海南美登木提取物调节人肝癌细胞凋亡基因p53、Fas和bcl-2的表达

目的分析海南美登木提取物调节人肝癌细胞凋亡基因p53、Fas和bcl-2的表达。方法应用体外细胞培养及RT-PCR法分析海南美登木提取物作用后肝癌细胞中凋亡基因p53、Fas及细胞增殖基因bcl-2表达。结果海南美登木提取物能对人体内肿瘤细胞进行诱导和分化,并且能够有效抑制肿瘤细胞DNA合成;细胞周期G0/G1期能够有效诱导细胞凋亡;经浓度为5、10 mg/L海南美登木对提取的癌细胞进行24、36及72 h处理,可以发现很多野生型p53基因,但是未发现Fas及bcl-2基因。结论海南美登木与患者体内诱导野生型p53基因关系密切,它能够有效清除患者体内恶变细胞,提高患者身体功能。     

南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对HepG2细胞增殖和诱导凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;采用分光光度计检测凋亡细胞胞浆caspase-3的活性变化。结果不同浓度的南蛇藤提取物能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量效应和时间效应关系;药物作用24h时,其IC50为111.8μg/ml,作用48h时,其IC50为99.7μg/ml,作用72h时,其IC50为43.0μg/ml;药物干预24h时,HepG2细胞停滞在G0-G1期,并产生细胞凋亡亚二倍峰。在药物为15μg/ml、30μg/ml和60μg/ml时,细胞凋亡率分别为44.91%、31.95%和21.94%,与对照组比较,均有显著性差异（F=5.449,P〈0.05）;在药物浓度为30μg/ml、60μg/ml和120μg/ml并分别作用24h和48h时,Caspase-3活性逐渐增强。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物抑制HepG2细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用可能与其增强Caspase-3活性有关。     

没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法以正常人肝细胞L-02作为对照,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法观察不同浓度没药甾酮（5～100μmol/L）对人肝癌细胞HepG2和L-02细胞增殖的影响并观察细胞形态的变化;应用流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡发生。结果不同浓度没药甾酮均可显著抑制人肝癌细胞HepG2生长,并呈时间、剂量依赖性,最大抑制率可达81.9%±1.92%（100μmol/L）;没药甾酮可使G0/G1期细胞比例增多,G2/M期细胞比例下降,可将细胞阻滞于G0/G1期;没药甾酮诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,50μmol/L和75μmol/L没药甾酮早期细胞凋亡率分别为24.91%±2.41%、53.03%±2.28%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论没药甾酮可抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡,其作用可能与干扰细胞周期有关。     

南蛇藤乙酸乙酯提取物通过活化caspase依赖的线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡

目的通过检测南蛇藤乙酸乙酯提取物在诱导肝癌细胞HepG2凋亡过程中产生的凋亡蛋白表达量探讨其凋亡途径。方法应用Annexin V-FITC与碘化丙啶(promide iodine,PI)双染色法,通过流式细胞技术检测不同浓度(15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml和240μg/ml南蛇藤乙酸乙酯提取物)干预HepG2细胞24小时后的细胞凋亡情况;应用蛋白质印迹法检测不同浓度(30μg/ml、60μg/ml及120μg/ml)南蛇藤乙酸乙酯提取物作用HepG2细胞24小时及60μg/ml和120μg/ml南蛇藤乙酸乙酯提取物作用HepG2细胞48小时后细胞中细胞色素c、裂解的胱冬蛋白原9(cleaved caspase-9)和胱冬蛋白酶3(caspase-3)的表达。结果当南蛇藤乙酸乙酯提取物浓度为15μg/ml、30μg/ml和60μg/ml时,可诱导HepG2细胞出现细胞凋亡,且细胞色素c、裂解的胱冬蛋白原9和caspase-3的表达量增加;随南蛇藤提取物浓度的增加(30μg/ml、60μg/ml及120μg/ml),蛋白表达亦增强。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物可能是通过促使膜间蛋白细胞色素c表达和释放活化caspase-9与caspase-3而诱导HepG2细胞的凋亡。     

格尔德霉素体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖并促进凋亡

目的研究格尔德霉素对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法不同浓度格尔德霉素与人肝癌HepG2细胞共培养,采用MTT法检测增殖抑制率;采用流式细胞术Annexin V法检测细胞凋亡率。结果在0.2、0.4和0.8μmol/L浓度下,格尔德霉素均显著抑制HepG2细胞的增殖,在干预细胞48h后,其抑制率分别为20.36%、29.45%和42.52%,抑制率随药物浓度增加而升高;同时,细胞凋亡率分别为4.82%、24.47%和53.64%,也呈剂量依赖性,与相应对照组比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论格尔德霉素可抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其调亡。     

花青素对NCI-H460细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用

目的研究花青素对大细胞型肺癌NCI-H460细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法体外培养NCI-H460细胞与25—200μg/ml的花青素共孵育,采用噻唑兰（MTT）法检测细胞增殖抑制率,Hoechst33258荧光染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期的分布。结果花青素在25—200μg／ml浓度范围内抑制NCI-H460细胞的增殖,有剂量和时间依赖性,花青素对NCI-H460细胞的IC50值为90．8μg／ml,50—200μg／ml的花青素处理NCI-H460细胞72h,Hoechest33258荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等细胞凋亡特征;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带;流式细胞图上可看到“亚G1期”凋亡峰,25、50、100、200μg/ml花青素对NCI-H460细胞凋亡率为1．3％、2．0％、11．7％和27．8％,G0／G1细胞数目显著增多,S期细胞显著减少。结论花青素能抑制NCI-H460细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,呈剂量依赖性,并使细胞阻滞于G0／G1期。     

黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用观察

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG-2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG-2细胞共同培养,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;采用Hoechst33258/PI染色法在荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果在25~100μg/ml的药物浓度作用下,细胞增殖被抑制。药物浓度在50μg/ml下作用48h,细胞抑制率达50.63%,药物浓度在75μg/ml下作用48h细胞,抑制率达77.62%。抑制率呈浓度和时间依赖性;药物浓度在50μg/ml时作用48h,可见HepG-2细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型的凋亡改变;随着黄芩苷作用浓度的增加,细胞凋亡率增高(P<0.05);随药物浓度的增加,Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量呈增加趋势,而Bcl-2表达减少。结论黄芩苷能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肝癌细胞增殖,其诱导凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

奥曲肽对人肝癌细胞生长增殖、甲胎蛋白合成及细胞凋亡的作用

目的　研究奥曲肽对肝癌细胞生长增殖及细胞凋亡的作用 ,探讨其对肝癌的作用机制 ,为临床应用提供实验依据。方法　采用MTT法、生长曲线观察奥曲肽对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响 ,电化学发光法测定培养上清液中甲胎蛋白 (AFP)含量 ,并用荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果　奥曲肽在 0 .0 0 5～ 80 μg/ml浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制肝癌细胞HepG2的生长增殖 ,并能显著减少肝癌细胞AFP合成。奥曲肽 (0 .2 5～ 4 .0 μg/ml)作用 4 8h后 ,荧光染色与透射电镜可见部分HepG2细胞呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测 ,出现凋亡峰 ,与对照组相比 ,细胞的凋亡率显著升高 (P <0 .0 5 )。结论　奥曲肽能够显著抑制肝癌细胞生长 ,并诱导肝癌细胞凋亡 ,有望成为治疗肝细胞癌的一个有效药物     

复方苦参注射液对人肝癌SMMC－7721肿瘤细胞作用的实验研究

选用人肝癌SMMC－7721肿瘤细胞,分别采用MTT法、流式细胞仪检测复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞体外增殖抑制率、细胞周期、凋亡率的影响。提示18．75～300μl／ml的复方苦参注射液在作用48h时对人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞的增殖抑制率在12．3％～82．5％,随着浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐上升,呈剂量依赖性。复方苦参注射液终浓度75μl／ml作用后的人肝癌SMMC-7721肿瘤细胞G0～G1期明显增高,S期、G2～M期的细胞比例明显减少,凋亡率（58．21％）明显高于对照组（4．17％）。提示复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用,并影响细胞周期,促进其凋亡。     

去甲斑蝥酸钠对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的观察去甲斑蝥酸钠对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法取常规培养的HepG2细胞,接种于24孔板,SNCID组分别加入5、2．5、1、0．5μg／ml的注射用去甲斑蝥酸钠1ml,对照组不添加任何药物。培养24、48、72h后用流式细胞术检测细胞周期,并计算增殖指数PI。结果SNCID组G0／G1期的细胞比例明显增高,而S期细胞比例、PI降低,此效果呈时间和浓度依赖性（P均〈0．05）。结论去甲斑蝥酸钠培养可阻滞人肝癌HepG2细胞于G0／G1期,抑制HepG2细胞增殖。     

旋毛虫排泄分泌蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

采用MTT法检测旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对人肝癌Hep G2细胞增殖的抑制作用。AO/EB荧光染色观察与300μg/ml排泄分泌蛋白共培养24 h的Hep G2细胞的细胞核形态。用75μg/ml排泄分泌蛋白作用Hep G2细胞24 h后,流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率,免疫荧光法检测细胞cleaved-caspase 9的表达。结果显示,旋毛虫排泄分泌蛋白呈剂量依赖性抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖。300μg/ml排泄分泌蛋白作用24 h后,Hep G2细胞核固缩呈圆珠状凋亡特征。75μg/ml排泄分泌蛋白作用细胞24 h后,细胞早期和晚期凋亡率分别为17.9%和7.3%,细胞坏死占6.6%;Hep G2细胞中cleaved-caspase 9荧光强度明显高于阴性对照。     

葛根素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的探讨葛根素对乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用终浓度为0、20、50、100、200μg/ml葛根素处理对数生长期的MCF-7细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各浓度的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术及Hoechst染色检测细胞早晚期凋亡率及凋亡指数,碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3的表达。结果葛根素可提高MCF-7细胞的增殖抑制率,此效应呈现剂量和时间依赖性,且除24 h 20μg/ml外,其余浓度及作用时间的增殖抑制率均高于0μg/ml(P0.05);不同浓度葛根素处理48 h后的早期、晚期凋亡率、细胞凋亡指数、G0/G1期细胞比例、凋亡促进基因Bax和Cleaved caspase-3水平升高,而S期、G2/M期细胞比例、凋亡抑制基因Bcl-2水平降低(P0.05)。结论葛根素可抑制乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖,促进其凋亡和细胞周期阻滞,该作用可能与提高凋亡促进蛋白表达、降低凋亡抑制蛋白表达有关。     

黄芪多糖对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制

目的 研究黄芪多糖(APS)和5-氟尿嘧啶(5-fu)联合使用对肝癌HepG2细胞的生长抑制及其作用机制.方法 用RPMI1640培养液对低分化人肝癌细胞株HepG2进行传代培养,取对数生长期细胞, 分为5组:A组:对照组,不含药物,使用同体积的磷酸盐缓冲液(PBS);B组:APS组,只给予100 μg/mlAPS;C组:5-fu组,只给予100 μg/ml 5-fu;D组:5-fu+低浓度APS组,给予100 μg/ml 5-fu+100 μg/ml APS;E组:5-fu+高浓度APS组,给予100 μg/ml 5-fu+200 μg/ml APS.用噻唑蓝(MTT)法观察APS及5-fu对HepG2细胞增殖的影响;用流式细胞术方法测药物作用后细胞周期变化和细胞凋亡;western-blot检测凋亡相关蛋白表达.结果 APS和5-fu联合使用可抑制HepG2细胞的增殖,效应呈浓度和时间依赖性;APS和5-fu联合使用阻滞HepG2细胞周期于G1期;并可诱导HepG2细胞凋亡;APS和5-fu联合使用,可明显增高肝癌HepG2细胞中caspase-3、caspase-9蛋白的表达,同时检测到抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低.在只使用5-fu的实验组细胞中均未检测到上述变化.结论 APS和5-fu联合使用能抑制肝癌HepG2细胞株的增殖,其机制之一是影响细胞周期使之阻滞于G1期,激活了细胞凋亡系统,从而诱导细胞凋亡.     

人参皂苷诱导黑色素瘤细胞B16-BL6凋亡的机制

目的探讨人参皂苷诱导黑色素瘤细胞B16-BL6凋亡的机制。方法培养黑色素瘤细胞B16-BL6,5、10、20、40μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 0、12、24、48、72 h,胆囊收缩素(CCK)8试验检测人参皂苷对细胞增殖的影响;10、20、40μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 48 h后,流式细胞仪检测人参皂苷对细胞凋亡的影响;Western印迹检测与凋亡相关蛋白的表达。结果随着时间的延长和浓度的增加,人参皂苷对细胞的抑制率增加,表现出时间和浓度的依赖性。72 h后,人参皂苷对细胞的抑制率到了平台期,用5μg/ml的人参皂苷处理黑色素瘤B16-BL6细胞,细胞的抑制率较低,因此后期选择10、20、40μg/ml的人参皂苷为研究对象,用10、20、40μg/ml的人参皂苷作用于黑色素瘤细胞B16-BL6 48 h后,各浓度组早期凋亡和晚期凋亡的细胞显著高于对照组,且呈剂量依赖性(P<0.01)。随着人参皂苷浓度的增加,Bax蛋白表达量增加,而Bcl-2蛋白表达量减少,两者之间的比例增加,而且呈剂量依赖性。随着人参皂苷浓度的增加,细胞色素(Cyt)C和细胞凋亡诱导因子(AIF)含量增加,且呈剂量依赖性。结论人参皂苷抑制黑色素瘤细胞B16-BL6增殖,促进细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bcl-2家族Bcl-2和Bax两者之间的比例改变、线粒体膜通透性改变、促使一些凋亡因子的释放有关。     

沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990体外增殖及凋亡的影响

目的 观察沙利度胺(THD)体外抑制人胰腺癌细胞株SW1990增殖及诱导其凋亡的作用.方法 应用不同浓度的THD(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μg/ml)处理胰腺癌SW1990细胞24、48、72 h,用MTT法测定细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V/PI检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 THD呈浓度和时间依赖性抑制胰腺癌细胞SW1990的生长.200μg/ml的THD干预使SW1990细胞G0/G1期比例从(41.15±2.23)％上升到(58.83 ±2.33)％;细胞凋亡率从2.6％增加到28.0％;细胞Bax蛋白表达量从0.17±0.03上调到0.33±0.04,Bcl-2蛋白表达量从0.35±0.02下调到0.17±0.01,Bcl-2/Bax比值从2.17±0.44下降到0.52±0.07.结论 THD可以抑制SW1990细胞增殖,其机制可能与上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

纳米氧化铜对人肝癌细胞的毒性作用

目的探讨40 nm氧化铜颗粒对人肝癌HepG2细胞毒性的影响。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于含终浓度分别为0(对照)～200μg/ml纳米氧化铜的无血清培养基中培养24 h。运用CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)检测分析其对人肝癌细胞的毒性作用。结果不同浓度纳米氧化铜染毒组HepG2细胞的存活率与对照组(0μg/ml)相比均明显降低(P0.05),且细胞存活率随着纳米氧化铜染毒浓度的上升呈下降趋势;HepG2细胞LDH的活力与对照组(0μg/ml)相比也明显升高(P0.01),且细胞中LDH活力随着纳米氧化铜染毒浓度升高呈上升趋势。结论 40 nm氧化铜颗粒能够引起HepG2细胞产生毒性效应。     

黄芩素对SCC15口腔癌细胞增殖和Caspase-3活性的影响

目的探讨黄芩素(BAI)对人口腔癌细胞株SCC15增殖和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3活性的影响。方法以噻唑蓝比色法(MTT)检测BAI在不同浓度(终浓度的50、100、200μg/ml)不同作用时间(0、12、24、36、48、60、72 h)条件下对SCC15口腔癌细胞增殖活性的影响。比色法检测Caspase-3活性的变化,通过流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 BAI在体外对SCC15细胞株具有直接抑制增殖作用,并呈时间和剂量依赖性,对SCC15细胞的IC50是153.20μg/ml。不同浓度BAI处理细胞后,SCC15细胞被阻止于G0/G1期,抑制SCC15细胞分裂而降低其增殖能力。结论 BAI可对人SCC15口腔癌细胞株的凋亡具有促进作用,并且促凋亡作用呈时间-剂量依赖性。BAI体外具有增加He La细胞Caspase-3活性的作用,能明显上调SCC15细胞中Caspase-3活性,且呈时间与浓度依赖性。     

藤梨根提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的影响

目的研究藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901的抑制作用及其机制。方法用MTT法检测不同剂量的藤梨根提取物对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,并用流式细胞仪分别检测细胞周期以及凋亡程度。结果在浓度范围25~200μg/ml范围内,不同浓度的藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901均有抑制作用,且有一定的浓度依赖性。且在藤梨根提取物细胞浓度为53、86以及142μg/ml作用48 h后SGC7901在S期比例增多,凋亡率明显增加。结论藤梨根提取物可能通过干预细胞周期和凋亡对胃癌细胞SGC7901增殖起抑制作用,同时与药物浓度有一定的依赖性。     

洛铂对肝癌HepG2细胞增殖和调亡的作用及机制

目的在体外细胞中研究洛铂对肝癌HepG2细胞在增殖、凋亡方面的作用及其机制。方法将HepG2细胞分为洛铂组(增殖实验:5、10、15μmol/L组;凋亡实验:10μmol/L;侵袭实验:4μg/ml)和对照组(不加药物)。利用CCK8法和流式细胞术分别检测2组HepG2细胞的增殖和凋亡情况。通过Western Blot初步检测2组细胞中增殖、凋亡相关蛋白NF-κB、Bcl-2、Bax、Bid、Puma、Caspase-3的表达变化。增殖实验采用双因素方差分析,凋亡实验采用χ2检验,侵袭实验采用t检验。结果在作用于细胞24、48、72 h后,对照组与实验组细胞生长增殖抑制率差异有统计学意义(F=273.5,P<0.01),同一时间不同浓度间、同一浓度不同时间差异均有统计学意义(F分别为1857、1365,P值均<0.01)。2组间细胞凋亡率比较差异有统计学意义(χ2=1821,P<0.001)。实验组HepG2细胞中穿透Transwell小室的细胞数少于对照组(21.30±2.74 vs 45.00±4.26,t=11.89,P<0.001)。洛铂组HepG2细胞Bcl-2表达水平下降,NF-κB、Bax、Puma、Caspase-3表达水平升高。结论洛铂可通过影响一系列增殖、凋亡蛋白发挥抑制肝癌细胞增殖及促进凋亡的作用,但细胞内信号通路复杂,需要进一步研究。     

奥沙利铂对人结肠癌细胞凋亡及FADD的影响

以不同浓度（0、25、50和100μg/ml）的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株（SW480）,分别于12、24和48 h后,应用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）mRNA水平,Western blotting检测FADD蛋白水平。结果奥沙利铂对SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性,SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率呈浓度依赖性的增加（P〈0.05）。不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24 h后,FADD mRNA和蛋白水平呈浓度依赖性增加。提示奥沙利铂能诱导SW480细胞凋亡,其作用机制可能与其激活凋亡死亡受体途径使FADD表达上调有关。