槲皮素联合survivin反义核苷酸对肝癌SMMC7721/ADM细胞MDR的逆转作用

目的 探讨槲皮素与survivin反义核苷酸(ASODN)联合应用对肝癌SMMC7721/ADM细胞多药耐药(MDR)的逆转作用.方法 选择肝癌敏感细胞株SMMC7721和MDR细胞株SMMC7721/阿霉素(ADM),观察其对四种不同化疗药物的耐药性及槲皮素、survivin反义核苷酸(ASODN)对SMMC7721/ADM细胞MDR的逆转效果.结果 槲皮素和ASODN联合时较两者单独应用时能显著降低四种化疗药物对SMMC7721/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50) (P<0.05).槲皮素单独应用及联合ASODN时均能明显降低SMMC7721/ADM细胞的多药耐药基因1(MDR1)mRNA及p170和多药耐药相关蛋白基因(MRP)mRNA及p190的表达(P均<0.05). 结论 槲皮素与ASODN联合能明显逆转SMMC7721/ADM细胞对四种化疗药物的耐药性.槲皮素可能通过抑制MDR1 mRNA和MRP mRNA的表达使p170和p190的合成减少而发挥耐药逆转作用,ASODN不能通过该途径发挥作用.     

携多药耐药基因1反义RNA重组腺病毒逆转肝癌多药耐药细胞的实验研究

目的探讨携带多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)反义RNA重组腺病毒载体在裸鼠体内逆转肝癌多药耐药细胞HepG2/阿霉素(adriamycin,ADM)的疗效及作用机制。方法构建携带AFP和asmdr1的重组腺病毒载体Adeno-asmdr1,ADM分级诱导肝癌细胞HepG2为多药耐药细胞HepG2/ADM,建立HepG2/ADM裸鼠皮下移植瘤模型,Adeno asmdr1局部注射,观察移植瘤的体积、透射电镜检测移植瘤组织细胞凋亡、RT-PCR检测MDR1转录水平,评价Adeno-asmdr1的抗肿瘤活性。结果在Adeno-asmdr1 ADM组,移植瘤体积无增大,而PBS组、ADM组体积明显增大;RT-PCR检测移植瘤细胞1周和4周MDR1 mRNA水平, ADM组无明显变化,Adeno-amdr1 ADM组在4周时MDR1转录水平仅为单纯ADM组的20%,经ADM Adeno-asmdr1处理组,可见凋亡增加,ADM组和PBS处理组的裸鼠移植瘤组织中出现少量或没有凋亡。结论携带MDR1反义RNA重组腺病毒部分逆转HepG2/ADM的多药耐药,阻止肿瘤生长,下调MDR1转录水平,导致肿瘤细胞凋亡。     

多药耐药相关蛋白-3表达与肝癌耐药的相关性

目的 探讨多药耐药相关蛋白-3(MRP-3)的表达与肝癌耐药的相关性.方法 应用RT-PCR方法检测正常肝细胞L-02、肝癌细胞BEL及肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3 mRNA的差异表达,再将MRP-3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进肝癌耐药细胞HepG2/ADM中,用MTT法、流式细胞仪及RT-PCR检测转染后细胞内阿霉素(ADM)的荧光强度、耐药指数及MRP-3 mRNA的表达情况.结果 肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3 mRNA的表达明显高于正常肝细胞L-02和肝癌细胞BEL(P<0.05).MRP-3反义转染进耐药细胞后,可明显降低细胞内ADM的耐药指数,提高细胞内ADM浓度(P<0.05),细胞内MRP-3 mRNA的表达较未转染细胞下降了62.5%(P<0.05).结论 MRP-3的高表达可能是导致肝癌多药耐药的机制之一.     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肝癌细胞耐药的研究

目的 观察反义硫代磷酸酯寡核昔酸(AsODN)联合逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)的作用。 方法 用人工合成互补于MDR1基因及MRP基因的反义20聚硫代磷酸寡核苷酸,以脂质体作载体,转染入耐阿霉素(ADM)肝癌细胞SMMC-7721/ADM,四甲基偶氮唑蓝法测定细胞对化学疗法药物的敏感性,流式细胞仪分析细胞相对荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Rhdaming123(Rh123)及柔红霉素(DNR)潴留以反映蛋白质p170和p190功能。 结果 ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度增加细胞对ADM(47.8倍)和DNR(21.6倍)的敏感性。ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,与单独任一种ASODN转染相比,对p170或p190表达的抑制并不增加(q值分别为3.23、3.24,P>0.05)。 结论 针对MDR1 MRP的ASODN联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度逆转肝癌细胞的耐药性。     

ABCG2、MDR1基因表达水平与5-氟尿嘧啶耐药的CD44+SGC-7901/5-Fu多药耐药关系

目的探讨乳腺癌耐药蛋白(ABCG2)、P-糖蛋白(MDR1)基因表达水平与5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药的CD44+SGC-7901/5-Fu多药耐药关系。方法采用反复短期暴露并逐步递增药物浓度法建立5-Fu耐药胃癌细胞株SGC7901/5-Fu,鼠抗人CD44抗体,流式细胞术(FACS)检测分选CD44+SGC-7901/5-Fu。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定SGC-7901/5-Fu、CD44+SGC-7901/5-Fu、CD44-SGC-7901/5-Fu细胞5-Fu耐药指数及交叉耐药性。RT-PCR方法分别检测对数期生长的SGC-7901、SGC-7901/5-Fu、CD44+SGC-7901/5-Fu、CD44-SGC-7901/5-Fu细胞ABCG2、MDR1 mRNA表达。结果 CD44+SGC-7901/5-Fu相对于SGC-7901细胞的耐药指数为12.5(P<0.05),但CD44-SGC-7901/5-Fu相对于SGC-7901细胞的耐药指数为1.2(P>0.05)。CD44+SGC-7901/5-Fu对ADM、MMC和DDP也有交叉耐药性,CD44-SGC-7901/5-Fu对ADM、MMC和DDP无交叉耐药性。与对照组(正常SGC-790)细胞比较,ABCG2、MDR1在5-Fu耐药的SGC-7901细胞株中表达明显增强(P<0.05)。与5-Fu耐药的SGC-7901细胞株比较,CD44+SGC-7901/5-Fu细胞株ABCG2、MDR1表达继续增加(P<0.05);。与5-Fu耐药的SGC-7901细胞株比较,CD44-SGC-7901/5-Fu细胞ABCG2、MDR1表达差别无统计学意义(P>0.05)。结论 CD44+SGC-7901/5-Fu细胞株对5-Fu耐药性明显增强,其多药耐药机制可能与ABCG2、MDR1mRNA表达增加相关。     

神经型钙黏附蛋白的表达对食管鳞癌侵袭和转移的影响

目的:探讨神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义.以及RNA干扰(RNAi)沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的影响.方法:采用免疫组织化学PV法和RT-PCR检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中N-cadherin蛋白和mRNA的表达.将N-cadherin基因的RNA干扰载体稳定转染至EC9706.通过RT-PCR和Western blotting检测RNAi的效果:运用Transwell体外侵袭实验检测RNAi后细胞侵袭能力的改变.结果:正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中N-cadherin的阳性表达率依次升高,分别为29.0％(18/62)、61.3％(19/31)、75.8％(47/62),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);N-cadherin蛋白的阳性表达率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(x2=6.916,6.924,4.486,P<0.05).食管鳞状细胞癌组织中N-cadherinmRNA的相对含量高于癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织(0.6631±0.0162 vs0.4613±0.0239,0.1538±0.0192),组间比较差异有统计学意义(x2=819.242,P<0.01).RNAi后EC9706中N-cadherin的表达显著下降;Transwell小室体外侵袭实验显示,EC9706的体外侵袭能力也降低.结论:食管鳞癌组织中N-cadherin的高表达与食管鳞癌的浸润、恶化有密切的关系.RNAi沉默N-cadherin基因表达能够使EC9706体外侵袭能力降低.     

缺氧诱导因子-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌中的表达及其相关性研究

目的 检测缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) 蛋白与EphA2蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达定位并探讨二者表达的相关性.方法 采用细胞免疫荧光法检测HIF-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌细胞株Eca109中的表达与定位;采用免疫组化法检测HIF-1α与EphA2在41例食管鳞状细胞癌和25例正常食管组织中的表达;常氧和缺氧条件下,Western 印迹法检测食管鳞状细胞癌细胞株Eca109和TE13经RNA干扰(RNAi)技术特异性沉默HIF-1α后EphA2表达的变化.结果 ①细胞免疫荧光结果显示HIF-1α和EphA2均在Eca109细胞胞质表达.②免疫组化结果显示HIF-1α在食管鳞状细胞癌和正常食管组织中的阳性表达率分别为70.73%(29/41)和0%(0/25),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).EphA2在食管鳞状细胞癌和正常食管组织中的阳性表达率分别为78.04%(32/41)和28%(7/25),两者比较差异有统计学意义(P<0.05).相关性检验提示HIF-1α和EphA2在食管鳞状细胞癌中表达呈正相关性(r=0.5654,χ~2=13.11,P<0.05).③ Western印迹结果显示在食管鳞状细胞癌细胞株Eca109和TE13中,EphA2表达随HIF-1α的沉默而受抑制.结论 HIF-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌组织中呈高表达,且二者表达呈正相关;EphA2表达受HIF-1α的调控,可能为HIF-1α的靶基因.     

体外香菇多糖对顺铂抑制胃癌细胞增殖的促进作用

目的:研究体外香菇多糖(Lentinan)对多药耐药基因表达的影响和促进顺铂抑制胃癌细胞增殖的作用.方法:分别用顺铂(Cisplatin)、香菇多糖和顺铂联合香菇多糖处理SGC-7901胃癌细胞,将其分为4组:对照组(Con组),香菇多糖组(Len组),顺铂组(Cis组)和顺铂联合香菇多糖组(L+C)组.应用RT-PCR检测多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP基因mRNA表达;应用CCK-8试剂盒检测Con组和药物处理组前后的胃癌细胞增殖状态.结果:正常SGC-7901胃癌细胞中多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP均表达mRNA,香菇多糖能显著降低多药耐药基因表达而对细胞增殖无明显影响;顺铂明显增加多药耐药基因表达,同时抑制细胞增殖(P<0.05);香菇多糖联合顺铂作用后,MDR1和MRP1基因表达完全受到抑制,LRP表达显著降低,细胞增殖速度明显低于Con组、Len组和Cis组,差异具有统计学意义(10d:0.54vs1.90,1.88,0.92,均P<0.05).结论:香菇多糖联合顺铂后因抑制多药耐药基因表达而显著增强顺铂的抑制细胞增殖作用.     

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞生物学行为的影响

目的观察硒化壳聚糖对体外培养慢性粒细胞多药耐药白血病细胞株K562/阿霉素(ADM)细胞生物学行为的影响。方法硒化壳聚糖作用于体外培养的K562/ADM细胞12、24 h,应用流式细胞法检测细胞凋亡,软件拟合计算细胞周期;应用免疫印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达;应用RT-PCR法检测MDR-1 mRNA水平。结果硒化壳聚糖能够明显增强ADM对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,阻滞细胞周期于G1期(P<0.05,P<0.01),下调P-gp表达和MDR-1 mRNA水平(P<0.05,P<0.01),硒化壳聚糖浓度越高,作用效果越显著。结论硒化壳聚糖能够通过下调MDR-1基因和P-gp表达,阻滞细胞周期于G1期来诱导细胞凋亡,进而对体外培养的K562/ADM细胞耐药生物学行为产生逆转。     

缺氧诱导因子-2α和多药耐药基因1在乳腺癌中的表达及相关性

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)-2α和多药耐药基因(MDR)1在乳腺癌中的表达及相关性。方法采用免疫组化和RT-PCR法检测47例乳腺癌组织和30例癌旁正常乳腺组织中的HIF-2α和MDR1蛋白和mRNA的表达及其相关性。低氧培养建立乳腺癌MCF-7细胞缺氧模型,应用荧光定量PCR和Western印迹分别检测每组缺氧模型细胞中HIF-2α和MDR1蛋白和mRNA的表达及其相关性。结果在乳腺癌组织中HIF-2α蛋白的阳性表达率(76.7%)和MDR1蛋白的阳性表达率(80.0%)均显著高于正常乳腺组织(P<0.05);在乳腺癌组织中HIF-2αmRNA的表达水平(0.896±0.012)和MDR1 mRNA的表达水平(0.884±0.016)均显著高于正常乳腺组织(P<0.05);乳腺癌组织中HIF-2α及MDR1蛋白及mRNA的表达均呈正相关(P均<0.05)。在缺氧组,随着缺氧时间的延长MCF-7细胞中MDR1的表达均逐渐增高,且MDR1的表达升高与HIF-2α的表达呈同步化改变。结论缺氧可通过核转录因子HIF-2α上调乳腺癌细胞内MDR1的表达,从而使乳腺癌细胞获得多药耐药性。HIF-2α和MDR1将可能成为逆转乳腺癌耐药的新的分子靶点。