miR-183通过靶定EPHA4调控老年前列腺癌细胞的转移

目的探讨微小RNA(miR)-183对老年前列腺癌细胞转移中的影响及其与靶基因促红细胞生成素产生肝细胞受体(EPH)A4的价值。方法对老年前列腺癌和癌旁组织中miR-183和EPHA4的表达水平通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法进行检测。老年前列腺癌细胞系PC3和LNCaP能够转染miR-183抗链球菌溶血素(AS)O,通过与阴性对照及Transwell迁移和侵袭实验对其细胞的运动和侵袭能力进行评价。再通过使用RT-PCR、Western印迹、绿色荧光蛋白(GFP)报告载体3种实验验证miR-183对其靶基因EPHA4的调控。结果 RT-PCR显示miR-183处于高表达水平(P<0.01)。转染miR-183 ASO细胞的迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.01)。生物信息学显示EPHA4 3'UTR含有miR-183的潜在结合位点。转染miR-183 ASO组细胞EPHA4 3'UTR荧光强度显著低于对照组(P<0.01),miR-183 minmcs增加EPHA4 3'UTR的荧光强度(P<0.01),而对突变的3'UTR无明显影响。miR-183 ASO中EPHA4 mRNA水平降低,miR-183 mimics中EPHA4 mRNA水平升高。miR-183 ASO组EPHA4的蛋白含量较对照组显著下降(P<0.01)。结论 miR-183通过EPHA4对老年前列腺癌细胞的迁移和侵袭进行调控,发挥着癌基因的作用。     

沉默miR-107对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化的影响

目的 探究miR-107对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响和机制。方法 利用荧光定量PCR方法分析miR-107在正常乳腺细胞及乳腺癌细胞系中的表达差异;HS578T细胞分别转染对照miRNA和miR-107抑制剂,利用划痕实验分析细胞迁移能力,用Transwell实验分析细胞侵袭能力,用实时荧光定量PCR方法检测细胞EMT标志物的表达水平,用蛋白质免疫印迹实验检测细胞PTEN/AKT信号通路。结果 与正常乳腺细胞相比,miR-107在乳腺癌细胞株中高表达;沉默miR-107的表达抑制HS578T细胞的迁移、侵袭及EMT,促进PTEN/AKT信号通路。结论 miR-107在乳腺癌细胞中高表达,沉默miR-107表达通过PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞迁移、侵袭和EMT。     

下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌H322细胞侵袭迁移并诱导凋亡

目的探讨miR-20a对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响和机制。方法 Realtime PCR方法分别检测miR-20a在正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中的表达变化。在肺癌H322细胞中转染miR-20a inhibitor,四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western印迹检测ZNF259、C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、C-Caspase-9、MMP-9蛋白表达变化。靶基因预测软件预测ZNF259可能为miR-20a的靶基因,利用双荧光素酶活性系统鉴定靶向关系。在肺癌细胞中共转染miR-20a inhibitor、ZNF259 siRNA,同样使用上述方法测定细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化,评估ZNF259 siRNA对下调miR-20a调控肺癌细胞的影响。结果肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中miR-20a的表达水平明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B,且H322细胞中miR-20a的表达水平最高。miR-20a inhibitor能够下调肺癌细胞中miR-20a的表达水平,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,促进细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达,减少细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶活性鉴定结果显示,ZNF259为miR-20a的靶基因,且下调miR-20a提高肺癌细胞中ZNF259蛋白表达水平。ZNF259 siRNA可以逆转下调miR-20a后的肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡变化。结论下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡。     

miR-301a促进人结肠癌细胞株HT29细胞侵袭与转移的机制

目的探讨miR-301a对结肠癌侵袭转移的影响及分子机制。方法实时荧光定量PCR检测40例结肠癌患者癌组织中miR-301a的表达水平,探究结肠癌和miR-301a表达的关系。同时在人结肠癌细胞株HT29细胞过表达和干扰miR-301a,MTT法检测miR-301a对HT29细胞增殖的影响。蛋白免疫技术和实时荧光定量PCR在分子水平上检测miR-301a表达对HT29细胞中侵袭相关分子的表达水平,探究miR-301a调控下的转化生长因子(TGF)-β/Smad4/基质金属蛋白酶(MMP)-9信号通路对结肠癌侵袭转移的影响。结果实时荧光定量PCR结果显示40例结肠癌患者癌组织中miR-301a的表达水平明显升高,且随着肿瘤分期分级的升高,其水平明显升高。MTT法检测发现过表达miR-301a的HT29细胞数量明显增加,而干扰miR-301a则细胞数目减少,表明miR-301a可促进结肠癌细胞的增殖。在分子水平上蛋白免疫技术和实时荧光定量PCR检测结果显示miR-301a通过下调TGF-β和Smad-4的表达,促进MMP-9的表达,最终促进癌细胞的侵袭转移。结论 miR-301a通过下调TGF-β/Smad4信号通路,促进MMP-9的表达,最终促进结肠癌的侵袭转移。     

miR-145通过调控PDCD4表达抑制缺氧/复氧所诱导的心肌细胞凋亡

目的 研究miR-145对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 建立H/R诱导的H9c2细胞体外模型,通过实时定量PCR法检测miR-145和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)mRNA表达,免疫印迹法检测PDCD4蛋白表达。向H9c2细胞中转入miR-145以上调miR-145表达,转入pcDNA-PDCD4以上调PDCD4蛋白表达。通过流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 H/R抑制H9c2细胞中miR-145表达而促进PDCD4表达,并且上调miR-145的表达抑制H/R诱导的H9c2细胞的凋亡。荧光素酶基因报告实验显示,miR-145在H9c2细胞中靶向抑制PDCD4蛋白的表达,上调PDCD4蛋白表达可显著促进H/R诱导的H9c2细胞凋亡。结论 miR-145可抑制缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制PDCD4蛋白表达有关。     

MicroRNA-21(miR-21)在大肠癌细胞中的表达及其靶基因

目的探讨微RNA(miRNA)-2l在大肠癌(CRC)细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对大肠癌细胞中磷酸醋酶张力蛋白同源物(PTEN)、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、mTOR表达的影响及其可能调控的靶基因。方法通过反义寡核苷酸(ASO)技术抑制大肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证。通过荧光定量PCR(FQ-PCR)技术及Western印迹法检测HCT116细胞中PTEN、PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达的改变。利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因系统检测PTEN活性。结果 miR-21在HCT116中表达最高,在SW480中表达最低。miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,并且PTEN蛋白的表达明显上调,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调。筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一。结论抑制miR-21的表达可促进HCT116细胞PTEN表达升高,PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调,PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控过程。miRNA-21在CRC中表达失控,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移。     

非小细胞肺癌组织miR-34a的表达及其对H1299细胞增殖的影响

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中miR-34a的表达情况及其对NSCLC细胞系H1299增殖的影响。方法 RT-PCR方法检测miR-34a在NSCLC组织和NSCLC细胞系H1299中的表达情况。克隆形成实验及MTT增殖实验检测miR-34a对NSCLC细胞系H1299增殖能力的影响;生物信息学方法预测miR-34a可能的功能性靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的功能性靶基因。Western印迹检测miR-34a对预测靶基因表达的影响。结果相比正常组织而言,NSCLC组织和细胞系H1299中miR-34a表达均显著下降(P0.05);转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05),而转染miR-34a抑制剂可增加NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05)。生物信息学预测显示Notch1是miR-34a可能的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299中Notch1的表达。结论 miR-34a可通过调节Notch1的表达,进而抑制NSCLC细胞的增殖。     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-92对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-92对前列腺癌细胞增殖以及凋亡的影响。方法首先利用实时荧光定量PCR技术检测32个前列腺癌组织和26个良性前列腺增生组织中miR-92的表达水平;人工设计合成miR-92的反义寡核苷酸,利用脂质体LipofectamineTM2000转染PC-3和DU-145两种细胞系,利用实时荧光定量PCR检测转染后细胞内miR-92的表达水平,并通过噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测细胞的增殖和凋亡情况。结果与良性前列腺增生组织相比,miR-92在前列腺癌组织中表达水平升高;与转染对照寡核苷酸的细胞相比,两种癌细胞转染anti-miR-92后,miR-92的水平降低,MTT检测发现细胞的活性降低,流式分析仪检测发现增殖的细胞数降低,并且细胞凋亡增加(均P<0.05)。结论抑制miR-92的表达导致细胞增殖减慢,凋亡增加,miR-92具有作为临床前列腺癌检测及治疗分子标志物的潜在功能。     

miR-455在前列腺癌中的相关功能研究

目的探讨miR-455在前列腺癌中的表达及相关功能。方法定量PCR检测前列腺癌患者血清和正常组中miR-455表达水平,同时基因转染抑制前列腺癌细胞系中miR-455表达,细胞划痕实验、CCK-8实验检测前列腺癌细胞系功能变化。结果前列腺癌患者血清中miR-455表达水平高于正常组。miR-455被抑制后,前列腺癌细胞增殖和迁移能力降低。结论 miR-455高表达利于前列腺癌细胞增殖,是前列腺癌发生发展的重要因素。     

miR-34a靶向CD44对肺癌细胞干细胞表型的影响

目的探讨肺癌干细胞中miR-34a靶向CD44对干细胞表型的影响。方法利用免疫磁珠法分选CD44~+的肺癌干细胞;TargetScan预测靶向CD44的潜在miRNAs;双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a对CD44靶向调控作用;qPCR检测miR-34a表达;Western印迹检测细胞CD44蛋白表达;干细胞成球实验检测干细胞成球能力;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与NC组比较,miR-34a组CD44-WT、CD44-Mut活性均显著降低(均P0.05);miR-34a组CD44 mRNA和蛋白表达及干细胞成球数、侵袭细胞数均显著低于NC组(均P0.05);与对照组比较,siRNA组干细胞成球数、侵袭细胞数均显著降低(均P0.05)。结论 miR-34a靶向调节CD44抑制肺癌干细胞成球和侵袭能力,miR-34a可能是治疗肺癌的潜在靶标。     

miR-126-3p靶向AKT2对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-126-3p(miR-126-3p)对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常葡萄膜组织及葡萄膜黑色素瘤组织中miR-126-3p的表达。采用葡萄膜黑色素瘤MUM2B细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-126-3p mimics及其阴性对照miR-NC、si-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)2及其阴性对照si-NC,分别记为miR-126-3p组、miR-NC组、si-AKT2组、si-NC组。甲基噻唑基四氮唑(MTT)、平板克隆形成实验检测增殖;Transwell小室实验检测迁移及侵袭;靶基因预测miR-126-3p的靶基因,双荧光素酶报告实验验证靶基因,Western印迹检测AKT2蛋白表达。MUM2B细胞中共转染miR-126-3p mimics与AKT2过表达载体,用以上方法检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果 与正常葡萄膜组织相比,miR-126-3p在葡萄膜黑色素瘤组织中表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-126-3p mimics或si-AKT2后MUM2B细胞...     

肺癌组织中miRNA-34a表达对肺癌细胞系A549增殖和迁移的影响

目的探讨肺癌组织中微小RNA(miR)-34a的表达情况及其对肺癌细胞系A549增殖和迁移的影响。方法 RT-PCR方法检测miR-34a在肺癌组织和肺癌细胞系A549中的表达情况。克隆形成实验检测miR-34a对肺癌细胞系A549增殖能力的影响;划痕实验检测miR-34a对肺癌细胞系A549迁移能力的影响。Target Scans软件预测miR-34a可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因。Western印迹方法检测miR-34a对预测靶基因表达的影响。结果 miR-34a在肺癌组织和肺癌细胞系A549中的表达较正常组织显著降低(P0.01)。转染miR-34a可显著抑制A549细胞的增殖和迁移能力(P0.01),而转染miR-34a抑制剂可增加A549细胞的增殖和迁移能力(P0.01)。Target Scans软件预测miR-34a可能的靶基因为B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miR-34a可显著抑制A549细胞中Bcl-2的表达(P0.01),而转染miR-34a抑制剂可增加A549细胞中Bcl-2的表达(P0.01)。结论 miR-34a可通过调节Bcl-2的表达而发挥肺癌抑制作用。     

miR-145-5p靶向抑制RAD18表达调控替莫唑胺对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的探究微小RNA(miR)-145-5p影响替莫唑胺治疗脑胶质瘤疗效的潜在机制。方法选取2012年2月至2017年2月在院接受手术治疗的老年脑胶质瘤60例,实时荧光定量PCR检测患者术后血清miR-145-5p水平,并对患者进行18个月的随访,分析血清miR-145-5p水平与预后的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87MG,分别转染阴性对照、miR-145-5p模拟物与miR-145-5p抑制物。采用MTT法检测各组细胞对替莫唑胺的敏感性;TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因测定分析miR-145-5p靶基因;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;Western印迹检测分析各组细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果血清高miR-145-5p水平组患者的生存率显著高于低miR-145-5p水平组患者,差异有统计学意义(P0.05)。MTT结果表明,miR-145-5p可使替莫唑胺的半抑制浓度(IC50)从406μmol/L降低至103μmol/L。TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因检测结果显示,RAD18是miR-145-5p的靶基因。流式细胞术和Western印迹结果表明,miR-145-5p可靶向抑制RAD18表达,并调控凋亡相关蛋白表达水平,进一步促进U87MG细胞凋亡。体内实验结果显示,与阴性对照组[(2.45±0.33)g]相比,单独注射替莫唑胺组[(1.73±0.22)g]、miR-145-5p组[(1.91±0.25)g]及替莫唑胺+miR-145-5p组[(0.93±0.15)g]的裸鼠肿瘤质量显著降低,且替莫唑胺+miR-145-5p组的肿瘤质量显著低于替莫唑胺组与miR-145-5p组(P0.05)。结论 miR-145-5p可通过靶向抑制RAD18表达,促进脑胶质瘤细胞凋亡,并增加脑胶质瘤对替莫唑胺的敏感性。     

miR-107靶向PCDH17表达调控EMT通路抑制胃癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的 探讨微小RNA(miR)-107靶向原钙黏蛋白(PCDH)-17调控EMT通路影响胃癌细胞迁移、侵袭的作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-107、PCDH17 mRNA在胃癌组织中表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107对PCDH17转录活性的影响;胃癌MKN-28细胞转染pcDNA-PCDH17或siRNA-PCDH,Transwell迁移及侵袭实验检测PCDH17的表达对MKN-28细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测PCDH17的表达对EMT通路的蛋白表达水平的影响.miR-107过表达验证细胞迁移及侵袭.结果 miR-107在胃癌组织中高表达,PCDH17在胃癌组织中低表达;过表达PCDH17后,细胞迁移及侵袭能力明显降低,E-Cadherin表达水平明显升高,而N-Cadherin、Vimentin表达水平明显降低;抑制PCDH17表达后,细胞迁移及侵袭能力明显增强,E-Cadherin表达水平明显降低,而N-Cadherin、Vimentin表达水平明显升高;双荧光素酶报告基因系统检测结果 显示,miR-107可直接调控PCDH17的转录活性;miR-107可通过负向调控PCDH17而促进EMT转化进而增强胃癌细胞迁移及侵袭能力.结论 miR-107靶向PCDH17表达从而调控胃癌细胞迁移及侵袭能力,其可能通过激活EMT通路而发挥作用.     

miRNA-1236通过靶向FOXO3a调控结直肠癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨miRNA-1236对结直肠癌细胞增殖的作用及其相关机制。 方法通过实时定量PCR检测转染miR-1236后miRNA-1236的表达,使用CCK-8以及克隆形成方法检测转染miRNA-1236后HCT116细胞的活性,ki67方法检测转染miRNA-1236后HCT116细胞增殖能力的变化,生物信息方法筛选miR-1236的潜在靶基因FOXO3a。Luciferase报告检测miRNA-1236与FOXO3a的结合位点,通过实时定量PCR方法检测转染miRNA-1236后FOXO3a基因的变化;通过免疫组化的方法检测结直肠癌患者组织中FOXO3a的表达,通过western blot检测低表达miRNA-1236后HCT116细胞中FOXO3a、PCNA以及Bax蛋白的变化。通过TCGA数据库检测FOXO3a基因在结直肠癌患者癌-癌旁,不同肿瘤阶段与不同性别中的表达。 结果本研究发现高表达miRNA-1236后HCT116细胞活性相对于阴性对照组明显增加,而低表达miRNA-1236后活性降低。低表达miRNA-1236后HCT116细胞增殖能力相对于阴性对照组明显降低。生物信息学预测miR-1236与FOXO3a有潜在的结合位点。采用Western blot以及逆转录实时定量PCR验证,过表达miRNA-1236后FOXO3a表达相对于阴性对照组明显降低,而低表达miRNA-1236后,FOXO3a表达明显升高,同时luciferase结果显示,FOXO3a是miRNA-1236的靶基因。并且,FOXO3a在结直肠癌症组织中明显降低。 结论miR-1236通过靶向FOXO3a的表达调节结直肠癌细胞HCT116增殖,同时为miR-1236成为诊断、预防以及治疗结直肠癌的生物学标记物提供理论基础。     

miR-4463在下肢动脉硬化闭塞症中的表达及意义

目的观察microRNA-4463(miR-4463)在下肢动脉硬化闭塞症(ASO)患者血浆和组织中的表达变化,推测其可能意义。方法采用miRNA芯片方法筛选ASO患者和对照人群血浆中差异表达miRNA,Real time PCR技术验证ASO患者和对照人群中miR-4463的表达水平,并进行临床分期比较。靶基因预测软件分析miR-4463靶基因,Gene Ontology和KEGG数据库分析靶基因的功能和信号通路。结果与对照组相比,ASO患者血浆中有51个miRNA变化超过1.5倍(P0.05)。miR-4463在ASO患者血浆和病变血管内膜组织中表达均显著降低,并随Fontaine分期呈逐渐下降趋势。生物信息学分析发现miR-4463靶基因与细胞迁移、脂质代谢、内吞作用等相关。结论 miR-4463参与了ASO的病程,其表达下降可能提示ASO的发生。     

miR-24-3p靶向HAP1基因对STZ诱导胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA-24-3p(miR-24-3p)靶向亨廷顿蛋白相关蛋白(HAP)1基因表达对链脲佐菌(STZ)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法培养小鼠胰岛β细胞NIT,分别将anti-miR-NC、anti-miR-24-3p、pcDNA、pcDNA-HAP1转染入NIT细胞,加入STZ诱导细胞;不做任何处理为Con组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24-3p及HAP1 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹(Western印迹)实验检测HAP1及B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证miR-24-3p的靶基因。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 STZ处理后胰岛β细胞中miR-24-3p相对表达量明显高于Con组(P0.05),而HAP1 mRNA及蛋白表达均明显降低(P0.05);STZ可增加胰岛β细胞凋亡率,抑制miR-24-3p表达可降低胰岛β细胞凋亡率,还可上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达;HAP1过表达与抑制miR-24-3p表达均可抑制STZ诱导的胰岛β细胞凋亡;HAP1是miR-24-3p的靶基因,miR-24-3p可负向调节HAP1表达;抑制HAP1表达可促进胰岛β细胞凋亡。结论 miR-24-3p表达可通过抑制靶基因HAP1表达进而促进STZ诱导的胰岛β细胞凋亡。     

胶质瘤中miR-34a靶向作用于MAPK13 mRNA并抑制其表达

目的预测并验证miR-34a与促分裂原活化蛋白激酶13（MAPK13）的靶向作用关系,寻找胶质瘤基因治疗的新方法。方法将miR-34a相似物转染八胶质瘤细胞A172中,实时定量PCR检测miR－34a在胶质瘤中的表达。目的基因的mRNA水平用实时定量PCR来评估,蛋白水平分别用荧光素酶试验和蛋白印迹来评估。miR－34a与目的基因3′非翻译区（3′UTR）的结合用MAPK13报告实验确认。结果miR－34a相似物转染入胶质瘤细胞A172后在A172细胞中大量表达,实时定量PCR、蛋白印迹和免疫荧光证明miR－34a降低MAPK13的表达量,MAPK13荧光素酶报告实验显示,MAPK13荧光素酶活性被miR－34a降低。结论miR－34a通过与MAPK133′UTR区的特异结合作用发挥对胶质瘤责任基因MAPK13的靶向沉默作用,可能成为未来胶质瘤基因治疗的新选择。     

miR-183通过抑制CAND1促进前列腺癌病理进程

目的探究miR-183通过对CAND1的调控机制影响前列腺癌的病理进程。方法定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测前列腺癌患者及各株细胞系中miR-183表达量;观察前列腺癌患者临床病理特征及外周血中miR-183表达量;荧光素酶报告基因法分析miR-183与CAND1的调控机制;qRT-PCR及Western印迹检测miR-183与CAND1的调控作用;qRT-PCR检测CAND1在前列腺癌肿瘤组织中mRNA表达量;CCK8法、Transwell及流式细胞实验检测miR-183与CAND1的细胞增殖、迁移及周期S期相关性。结果前列腺癌组织样本中miR-183表达量明显高于癌旁正常组织,前列腺癌细胞株(PC3、Tsu-Pr1、DU145、22RV1、LNCAP)的miR-183表达量明显均高于RWPE-1,不同Glcason评分、TNM分期、淋巴结转移、远处转移的患者比较,差异具有统计学意义(P<0.05);前列腺癌CAND1表达量明显低于癌旁正常组织,(PC3、Tsu-Pr1、DU145、22RV1、LNCAP)前列腺癌细胞株的CAND1表达量明显均低于RWPE-1,过表达miR-183抑制CAND1 mRNA和蛋白表达量,miR-183抑制物促进CAND1 mRNA和蛋白表达量(P<0.05);miR-183 mimic转染组PC3增殖、迁移及S期细胞数均明显升高,miR-183 mimic+CAND1转染组PC3增殖、迁移及S期细胞数均明显降低(P<0.05)。结论过表达miR-183能抑制CAND1而促进前列腺癌的发展,miR-183有可能成为前列腺癌诊断与预测的潜在生物标志物。