肺癌细胞与组织中miR-100、miR-148a的表达变化及临床意义

目的：观察微小RNA 100（miR-100）、微小RNA 148a（miR-148a）在肺癌细胞与组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR方法检测人肺癌细胞系NCI-H1299、NCI-H358、H460、A549及人正常支气管上皮细胞系HBE,以及肺癌及其癌旁组织中miR-100、miR-148a表达;分析肺癌组织中miR-100、miR-148a表达与其临床病理参数的关系。结果与HBE细胞相比,miR-100在NCI-H1299、NCI-H358及A549细胞中表达升高,在H460细胞表达降低,P均＜0．05;miR-148a在NCI-H358、H460细胞中表达升高,在A549细胞中表达降低,P均＜0．05。与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-100表达降低,但差异无统计学意义（P＝0．400）;miR-148a表达升高（P＝0．036）。肺癌组织中miR-100、miR-148a表达水平与患者性别、年龄、病理类型无关;有淋巴结转移者肺癌组织中miR-100表达水平较无淋巴结转移者低（P＝0．016）。结论 miR-100、miR-148a在肺癌细胞中表达异常;在肺癌组织中,miR-100表达降低,miR-148a表达增加,二者可能参与肺癌的发生、发展。     

白藜芦醇对人食管癌细胞Eca-109增殖的影响及其机制探讨

目的观察白藜芦醇（Res）对人食管癌细胞Eca-109增殖的影响,并探讨其机制。方法将Eca-109细胞分别与0、10、20、40μmol/L的Res共同培养,采用MTT法测定Res对Eca-109细胞的生长抑制率,采用RT-PCR法检测Eca-109中的VEGF mRNA。结果随着Res浓度增加、作用时间延长,Eca-109细胞生长抑制率增加（P均〈0.05）,VEGF mRNA表达量降低（P均〈0.05）。结论Res可抑制Eca-109细胞增殖,其作用可能与抑制VEGF表达有关。     

血清miR-760表达对早期胃癌的诊断价值

目的 探讨早期胃癌患者血清miR-760表达变化及其对早期胃癌的诊断价值.方法 选择98例早期胃癌患者作为早期胃癌组,并选择萎缩性胃炎者53例以及体检健康者30例分别作为萎缩性胃炎组和对照组.应用实时荧光定量PCR检测各组血清中的miR-760,采用电化学发光法检测血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原-19(CA-199)...     

玉竹提取物B对人食管癌细胞Eca-109增殖与凋亡的影响

目的观察玉竹提取物B（EB-PAOA）对人食管癌细胞Eca-109增殖与凋亡的影响。方法将体外培养的Eca-109细胞与不同浓度的EB-PAOA共育,采用MTT法检测Eca-109细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪检测Eca-109细胞凋亡率。结果随着EB-PAOA浓度增大、作用时间延长,Eca-109细胞的增殖抑制率逐渐升高（P均〈0.05）,呈时间、剂量依赖性;随着EB-PAOA浓度增加,Eca-109细胞凋亡率逐渐增加,呈一定浓度依赖性（P均〈0.05）。结论EB-PAOA能够抑制人食管癌细胞Eca-109的增殖,并诱导其凋亡。     

Survivin基因小于扰RNA对人结肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨载体介导的Survivin小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞株Lovo生物学行为的影响.方法 构建Survivin特异性siR-NA真核表达载体.转染结肠癌癌细胞后,以噻唑蓝(MTT)比色法、克隆形成试验、流式细胞术测定细胞增殖、周期变化.结果 与对照组相比,pGenesil-2-Survivinl和2载体干扰组增殖能力明显减弱(P<0.05);转染pGenesil-2一Survivinl和2质粒后14 d,Lovo细胞形成克隆的百分率较正常组明显降低(P<0.05).转染了pGenesii-2-Survivinl和pGenesil-2-Survivin2质粒后48 h,Lovo细胞GO/G1和G2/M期细胞百分比较正常组明显增加(P<0.05),而S期细胞百分比较正常组明显减少(P<0.05).结论 载体介导的Survivin siRNA对Survivin的抑制可显著抑制结肠癌细胞株Lovo的恶性生物学行为.     

RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将Bcl-xL小干扰RNA（siRNA）转染食管癌EC109细胞,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot方法检测食管癌细胞Bcl-xL mRNA和蛋白,采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型检测癌细胞增殖和侵袭力。结果与对照组相比,siRNA转染组细胞Bcl-xL mRNA和蛋白水平明显下调（P均〈0.05）,所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少（P均〈0.05）,并均呈浓度依赖性。结论采用RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达,可抑制食管癌细胞的增殖和侵袭能力。     

VEGF-C siRNA载体构建及其对转染食管癌细胞中VEGF-C表达的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人食管癌细胞EC9706中血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的抑制作用.方法 根据siRNA设计原则,针对人VEGF-C cDNA序列设计并合成编码siRNA的寡核苷酸序列,并将其克隆入siRNA表达载体,构建重组质粒.将重组质粒转染入EC9706细胞株,通过免疫组织化学、RT-PCR和原位杂交法检测转染细胞中VEGF-C蛋白和mRNA的表达.结果 正常未转染(对照组)和无关序列转染(无关序列组)EC9706中,均有大量VEGF-c蛋白阳性棕色颗粒、mRNA阳性条带和紫蓝色阳性颗粒,而在siRNA转染EC9706(siRNA1-3组)中,仅有少量弱表达颗粒和较弱的阳性条带,与对照组和无关序列组相比,P均<0.01.结论 成功构建了VEGF-C siRNA载体.此载体能有效抑制人食管癌细胞EC9706中VEGF-C的表达,其可能成为抗食管癌淋巴管生成的一种新方法 .     

影响食管癌预后的生物学因素

影响食管癌预后的因素较多,肿瘤的临床病理指标如有饮酒史、肿瘤浸润范围、长度、远处转移、TNM分级都对患者的预后产生影响。现仅对近年来的有关食管癌外周血DNA含量、nm23基因及增殖细胞核抗原（PCNA）等生物学因素的研究进展作一综述。     

HLA-B对喉癌Hep2细胞生物学行为的影响

目的探讨人类白细胞组织相容抗原（HLA）-B在喉癌发生、发展中的作用。方法采用RNA干涉技术下调Hep2细胞中HLA-B基因表达。用干涉效应最明显、转染siRNA的细胞作为观察组,转染PBS及无义siRNA的细胞作为对照1组及对照2组。采用流式细胞仪、MTT和细胞体外侵袭力分析方法检测各组细胞凋亡率、增殖情况、细胞周期及局部侵袭能力。结果 RNA干涉7 d观察组细胞凋亡率明显高于两对照组,细胞周期阻滞于S期;细胞增殖能力及局部侵袭能力明显强于两对照组,P均〈0.05。结论 HLA-B表达降低或缺失在喉癌的发生、发展中起促进作用。     

人端粒酶逆转录酶RNA干扰对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的研究端粒酶逆转录酶（hTERT）RNA干扰对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响。方法将HCT116细胞分为转染组（转染重组质粒真核表达载体）、对照组（转染空载体质粒）和未转染组。PCR方法检测hTERT干扰序列,RT—PCR方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、细胞增殖和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞衰老,Annexin V／PI染色流式细胞光度术检测细胞凋亡。结果转染细胞内均存在hTERT干扰序列,hTERT干扰率为21．5％;与未转染细胞相比,转染细胞核质比明显缩小,增殖率显著下降（P〈0．05）,衰老细胞和G2-M期细胞明显增加（P〈0．05）。hTERT干扰显著增加结肠癌细胞凋亡（P〈0．05）,而对照细胞各指标均无显著变化。结论hTERT干扰显著影响结肠癌细胞的生物学行为。     

人miR-205真核表达载体的构建及鉴定

目的构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-205,并使其在肾上腺皮质癌细胞SW-13中稳定表达。方法依据miRbase数据库中pre-miR-205序列设计引物,PCR扩增pre-miR-205基因并将其克隆至线性化的pcD-NA3.1(+)质粒中,获得重组表达载体pcDNA3.1(+)-miR-205,经双酶切及测序分析后,将其及对照空载体转染肾上腺皮质癌SW-13细胞,采用实时定量RCR法鉴定miR-205在SW-13细胞中表达。结果酶切和测序结果均证实pcDNA3.1(+)-205重组质粒构建成功,经实时定量RCR检测表明转染pcDNA3.1(+)-205的SW-13细胞中miR-205阳性高表达。结论真核表达载体pcDNA3.1(+)-205在SW-13中稳定转染,为进一步研究miR-205在肾上腺皮质癌细胞SW-13中的功能及基因调控机制奠定了实验基础。     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对人大肠癌细胞生物学行为的影响

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默STAT3基因表达对人大肠癌细胞生物学行为的影响。方法采用真核细胞转染技术将pSi-lencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒转染人结肠癌HCT116细胞,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR、Western blot及免疫组化法分别观察STAT3基因和蛋白的变化,流式细胞仪及AO/EB染色观察细胞凋亡。结果 pSilencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒对大肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,与空白组及阴性组相比差异有统计学意义(P0.05);在重组质粒组,STAT3基因mRNA及蛋白的表达与空白组及阴性组相比明显减低(P0.05);重组质粒可诱导HCT116细胞凋亡,细胞周期分期示细胞阻滞于G2期。结论 pSilencer3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3基因在人大肠癌细胞中的表达。     

miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响及其机制探讨

目的 观察miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响,并探讨其是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶(DNMT3B)表达发挥作用.方法 采用MTT法检测miR-200c对人胃癌MGC-803细胞生长增殖能力的影响;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告载体系统观察miR-200c对DNMT3B 3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-200cmimics转染胃癌细胞MGC-803,采用Western blot检测DNMT3B表达水平.结果 MTT结果显示,在转染miR-200c mimics 24、48、72 h后,细胞增殖活性OD值分别为0.31±0.01、0.47±0.01、0.53 ±0.02,与对照组的0.44±0.03、0.62±0.01、0.87 ±0.01比较,P均＜0.05;荧光素报告载体系统证实,DNMT3B是miR-200c直接调控的靶基因.Western blot结果显示,miR-200c可抑制DNMT3B蛋白的表达.结论 miR-200c通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞生长增殖能力.     

人参皂甙Rg3对人食管癌EC-9706细胞及内源性VEGF的影响

培养人食管癌细胞株EC0706,不同浓度中药20（R）-人参皂甙Rg3和不同时间点进行干预,采用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学等技术了解不同浓度Rg3对此细胞增殖、凋亡、细胞周期及内源性VEGF的影响。MTT法示不同浓度Rg3对人食管癌细胞株EC0706的增殖均有明显抑制作用;流式细胞术示Rg3能诱导细胞凋亡及调节细胞周期;免疫细胞化学示Rg3能抑制细胞内源性VEGF的表达。认为适当浓度的RS3作用一定时间后,可促进人食管癌细胞株EC0706的凋亡,并可抑制肿瘤细胞内源性分泌的VEGF的表达,Rg3抑制肿瘤血管生成的机制之一是通过影响细胞分泌上述因子而起作用的。     

RNAi沉默CD14基因对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的以胃癌SGC-7901细胞为研究对象,在细胞水平观察沉默CD14基因对胃癌细胞增殖、凋亡、周期及下游靶因子TNF-α、IL-8的影响,探讨CD14基因在胃癌中的发病地位。方法重组CD14shRNA慢病毒为载体转染胃癌SGC-7901细胞。实验分3组,正常组、慢病毒阴性对照组(NCshRNA)、CD14沉默组(CD14shRNA)。采用荧光显微镜观察转染效率,确定最佳转染时间;Western blotting检测CD14蛋白的沉默效率;MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Real-time PCR技术检测TNF-α、IL-8表达。结果成功转染慢病毒CD14shRNA的SGC-7901人胃腺癌细胞可表达绿色荧光蛋白,测得在病毒MOI=10时,转染72 h后,慢病毒的转染效率最佳。转染后24 h,正常组细胞增殖率为218.18%,阴性对照组为216.27%,CD14shRNA组为211.63%,各组间相比,差异无统计学意义(P0.05);转染后48 h、72 h,正常组细胞增殖率为427.49%、479.22%,阴性对照组为417.84%、473.37%,CD14shRNA组为345.54%、362.64%,经比较,CD14沉默后细胞增殖率下降(P0.05)。CD14shRNA组细胞早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率均高于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。CD14shRNA组细胞G1期42.57%、S期38.65%、G2期13.22%,正常组细胞G1期35.91%、S期52.60%、G2期11.49%,差异有统计学意义(P0.05)。Western blotting结果显示,在转染胃癌细胞后,CD14shRNA慢病毒载体组细胞CD14蛋白表达相对于正常组及阴性对照组明显减少(P0.05);Real-time PCR结果显示,CD14shRNA转染胃癌细胞后,TNF-α、IL-8 mRNA表达较正常组、阴性对照组明显下降。结论 CD14基因沉默后,胃癌细胞增殖能力减弱,细胞周期阻滞在S期,细胞合成减少,凋亡率增加,TNF-α、IL-8表达下降,这说明CD14基因在胃癌细胞增殖、发展过程中占据重要地位。     

ALA-PDT对人食管癌Eca-109细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸—光动力疗法(ALA-PDT)对人食管癌Eca-109细胞相关凋亡蛋白表达的影响.方法 将人食管癌Eca-109细胞经过培养、处理后分为两组,ALA-PDT组(PDT组)细胞用ALA孵育6h后在光动力治疗系统下进行光照,光照后24h提取细胞总蛋白和胞质蛋白;对照组细胞不进行光动力治疗.采用Western blot法检测两组细胞中的Bcl-2、Cytc蛋白表达.结果 ALA-PDT作用于人食管癌Eca-109细胞后,与对照组比较,PDT组胞质中的Bcl-2蛋白表达量明显降低,Cytc蛋白表达量明显升高(P均＜0.05).结论 线粒体凋亡通路可能是ALA-PDT诱导Eca-109细胞凋亡的主要通路,Bcl-2可能为该凋亡通路的靶基因之一,释放Cytc进而诱导细胞凋亡可能为ALA-PDT诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的线粒体通路终末效应之一.     

miR-20b-5p靶向调控Cyclin D1对NSCLC细胞生物学行为的影响

目的 探讨微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)靶向调控细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响及其作用机制.方法 体外培养NSCLC细胞系A549、H1975、PC-9和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,采用RT-qPCR法检测miR-20b-5p相对表达量,选择...     

苦参素注射液对人食管癌Eca-109细胞周期的影响及机制研究

目的 探讨苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖周期的影响及其机制.方法 运用流式细胞术检测细胞周期变化和调控细胞增殖周期相关蛋白CyclinD1和CDK4的表达.结果 与阴性对照组和阳性对照组比较,苦参素对Eca-109细胞持续作用48 h后,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P均<0.05);CyclinD1和CDK4的表达量均随苦参素剂量增加而减少.结论 苦参素可以明显将人食管癌Eca-109细胞阻滞于G0/G1期,其主要机制可能与CyclinD1及CDK4的低表达有关.