五味子多糖对裸鼠脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度五味子多糖对体外培养裸鼠脑胶质瘤细胞生长的影响。方法体外培养原代裸鼠脑胶质瘤细胞,采用MTT方法,检测不同浓度五味子多糖作用24、48、72 h时对其增殖的影响。结果五味子多糖浓度在200μg/ml时,细胞生长无明显影响;在24、48 h时,药物浓度在400、800μg/ml时,对细胞生长的作用也不明显;但在72 h时,药物浓度在400和800μg/ml时,对细胞增殖的抑制作用很明显(P<0.01)。结论高浓度五味子多糖对体外培养裸鼠脑胶质瘤细胞的增殖具有抑制作用,提示五味子多糖可能在治疗脑胶质瘤方面发挥重要作用。     

五味子木脂素对神经细胞的毒性作用及对胶质瘤细胞的抑瘤效应

目的 研究不同浓度五味子木脂素对体外培养的原代神经细胞的毒性作用和胶质瘤细胞的抑瘤效应.方法 体外培养原代小鼠神经细胞及大鼠C6脑胶质瘤细胞,采用MTT法观察0,50,100和200 μg/ml五味子木脂素作用细胞48 h,对神经细胞的毒性作用及肿瘤细胞生长的影响.结果 各浓度五味子木脂素对体外培养原代小鼠神经细胞无明显毒性作用,而对大鼠C6脑胶质瘤细胞则有明显的抑制增殖作用(P＜0.01).结论 五味子木脂素对神经细胞无毒副作用,对胶质瘤细胞有明显抑瘤效应.     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡过程中Caspase-3的表达

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用及其诱导凋亡的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将质量浓度为0、200、400、800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)和细胞免疫组织化学方法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Caspase-3蛋白表达情况。结果不同浓度(200、400、800μg/ml)五味子多糖作用裸鼠胶质瘤细胞48 h后,与对照组相比较,五味子多糖组培养上清中Caspase-3蛋白表达水显著升高(P<0.01);细胞免疫组化结果显示,200、400、800μg/ml多糖组Caspase-3蛋白表达阳性率均明显升高(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过激活Caspase-3而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

五味子总木脂素与顺铂抑制大鼠胶质瘤细胞增殖的作用

目的 探讨大鼠脑胶质瘤细胞对五味子总木脂素作用的敏感性及五味子总木脂素与顺铂作用后对胶质瘤细胞增殖的影响.方法 培养大鼠C6脑胶质瘤细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特性,应用MTT法检测五味子总木脂素单独及联合顺铂作用后细胞的增殖程度.结果 大鼠C6脑胶质瘤细胞在五味子总木脂素低浓度作用时抑制生长作用不明显,甚至出现轻微的增殖现象,药物浓度达到200 μg/ml时,明显抑制细胞增殖.总木脂素与顺铂联合作用检测结果为0.43 ±0.01,与对照组(0.75 ±0.04)相比,具有显著性差异(P＜0.01).结论 五味子总木脂素与顺铂联合可发挥协同作用,从而抑制细胞增殖.     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将浓度为0、200、400和800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测其上清液中Bax和Bcl-2的蛋白表达;细胞免疫组织化学法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Bax和Bcl-2阳性表达率。结果不同浓度五味子多糖作用细胞后,细胞培养上清中Bcl-2蛋白表达水平均下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Bax/Bcl-2值均升高(P<0.01)。细胞免疫组化结果显示,400和800μg/ml多糖组Bax阳性表达率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。400和800μg/ml多糖组Bcl-2阳性表达率下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax/Bcl-2比值,使促凋亡因素占优势,从而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

五味子木脂素与顺铂抑制SHG-44神经球细胞的生长

目的研究五味子木脂素和顺铂对人脑胶质瘤SHG-44神经球细胞生长的作用。方法 MTT法分析检测五味子木脂素和顺铂对SHG-44神经球细胞生长的影响;ELISA法检测细胞培养上清中bcl-2及caspase 3蛋白的变化。结果 50、100、200 mg/L五味子木脂素作用24、48、72h,均能明显地抑制SHG-44神经球细胞的生长,作用呈浓度依赖性;10 mg/L顺铂作用后也可明显抑制神经球细胞的生长,作用呈时间依赖性。Elisa结果显示,药物作用后bcl-2蛋白水平明显下调,而caspase 3蛋白水平明显上调。结论五味子木脂素和顺铂都可以通过下调抗凋亡蛋白bcl-2的水平,进而抑制SHG-44神经球细胞的生长。     

五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的探讨五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法人胶质母细胞瘤株U251置于胎牛血清中培养,分为观察组和对照组。观察组应用五味子多糖作用于人胶质瘤U251细胞,对照组未应用任何药物作用于人胶质瘤U251细胞。四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。RT-PCR观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞周期素(cyclin)B1 mRNA、原癌基因(c-Myc)mRNA的影响。Western印迹观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞cyclin B1、c-Myc蛋白的影响。结果培养48 h后,观察组不同浓度用药组OD570值均低于对照组,且随着用药浓度的上升,五味子多糖对人胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用逐渐加强趋势。观察组cyclin B1 mRNA、c-Myc mRNA相对表达量均低于对照组(P0.05)。观察组cyclin B1、c-Myc蛋白表达量均低于对照组(P0.05)。结论五味子多糖能够有效抑制人胶质瘤U251细胞增殖,这可能与五味子多糖抑制cyclin B1与c-Myc的表达作用有关。     

五味子粗多糖对脑胶质瘤细胞生长的作用

目的 观察不同浓度五味子粗多糖对体外培养大鼠脑胶质瘤细胞生长的作用.方法 用0、1.25、2.5、5 mmol/L五味子粗多糖作用于体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞,采用MTT法检测五味子粗多糖对细胞增殖的抑制作用.结果 不同浓度(1.25、2.5、5 mmol/L)五味子粗多糖作用3、12、24、48 h,均能明显降低大鼠脑胶质瘤C6细胞的存活率;药物作用48 h时(0.53±0.07、0.45±0.04、0.40±0.02),细胞生长抑制最为明显,与对照组(0.54±0.03)相比有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 五味子粗多糖对大鼠脑胶质瘤C6细胞的生长具有抑制作用,提示五味子粗多糖可能在治疗脑胶质瘤方面发挥重要作用.     

脂联素对大鼠原代Kupffer细胞白细胞介素10表达的影响

目的本研究观察外源性脂联素对体外培养的大鼠原代Kupffer细胞白细胞介素（IL）-10表达的调节作用,以阐明脂联素的抗炎作用机制。方法通过两步胶原酶灌流、密度梯度离心和2 h选择性贴壁方法分离纯化大鼠肝脏Kupffer细胞。酶联免疫吸附试验方法检测脂联素作用下原代Kupffer细胞上清液中IL-10的表达水平。荧光定量PCR法检测脂联素作用下原代Kupffer细胞IL-10 mRNA表达。结果 0.5、1.0、1.5μg/ml脂联素处理Kupffer细胞4、8、12、16 h,与对照组相比,同一浓度的脂联素随着培养时间的延长,Kupffer细胞IL-10分泌逐渐增加;而同一作用时间下,随着脂联素浓度的增加,Kupffer细胞IL-10分泌量并没有逐渐增加。1.0和1.5μg/ml脂联素作用Kupffer细胞16 h,IL-10基因表达量与对照组相比显著增加,各处理组间无明显差异。结论脂联素可上调大鼠原代Kupffer细胞IL-10的表达,这可能是其抗炎作用机制之一。     

脂联素随原代HSC活化表达的动态变化及其对原代HSC表达MMP-13的影响

目的:探讨脂联素mRNA在原代肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化过程中表达的变化趋势,以及其对体外培养的原代HSC增殖状况和金属基质蛋白酶-13(MMP-13)mRNA与蛋白表达的影响.方法:改良的肝脏二步原位灌注法分离培养原代HSC;以α-SMA为原代HSC活化的标志,Real-time PCR方法检测随HSC活化脂联素表达的动态变化;MTT方法检测脂联素对活化HSC增殖的影响,以外源性脂联素处理原代HSC,根据脂联素浓度,分为对照组,脂联素处理浓度62.5μg/L,125μg/L,250μg/L,500μg/L五组,Real-time PCR方法检测MMP-13 mRNA表达;ELISA方法检测原代HSC分泌的MMP-13蛋白量.结果:HSC存活率的下降与脂联素浓度呈线性相关(OR=0.828).MMP-13 mRNA和蛋白表达水平与外源性加入脂联素浓度正相关,当脂联素浓度增加至500 g/L时,MMP-13 mRNA表达增高至对照组的5.54倍,MMP-13含量增加至30.951μg/L显著高于对照组的24.127μg/L,差异具有显著统计学意义.结论:脂联素具有抑制肝纤维化的作用,其机制可能与抑制HSC增殖和增强MMP-13在HSC细胞的表达有关.     

脂联素对原代大鼠肝星状细胞表达MMP-2和MMP-13的影响

目的观察外源性脂联素对体外培养原代大鼠肝星状细胞（HSC）表达基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响,探讨脂联素对肝纤维化的影响。方法改良的肝脏二步原位灌注法分离肝星状细胞,外源性脂联素（125μg/L、250μg/L、500μg/L）处理体外培养的原代肝星状细胞。Real-time PCR方法分析其对原代HSCMMP-2和MMP-13 mRNA表达的影响,ELISA方法检测原代HSC分泌MMP-2和MMP-13蛋白水平,酶谱法检测细胞外MMP-2的酶活性。结果脂联素促进MMP-2和MMP-13 mRNA表达,随脂联素浓度增加,作用更加明显。脂联素可促进HSC分泌MMP-2及MMP-13蛋白,提高MMP-2酶活性,但均无剂量依赖性。结论脂联素调节MMP-2表达和活性,促进MMP-13表达,可能对肝纤维化产生影响。     

五味子粗多糖与顺铂抑制脑胶质瘤细胞增殖的作用

目的研究五味子粗多糖(FSP)单独或与顺铂联合抑制脑胶质瘤细胞增殖的作用。方法培养脑胶质瘤(SHG-44)细胞,应用四甲基偶氮唑(MTT)法检测FSP单独及联合顺铂抑制细胞增殖的情况。结果脑胶质瘤SHG-44细胞在FSP浓度200、400、800μg/ml时,均可以抑制细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),且有浓度依赖性。FSP与顺铂联合作用时可以明显地抑制细胞的生长(P<0.01)。结论 FSP可以抑制胶质瘤SHG-44细胞的增殖,联合顺铂时可发挥协同作用。     

脂联素对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 观察外源性脂联素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和活化的影响,探讨脂联素对肝纤维化的影响.方法 外源性脂联素(0.1 μtg/mL、1μtg/mL、10 μg/mL)处理体外培养的HSC-T6,MTT法分析其对HSC-T6增殖的影响,Western blot法检测HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 脂联素对HSC的抑制作用随药物浓度的增加而增强,α-SMA的蛋白表达随脂联素浓度增加而下降.结论 脂联素能抑制HSC-T6的增殖,从而发挥抗肝纤维化作用.     

胰岛素对大鼠骨骼肌细胞脂联素受体基因表达的影响

目的了解体外胰岛素对原代培养大鼠骨骼肌细胞脂联素受体1表达的影响。方法体外原代培养骨骼肌细胞,应用SYBRGreenⅠ染料建立一种快速、可靠的实时定量PCR,对其主要要素进行优化。观察不同胰岛素浓度不同作用时间下,大鼠骨骼肌细胞脂联素受体基因表达水平的动态变化。结果建立敏感、特异、快速检测脂联素受体1mRNA的实时定量PCR方法,随着胰岛素浓度的增加,脂联素受体1表达逐渐降低。在较低浓度（胰岛素浓度〈1nmol/L）时,脂联素受体1表达的降低无统计学意义,当胰岛素浓度增加到10nmol/L及以上时,骨骼肌细胞脂联素受体1表达的降低有统计学意义（P〈0.05）,这种抑制作用1h后出现,24h后达到高峰。结论成功地建立SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测脂联素受体基因的表达方法,体外高胰岛素对骨骼肌细胞脂联素受体1mRNA表达有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性。     

越桔原花青素对SHG-44脑胶质瘤细胞生长的作用

目的探讨越桔原花青素对体外培养的人胶质瘤细胞株SHG-44生长的影响。方法培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,加入5%基础培养液和越桔原花青素(浓度分别为5、10、20、40μg/L)含药血清培养24、48、72 h,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测药物作用后SHG-44细胞的生长情况。结果不同浓度的越桔原花青素均可以抑制SHG-44胶质瘤细胞的生长。10、20、40μg/L越桔原花青素浓度组在作用24、48、72 h时,细胞的生长均受到了明显的抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而5μg/L浓度越桔原花青素浓度组在作用细胞72 h时,细胞的生长亦明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论越桔原花青素可以抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞生长,为其开发为抗脑肿瘤新药提供初步理论依据。     

瑞香素体外抗卡氏肺孢子虫作用的初步研究

目的研究瑞香素在体外抗卡氏肺孢子虫(Pneumocystiscarinii,Pc)的作用。方法建立Wistar大鼠卡氏肺孢子虫肺炎模型;分离、纯化虫体,进行体外培养。测定不同浓度的瑞香素体外抗Pc的作用,观察经FeSO4、MgSO4螯合后的瑞香素对虫体的生长影响情况。用透射电镜观察药物处理后的虫体超微结构改变。结果瑞香素抗Pc作用效应在1～20μmol/L浓度范围呈剂量依赖和时间依赖关系。10μmol/L瑞香素与1.0μg/ml喷他脒对Pc生长影响效果相当。若预先将瑞香素与FeSO4按21比例混合后,瑞香素对Pc的生长抑制作用大大减弱。瑞香素处理后的虫体的超微结构有改变。结论瑞香素在体外对Pc生长有抑制作用。     

十全大补汤总多糖的体外抗肿瘤作用

目的探讨十全大补汤总多糖（以下简称总多糖）的体外抗肿瘤作用,为其临床应用及抗肿瘤药物的研发提供依据。方法以200、100、50μg/ml浓度总多糖干预体外培养的人肺癌A549细胞株、人肝癌Bel-7402细胞株、人结肠癌HCT-8细胞株和人宫颈癌Hela细胞株。作用24、48、72 h时采用MTT法测定细胞增殖抑制率（IR）。结果 200μg/ml总多糖作用48 h时A549细胞的IR最高;总多糖对另3种细胞的作用均为随浓度及作用时间延长IR逐渐升高,以200μg/ml、作用72 h时IR最高,呈剂量及时间依赖性。结论总多糖可在体外抑制肿瘤细胞生长;其有望作为抗肿瘤药物用于临床。     

千金子二萜醇对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞体外生长的抑制作用

目的观察中药千金子体外对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞的抑制作用。方法将人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞在不同浓度含千金子二萜醇(111、333、1 000、3 000、9 000μg/ml)的培养基中培养,MTT法观察千金子二萜醇对细胞体外增殖情况的影响。结果24 h后两实验组细胞增殖速度减慢,并随浓度增加增殖速度减慢明显;3 000、9 000μg/ml浓度组有统计学差异(7860细胞:P=0.005,P=0.002;renca细胞:P=0.005,P=0.003),以9 000μg/ml浓度组作用最强,人肾癌7860细胞生长抑制率达76.03%,小鼠肾癌renca细胞生长抑制率为64.65%;与空白对照比较差异显著(P=0.002,P=0.003);两实验组细胞增殖比较没有明显差异(P0.05)。结论中药千金子体外对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞有明显抑制作用,使两细胞体外生长被显著抑制,证实千金子二萜醇是一种有临床应用前景的抗肿瘤中药提取物。     

五味子乙素对人胃癌细胞株MGC-803凋亡的影响

目的观察五味子乙素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡作用。方法用10、50、100、200μmol/L浓度五味子乙素作用胃癌细胞株48 h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;MTT法检测五味子乙素对细胞增殖的抑制作用;电镜观察、判定凋亡细胞;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。结果倒置显微镜下,随着五味子乙素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;MTT法亦检测到上述结果;当五味子乙素作用浓度是100μmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞。结论高浓度的五味子乙素可剂量依赖性地诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡。     

外源性脂联素对内皮素1诱导的肝星状细胞收缩的影响及作用机制

目的观察外源性脂联素对内皮素(ET)1诱导的肝星状细胞(HSC)-T6收缩的影响,探讨脂联素在此过程中的可能作用机制。方法应用胶原晶格法观察不同浓度(0.25、0.5μg/ml)脂联素及脂联素(0.5μg/ml)与左旋硝基精氨酸甲酯(LNAME)(5 mmol/L)共同作用下对ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩的影响;分别采用实时荧光定量PCR、Western Blot检测脂联素(0.5μg/ml)作用后HSC-T6细胞中ET-1 mRNA及蛋白的表达,采用ELISA检测脂联素(0.5μg/ml)作用后HSC-T6细胞培养液中ET-1蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR及Western Blot检测不同浓度(0.5、1、2μg/ml)脂联素与ET-1共同作用下HSC-T6细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的mRNA及蛋白的表达,同时检测HSC-T6细胞中AMPK、p-AMPK、Akt、p-Akt蛋白的表达。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用Dunnett法。结果 (1)胶原晶格实验显示,与空白对照组相比,ET-1组凝胶面积显著收缩[(24.8±7.3)%vs(71.9±4.1)%,P0.01];脂联素(0.5μg/ml)处理后,明显抑制ET-1引起的收缩[(52.7±20.6)%vs(24.8±7.3)%,P0.05];L-NAME(5 mmol/L)可以部分抵消脂联素的抑制作用(P0.05)。(2)脂联素(0.5μg/ml)可以抑制HSC-T6细胞中ET-1 mRNA及蛋白的表达(P0.05),同时可以抑制细胞上清液中ET-1的蛋白表达,在脂联素的基础上加入L-NAME后,脂联素的上述抑制作用均得到部分逆转。(3)HSC-T6细胞中有i NOS mRNA表达,加入ET-1后i NOS mRNA表达量明显下降(P0.01),同时加入ET-1和脂联素作用后i NOS mRNA表达较ET-1组增加,且随着脂联素浓度升高i NOS mRNA表达量有逐渐升高的趋势,HSC-T6细胞中i NOS蛋白表达与mRNA表达趋势一致;ET-1处理24 h后HSC-T6细胞中p-AMPK表达水平明显减低,在此基础上加入脂联素后,p-AMPK表达水平明显上升,且随脂联素浓度的增加逐渐增加;ET-1处理24 h后HSC-T6细胞中p-Akt表达水平明显上升,在此基础上加入脂联素后,p-Akt的表达水平下降,且随脂联素浓度的增加逐渐降低。结论脂联素能够抑制ET-1诱导的HSC收缩,其机制可能是通过激活AMPK,增加NO的合成,减少ET-1的合成分泌,同时阻断Akt信号通路来实现的。脂联素抑制HSC的收缩作用可能是其抗肝纤维化的机制之一。