丹皮酚对人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435增殖的影响

目的 观察丹皮酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-435增殖的影响及其抑制机制.方法 应用MTT法观察丹皮酚对MDA-MB-435细胞的细胞毒作用；应用苏木精-伊红(HE)染色观察丹皮酚对细胞形态学的影响；流式细胞仪检测丹皮酚处理MDA-MB-435细胞后细胞周期的变化.结果 丹皮酚作用于MDA-MB-435细胞的IC50为60 mg/L;60 mg/L的丹皮酚作用于MDA-MB-435细胞24、48 h后,细胞生长受到不同程度的抑制,出现细胞变圆,体积缩小,胞浆起泡,部分细胞浮起,胞膜皱缩,核深染等形态学改变.肿瘤细胞周期在G0/G1期百分数增加,S期和G2/M期百分数减少,出现Sub-G1期凋亡峰,百分率分别为12.4％和23.7％.结论 丹皮酚通过影响MDA-MB-435细胞周期和诱导凋亡而抑制MDA-MB-435增殖.     

汉防己甲素对三阴性乳腺癌细胞体外生物学活性的影响及机制

目的 探讨汉防己甲素(Tet)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生物学活性的影响及机制.方法 选取MDA-MB-231细胞,用含10％胎牛血清的DMEM培养基于37℃、5％CO2培养箱中培养.采用CCK-8实验检测不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25μmol/L)汉防己甲素对MDA-MB-231细...     

抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响

目的:探讨抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响及其机制.方法:采用脂质体转染法将带有全长Pdcd4cDNA的质粒转入BGC-823细胞,MTT法测定羟基喜树碱对Pdcd4cDNA转染BGC-823细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测羟基喜树碱作用前后细胞周期和凋亡率的变化,Western blot蛋白印迹法检测Pdcd4蛋白表达.结果:建立了稳定转染Pdcd4cDNA的BGC823细胞系:羟基喜树碱作用转染细胞24,72 h后,药物对Pdcd4cDNA转染组细胞的半数抑制浓度均低于两对照组(pCDNA3.1与pCDNA-Pdcd4-D418A)(74.48 μmol/L vs 87.67,102-30 μmol/L;14.30 μmol/L vs 40.59,29.54μmol/L,均P＜0.05);流式细胞仪测定结果表明,80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞24h,处于细胞周期G0/G1期的细胞比例下降,S期细胞比例升高,出现细胞周期S期阻滞,72h,细胞凋亡率显著升高(pCDNA3.1:45.40%vs 5.65%:pCDNA-Pdcd4-D418A:36.21%vs 3.07%;pCDNA-Pdcd4:46.17% vs 4.25%,P＜0.05):Westem blot结果表明80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞72 h,Pdcd4蛋白表达水平升高.结论:提高人胃腺癌细胞BGC-823中Pdcd4蛋白的表达能增强其对羟基喜树碱的敏感性:羟基喜树碱能引起BGC-823细胞s期阻滞,并能诱导细胞凋亡;羟基喜树碱本身也可上调BGC-823中Pdcd4的表达.     

全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的 本研究探讨全硫代反义寡核苷酸( PS-ASODN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞生长、迁移、侵袭的影响.方法 本实验将PS-ASODN经脂质体转染作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,将实验分为空白对照组、对照正义全硫代寡核苷酸(PS-SODN)组和不同剂量的PS-ASODN组;脂质体介导的PS-ASODN和PS-SODN作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(EUSA)、流式细胞术、Transwell小室迁移、侵袭实验检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡、细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 终浓度为1、3及5 μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与空白对照组比较差异显著(P＜0.01),并呈一定剂量依赖性;ELISA法检测结果,1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞作用72 h后端粒酶皆为阴性,表明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性.1、3及5μmol/L的PS-ASODN作用24h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.01).结论 PS-ASODN能有效抑制人乳腺癌MDA-MB -231细胞的生长、促进凋亡、抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能是通过PS-ASODN降低端粒酶活性而实现.     

辛伐他汀对耐紫杉醇人肺腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨辛伐他汀联合紫杉醇对人肺腺癌耐紫杉醇细胞株增殖的影响。方法用0、10、20、40、80μmol/L的辛伐他汀处理耐紫杉醇A549细胞(A549/Taxol)24、36、48 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测算各组细胞增殖率。用含有20μmol/L的辛伐他汀(辛伐他汀组)、10-7mol/L紫杉醇(紫杉醇组)及20μmol/L的辛伐他汀+10-7mol/L紫杉醇(联合组)培养A549/Taxol细胞,24、48 h后用MTT法测算各组细胞增殖率,24、36、48 h后用流式细胞术检测各组细胞周期。结果辛伐他汀能浓度依赖性(10~40μmol/L)地抑制耐紫杉醇A549/Taxol细胞增殖,而且抑制作用呈时间依赖性(P均<0.05)。相同时点比较联合组细胞增殖抑制率和G1期细胞比例高于辛伐他汀组、紫杉醇组和空白对照组。结论辛伐他汀可抑制A549/Taxol增殖,辛伐他汀联合紫杉醇对A549/Taxol增殖有协同抑制作用。     

高钙拮抗氟对人牙乳头间充质细胞毒性的体外试验研究

目的观察高浓度钙对氟细胞毒性的影响.方法体外培养的人牙乳头间充质细胞给予不同浓度氟10～2 630 μmol/L处理,将有明显氟细胞毒性的实验组同时予高浓度钙(4.1,10 mmol/L)处理,用S四唑盐(MTT)比色法和透射电镜观察细胞活性和超微结构.结果 263,1 315,2 630×10-6mol/L氟对人牙乳头间充质细胞毒性明显,10×10-3mol/L和4.1×10-3mol/L钙对1 315×10-6mol/L浓度以下氟毒性有明显拮抗作用,对2 630×10-6mol/L氟毒性作用不确定.结论氟细胞毒性在一定范围内可被高钙拮抗.     

紫檀芪对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响

目的探讨紫檀芪(PTE)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响。方法细胞分为正常对照组、PTE组(10、20、40、80μmol/L),各组细胞分别处理24、48、72 h。MTT法检测各组细胞存活率;黏附实验测定各组细胞黏附率;TUNEL法测定各组细胞凋亡率;Caspase-Glo3/7定量试剂盒测定细胞Caspase3/7的表达情况。结果MTT结果显示PTE对MDA-MB-231细胞增殖有抑制作用(P<0.01),呈药物浓度时间依赖效应,其中80μmol/L处理72 h组抑制效果最明显。黏附实验(48 h)结果显示PTE可以减弱MDA-MB-231细胞黏附能力(P<0.01),并呈浓度依赖效应。TUNEL检测(48 h)结果显示PTE可以增加MDA-MB-231细胞的凋亡率(P<0.01)。Caspase3/7检测结果显示PTE可以使Caspase3/7活性升高(P<0.01)。结论 PTE可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡。     

双硫仑联合紫杉醇对食管癌细胞增殖、侵袭能力的抑制作用及其机制

目的 探讨双硫仑联合紫杉醇对食管癌细胞增殖、侵袭能力的抑制作用并分析其机制。方法 以不同浓度双硫仑（0、10、20、40μmol/L）分别作用于食管癌细胞株TE-1和TE-10,CCK-8法测算细胞活力,筛选得到双硫仑最佳作用浓度为20μmol/L。将TE-1、TE-10食管癌细胞分别分为对照组（不加药物正常培养）、双硫仑组（20μmol/L双硫仑）、紫杉醇组（0.5μmol/L紫杉醇）、双硫仑+紫杉醇组（20μmol/L双硫仑+0.5μmol/L紫杉醇）。采用MTT法观察细胞增殖能力,流式细胞术观察细胞凋亡率,Transwell实验观察细胞侵袭能力,RT-qPCR法检测细胞α微管蛋白mRNA,Western blotting法检测细胞α微管蛋白、Bcl-2蛋白。结果 TE-1及TE-10细胞增殖率对照组>双硫仑组>紫杉醇组>双硫仑+紫杉醇组,TE-1及TE-10细胞凋亡率对照组<双硫仑组<紫杉醇组<双硫仑+紫杉醇组（P均<0.05）,TE-1及TE-10细胞穿膜细胞数对照组>双硫仑组>紫杉醇组>双硫仑+紫杉醇组（P均<...     

药物诱导胃癌细胞凋亡的初步探索

目的:了解羟基喜树碱和氧化砷体外诱导胃癌细胞凋亡的能力.探索最佳诱导时间和剂量.并初步阐明其作用机制。方法:利用HE染色法、流式细胞仪和DNA末端原位标记染色法(TUNEL)观察羟基喜树碱和氧化砷在体外对胃癌细胞MKN-28(高分化腺癌)。SGC-7901(中分化腺癌)。MKN-45(低分化腺癌)的作用 结果:药物作用48小时后,羟基喜树碱0.01mg/ml组胃癌细胞MKN-28、SGC-7901、MKN-45的凋亡率分别为30.26％、21.88％和12.35％,氧化砷10μmol/L组胃癌细胞MKN-28、SGC-7901、MKN-45的凋亡率分别为22.52％、13.83％和9.68％其中羟基喜树碱在细胞周期的S期诱导胃癌细胞发生凋亡,而氧化砷则主要作用于G2/M期。     

人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响,并探讨其机制。方法取处于对数生长期的MDA-MB-231,加入不同终浓度（50、100、200、400、600μmol/L）人参皂苷Rg3,以不加人参皂苷Rg3为对照。MTT法检测细胞生长情况;Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白E（Cyclin E）及细胞分裂周期蛋白25A（CDC25A）表达水平。结果低浓度（≤200μmol/L）的人参皂苷Rg3可促进MDA-MB-231增殖,高浓度（≥400μmol/L）的人参皂苷Rg3则抑制其增殖。与对照细胞比较,低浓度人参皂苷Rg3处理的细胞中Cyclin E及CDC25A的表达增高,高浓度处理者Cyclin E及CDC25A的表达下降（P均〈0.01）。结论高浓度人参皂苷Rg3在体外对乳腺癌细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与抑制细胞周期关键蛋白Cyclin E及CDC25A的表达有关。     

EZH2抑制剂DZNeP对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的探讨EZH2抑制剂DZNe P对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法取对数生长期乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231,经2.5、5、10、20μmol/L DZNe P处理后(设不加DZNe P仅添加完全培养基组为对照组),采用四甲基偶氮唑盐比色法检测各组24、48、72 h的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组24、48 h的凋亡率,收集20μmol/L DZNe P处理72 h的MCF-7、MDA-MB-231细胞,采用Western印迹检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路和Wnt/β-连接素(β-catenin)通路中的蛋白变化。结果 DZNe P在2.5~20μmol/L范围内可抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖,且与对照组相比增殖抑制率升高(P0.05),该抑制效应呈浓度和时间依赖性;与对照组相比,DZNe P处理组的凋亡率均升高(P0.05),DZNe P各浓度处理48 h的凋亡率均高于24 h(P0.05);PI3K/Akt通路中,与对照组相比,20μmol/L DZNe P处理72 h后MCF-7、MDA-MB-231细胞的PTEN水平均升高,Akt水平均降低(P0.05);而在Wnt/β-catenin通路上,20μmol/L DZNe P处理72 h后两细胞株中的β-catenin、Cyclin D1和C-myc水平均降低(P0.05)。结论 DZNe P可抑制人乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,可能与抑制肿瘤恶性行为相关的PI3K/Akt、Wnt/β-catenin通路有关,在乳腺癌治疗上有一定应用前景。     

CIK对地西他滨增敏乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤机制探讨

目的 观察地西他滨（DAC）增敏细胞因子介导的杀伤细胞（CIK）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的细胞毒作用,并探讨其增敏机制.方法 取对数生长期的乳腺癌MDA-MB-231及正常乳腺MCF-10A细胞,MMT法检测DAC及TRAIL对乳腺癌细胞的增殖抑制率,LDH法检测DAC单用或联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及CIK对乳腺癌细胞的杀伤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 DAC对乳腺癌细胞MDA-MB-231及正常乳腺上皮细胞MCF-10A无明显杀伤作用.TRAIL对MDA-MB-231有明显杀伤作用,作用24h的IC50约为100 ng/mL,然而对MCF-10A无明显促凋亡影响.5∶1、10∶1、20∶1效靶比的CIK对MDA-MB-231的杀伤率分别为10.7％±1.2％、17.8％±2.1％、37.2％±3.4％,对MCF-10A无杀伤作用.经50 μmol/L的DAC预处理乳腺癌细胞MDA-MB-231 24 h后,5∶1、10∶1、20∶1效靶比的CIK对MDA-MB-231的杀伤率分别为18.6％±2.6％、26.3％±4.5％、51.6％±6.6％,与相应单独效靶比的CIK杀伤作用比较,P均＜0.01.结论 DAC增敏CIK对乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤敏感性,对正常的乳腺上皮细胞无影响,DAC联合CIK可能成为治疗乳腺癌患者的新途径.     

地拉罗司对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响

目的探讨铁鳌合剂地拉罗司(deferasirox,DFS)体外对成骨细胞增生、分化、矿化和细胞内铁离子的影响。方法小鼠前成骨样细胞MC3T3-E1在37℃条件下体外培养,在10 mmol/Lβ-甘油磷酸和50 mg/L抗坏血酸的诱导作用下,分化为成骨细胞,同时用不同浓度(10、20、40μmol/L)DFS干预,用CCK-8法检测细胞的增生,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测细胞ALP活性,Von kossa染色法行细胞钙结节染色,实时定量PCR检测细胞膜转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)mRNA的表达。结果 MC3T3-E1细胞增生结果显示,DMSO溶剂组、对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组A值分别为1.41±0.09、1.41±0.09、1.01±0.01、0.79±0.04、0.67±0.04;ALP活性检测结果显示,对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组ALP活性值分别为0.73±0.03、0.65±0.02、0.54±0.03、0.35±0.04;钙结节检测结果显示,对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组TfR mRNA钙化面积比值分别为4.22±0.12、3.29±0.14、1.40±0.20、0.86±0.21;TfR mRNA表达检测结果显示,对照组(0μmol/L)、10、20、40μmol/L组TfR mRNA表达比分别为1、1.52±0.23、1.91±0.17、2.98±0.14。MC3T3-E1细胞的增生、ALP活性、钙结节和钙化面积随DFS干预浓度的增加呈剂量依赖性降低(P0.05),TfR mRNA的表达随DFS干预浓度的增加呈剂量依赖性升高(P0.05)。结论 DFS可能通过螯合成骨细胞内的铁离子抑制其增生、分化和矿化。     

紫杉醇及多西他赛对肺癌细胞增殖抑制的效果及JAK/STAT相关机制

目的分析紫杉醇及多西他赛对肺癌细胞增殖抑制的效果及相关机制。方法肺癌细胞H1299随机分为对照组、紫杉醇组(10μmol/L)、多西他赛组(10μmol/L)及紫杉醇+多西他赛组(10μmol/L+10μmol/L),各组细胞经相应药物处理后,MTT法检测药物对细胞的增殖抑制率、荧光定量PCR法及免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白及JAK-STAT通路蛋白JAK1、JAK3、STAT1和STAT3的表达变化。结果与对照组相比,紫杉醇组、多西他赛组及紫杉醇+多西他赛组细胞的增殖受到明显抑制,紫杉醇+多西他赛组细胞增殖抑制率最高,且与其他两组比较差异显著(P0.01);同时,紫杉醇、多西他赛和二者合用均能够有效增强细胞凋亡蛋白Bax、Caspase3和Caspase9及JAK1、JAK3、STAT1和STAT3表达,抑制Bcl2蛋白表达,且二者联用的作用效果明显优于二者单独使用的作用效果(P0.01)。结论紫杉醇和多西他赛联用能有效抑制肺癌细胞增殖、促进其凋亡,可能与其激活细胞内JAK/STAT信号转导通路相关。     

羟基红花黄色素A对缺氧心肌细胞的保护作用

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对缺氧心肌细胞的保护作用。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照、缺氧损伤、HSYA1×10-6mol/L～1×10-10mol/L组、地尔硫艹卓组,同时设1×10-6mol/LHSYA正常对照组。以高纯氮气封罐,无糖无血清培养液密闭培养制备心肌细胞缺氧模型,观察各组细胞形态学变化,计数细胞搏动频率,测定心肌细胞存活率、细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞内的丙二醛(MDA)浓度及ATP酶活性。结果与缺氧损伤组比较,1×10-7mol/L和1×10-8mol/L浓度HSYA组心肌细胞仍存在规律性搏动,细胞存活率显著升高,细胞培养液中LDH活性、心肌细胞内MDA的含量明显低于缺氧损伤组(P<0.05,P<0.01),而细胞内ATP酶的活性较缺氧损伤组显著增高(P<0.01)。结论1×10-7、1×10-8mol/L浓度的HSYA可有效的保护心肌细胞免受缺氧损伤。     

去铁酮对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响

目的研究铁螯合剂去铁酮(deferiprone,DFP)体外对成骨细胞增生、分化以及细胞铁代谢的影响。方法体外培养小鼠前成骨样细胞MC3T3-E1,在10 mmo L/Lβ-甘油磷酸和50μg/m L抗坏血酸的诱导下,分化为成骨细胞,同时用不同浓度(25、50、100μmol/L)DFP干预,用CCK-8法检测细胞的增生,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测细胞ALP活性,实时定量PCR检测细胞膜转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)mRNA的表达。结果 MC3T3-E1细胞增生结果显示,DMSO溶剂组、对照组(0μmol/L)和DFP 25、50、100μmol/L组A值分别为1.36±1.10、1.41±0.09、0.78±0.06、0.68±0.03、0.46±0.01;ALP活性检测结果显示,对照组(0μmol/L)和DFP 25、50、100μmol/L组ALP活性值分别为0.83±0.05、0.75±0.04、0.64±0.03、0.51±0.03;TfR mRNA表达检测结果显示,对照组(0μmol/L)和DFP 25、50、100μmol/L组表达比分别为1、1.16±0.05、1.32±0.06、2.30±0.11。MC3T3-E1细胞的增生、ALP活性随DFP干预浓度的增加呈剂量依赖性下降(P0.05),TfR mRNA的表达随DFP干预浓度的增加呈剂量依赖性上升(P0.05)。结论 DFP可能通过螯合成骨细胞内的铁离子抑制其增生、分化。     

重楼皂苷Ⅰ对结肠癌耐奥沙利铂细胞株的毒性研究

目的探讨重楼皂苷Ⅰ对结肠癌耐奥沙利铂细胞的体外毒性及其机制。方法复苏结肠癌SW480、LoVo细胞,采用大剂量冲击法诱导结肠癌耐奥沙利铂细胞,CCK-8实验检测其耐药性,Transwell细胞侵袭实验检测其侵袭性以鉴定其恶性生物学行为。CCK-8实验检测重楼皂苷Ⅰ对耐药细胞及其亲代细胞的毒性作用,Annexin V/PI染色流式细胞术检测重楼皂苷Ⅰ处理细胞后Annexin V/PI阳性细胞比例以检测其对细胞凋亡的作用。提取细胞总蛋白,Western blotting检测重楼皂苷I处理细胞后细胞中凋亡相关蛋白Bax和Caspass-3等蛋白的表达。结果大剂量奥沙利铂冲击法成功诱导奥沙利铂耐药细胞LoVo/L-OHP、SW480/LOHP。CCK-8细胞毒性实验显示,LoVo/L-OHP、SW480/L-OHP的IC_(50)值比其亲代细胞提高5~25倍,Transwell细胞侵袭实验证实,耐药细胞比亲代细胞具有更强的侵袭性(P0.019)。CCK-8实验显示,重楼皂苷I对SW480、LoVo及其耐奥沙利铂细胞的IC_(50)值相似。Annexin V/PI染色、流式细胞仪检测凋亡细胞比例显示,重楼皂苷I处理细胞后,Annexin V/PI阳性细胞率明显升高,Western blotting结果显示,重楼皂苷Ⅰ处理细胞后细胞中Bax和Caspass-3蛋白表达水平升高。这两个实验证实,重楼皂苷Ⅰ能够促进结肠癌细胞及其耐药细胞凋亡。结论重楼皂苷I对结肠癌细胞及耐奥沙利铂细胞均有良好的抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用是通过介导结肠癌细胞凋亡实现的。     

和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响

目的 探究和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响。方法 以不同浓度和厚朴酚(0、10、20、30、40、50μmol/L)联合5 nmol/L紫杉醇处理紫杉醇耐药的肺癌细胞(A549/Taxol),采用MTT检测细胞存活率,筛选试验浓度。再将A450/Taxol细胞分为对照组、紫杉醇组、和厚朴酚+紫杉醇组和Notch信号通路激活剂(Jagged1/FC)组,检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,并采用Western Blotting法检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白及Notch信号通路蛋白表达。结果 5 nmol/L紫杉醇与20、30、40、50μmol/L和厚朴酚联用时,细胞存活率明显降低,其中30μmol/L和厚朴酚抑制效果最佳,选用此浓度进行后续实验;与紫杉醇组比较,和厚朴酚+紫杉醇组细胞存活率、细胞迁移能力降低,细胞凋亡率升高,c-Myc、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Notch1、Jagged1和Hes1表达下调,cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和E-c...     

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。     

丝裂霉素C及紫杉醇对人胚肺成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的 在体外细胞学水平观察丝裂霉素C及紫杉醇抑制人胚肺成纤维细胞增殖的量效及时效关系特点.初步探讨药物抑制细胞增殖的潜在机制,为设定药物洗脱气道支架的药物洗脱浓度提供试验参考.方法 采用噻唑兰(MTT)法分别测定10-11 mol/L至10-4 mol/L(10倍倍比稀释)的丝裂霉素C或紫杉醇持续作用24、48和72 h后对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制率.通过AnnexinV-FITC/PI双染及流式细胞术检测5 x 10-6、10-5、5×10-5、10-4、2×10-4 mol/L的丝裂霉素C或紫杉醇持续作用48 h后的细胞凋亡百分比.并采用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学特征.结果 MTT结果显示,各浓度丝裂霉素C或紫杉醇持续作用24、48及72 h均可在不同程度上抑制人胚肺成纤维细胞增殖.其中,当丝裂霉素C处于10-11 mol/L至10-8 mol/L的较低浓度水平时,药物对细胞增殖的抑制作用较弱.且在此浓度范围内,提高药物浓度或延长作用时间对于改善抑制率无益.而当丝裂霉素C处于10-7 mol/L至10-4 mol/L的较高浓度水平时,随作用时间延长或药物浓度提高,抑制率呈渐进式增高.10-7、10-6、10-5及10-4 mol/L的丝裂霉素C持续作用72 h,抑制率分别为53.52％、60.23％、89.81％及96.47％.紫杉醇对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用存在明显的“阈浓度效应”.10-5 mol/L的紫杉醇持续作用72 h,抑制率仅为48.22％,但当浓度达到10-4 mol/L后,药物作用24 h时抑制率即可达93.38％,且随作用时间延长,抑制率可进一步升高.细胞凋亡部分的试验结果与MTT部分相吻合,即当药物对细胞增殖的抑制作用较为明显时,采用流式细胞术可检测到大量凋亡细胞,且以早期凋亡为主.此时进行Hoechst 33342荧光染色可观察到典型的凋亡细胞.结论 在体外条件下,一定浓度的丝裂霉素C或紫杉醇持续作用均可对人胚肺成纤维细胞的增殖产生抑制作用.二者在气道药物洗脱支架的制备中具有潜在应用价值,可作为备选涂层药物.为有效抑制成纤维细胞增殖,丝裂霉素C洗脱气道支架的药物洗脱浓度不应低于10-7mol/L,而紫杉醇药物洗脱气道支架的药物洗脱浓度不应低于10-5 mol/L,极限洗脱浓度均为10-4 mol/L,此时丝裂霉素C或紫杉醇持续作用72 h抑制率均可达95％以上.在此基础上进一步提高洗脱浓度对于改善抑制率而言意义不大,反而有增加系统毒性的风险.诱导细胞凋亡是丝裂霉素C及紫杉醇抑制人胚肺成纤维细胞增殖的可能机制之一.