顺铂诱导人卵巢癌COC1,COC1／DDP细胞凋亡的研究

目的：探讨顺铂作用于卵巢癌细胞的作用机理。方法：通过电镜,光镜,流式细胞仪等方法观察顺铂诱导人亲代和耐药卵巢癌细胞ＣＯＣ１、ＣＯＣ１／ＤＤＰ凋亡,进行细胞周期分析及计算凋亡率。结果：顺铂引起细胞Ｓ期增多、Ｓ期细胞凋亡,ＣＯＣ１,ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞凋亡率不同,结论：顺铂药理机制之一是诱导细胞凋亡,耐药与凋亡减少有关。     

顺铂诱导人卵巢癌细胞凋亡的形态学观察

顺钱在孵巢肿瘤化疗中疗效肯定,为进一步探讨其作用机制,本实验采用ＡＯ１０／１７细胞为标本,通过光镜、电镜观察顺铂作用后细胞的形态改变,流式细胞仪（ＦＣＭ）分析其ＤＮＡ含量及二苯胺法测定其ＤＮＡ降解。结果发现２０ｕｍｏｌ／Ｌ顺铂作用后２４～３６ｈ,发生细胞凋亡,其细胞形态学改变包括体积缩小;核染色质浓缩,并沿核膜周围聚集,最后形成有膜包绕的凋亡小体,并被邻近细胞吞噬;还有一些细胞胞浆中出现空泡。２０ｕｍｏｌ／Ｌ顺铂作用后１２ｈ,ＦＣＭ显示Ｇ１峰前出现凋亡峰,其ＤＮＡ含量为Ｇ１期细胞的３０％～７０％…     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究

目的 通过建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对顺铂的耐药机制。方法应用顺铂连续作用并逐步提高药量的递增压力选择法，从人卵巢腺癌细胞ＣＯＣ１中分离出对顺铂耐药的细胞亚株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ），并比较耐药细胞和亲代细胞某些生物学特性差异。结果ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂的耐药性是ＣＯＣ１的６．５倍，群体倍增时间较亲代细胞缩短了１２．９％。对卡铂和丝裂霉素Ｃ有不同程度的交叉耐药性，对阿霉素和５－氟尿嘧啶则保持敏感。并且耐药细胞内铂离子含量及ＤＮＡ链间交联指数均明显低于ＣＯＣ１细胞，但免疫细胞化学显示ＣＯＣ１及ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞内均无Ｐ糖蛋白表达。结论ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度降低及ＤＮＡ链间交联形成减少，与Ｐ糖蛋白关系不大。     

抑制ClC-3表达对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用

目的：探讨抑制氯离子通道-3(ClC-3)基因表达对顺铂(DDP)诱导的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用,为卵巢癌的治疗提供实验依据。方法：转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒至人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法检测转染重组质粒对ClC-3蛋白表达的影响;MTT法检测细胞增殖率;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白细胞色素C（Cyt-c）及Caspase-3活化片段蛋白表达。结果：与SKOV3细胞比较,SKOV3/ DDP细胞中ClC-3蛋白表达水平增加( P<0.05);转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒后,SKOV3/DDP细胞ClC蛋白表达水平明显降低;ClC-3-siRNA联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞增殖率下降( P<0.05),Cyt-c和Caspase-3活化片段蛋白表达水平增加( P<0.05) 。结论：pSH1-siRNA-ClC-3可有效抑制SKOV3/DDP细胞ClC-3蛋白的表达,并促进DDP诱导SKOV3/DDP细胞凋亡。     

卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立

目的 :建立人卵巢癌体外耐药模型 ,研究卵巢癌对顺铂的耐药特征。方法 :模仿临床卵巢癌化疗模型 ,采用中等浓度、间歇作用法 ,从人卵巢癌细胞株SKOV3培养出对顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP ;倒置显微镜下观察细胞形态 ;MTT法、单克隆形成法检测耐药细胞的耐药指数 ;流式细胞仪检测两种细胞的细胞周期分布。结果 :SKOV3/DDP细胞形态无明显改变 ;耐药指数用MTT法检测为 1 8,单克隆形成法检测为 8;SKOV3主要分布于G0 -G1期 ,SKOV3/DDP主要分布于S期及G2 -M期。结论 :中等剂量、间歇作用法可以诱导出卵巢癌细胞株SKOV3对顺铂耐药性。此项研究结果可为临床卵巢癌化疗方案的制定、复发癌二线化疗药物的选择提供理论依据     

顺铂引起卵巢癌细胞周期变化及凋亡的观察

目的 :了解顺铂 (DDP)引起卵巢癌细胞COC1、COC1/DDP细胞周期变化及凋亡规律。方法 :用光镜、电镜及流式细胞术等方法观察细胞凋亡规律及进行细胞周期分析。结果 :DDP引起COC1、COC1/DDP细胞周期变化主要表现为S期阻滞 ,P <0 .0 1;细胞死亡方式主要是凋亡 ,凋亡细胞发生在S期 ,P <0 .0 1;COC1、COC1/DDP细胞凋亡率不同 ,COC1凋亡率高 ,两组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :DDP引起COC1、COC1/DDP细胞S期阻滞、S期细胞凋亡 ,细胞凋亡与获得性耐药有关     

整合素β1对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响研究

目的 探讨整合素β1介导的细胞与细胞外基质(extraceUular matrix,ECM)的黏附,及其黏附对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡抑制作用即耐药性的影响研究.方法 利用酶联免疫吸附实验(ELISA)及吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)双荧光染色法分析卵巢癌株型SKOV3、3AO、8910细胞由顺铂诱导的细胞凋亡情况,并采用分组对照的方法检测整合素β1及整合素β1与特异性配体的黏附作用在细胞凋亡中的作用.结果 卵巢癌3株细胞均可由顺铂诱导凋亡(P<0.01).经顺铂(10 μg/mL)作用48 h后,生长于整合素β1的配体-纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)上的3株细胞的富集系数(enrichmentfactor,EF)明显低于生长于非整合素配体一多聚赖氨酸上的细胞EF值;吖啶橙-溴化乙锭双荧光染色法结果显示生长于FN上的细胞凋亡率明显低于生长于多聚赖氨酸上的细胞凋亡率,用整合素β1的特异性阻断抗体封闭过的细胞再次生长于FN上,EF又明显提高(P<0.01).结论 整合素β1介导的细胞与FN的黏附对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有抑制作用,提示细胞黏附可能通过抑制细胞凋亡而促使细胞产生耐药性.     

顺铂诱导的人胃癌耐药细胞BGC-823/CDDP的建立

目的 建立人胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞(BGC-823/CDDP细胞)并研究其生物学特征.方法 采用体外逐步增加顺铂药物浓度反复间歇诱导法建立BGC-823/CDDP细胞系,并对其产生耐药的特点、光镜形态、超微结构、生长特点、细胞周期进行研究,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其药物敏感性.结果 BGC-823/CDDP细胞系生物学特征较亲代细胞发生了变化.BGC-823/CDDP细胞系体积较亲代细胞稍大,并有巨核细胞,透射电镜观察细胞表面微绒毛明显减少.BGC-823/CDDP细胞较亲代细胞的倍增时间延长了4.3 h.细胞周期分布:S期细胞轻度减少;而G0/G1和G2/M期细胞较亲代细胞轻度增多;与亲代细胞比较,BGC-823/CDDP细胞对CDDP的耐药倍数为11.35倍,对丝裂霉素C(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)分别为4.85、5.29、10.07倍,表明其具有交叉耐药性.结论 本实验成功建立了BGC-823/CDDP细胞系,为下一步实验研究奠定了基础.     

流式细胞术分析顺铂对人卵巢癌细胞系HO─8910细胞凋亡的诱导作用

流式细胞术分析顺铂对人卵巢癌细胞系ＨＯ┐８９１０细胞凋亡的诱导作用马向东陈必良叶永清郑维国王德堂（第四军医大学西京医院妇产科西安７１００３３）关键词细胞凋亡卵巢肿瘤流式细胞术顺铂中图号Ｒ７３７．３１细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种生理性细胞程序化...     

活化的巨噬细胞对肝癌细胞株的凋谢作用

目的：观察巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＭΦ）对肝癌细胞株的凋谢作用。方法：从肝癌患者腹水中分离ＭΦ，以细菌脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）进行激活，人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１为靶细胞，光镜观察靶细胞形态学改变。结果：ＬＰＳ活化的ＭΦ与靶细胞共同培养１ｈ可见紧密接触，２４ｈ靶细胞呈现核碎裂，胞浆嗜酸性增强，凋谢小体形成等变化；未活化的ＭΦ仅有与靶细胞接触但未见其破坏现象。结论：活化的ＭΦ通过凋谢的方式引起肝癌细胞株死亡。     

Paclitaxel Induced Apoptosis in Human Ovarian Cancer Cell Line COC 1

Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ,ａｎｅｗａｎｔｉｔｕｍｏｒａｇｅｎｔｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ,ｐｏｓｓｅｓｓｅｓｓｉｇ－ｎｉｆｉｃａｎｔａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｅｃｔｏｎｓｅｖｅｒａｌｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｓ,ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｏｎａｄ...     

p53在顺铂诱导人卵巢癌细胞系HO-8910的表达体会

在SP法检测顺铂诱导人卵巢癌细胞系HO-8910细胞凋亡的研究中,观察细胞凋亡过程中p53蛋白的表达情况,分析报道如下。1材料与方法1.1材料人卵巢癌细胞系HO-8910为分化差乳头状浆液性腺癌[1],购自中国科学院上海生物研究所。顺铂(CDD)为昆明三戍贵金属药业有限公司产品。RPMI-1640培养基为美国Gibco公司生产。小牛血清由中国医药科学院血液研究所生产。小鼠抗人p53抗体(克隆号DO-7),SP免疫组织化学试剂盒均为美国ZYMED公司产品。24孔培养板为美国FALCON产品。1.2方法细胞系的维持培养:细胞培养于含10%热灭活小牛血清、100U/mL青霉…     

曲妥株单抗联合顺铂对卵巢癌细胞株的抑制作用

目的研究曲妥株单抗对卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法与流式细胞术检测人卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制及凋亡情况。结果 （1）顺铂（DDP）、曲妥株单抗及DDP＋曲妥株单抗合药均对卵巢癌细胞株SKOV3有一定的生长抑制作用;在同一浓度、同一作用时间下,DDP组的抑制率高于曲妥株单抗组,DDP＋曲妥株单抗组的抑制率高于DDP组;3组均随着药物浓度的增加、作用时间的延长而抑制作用增强（P〈0.05）。（2）DDP、曲妥株单抗及DDP＋曲妥株单抗3组的凋亡率均较对照组高,且3组的凋亡率均随作用时间的延长而升高;在同一作用时间下,DDP组的凋亡率高于曲妥株单抗组,DDP＋曲妥株单抗组的凋亡率高于DDP组（P〈0.05）。结论 DDP、曲妥株单抗及其联合DDP均能明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖,诱导细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性,联合DDP效应增强。     

不同剂量顺铂的PV方案综合治疗鼻咽癌114例临床分析

报道瓜剂量（２０ｍｇ／ｄ×５）与中剂量（５０ｍｇ／ｄ×２）顺铂加长春新碱（ＶＣＲ）（１．５ｍｇ／ｄｄ１，８）的ＰＶ方案与常规放疗联合应用治疗鼻咽癌１１４例。其中，低剂量顺铂组７３例，中剂量顺铂组４１例，两组综合治疗（ＰＶ加放疗）有效率分别为９３．１％及９７．５％，但统计学处理差异无显著性，两组病例化疗后的毒副反应发生率差异也无显著性，但中剂量组具有方法简便，患者易于接受的优点，可作为ＮＰＣ的辅助化疗。     

凋亡抑制基因在人卵巢癌细胞敏感株及耐药株中的表达

目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P＜0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.     

卵巢癌细胞凋亡和细胞倍性与p53基因突变的关系

目的了解Ｐ５３基因突变、细胞倍性、细胞凋亡三者的关系,探讨突变型Ｐ５３基因在肿瘤发生中的作用机制。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测２０例正常卵巢组织、２０例良性卵巢肿瘤、４５例恶性卵巢癌（其中肿瘤未转移组２０例,肿瘤转移组２５例）患者的Ｐ５３基因突变,流式细胞仪Ｆａｃｓｃａｎ检测卵巢癌细胞染色体倍性,凋亡率及其在细胞周期各相中的分布情况。结果卵巢癌转移组的Ｐ５３基因突变率为６０％,未转移组为４０％（Ｐ     

卵巢癌细胞凋亡和细胞倍性与p53基因突变的关系

目的　了解p53基因突变、细胞倍性、细胞凋亡三者的关系,探讨突变型p53基因在肿瘤发生中的作用机制。方法　应用PCR-SSCP检测20例正常卵巢组织、20例良性卵巢肿瘤、45例恶性卵巢癌(其中肿瘤未转移组20例,肿瘤转移组25例)患者的p53基因突变,流式细胞仪Facscan检测卵巢癌细胞染色体倍性、凋亡率及其在细胞周期各相中的分布情况。结果　卵巢癌转移组的p53基因突变率为60％,未转移组为40％(P>0．05);其中p53基因突变组肿瘤细胞凋亡率(20．25％)明显低于未突变组肿瘤细胞凋亡率(41．68％)(P<0．05);p53基因突变组异倍体细胞百分率(73．9％)明显高于未突变组(36．4％,P<0．05);另外,异倍体细胞较二倍体细胞更容易发生转移(P<0．05);异倍体肿瘤细胞凋亡率为36．1％,二倍体肿瘤细胞凋亡率为42．0％,二者差异无显著性(P>0．05)。结论　 p53基因突变使肿瘤细胞凋亡率下降,进而促进肿瘤发生发展。p53基因突变多见于异倍体细胞,细胞凋亡率与细胞倍性无关。     

As2O3对卵巢癌耐顺铂细胞珠的诱导凋亡作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP的作用,探讨As2O3抑制肿瘤细胞生长的作用机制。方法①用MTT法检测不同浓度、不同作用时间的As2O3对COC1/DDP的生长抑制率。②用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测As2O3作用于COC1/DDP发生的细胞凋亡。③用cDNA基因芯片筛查与As2O3诱导凋亡发生相关的基因,并用实时定量PCR技术验证结果。结果①As2O3对COC1/DDP有生长抑制作用,其生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长逐渐增强。②As2O3对COC1/DDP有凋亡诱导作用,随时间延长和剂量加大,凋亡发生率增加(P<0.05)。2.0μmol/LAs2O3作用24 h开始出现凋亡细胞,72 h达高峰,96 h细胞出现坏死。③COC1/DDP细胞在As2O3作用前后上调基因15个,下调基因10个,其中凋亡相关基因Bax、p53、c-Myc的上调,以及耐药基因LRP的下调与As2O3诱导COC1/DDP发生凋亡有关。基因芯片的结果与实时定量PCR验证结果相符合。结论As2O3对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP有生长抑制作用,发生机制与As2O3诱导细胞凋亡发生有关。促凋亡基因和耐药相关基因参与As2O3诱导卵巢癌耐药细胞株凋亡的作用。