高氧暴露对早产鼠肺组织HO-1和GCLC表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位（GCLC）动态表达的影响。方法受孕21 d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只，喂养1 d后随机分为空气组和高氧组。空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养，高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中（氧浓度85%~95%）饲养，分别于第1、4、7、10、14天，每组取8只大鼠，采集两组早产鼠肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化；采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化。结果与空气组相比，高氧组早产鼠体重下降显著（P < 0.05）。与空气组相比，高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化。高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组，在第10、14天时高于空气组（P < 0.05）。高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组，在第10天时高于空气组（P < 0.05）。与空气组比较，高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高；除第1天外，GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高（P < 0.05）。结论高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞。早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关。     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

地塞米松对高氧肺损伤新生大鼠肺水通道蛋白1表达的影响

目的 探讨地塞米松对新生大鼠高氧肺损伤时水通道蛋白1(AQP1)表达的影响及其对肺损伤的可能保护机制.方法 新生Wistar大鼠32只随机分为空气组、高氧组、空气+地塞米松组、高氧+地塞米松组.第3天取肺组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测AQP1的mRNA表达和分布变化;并对肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透指数及组织病理学改变进行对比分析.结果 高氧暴露第3天肺组织出现出血、炎性细胞浸润和水肿,肺W/D、BALF蛋白含量、肺通透指数明显升高;地塞米松干预组肺损伤程度减轻,测定值降低.空气组、高氧组、高氧+地塞米松组AQP1 mRNA相对吸光度比值分别为0.70±0.04、0.42±0.03、1.04±0.04,各组间差异有显著性(P<0.05);与空气组相比,高氧组AQP1 mRNA表达明显降低,高氧+地塞米松组AQP1 mRNA表达显著上调;AQP1蛋白表达与其mRNA变化一致.结论 高氧肺损伤时大鼠肺AQP1表达下调;地塞米松干预对肺损伤有保护作用,上调肺AQP1的表达可能是其作用机制之一.     

新生大鼠高氧肺损伤血管内皮生长因子蛋白及其mRNA表达变化研究

目的：血管内皮生长因子（VEGF）参与肺的发育和损伤修复,VEGF具有促进肺泡和肺血管增殖以及预防新生儿支气管肺发育不良（BPD）的作用。该研究的目的是探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达的变化。方法：新生Sprague-Dawley大鼠48只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧实验组吸入95%以上高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测新生大鼠3 d,7 d,14 d肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达变化。结果：空气对照组新生大鼠生后随着肺发育,肺组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达逐渐增加。高氧实验组新生鼠吸入高氧3 d,肺VEGF蛋白表达出现降低,在7 d,14 d明显降低与对照组比较差异有显著性（VEGF 蛋白:12.67±3.82 vs 7.79±5.23; 15.10±8.91 vs 5.85±3.37, 均P<0.01）;高氧实验组VEGF mRNA表达在3 d,7 d,14 d均明显低于对照组（VEGF mRNA: 1.19±0.63 vs 0.78±0.22, 1.52±0.47 vs 0.53±0.18, 1.89±0.81 vs 0.48±0.12, 均P<0.01）。结论：VEGF能促进新生大鼠肺发育,VEGF蛋白及VEGF mRNA表达与新生大鼠肺发育有密切关系。高氧可抑制VEGF蛋白及VEGF mRNA在新生大鼠肺内的表达,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤发病机制中起重要作用。     

阿奇霉素对新生大鼠高体积分数氧肺损伤的影响

目的探讨阿奇霉素对高体积分数氧(高氧)诱发新生大鼠肺损伤的影响。方法选用出生2d的新生Wistar大鼠90只,雌雄不拘,随机分为3组:空气对照组、高氧模型组、阿奇霉素治疗组(阿奇霉素组),每组各30只。空气对照组新生鼠暴露在室内空气中;高氧模型组和阿奇霉素组新生鼠暴露在900mL·L-1氧气中,共14d;阿奇霉素组新生大鼠于出生第2天起,每天分别腹腔内注射阿奇霉素200mg·kg-1;空气对照组和高氧模型组新生鼠腹腔内注射9g·L-1盐水。第3、7、14天每组各处死10只动物,取肺组织,光镜下观察其肺组织的病理变化;采用免疫组织化学染色检测其肺组织干扰素-γ(IFN-γ)、结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果IFN-γ在空气对照组无阳性表达;高氧模型组第7天达到高峰,第14天明显下降,但仍高于空气对照组;阿奇霉素组IFN-γ表达强度在各时间段均低于高氧模型组(Pa<0.05)。CTGF在空气对照组无阳性表达;高氧模型组随吸入高氧时间延长,阳性表达逐渐增强;阿奇霉素组CTGF表达强度在各时间段均低于高氧模型组(Pa<0.05)。MMP-9在空气对照组仅有散在的阳性细胞着色;...     

HoxB5在高体积分数氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织中的动态表达及其意义

目的 探讨生长调控基因HoxB5对正常肺泡发育的调控及其在肺泡损伤修复过程中的作用.方法新生大鼠80只,随机分为高体积分数氧(高氧)组和对照组.高氧组吸入850～900 mL/L氧气,建立慢性肺疾病(CLD)模型;对照组吸入空气,余控制因素相同.分别于实验第1、3、7、14、21天留取大鼠肺组织,应用免疫组织化学法测定二组大鼠肺组织HoxB5动态表达部位及强度,RT-PCR测定二组大鼠肺组织HoxB5 mRNA的动态表达,原位杂交技术测定HoxB5 mRNA在其肺组织的动态表达部位.SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果对照组新生大鼠出生第21天肺泡发育逐渐完成,而高氧组自第7天始肺泡发育受阻,随着时间的延长肺泡发育障碍明显加重.二组新生大鼠肺组织HoxB5蛋白在第1、3天表达均无差异(Pa>0.05),但高氧组在第7天后表达逐渐减少,对照组在第7天达高峰之后平稳表达,第14、21天对照组肺组织HoxB5均明显高于高氧组(Pa<0.05),HoxB5 mRNA高氧组在第7天后表达逐渐减少,对照组在第7天后平稳表达,均明显高于高氧组(Pa<0.05).免疫组织化学和原位杂交检测结果显示,对照组HoxB5蛋白及mRNA主要表达于肺泡上皮,且在肺泡连接处、肺泡拐角处及肺泡嵴表达更明显,而高氧组在上述部位表达明显减弱.结论高氧肺损伤新生大鼠肺泡上皮HoxB5随着肺泡化障碍及肺损伤的加重表达明显减少,HoxB5表达减少可能在高氧肺发育障碍和肺泡上皮细胞损伤修复中发挥重要作用.     

持续高氧暴露降低新生大鼠肺组织血管内皮生长因子的表达

目的：高氧肺损伤是导致支气管肺发育不良(BPD)的最常见原因。血管内皮生长因子(VEGF)在新生肺中具有促进内皮细胞增殖、分化、诱导血管发生的作用。本研究动态观察高氧暴露对新生鼠肺组织VEGF表达的影响,探讨BPD的发生机制。方法：新生Wistar大鼠出生后随机分为空气组和高氧组(均n=30)。高氧组在生后12h内开始,予以持续吸入95%氧气。分别于生后1、2、3、7、14、21d各处死5只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF蛋白表达,原位杂交方法检测VEGFmRNA表达。结果以切片视野灰度值表示,值越高说明蛋白或mRNA表达越少。结果：新生鼠高氧暴露7d后肺泡间隔减少,肺微血管发育异常,间质纤维化,且病变随高氧暴露时间延长而加重。高氧组大鼠第3,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(81.9±0.8vs80.8±1.0,82.8±1.2vs79.2±1.6,均P<0.01)。VEGFmRNA表达亦显著减少(89.5±1.1vs88.0±1.0,91.1±1.5vs87.7±1.7,均P<0.001)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低,在高氧暴露14、21d时几乎检测不到VEGF蛋白和mRNA的表达。结论：高氧暴露抑制新生鼠肺VEGF的表达,这可能与高氧诱导BPD的发生有关。     

卡托普利对高氧致新生大鼠慢性肺疾病的保护作用及机制探讨

目的：观察高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织ACE,AngⅡ和ColⅠ蛋白及mRNA含量的动态变化,以探讨卡托普利的保护作用及机制。方法：足月新生Wistar大鼠240只,随机分为高氧组、空气对照组、卡托普利治疗组和盐水对照组,每组各60只。将高氧组、盐水对照组和卡托普利治疗组的足月新生Wistar 大鼠（连同母鼠）生后即置于氧舱内持续吸入高浓度氧（FiO2=0.9）21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气。卡托普利治疗组于生后7 d每天经胃管灌服卡托普利每日30 mg/kg, 盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水。每组分别于实验开始后第1,3,7,14,21天随机选取6只麻醉后处死。肺组织采用ELISA法测定ColⅠ蛋白含量,用日产7170全自动生化分析仪测定ACE活性,用放免法测定AngⅡ的含量。用RT-PCR法检测肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠmRNA表达的动态变化并同时观察肺组织形态学变化。结果：与空气对照组比较,高氧组、盐水对照组肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠ蛋白含量及mRNA表达在实验后第14天明显升高,第21天达高峰(P<0.05或P<0.01),卡托普利治疗组上述指标与高氧组、盐水对照组比较明显降低(P<0.05或P<0.01),但仍高于空气对照组（P<0.05）。 肺组织形态学改变：高氧组、盐水对照组第14天肺组织间质细胞增多,出现纤维化改变。第21天正常肺泡结构消失,肺组织出现严重的纤维化。卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻。结论：卡托普利干预抑制了高氧致CLD新生大鼠肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠ蛋白含量及mRNA表达,减轻了肺纤维化病变,这可能是卡托普利对高氧肺损伤具有保护作用的机制之一。［中国当代儿科杂志,2007,9（2）：169-173］     

高迁移率族蛋白B1在高氧致支气管肺发育不良的表达

目的：检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在高浓度氧（60% O2）暴露新生小鼠肺组织损伤模型中的表达水平,探讨HMGB1在支气管肺发育不良（BPD）发病机制中的作用。方法：新生足月C57BL/6小鼠随机分为BPD组和对照组,制备高氧浓度致新生鼠BPD模型,应用苏木精-伊红染色、Masson染色、放射性肺泡计数（RAC）、免疫荧光和实时荧光定量PCR技术,观察氧暴露后3 d、7 d、14 d肺组织病理改变及HMGB1的蛋白和mRNA表达水平。结果：BPD组在氧暴露后随时间推移,出现肺泡上皮肿胀,肺泡壁增厚,间质水肿,炎症细胞浸润,胶原样物质产生,肺泡结构紊乱,数量减少,较空白对照组明显发育迟滞。在氧暴露后7 d、14 d,HMGB1及其mRNA表达均强于对照组（P＜0.05）。结论：高氧暴露所致BPD中,HMGB1表达增加。BPD的病理过程可能与HMGB1表达增加有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（3）：219-223］     

早产新生大鼠高氧肺损伤Shh信号转导途径Smo和Glil蛋白表达和意义

目的探讨高氧诱导新生大鼠急性肺损伤中Shh信号通路Smo和Glil蛋白的表达及其意义。方法建立早产新生大鼠高氧肺损伤模型。实验组持续吸入氧体积分数大于95％的医用氧气,对照组吸入空气。分别留取第3、7、14天的肺组织,肺组织切片HE染色观察肺脏病理改变,应用Westernblot技术检测肺组织Smo和Glil蛋白的动态表达情况。结果实验组高氧暴露3天肺毛细血管开始充血、渗出;7天肺结构紊乱,炎性细胞浸润;14天肺泡融合,纤维增生,间隔增宽。实验组Smo和Glil蛋白主要分布于支气管上皮、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞及部分纤维组织。与对照组相比,实验组高氧第7天Smo蛋白表达显著增加[（0．423±0．056）比（0．061±0．008）],14天达高峰[（0．612±0．082）比（0．132±0．011）];Glil蛋白于14天表达显著增加[（0．515±0．071）比（0．209±0．013）],P均〈0．05。结论高氧可致新生大鼠肺泡结构紊乱和肺发育停滞,Smo和Glil蛋白呈现高表达,这可能和高氧诱导的肺损伤和支气管肺发育不良的发生发展有关。     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。     

高氧、维甲酸对早产鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、-9 及特异性组织抑制物-1、-2表达的影响

目的探讨基质金属原蛋白-2(MMP-2)、MMP-9、基质金属蛋白酶特异性组织抑制物-1(TIMP-1)和TIMP-2在高氧肺损伤中的作用及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法建立高氧(FiO285%)暴露早产SD大鼠肺损伤模型,应用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA表达,采用明胶酶谱检测MMP-2和MMP-9酶原及活酶表达,采用Western blot技术检测TIMP-1和TIMP-2蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4、7、14d,MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达均显著升高(P均<0.01),MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶和TIMP-1蛋白的表达明显上调(P<0.05);RA对空气暴露下它们的表达均无明显影响(P均>0.05),但不同程度下调高氧暴露后MMP-2、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达和MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶的表达,进一步提高TIMP-1蛋白表达;高氧、RA对TIMP-2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响(P均>0.05)。结论高氧暴露明显改变MMPs/TIMPs的表达,在肺泡形成关键时期,MMPs/TIMPs之间平衡关系的破坏是造成肺发育受阻和纤维化的重要因素;通过协调MMPs/TIMPs之间的表达,改善肺泡结构,降低肺纤维化程度,从而逆转高氧所致肺损伤,是RA发挥保护作用的重要机制之一。     

高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中长链非编码RNANANCI的表达及对NKX2.1的调控作用

目的探讨长链非编码RNA NANCI在高氧诱导肺损伤新生小鼠肺组织中的表达变化及对NKX2.1的调控作用。方法采用随机分组法将48只C57BL/6J新生小鼠随机分为空气组和高氧组,每组24只,各组再随机分为生后7 d组、14 d组、21 d组,每组8只。空气组置于室内环境(Fi O2=21%)中饲养,高氧组置于高氧箱(保持氧浓度95%)中饲养,在各时间点分别处死两组动物后收集肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法观察小鼠肺组织病理变化;采用RT-q PCR及Western blot技术分别检测NANCI、NKX2.1的m RNA和蛋白表达水平。结果空气组新生小鼠肺组织NANCI和NKX2.1的m RNA表达水平7 d最高(P0.05),14 d与21 d呈同水平表达。与空气组比较,高氧组肺组织肺泡化程度降低,辐射状肺泡计数(RAC)减少(P0.05),且高氧组RAC值随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。各时间点高氧组NANCI m RNA、NKX2.1 m RNA及其蛋白表达水平均低于空气组(P0.05),且随高氧处理时间延长逐渐降低(P0.05)。NKX2.1与NANCI表达呈正相关(r=0.585,P=0.003);两者与高氧组RAC水平均呈正相关(分别r=0.655、0.541,P0.05)。结论 NANCI可能主要参与未成熟肺组织发育;肺组织损伤程度随高氧暴露时间的延长逐渐加重,且NANCI及NKX2.1水平与肺损伤程度相关,提示NANCI/NKX2.1靶基因信号通路可能参与新生小鼠高氧肺损伤过程。     

宫内炎性预敏及生后高氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的观察宫内炎性预敏及生后高氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子（VEGF）及其受体表达的影响,探讨其与新型支气管肺发育不良（BPD）发病机制之间的关系。方法早产大鼠随机分为生理盐水＋高氧组、LPS＋高氧组、LPS组和正常对照组,于生后第1、7和14天随机取8只,行HE染色,观察肺组织形态学结构,做辐射状肺泡计数（RAC）采用Western blot和RT-PCR方法检测各组肺组织VEGF及其受体Fit-1和Flk-1蛋白及mRNA表达水平。结果（1）正常对照组和LPS组在生后1～14d随鼠龄增加,RAC逐渐增多,但LPS组在生后第1～14天RAC均低于对照组（P分别=0．029,0．013,0．009）;生理盐水＋高氧组和LPS＋高氧组则随鼠龄增加RAC逐渐下降,LPS＋高氧组至生后14dRAC低于其他三组（P分别=0.000,0.002,0.012）。（2）VEGF及其受体Flk-1蛋白的表达与其相应肺组织RAC变化规律基本一致。而Fit-1表达在四组中均随鼠龄增加而呈增高趋势。（3）VEGF及其受体mRNA表达规律与其蛋白表达强度变化规律基本一致。结论宫内炎性预敏及生后高氧暴露可能是导致新型BPD发生的重要因素。     

早产鼠高氧暴露后肺组织血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的动态变化及相互关系

目的：最近研究表明,血管内皮生长因子（VEGF）及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)功能的缺失,在支气管肺发育不良（BPD）发病机制中发挥了重要的作用。该文通过动态观察持续中浓度高氧暴露（60％O2）对早产大鼠肺内VGEF蛋白及mRNA和eNOS蛋白及mRNA表达的影响,探讨BPD的发病机制。方法：将21 d 孕早产鼠随机分为高氧暴露组(简称高氧组) 和空气对照组(简称空气组) ,分别置于常压高氧仓中（60％O2）和正常空气中暴露。分别于生后1,4,7,11,14 d每组各处死6只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF和eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应方法检测VEGF和eNOS mRNA表达。结果：早产鼠高氧暴露4 d后出现肺泡间隔减少,微血管发育异常,间质纤维化,且病变随着高氧暴露时间的延长而加重。高氧组大鼠第4,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(P< 0. 05), VEGF mRNA表达亦显著减少(P< 0. 05)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低。高氧组大鼠在高氧暴露过程中肺组织eNOS蛋白和mRNA表达亦随着暴露时间的延长而降低。结论：高氧暴露导致早产鼠肺组织VEGF和eNOS表达持续性减少,微血管发育异常和肺泡化受阻。这些由高氧暴露诱导产生的BPD样损害,可能与VEGF和eNOS的表达下调有关,且二者之间存在着密切的联系。［中国当代儿科杂志,2007,9（5）：473-478］     

Responses of pulmonary platelet-derived growth factor peptides and receptors to hyperoxia and nitric oxide in piglet lungs

The peptides platelet-derived growth factor-A (PDGF-A) and especially -B have important roles in lung development. The effect of hyperoxic exposure with and without inhaled nitric oxide (iNO) on lung expression of PDGF and its receptors is unknown. We hypothesized that hyperoxia exposure would suppress mRNA expression and protein production of these ligands and their receptors. The addition of iNO to hyperoxia may further aggravate the effects of hyperoxia. Thirteen-day-old piglets were randomized to breathe 1) room air (RA); 2) 0.96 fraction of inspired oxygen (O2), or 3) 0.96 fraction of inspired oxygen plus 50 ppm of NO (O2+NO), for 5 d. Lungs were preserved for mRNA, Western immunoblot, and immunohistochemical analyses for PDGF-A and -B and their receptors PDGFR-alpha and -beta. PDGF-B mRNA expression was greater than that of PDGF-A or PDGFR-alpha and -beta in RA piglet lungs (p<0.05). Hyperoxia with or without iNO reduced lung PDGF-B mRNA and protein expression relative to the RA group lungs (p<0.01). PDGF-B immunostain intensity was significantly increased in the alveolar macrophages, which were present in greater numbers in the hyperoxia-exposed piglet lungs, with or without NO (p<0.01). PDGFR-beta immunostaining was significantly increased in airway epithelial cells in O2- and O2+NO-exposed piglets. PDGF-A and PDGFR-alpha immunostain intensity and distribution pattern were unchanged relative to the RA group. Sublethal hyperoxia decreases PDGF-B mRNA and protein expression but not PDGF-A or their receptors in piglet lungs. iNO neither aggravates nor ameliorates this effect.     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在高氧性肺损伤中的变化

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)在高氧性肺损伤中表达及意义。方法 幼年Wistar大鼠32只,随机分为空气组和高氧组,并于高氧暴露3、7、14 d后用免疫组织化学方法(SABC)观察MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在肺组织中的分布,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA在肺组织中表达,此外对支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透系数、肺湿／干重比(W／D)及肺组织病理学改变也进行对比分析。结果 高氧组3 d时肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润,7 d时进一步加重,14 d时间质细胞增生,肺间隔明显增宽,出现肺纤维化倾向。W／D值、肺通透系数和BALF蛋白含量在3、7、14 d均明显高于空气组(P均<0.05)。免疫组化法示MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在正常肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞呈弱阳性表达,高氧组3 d时肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、巨噬细胞、肺泡间质细胞均呈强阳性表达,7、14 d表达更广泛。与空气组相比,高氧3 d时MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平明显增加,7 d时最显著,14 d开始下降(P均<0.05),而TIMP-1、TIMP-2 mRNA表达却持续增加,14 d时仍无明显下降(P均<0.05)。高氧暴露后MMP-2／TIMP-2、MMP-9／TIMP-1比值亦增加,其中7 d时最为显著,14 d开始下降。结     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。