99Tcm直接法标记血管抑素

目的: 探索用99Tcm直接标记血管抑素(angiostatin, AS)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其生物活性. 方法:制备的AS经鉴定后,分别用2-巯基乙醇(2-ME)和氯化亚锡(SnCl2)还原法进行标记,并用正交设计筛选最佳合成条件;对标记产物用纸层析法及Sephadex G-50层析柱分离测标记率;产物中分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸(Cys)以观察其体外稳定性;用人脐静脉内皮细胞系ECV304观察其生物活性. 结果:2-ME法最佳标记条件为AS 100 μg,PB(0.5 mol*L-1, pH 7.3) 1 mL, 2-ME 100 μg, 亚甲基二膦酸盐(MDP)(用1 mL生理盐水溶解) 10 μL,加入99TcmO4- 185 MBq,标记率可达(97.0±1.5)%; SnCl2法为AS 100 μg,硼酸缓冲液(0.1 mol*L-1, pH 9.0) 1 mL, 20 g*L-1 SnCl2 (1 mol*L-1盐酸作为溶剂) 20 μL加入MDP药盒,用去氧水稀释至1 mL, 取20 μL,加入99TcmO4- 185 MBq,标记率可达(90.0±3.0)%. 产物在体外稳定;细胞培养观察其抑制内皮细胞生物活性与AS无显著差异. 结论:用99Tcm直接法标记AS简单高效,且对AS生物活性无明显影响.     

188Re标记Morpholino寡核苷酸体外稳定性及生物分布

目的 采用治疗性核素铼188(rhenium- 188,188Re)标记Morpholino寡核苷酸,探讨其作为治疗性药物的可能性.方法 以硫乙甘肽(Mercaptoacetyltriglycine,MAG3)作为双功能螯合剂,采用间接标记法,试验不同标记条件对标记率的影响.标记完成后检测生物活性、体外稳定性及正常小白鼠的体内分布.结果 在最佳标记条件下,Morpholino的标记率为65％±12％,纯化后放化纯度＞93％,比活度为(2.37±0.32)MBq/μg.稳定性检测发现,标记物在体外出现再氧化,导致188Re-Morpholino出现解离.加入抗氧化剂抗坏血酸(VitC)后可以显著提高体外稳定性.正常鼠生物分布显示,Morpholinos 主要通过肾脏排泄,甲状腺及胃的摄取明显高于其他器官.结论 以MAG3作螯合剂,188Re可以成功标记Morpholino寡核苷酸;188Re-Morpholino标记物体外稳定性较差,虽然加入抗氧化剂可以提高体外稳定性,但标记物在体内仍出现解离,因此,目前的标记方法可能不适合作为治疗药物.     

肿瘤靶向治疗用白蛋白磁性纳米粒子的~(188)铼(~(188)Re)标记

目的188铼(188Re)标记用于肿瘤靶向治疗的白蛋白磁纳米体的实验室条件.方法 188Re标记白蛋白磁性纳米体的最佳实验室条件是SnCl2·H2O8 mg/ml,柠檬酸20 mg/ml,维生素C 8 mg/ml,反应容积为500μl,反应时间为3 h.结果188Re总的标记率大于90%,标记稳定性7 h为98%、24 h为95%.结论188R-0白蛋白磁性纳米体的标记率及标记稳定性适于用于肿瘤靶向治疗的体内研究.     

^188Re标记丙氧鸟苷白蛋白纳米微球的制备

目的制备188Re标记丙氧鸟苷（GCV）白蛋白纳米微球（^188Re-GCV-BSA-NP）。方法通过蛋白交联固化的方法制备GCV-BSA-NP,并测定GCV-BSA-NP的体外释药特性;采用预锡化直接标记法对GCV-BSA-NP进行188Re标记,同时观察188Re-GCV-BSA-NP体外稳定性。结果GCV-BSA-NP为大小不等的规则性微球,微球直径不等,但多集中在250-290nm。GCV-BSA-NP总的标记率〉90%,放化纯〉95%,放射性比活度1.85×105MBq/μmol。标记物放置于37℃的PBS（pH7.4）溶液中,在24h时放化纯为95%。结论预锡化直接标记法简便快速,能够得到较高的标记物放化纯度,稳定性好,GCV-BSA-NP具有明显的缓释功能。     

188Re-Herceptin免疫导向治疗乳腺癌的实验研究

目的以针对HER-2/neu癌基因表达蛋白为靶点的人源性单克隆抗体Herceptin作为靶向载体,制备188Re标记的放射免疫治疗剂(188Re-Herceptin),观察其在体外对HER-2/neu癌基因高表达的SKBR-3乳腺癌细胞株的靶向结合性及抗癌作用。方法188Re对Herceptin的标记采用直接标记法,取不同放射性活度的188Re-Herceptin与SKBR-3乳腺癌细胞共同培养,以MTT法测定其对单层培养的肿瘤细胞生长的抑制作用,并计算相对抑制率(IC50)。结果188Re-Herceptin在体外可明显抑制SKBR-3细胞,且其杀伤作用呈剂量依赖性;而188Re标记的正常鼠IgG(nmIgG)和188ReO4-的抑制作用较弱。188Re-Herceptin组的IC50(76.1×104Bq/L)明显低于188Re-nmIgG组(139.2×104Bq/L)和188ReO4-组175×104Bq/L。结论188Re-Herceptin具有明显的抑制体外培养SKBR-3乳腺癌细胞生长增殖的作用,可进一步用于乳腺癌的放射免疫导向治疗。     

放射性核素^125I与神经生长因子的偶联及条件优化

目的: 探讨放射性核素125I与神经生长因子(nerve growth factor,NGF)偶联的最优反应条件.方法: 采用联结标记法进行125I与神经生长因子偶联反应,在125I投料量固定为37 MBq的条件下,改变NGF的投料量分别为20,50,100,150 μg,同样的条件下反应后以三氯醋酸沉淀法计算产率.将产物保存于4℃,于1,2,3,5,7天,2,3,4周时间点检测产物的放射性化学纯度,评价产物的体外稳定性.结果: 当NGF投料量由20 μg增加到50 μg时,125I-NGF产率由76.6%迅速增加到79.0%,当继续增加NGF投料量至150 μg时,125I-NGF产率仅增加1.2%.经过连续4周观测,本标记方法的产物125I-NGF在体外4℃储存条件下未发现明显脱碘,放射化学纯度始终大于80%.结论: 125I与神经生长因子偶联的理想原料配比为37 MBq 125I与50 μg NGF进行反应,该条件下的产物125I-NGF放射性浓度为97.31 MBq/ml,放射性比活度为584.6 MBq/mg.     

用188Re标记IGF-1类似物的方法

目的研究标记率高且稳定的^188Re标记胰岛素样生长因子-1类似物（IGF-1A）的方法。方法采用直接标记法,改变Tween-80用量、SnCl2·2H2O浓度、IGF-1A用量、洗脱液体积等标记条件;分别在不同时间点测定标记率;标记物中加入生理盐水或人血清后不同时间点测定放射化学纯度。结果最佳标记方法为：将100μl SnCl2·2H2O（10mg/ml）加入50μl IGF-1A（2 mg/ml）;300μl Na3PO4和10μl 0.1%Tween-80混匀后加入50μl ^188ReO4-洗脱液;在IGF-1A体系中加入洗脱液体系,室温反应30 min;加入500μl NaH2PO4将pH值调节到7.0左右,标记完成。最高标记率为（94.07±0.32）%,胶体含量为（5.50±1.50）%。室温下放置6 h放射化学纯度为（89.07±0.74）%,加入人血清放置24 h后放射化学纯度为（76.57±9.96）%。结论用直接标记法进行188Re标记,IGF-1A标记率高且稳定性良好。     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化与标记

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在体外的诱导分化及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记MSCs的可行性. 方法:利用密度为1.073 kg/L的percoll分离骨髓的单个核细胞,体外培养与扩增MSCs;取生长良好的第3代细胞,用成骨细胞分化培养液培养21 d,Ⅰ型胶原免疫组化染色和碱性磷酸酶(AKP)组化染色;分别以浓度为5,10和15 μmol/L的Brdu溶液标记MSCs,孵育12,24,48,72和96 h后免疫组化检测Brdu,确定最佳标记量和最佳标记时间. 结果:诱导分化第21日, AKP染色呈强阳色,Ⅰ型胶原免疫染色呈阳性. 10 μmol/L Brdu标记MSCs的效果最好,随着孵育时间的延长,Brdu标记率逐渐增高,标记72 h后标记率在90%以上. 结论:MSCs在体外一定条件下可定向诱导分化为成骨细胞,用Brdu标记MSCs的最佳浓度为10 μmol/L,最佳时间是72 h.     

大鼠生精细胞体外培养条件的研究

目的:寻找一个最适合生精细胞体外培养的培养体系,为进一步培养人类生精细胞提供技术基础.方法:用单一酶-研磨-Percoll法制备15 d龄雄性大鼠生精细胞混悬液用于体外培养.①设计两种不同的培养条件:DMEM/F12和改良人类输卵管液(HTF)作为基础培养液,分为两组.每组根据添加不同浓度的激素分为6小组.添加的睾酮(T)和FSH浓度分别为:对照组H0(T 1 μmol/L,FSH 0 IU/L)、H1组(T 1 μmol/L,FSH 10 IU/L)、 H2组(T 1 μmol/L,FSH 25 IU/L)、H3组(T 1 μmol/L,FSH 50 IU/L)、H4组(T 1 μmol/L,FSH 100 IU/L)、H5组(T 0 μmol/L,FSH 50 IU/L). ②通过BRDU标记和流式细胞仪检测所有实验的生精细胞倍体的变化来判断其发育,进一步确认本研究使用培养条件的可靠性.结果:在生精细胞与支持细胞共培养过程中以改良人类输卵管液作为基础培养液,添加T 1 μmol/L ,FSH 50 IU/L或100 IU/L都适宜生精细胞体外培养;另通过BRDU标记及流式细胞仪检测均表明,在本研究条件下体外培养生精细胞能从初级精母细胞阶段分化到精子细胞阶段.结论:改良人类输卵管液作为基础培养液,添加浓度为50 IU/L或100 IU/L的FSH及T 1 μmol/L,最适合生精细胞的体外成熟培养.     

~(188)Re标记VEGF多肽片段的荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的 探讨188Re标记VEGF189外显子6编码的多肽(QKRKRKKSRYKS)的方法、标记物在荷瘤裸鼠体内的分布及显像.方法 以S-acetyl-MAG3为双功能螯合剂,正交设计法寻找188Re标记多肽QKRKRKKSRYKS的最佳条件;研究标记物在荷卵巢癌SKOV3裸鼠的体内分布,并在不同时间行SPECT平面显像.结果 采用SPSS 13.0进行分析.结果 188Re标记QKRKRKKSRYKS在最佳标记条件下的标记率为(73.1±5.5)%,HPLC纯化后放射化学纯度>95%,且受体结合活性良好;标记物室温下放置24 h,其放射化学纯度为(91.76±1.36)%;尾静脉注射标记物后,0.5 h荷瘤裸鼠肿瘤部位开始出现放射性浓聚,1 h浓聚更为明显,肿瘤放射性摄取为(1.846±0.511)%ID/g,肿瘤/对侧肌肉组织比值达(2.43±0.30).此外,肝脏、小肠、肾脏及膀胱等部位也可见明显的放射性浓聚,但3 h后肿瘤部位的放射性浓聚影基本消退.结论 188Re-MAG3-QKRKRKKSRYKS能明显聚集于肿瘤组织.