二至丸与失笑散对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA的调控

目的 研究不同治则中药复方二至丸与失笑散对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA/PAI-1纤溶途经的调控作用.方法 SD雄性大鼠60只随机分为假手术组和造模组,造模组于1周后随机分为模型对照组、二至丸组、失笑散组及合方组.各治疗组分别给予相应药物灌胃,模型对照组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,4周末处死大鼠.观察内容包括一般情况、肝功能、肝组织病理、Western 印迹法检测uPA蛋白表达、RT-PCR法检测肝组织PAI-1的表达.结果 与模型对照组比较,3个中药复方均能降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠血清ALP,ALT,AST水平(P<0.01),失笑散及合方能降低TBil(P<0.01);合方改善ALP,ALT优于两个单方.3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P<0.01),合方优于两个单方.3个复方均能显著降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠PAI-1 mRNA表达(P<0.01),提高uPA的表达(P<0.05,P<0.01).合方对上述环节的调控优于两个单方.结论 不同治则中药复方均能改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度,合方作用优于两个单方,其机制可能与通过调控uPA/PAI纤溶途径有关.     

全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞纤溶活性的影响

目的观察不同浓度全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）活性的影响。方法以凝血酶和不同剂量的全蝎纯化液同时作用于培养的人脐静脉内皮细胞（VEC-340）,12h后收集细胞液测定t-PA和PAI活性。结果与空白组比较,凝血酶组t-PA活性降低,PAI活性增高,差异有统计学意义（P〈0.01）,与凝血酶组比较,全蝎大剂量、中剂量、小剂量组t-PA活性均增高,PAI活性降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论凝血酶对VEC-340细胞具有损伤作用,可诱导内皮细胞抗血栓性发生变化。全蝎纯化液可促进血管内皮细胞释放t-PA,抑制PAI分泌,对纤溶平衡具有调节作用。提示这可能与全蝎纯化液增加血管内皮细胞抗血栓能力有关。     

益气活血法对缺血性中风高危者血浆t-PA活性的影响

[目的]了解缺血性中风高危人群凝血与纤溶功能状况,并为益气活血法预防缺血性中风临床方案的实施提供科学依据。[方法]将来院健康查体以及门诊就诊患者分为缺血性中风高危组和正常对照组,分别采取空腹肘静脉血标本(缺血性中风高危组在治疗前及治疗后各采1次),而后,采用发色底物法,使用酶标仪测定血浆中组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活性,将所测得数据进行对比分析。[结果]正常对照组血浆t-PA活性为0.574kU/L>治疗组0.509kU/L>缺血性中风高危组0.412kU/L。经过比较显示:1)正常对照组显著高于缺血性中风高危组。2)治疗组显著高于缺血性中风高危组。[结论]1)使用血浆t-PA活性测定方法对缺血性中风高危人群进行评估,具有确切的临床实用价值。2)缺血性中风高危人群,血浆t-PA活性普遍降低。3)益气活血中药能提高人体血浆中t-PA的活性。     

螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响

目的研究螺旋藻激酶(Spirulina kinase,SPK)对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响,探讨其抗血栓作用机制,为开发新型溶栓药物提供理论依据。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立肾上腺素(Adr)损伤模型加入不同浓度的SPK,并以肝素(Hep)为阳性对照,与空白组对照,经过12,24,48 h后,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经凝胶电泳分离后,凝胶图像分析仪照相和扫描,测定各组t-PAmRNA、PAI-1mRNA与内参基因三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的相对表达量。结果在Adr损伤模型中,2 mg/ml SPK可以上调t-PAmRNA表达,超大剂量SPK降低t-PAmRNA表达。SPK还可以随着剂量的增加明显的抑制PAI-1mRNA的表达,效果强于大剂量的肝素。结论 SPK可能通过小部分活化t-PAmRNA的表达,抑制PAI-1mRNA的表达,从而达到抗血栓的作用。     

uPA和FAK在肝癌组织中的表达及相关性研究

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和黏着斑激酶(FAK)在原发性肝癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测34例原发肝癌组织、14例癌旁正常肝组织中uPA和FAK的表达情况。结果原发性肝癌组织中uPA和FAK表达定位于细胞质和细胞核,其表达明显高于癌旁正常肝组织(P均<0.05)。二者的表达与性别、年龄、肿瘤大小等无显著相关性(P均>0.05),与淋巴结转移、组织分化及癌栓等有显著性关(P均<0.05);uPA与FAK表达呈明显正相关(P<0.05)。结论 uPA与FAK在原发性肝癌呈高表达,且与原发性肝癌的发生、发展和转移密切相关。     

茜草和茜草炭对正常大鼠凝血-纤溶系统的影响

目的:研究茜草和茜草炭对正常Wistar大鼠凝血-纤溶系统的影响,通过其药理作用探讨它们的止血化瘀机制.方法:将Wistar大鼠随机分为6组,每组7只,分别为茜草和茜草炭水煎制低剂量、高剂量组(含生药5.0,10.0 g·kg-1),阳性对照组(氨甲苯酸0.6 g·kg-1),空白对照组(生理盐水10 mL·kg-1).灌胃7d,用ELISA法检测大鼠血浆中组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)和纤溶酶原(PLG)活性.结果:和空白对照组比较,茜草在实验剂量下均能提高t-PA的活性,且高剂量时提高t-PA的活性更显著(P＜0.01).高剂量茜草炭能使大鼠t-PA活性提高(P＜0.05),但其作用低于高剂量茜草组.低剂量时对大鼠t-PA活性影响不显著.茜草和茜草炭对PAI和PLG的活性影响均不显著.结论:茜草高、低剂量均能提高t-PA的活性,且在高剂量时提高更显著,进而影响凝血-纤溶系统,从而发挥其止血化瘀作用.茜草炭对纤溶系统也有一定作用,但可能是多种酶的综合作用.茜草和茜草炭对凝血-纤溶系统药理作用效果不同,进而影响它们的临床使用.     

青心酮对人血管内皮细胞tPA和PAI生成的影响

以发色底物分解产色法检测了青心酮对培养的人脐静脉内皮细胞tPA和PAI活性的影响。结果显示青心酮具有调节PAI和tPA平衡的作用，由于对PAI的抑制作用明显强于对tPA的作用．PAI／tPA比值明显下降。此调节作用并呈现一定的量效关系。因此，DHAP改善器官如子宫胎盘的微循环可能与其调节血管内皮细胞PAI／tPA活性平衡的作用有关。     

冠心病血瘀证患者血浆和细胞水平纤溶活性的研究

目的及方法：采用发色底物法检测冠心病血瘀症和非血瘀证患者血浆和外周血单核细胞ｔ－ＰＡ、ＰＡⅠ－１活性,研究并比较冠心病血瘀证患者血浆和单核细胞水平纤溶活性的改变及其意义。８０例冠心病患者作为观察组,其中血瘀证组３０例,非血瘀证组５０例（包括痰浊证２７例,气滞证２３例）,健康对照组２０例。结果：冠心病血瘀证患者血浆ＰＡⅠ－１活性显著高于非血瘀证组（Ｐ〈０．０１）;血瘀证和非血瘀证患者ＰＢＭＣ ＰＡⅠ     

3种他汀药物调控纤溶活性抑制人血管平滑肌细胞增殖与迁移

 目的 探讨3种常用他汀药物(普伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)介导纤溶酶原激活物及其抑制剂对体外培养人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法 采用四唑盐(MTT)比色法测定VSMC增殖活性,刮伤实验和改良Transwell chamber装置测定细胞迁移能力;用RT-PCR分析细胞tPA,uPA和PAI-1 mRNA表达;采用发光底物法测定细胞分泌tPA和PAI-1蛋白含量。结果 辛伐他汀和氟伐他汀可通过下调细胞PAI-1 mRNA表达和上调tPA mRNA表达,抑制10％胎牛血清诱导VSMC增殖和迁移,不同他汀药物对纤溶活性的调控时相不尽相同。普伐他汀在指定时间对基因转录活性无影响,随培养时间延长对tPA和PAI-1蛋白分泌伴有轻度增加和抑制。结论　他汀类药物抑制VSMC增殖和迁移可能与非调脂性抗动脉粥样硬化作用机制有关,辛伐他汀和氟伐他汀通过上调tPA mRNA和下调PAI-1 mRNA基因转录活性,而普伐他汀可能与tPA和PAI-1通过翻译后修饰或与辅助因子相互作用而调控纤溶酶及其抑制物活性,进而促进纤溶,抑制细胞增殖和移行。     

清毒片对HL-60细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂活性的体外影响

目的观察中药清毒片对HL-60细胞尿激酶型纤溶酶原活化剂(u-PA)活性的影响.方法取离心灭菌后的清毒片药物水煎浓缩剂2 mL,以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液逐步稀释为从110至11600的12个稀释倍数,分别培养等量细胞,同时以阿糖胞苷作为实验的阳性对照,以培养液作为阴性对照.用MTT法分别测定各浓度药液的细胞增殖抑制率,取上清进行u-PA活性的ELISA检测.结果清毒片水煎浓缩剂对HL-60细胞有较好的抑制作用,随着药物浓度加大,抑制作用增强,同时细胞上清中的u-PA活性下降.结论清毒片对急性早幼粒细胞性白血病的治疗作用与其降低白血病细胞u-PA活性水平的作用有关.     

冠脉舒对冠心病患者血浆组织型纤溶酶原激活物及其抑制物的影响

本课题研究中药冠脉舒对冠心病患者血浆组织型纤溶酶原激活物(t·PA)及其抑制物(PAI)的影响。将50例患者随机分为治疗组(30例)和对照组(20例),并与健康人对照。结果表明,同健康人比较,冠心病患者血浆t-PA活性明显降低(P<0.05),PAI活性明显升高(P<0.01)。经冠脉舒治疗后,t-PA活性升高(P<0.001),PAI活性降低(P<0.001)。提示冠脉舒能提高冠心病患者血浆纤溶活性。     

健康老年人血瘀证的调查及血浆t－PA、PAI活性的研究

通过对７７例健康老年人进行血瘀证的调查，并与３５例健康青年人作对照，结果发现５１．７９％的健康人群有血瘀证出现，不同年龄组血瘀证检出的出率有非常显著性差异（Ｐ＜０．００５）。同时随年龄增长，血瘀证检出率呈递增变化规律。采用发色底物分析法检测血浆组织纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）及其抑制物（ＰＡＩ）的活性及Ｐ／ｔ比值。结果显示：老年前期及老年期血浆ｔ－ＰＡ活性均明显高于青年人（Ｐ均＜０．０１）。而ＰＡＩ     

健康老年人血瘀证的调查及血浆t－PA、PAI活性的研究

通过对７７例健康老年人进行血瘀证的调查，并与３５例健康青年人作对照，结果发现５１．７９％的健康人群有血瘀证出现，不同年龄组血瘀证检出率有非常显著性差异（Ｐ＜０．００５）。同时随年龄增长，血瘀证检出率呈递增变化规律。采用发色底物分析法检测血浆组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）及其抑制物（ＰＡＩ）的活性及Ｐ／ｔ比值。结果显示：老年前期及老年期血浆ｔ－ＰＡ活性均明显高于青年人（Ｐ均＜０．０１）。而ＰＡＩ活性各年龄组均无显著差异，Ｐ／ｔ比值老年人显著下降（Ｐ＜０．０５）。实为老年机体对抗高凝状态的生理代偿反应，对促使老年人维持生理平衡有极其重要的意义。     

PAI-1 mRNA在糖尿病大鼠肾脏的表达与通心络胶囊的干预作用研究

目的研究纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）在糖尿病大鼠肾皮质的表达和中药通心络胶囊对其的干预作用。方法将SD大鼠随机分为两组,一组经链尿佐菌素诱发的糖尿病模型（DM）组,另一组为血糖正常对照组（C）,两组均再随机分为DMl组、DM2组、Cl组、C2组,其中DM2组、C2组给予通心络治疗5周。治疗前后称体重、监测血糖,最后取肾脏称重,采用逆转录一多聚酶链式反应（RT-PCR）观测肾皮质PAI-1mRNA表达量。结果 DM组大鼠肾重/体重值及PAI-lmRNA表达明显高于C组（P〈0.01）,DM2组PAI-1mRNA表达低于DMl组,差异有统计学意义（P〈0.05）,肾皮质PAI-1mRNA表达量在C1与C2组间无统计学意义（P〉0.05）。结论 PAI-1mRNA在糖尿病大鼠肾皮质的表达增高,PAI-1增高参与糖尿病肾病的病理生理过程。中药通心络对糖尿病时PAI-1mRNA肾皮质的表达增高有下调作用。     

柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活系统影响的研究

目的:探讨柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活系统[尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)、纤溶酶原激活抑制因子-1(PAI-1)]在肝组织蛋白表达的调控作用。方法:将大鼠随机分为正常组、血瘀组和柔肝组。主要观察项目:大鼠血瘀体征;用免疫组化、酶联免疫吸附法检测肝组织中uPA、uPAR、PAI-1的表达。结果:血瘀组出现明显的血瘀表现,正常组与血瘀组体征差异显著。经柔肝冲剂治疗后,血瘀体征有明显改善。通过免疫组化、蛋白定量发现PAI-1、uPA、uPAR在各组大鼠肝组织中均有表达。PAI-1、uPA、uPAR表达在血瘀组较正常组为高,其差异有统计学意义,P<0.01。经柔肝冲剂治疗后它们表达均有下降,其差异有统计学意义,P<0.01。结论:uPA、uPAR、PAI-1在正常大鼠肝组织中有表达。血瘀型肝纤维化时,其在肝组织中蛋白表达增高,柔肝冲剂可降低其表达。柔肝冲剂可能通过影响纤溶酶原激活系统,起到抗肝纤维化作用。     

柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活系统影响的研究

目的：探讨柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活系统[尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）、尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）、纤溶酶原激活抑制因子-1（PAl-1）]在肝组织蛋白表达的调控作用。方法：将大鼠随机分为正常组、血瘀组和柔肝组。主要观察项目：大鼠血瘀体征；用免疫组化、酶联免疫吸附法检测肝组织中uPA、uPAR、PAl-1的表达。结果：血瘀组出现明显的血瘀表现，正常组与血瘀组体征差异显著。经柔肝冲剂治疗后，血瘀体征有明显改善。通过免疫组化、蛋白定量发现PAl-1、uPA、uPAR在各组大鼠肝组织中均有表达。PAI-1、uPA、uPAR表达在血瘀组较正常组为高，其差异有统计学意义，P〈0．01。经柔肝冲剂治疗后它们表迭均有下降，其差异有统计学意义，P〈0．01。结论：uPA、uPAR、PAl-1在正常大鼠肝组织中有表达。血瘀型肝纤维化时，其在肝组织中蛋白表达增高，柔肝冲刑可降低其表达。柔肝冲剂可能通过影响纤溶酶原激活系统，起到抗肝纤维化作用。     

rt—PA在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对神经细胞保护的研究

目的观察重组组织型纤溶酶原激活剂（rt—PA）在体外血脑屏障氧糖剥夺模型中对神经细胞的影响,探讨rt—PA对脑缺血神经元的保护作用。方法利用Transwell培养小室为支架,构成以人血管上皮细胞为基础的体外血脑屏障模型;利用厌氧培养箱及无糖培养液,建立体外缺血缺氧模型;在体外缺血缺氧模型基础上,采用组织培养技术,培养神经细胞,并在缺血缺氧条件下,使用MTT法进行检测不同剂量rt—PA对神经细胞活性的影响。结果分别在氧糖剥夺实验（OGD）及非0GD条件下,在不同rt—PA药物的浓度作用下,低浓度（0．3125ug／mL）对非0GD条件下神经细胞的生长有促进作用,在OGD条件下,低浓度（0．625ug／mL,0．3125gg／mL）对神经细胞同样具有保护作用。结论rt—PA可能对脑缺血后神经细胞存在保护作用,并与rt—PA的剂量相关,在0GD条件下,低剂量rt—PA对神经细胞的保护作用更为显著。     

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠VCAM-1,PAI-1mRNA的影响

目的:探讨肺纤方干预肺间质纤维化炎性反应及纤溶抑制的作用。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方提取物高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6 g·kg-1)7组,采用气管插管灌注博莱霉素3 mg·kg-1进行大鼠肺间质纤维化造模。造模第2天予药物灌胃干预。于第14,28天分两批进行动物处理,HE染色观察肺泡炎程度,Masson染色观察肺纤维化程度。RT-PCR检测血管细胞黏附分子(VCAM-1),纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)基因表达。结果:肺纤方中剂量组能够显著抑制肺泡炎、肺纤维化程度,降低VCAM-1,PAI-1mRNA表达。结论:肺纤方通过抑制VCAM-1,PAI-1基因表达,减轻炎性反应、改善纤溶抑制而发挥抗纤维化作用。     

心气虚证大鼠循环肾素血管紧张素系统激活与血浆纤溶酶原激活物抑制剂活性变化的实验研究

目的：检测心力衰竭（HF）－心气虚大鼠循环肾素血管紧张素系统（RAS）及纤溶酶原激活物抑制剂（PAI－1）活性变化，讨论HF－心气虚时气虚血瘀与RAS激活对内源性纤溶系统的关系及其意义。方法：建立大鼠动静脉瘘（AVF）HF－心气虚和对照组模型（假手术组），检测左心室功能，用放免法和发色底物法检测血浆肾素活性（PRA）、血管紧张素罗马数（Ang Ⅱ）浓度及PAI－1变化，并进行两组间比较。结果：与假手术组和术产比较,HF-沁气虚组大鼠术后出现左心功能不全，左室收缩压降低，舒张末压增高（P＜0.05），同时血浆PRA、Ang Ⅱ水平及PAI－1活性增高（P＜0.05）；随着心功能改善，血浆PRA、Ang Ⅱ水平及PAI－1活性下降。结论：HF－心气虚时RAS激活对导致机体纤溶系统功能失衡有重要作用，可用以解释严重心功能不全患者血液呈高产状态，并且发生血栓栓塞疾病危险增高的原因，可能为心气虚致气虚血瘀的病理生理基础。