亚低温对大鼠脑创伤后海马组织ATP酶及神经细胞凋亡的影响

目的观察亚低温对脑创伤后海马组织ATP酶活性及神经元凋亡的影响,为其临床作用机制提供理论依据.方法 42只Spregue-Dawley大鼠随机分为假手术对照组、脑创伤组和亚低温治疗组,复制动物脑创伤模型,亚低温治疗组伤后快速予31℃±1℃亚低温,维持约24 h.各组均在受伤后2 d行神经功能行为评分及伤侧取材检测海马ATP酶活性、原位缺味端标记(TUNEL)法检测CA1区神经元凋亡情况.结果亚低温明显提高脑创伤后的神经功能行为评分(P﹤0.05),增加脑创伤后下降的Ca2 -ATP酶活性(P﹤0.01),减少海马CA1区凋亡的神经元数量(P﹤0.01).结论亚低温对创伤脑组织的保护作用与其增加Ca2 -ATP酶活性,减轻钙超载,抑制神经元凋亡有关.     

脓毒症对大鼠海马区caspase-3表达的影响

目的 探讨脓毒症对大鼠海马区神经元的凋亡蛋白酶caspase-3表达的影响。 方法 80只30日龄健康雄性Wistar大鼠,随机分为盲肠结扎穿孔术（CLP） 组（n=50）和对照组（n=30）。CLP组采用CLP建立脓毒症模型,对照组行假手术不造成脓毒症模型。于手术后6、12、24 h,CLP组和对照组分别取10只大鼠,5只做神经行为学评分,另外5只处死取脑,采用蛋白免疫印迹法观察caspase-3的表达,术后24 h,两组各取3只大鼠,采用免疫荧光检测caspase-3的表达。 结果 对照组大鼠大脑海马区仅微量表达caspase-3,神经行为学评分较高。CLP组大鼠caspase-3的表达量于CLP后6 h就开始升高,24 h达高峰,均明显高于对照组（P＜0.05）,大鼠的神经行为学评分在CLP后6 h开始降低,并随着时间逐渐下降,均明显低于对照组（P＜0.05）。 结论 脓毒症脑损伤时大鼠的神经行为学评分降低,海马区神经元caspase-3表达上调,并随时间变化而波动。     

氨基胍对癫痫大鼠海马区bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的探讨氨基胍对癫痫大鼠海马区bcl-2、bax蛋白表达的影响。方法32只SD大鼠随机分为4组：空白对照组（Ns＋Ns组）,模型组（Ns＋KA组）,氨基胍预处理组（AG＋KA组）和单纯氨基胍组（AG＋Ns组）,每组8只。4组大鼠造模后存活24h、48h,免疫组织化学法显示bcl-2、bax的蛋白表达情况。结果bcl-2的免疫反应在Ns组和AG组最强,AG＋KA组次之,KA组最弱;bax的免疫反应在KA组最强,AG＋KA组次之,Ns组和AG组最弱。结论氨基胍预处理癫痫模型大鼠可以使bcl-2的表达增加、bax的表达降低。     

丙泊酚对大鼠脑创伤后神经细胞死亡相关蛋白激酶mRNA表达及凋亡的影响

死亡相关蛋白激酶(DAPK)[1]可出现于脑缺血和创伤性脑损伤后神经细胞凋亡启动阶段信号转导级联反应定型之前,其基因表达与多种促凋亡信号转导的生物分子作用有关[2-3].已证实丙泊酚具有脑保护作用,其作用机制还未完全阐明.     

脑创伤后单唾液酸四己糖神经节苷脂对氧自由基线粒体信号通路的影响

目的探讨脑创伤后单唾液酸四己糖神经节苷脂对氧自由基线粒体信号通路的影响。方法采用改进的Marmarou's法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化、TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、凋亡细胞数进行动态观察。硫代巴比妥酸法测量丙二醛。结果伤后给予Edaravone进行干预自由基水平明显减少,细胞色素c表达和神经元细胞凋亡数降低;依达拉奉与单唾液酸四己糖神经节苷脂联合干预效果更为明显。结论颅脑创伤后单唾液酸神经节苷脂具有脑保护作用,其可能的机制之一是调节氧自由基线粒体信号通路而发挥作用。     

葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因的影响

背景：Fan及P53是重要的促进凋亡的调控基因，属于肿瘤坏死因子／神经生长因子受体家族，其表达产物具有传递凋亡信号的作用，可调控脑缺血再灌注损伤时细胞的凋亡，而葛根素则能够减轻细胞的凋亡程度。 目的：观察葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因Fas及P53的影响。 设计：随机对照实验。 单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科。 材料：实验于2001-09／2002-02在华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科实验室完成。选取清洁级3个月龄Wistar大鼠45只。随机分为假手术组、模型对照组、葛根素治疗组，15只／组。 方法：葛根素治疗组及模型对照组建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型。假手术组只分离第一颈椎两侧翼小孔，但不电凝两侧椎动脉，只分离两侧颈总动脉，但不夹闭之。葛根素治疗组于缺血前1h给予葛根索注射液100mg／kg，模型对照组给予等量生理盐水，假手术组不给药。各组大鼠分别于脑缺血再灌注后3，6，12，24，48h即速处死，每次每组3只。分离海马组织，制备组织切片，利用免疫组化法、原位末端标记法检测各组大鼠脑缺血再灌注后不同时间点Fas及P53蛋白表达的水平及凋亡细胞数的变化。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas及P53蛋白表达的阳性细胞数。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较。 结果：实验纳入大鼠45只，全部进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显Fas基因表达。与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后各时间点均明显降低：6，12，24，48h时差异显著[（15．0&;#177;4．3）。（13．5&;#177;4．9）；（40．7&;#177;3.4），（27．2&;#177;3．1）；（37&;#177;4．8），（22.0&;#177;2．1）；（24．7&;#177;4．1）。（18．9&;#177;5．3）个／mm；P〈0．05，P〈0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区P53蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显P53基因表达。与模型对照组比较，葛根索治疗组于脑缺血再灌注后24，48h均明显降低[（25．3&;#177;4．4），（12．8&;#177;2．7）；（24．3&;#177;3．6），（10．9&;#177;3．0）个／mm；P〈0．01]。④各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较：与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后12，24，48h均明显降低[（34．0&;#177;3．7），（21．0&;#177;3．7）；（41．0&;#177;4．2），（33．0&;#177;4．8）；（71．0&;#177;5.5），（41．0&;#177;3．4）个／mm；P〈0．01]。 结论：给予葛根紊治疗的大鼠缺血再灌注6-48h时Fas的表达显著降低，缺血再灌注24—48h时P53的表达亦明显减少，且凋亡细胞数也呈下降趋势，进一步证实葛根紊的脑保护作用，提示葛根素抑制脑复苏后的细胞凋亡可能与其减少促凋亡基因Fas及P53蛋白表达有关。     

植物雌激素对去卵巢血管性痴呆大鼠认知功能和海马胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的:观察植物雌激素对去卵巢血管性痴呆(VD)大鼠海马胆碱能神经元表达的影响,探讨植物雌激素对去卵巢VD大鼠的脑保护作用及可能机制。方法:60只雌性Wistar大鼠经水迷宫筛选随机分为4组。Ⅰ组(sham组):VD大鼠,未去除卵巢;Ⅱ组(OVX组):VD大鼠,去除卵巢;Ⅲ组(OVX+est组):VD大鼠,去除卵巢,给予化学雌激素喂养;Ⅳ组(OVX+phy组):去除卵巢,给予植物雌激素喂养。4组大鼠VD手术前后分别应用Morris水迷宫检测法进行大鼠空间认知功能的评价。采用胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫组织化学ABC法,观察去卵巢VD大鼠各组海马胆碱能神经元的数目。结果:与OVX组相比,OVX+est组及OVX+phy组的大鼠海马胆碱能神经元数目明显升高(P<0.05),且在水迷宫中找到水下平台的时间、距离明显缩短(P<0.05),而与sham对照组差别不明显,且OVX+est组和OVX+phy组相比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:植物雌激素具有雌激素样作用,能增强大鼠海马胆碱能神经元的ChAT表达,对血管性痴呆大鼠的记忆损害有一定程度的保护作用。     

高压氧对鼠脑创伤后基因mdm2、bcl-2、bax表达的影响

目的在建立中度颅脑损伤动物模型的基础上,通过观察创伤后高压氧治疗对大鼠基因mdm2、bcl-2和bax表达的影响,探讨高压氧治疗作用的分子机制,为高压氧在临床上的应用提供理论依据。方法成年健康雌性SD大鼠16只,随机分为两组（脑损伤组,高压氧治疗组）。各组大鼠均于致伤后48h,取挫伤灶周边脑组织,采用免疫组化法测定基因mdm2、bcl-2和bax的表达。结果高压氧治疗组基因bcl-2的表达强于损伤组（P〈0．05）。而基因mdm2、bax在两组间的表达无差异。结论高压氧对脑损伤的治疗作用与抑制细胞凋亡有密切关系。     

40 kV/m电磁脉冲辐照后大鼠海马区细胞凋亡研究

细胞凋亡是由基因控制的细胞自主的有序的死亡[1]。在以往的实验中,我们发现电磁脉冲(ＥＭＰ)对小鼠脑内儿茶酚胺类物质含量有影响[2],并且ＥＭＰ辐照后小鼠的学习、记忆能力也有改变(另文报道),但对ＥＭＰ辐照后动物海马细胞凋亡的研究尚未见文献报道,为进一步探讨ＥＭＰ...     

中度低温体外循环后大鼠海马mcl-2和bax的表达与神经元凋亡

背景：海马损伤被广泛认为与神经认知功能障碍有关，大鼠体外循环模型的建立使关于体外循环相关的海马损伤的研究得以进行。目的：旨在研究中度低温、血液稀释体外循环对大鼠海马bcl-2和bax基因表达及神经元凋亡的影响。设计：以实验动物为研究对象，完全随机分组设计，探索性研究。单位：一所大学医院麻醉科。材料：实验选用30只雄性SD大鼠，随机将大鼠分为体外循环组和假体外循环组，每组各15只。方法：体外循环组大鼠经历60min中度低温非搏动性体外循环通过使用蠕动泵和膜式氧合器，体外循环预充用20mL 1:1晶胶液；另外15只假体外循环组大鼠除不进行体外循环外其他操作与体外循环组完全相同。每组中6只大鼠在手术后1h断头取海马+匀浆，采用逆转录聚链酶反应方法测定bcl-2和bax mRNA表达，表达强度以bcl-2或bax聚合酶链反应产物密度与看家基因β-actin比值来表示。每组中6只在手术后6h处死，采用免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达，脱氧核糖核酸末端转移酶介导缺口末端标记法染色法测定神经元凋亡，蛋白表达强度以阳性面积占整个测量面积百分比表示。每组中其余3只在手术后6h采用电子显微镜观察海马神经元超微结构变化。主要观察指标：①两组大鼠海马bcl-2和bax基因表达、蛋白Bcl-2和Bax表达。②两组大鼠海马脱氧核糖核酸末端转移酶介导缺口末端标记法法神经元凋亡以及神经元电镜超微结构改变。结果：手术后1h，体外循环组大鼠海马bcl-2和bax mRNA表达，bax与bcl-2 mRNA表达比值明显高于假体外循环组，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。手术后6h，体外循环组大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达明显高于假体外循环组，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。TUNEL染色显示，术后6h，体外循环组海马CA1区神经元凋亡(染色阳性面积占整个测量面积的百分比)明显高于假体外循环组，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。电子显微镜超微结构显示，体外循环后6h，体外循环组海马神经元超微结构出现明显异常，如部分线粒体中度或重度肿胀、空泡变性、嵴减少或消失。一些神经元出现典型的凋亡早期形态学变化，如神经元固缩、核不规则有切迹、染色体浓缩及核仁边集等。结论：中度低温、血液稀释体外循环可导致大鼠海马bax和bcl-2基因表达及神经元凋亡，这可能部分解释体外循环后神经认知功能障碍的机制。     

脑损伤大鼠皮质神经细胞凋亡过程中细胞外调节激酶通路的作用

目的:细胞外调节激酶通路在凋亡信号转导中具有重要作用,观察细胞外调节激酶信号转导通路在颅脑损伤中的作用。方法:实验于2004-09/2006-01在华北煤炭医学院中心实验室完成。选用SD大鼠70只,按随机数字表法分为2组,即对照组(n=28)和模型组(n=42),每组又分为伤后10min,30min,3h,6h,24h,48h和72h7个时相点,对照组每个时相点4只大鼠,模型组每个时相点6只大鼠。按照Mamarou方法建立大鼠重型弥漫性颅脑损伤模型,在不同时相点采用免疫组化、Western-blot法分别检测两组大鼠颅脑损伤后皮质细胞外调节激酶的表达情况,另外分别应用原位杂交方法、原位末端标记法检测半胱氨酸天冬氨酸酶3及凋亡细胞,并进行比较。结果:70只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①模型组大鼠皮质p-细胞外调节激酶1/2蛋白在伤后10min时已较对照组明显升高(P<0.05),逐渐增强,伤后6h达高峰,24h仍有大量表达,明显高于对照组(P<0.01),至伤后48h降至对照组水平(P>0.05)。②模型组大鼠皮质半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA杂交阳性信号表达在伤后3h开始升高,48h达高峰,72h仍明显高于对照组(P<0.01)。③模型组大鼠皮质伤后3h偶见原位末端标记阳性细胞,6h开始增加,明显高于对照组(P<0.01),48h达高峰。④p-细胞外调节激酶1/2蛋白与半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA及原位末端标记阳性细胞均主要分布于损伤中心区及其周围,在分布区域上呈现很大的相似性。结论:脑损伤时p-细胞外调节激酶1/2蛋白表达呈一种过度激活状态,而且与半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA及原位末端标记阳性细胞在分布区域上呈现很大的相似性,推测大鼠脑损伤后细胞外调节激酶通路的过度激活是导致神经细胞凋亡的作用途径之一。     

汉防己甲素干预急性损伤脊髓神经元凋亡及bcl-2和bax表达:与甲基强的松龙的比较

背景:研究证实汉防己甲素对急性脊髓损伤有保护作用,但其具体机制尚不清楚.目的:观察汉防己甲素对急性脊髓损伤大鼠的神经保护作用,并从细胞凋亡通路探讨其作用机制.方法:将100只成年大鼠随机分为4组.采用加速压迫型Allen's打击法制备脊髓损伤模型.甲强龙组和汉防己甲素组分别于造模前和造模后24,48 h经尾静脉注射甲基强的松龙和汉防己甲素.假手术组与模型组注射等量生理盐水.造模后8 h,1,3,7,14 d采用BBB评分评估大鼠的运动功能,苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织的形态改变,免疫组织化学染色检测bcl-2和bax的表达.结果与结论:伤后7,14 d,甲强龙组和汉防己甲素组大鼠的BBB评分显著高于模型组(P<0.05),各时间点甲强龙组和汉防己甲素组间BBB评分差异无显著性意义(P>0.05).伤后3～7 d,脊髓组织损伤最为严重,甲强龙组和汉防己甲素组的损伤程度较模型组轻,同时bax表达较模型组少,而bcl-2表达较模型组多(P<0.01).说明汉防己甲素可通过增加bcl-2表达、降低bax表达,抑制急性脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复,其作用不逊于甲基强的松龙.     

熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡与凋亡相关基因的关系

目的：体外实验探讨熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与其相关基因之间的关系。方法：采用四甲基偶氮唑蓝比色、TUNEL法、流式细胞术检测熊果酸对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制与杀伤作用；应用免疫组织化学SP法检测凋亡相关基因caspase-9、bcl-2、bax的表达。结果：熊果酸在体外对HT-29细胞有中度增殖抑制效应，在熊果酸作用下，HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象，TUNEL法显示细胞固缩，核染色质聚集或断裂，形成凋亡小体。流式细胞术检测在G1期之前出现sub-G1峰，凋亡率最高为11．63％，熊果酸的作用具有浓度和时间依赖性。在HT-29细胞凋亡过程中，凋亡相关基因caspase-9、bax的表达增强，bcl-2的表达减弱。结论：熊果酸在体外对结肠癌HT-29细胞有诱导凋亡作用，而caspase-9和bax的表达增强，bcl-2的表达减弱可能是其作用机制之一。     

急性脑损伤大鼠脑组织核转录因子-κB活性及肿瘤坏死因子-α表达的变化

本研究旨在观察大鼠急性脑损伤后脑组织核转录因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF—α)蛋白表达的变化，探讨NF-κB活化在脑损伤后继发性脑水肿中的作用；并给应用NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)治疗提供佐证。     

姜黄素致HepG-2细胞的凋亡作用及对bcl-2/bax表达的影响

目的:研究姜黄素致人肝癌HepG-2细胞的凋亡作用及bax与bcl-2 mRNA表达的变化,为姜黄素的临床应用提供实验依据.方法:当HepG-2细胞处于对数生长期时,分别加入不同浓度(0、2.5、5、10、20、30 mg/L)的姜黄素处理48 h,MTT试验检测细胞的抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测bax和bcl-2mRNA的含量.结果:随着姜黄素浓度的增高,其对HepG-2细胞的抑制作用逐渐增强.当姜黄素浓度为30mg/L时,其抑制率达到(58.23±2.56)%,IC50=25.44 mg/L,而细胞的凋亡率由对照组的(1.1±0.3)%上升到(38.4±1.5)%;bax和bcl-2分别是对照组的(5.00±0.55)倍和(0.28±0.05)倍.结论:姜黄素能抑制HepG-2细胞的生长,诱导细胞凋亡,它的分子机制可能是上调bax基因和下调bcl-2基因的表达.     

创伤性脑损伤诱导大鼠脑内巨噬细胞亚群分化与脑外伤后神经元过度自噬和凋亡的关系研究

目的 探讨创伤性脑损伤后大鼠脑内巨噬细胞分化的亚群种类和创伤后神经元过度自噬和凋亡的关系.方法 选择45只雄性SD大鼠建立创伤性脑损伤(TBI)模型,然后根据随机数字表法分为Sham 组(假手术大鼠,右心室注射5 μL氯化钠溶液)、TBI组(TBI模型大鼠,右心室注射5 μL氯化钠溶液)和3 - MA组(TBI模型大鼠...     

高压氧对大鼠创伤性脑损伤神经元凋亡及其凋亡相关因子的影响

目的:探讨高压氧对创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2表达的影响。方法:成年健康雄性Wistar大鼠66只,随机分为高压氧治疗组(HBOT)、损伤对照组和假手术组,应用自由落体法建立中度颅脑损伤的大鼠模型,采用原位末端标记法(TUNEL)染色检测脑挫伤灶旁周围半影区的细胞凋亡情况,用免疫组化法检测Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。结果:HBOT组与损伤对照组相比,凋亡细胞数和Caspase-3阳性表达均有不同水平降低,Bcl-2表达升高,差异有显著性(P<0.01)。假手术组各指标均为阴性。结论:HBO对创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的发生有抑制作用,其抑制神经细胞凋亡的机制可能与HBOT对促凋亡蛋白Caspase-3的抑制和抗凋亡蛋白Bcl-2的促进作用有关。     

弥漫性脑创伤后Bcl-2家族与线粒体途径细胞凋亡的相关性分析

目的探讨脑创伤后Bcl-2家族在线粒体途径细胞凋亡中的作用。方法采用改进的Marmarou’s法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化,TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、Bax、Bcl-2表达及凋亡细胞数进行动态观察。结果伤后1 h至24 h Cytc表达与TUNEL阳性细胞数密切相关（r=0.958,P〈0.05）;伤后1 h至24 h Bax和Bcl-2二者的比例与Cytc免疫反应相关（r=0.996,P〈0.01）,但Cytc表达峰值（24 h）早于Bax和Bcl-2二者的比例高峰值（48 h）;伤后1 h至72 h Bax和Bcl-2二者的比例与TUNEL阳性细胞数密切相关（r=0.925,P〈0.01）。结论 Bax和Bcl-2二者的比例对Ctyc释放的调节起重要作用,Bax和Bcl-2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因的调节中可能仍发挥重要的作用。     

醒脑静治疗大鼠重型颅脑损伤的作用机制

目的观察醒脑法与传统活血法对重型颅脑损伤大鼠脑组织水肿、凋亡及水通道蛋白4（AQP4）表达的影响,探讨其治疗颅脑损伤的疗效差异及作用机制。 方法SD大鼠72只,随机分为假手术组（12只）,模型组（20只）,醒脑静治疗组（20只）,传统活血治疗组（20只）。采用改良后Feeney方法建立大鼠重型颅脑损伤模型。分别在24 h,48 h,72 h,7 d 4个时间点,假手术组取3只、余各组取5只测定脑组织含水量、HE染色观察脑组织变化情况,免疫组化方法检测受损区域脑组织AQP4的表达并采用TUNEL法检测凋亡细胞,通过RT-PCR验证治疗后AQP4表达水平。 结果模型组各时间点脑组织含水量、损伤灶周围细胞凋亡数及AQP4的表达均高于假手术组,差异具有统计学意义（P<0.05）。醒脑静组及传统活血组各时间点脑组织含水量、AQP4表达水平、细胞凋亡水平均比模型组降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,RT-PCR支持AQP4变化结果。 结论醒脑静可改善重型颅脑损伤后引起的脑水肿及细胞凋亡,效果优于传统活血疗法。其作用机制可能与抑制AQP4在损伤脑组织中的表达、减轻脑细胞损害有关。