SBHL对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长抑制作用的研究

目的观察SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长的抑制作用,从分子水平探讨SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长抑制作用的机制。方法用MTT比色法观察不同浓度和作用时间的SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞增殖的影响;用流式细胞术对细胞周期进行分析;TRAP-银染法检测端粒酶活性。结果 5×10-5mol/L-1×10-3mol/LSBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞增殖有明显的抑制作用,这种抑制作用随SBHL浓度的增加而增加;流式细胞术对细胞周期进行分析的结果显示,随着SBHL浓度的增加,S期细胞含量逐渐降低,G1期细胞含量逐渐增加,SBHL将细胞阻滞于G1期,抑制DNA合成。SBHL处理的甲状腺鳞癌SW579细胞与对照组相比,端粒酶活性明显降低。结论 (1)SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长具有明显的抑制作用,而且这种抑制作用与SBHL的浓度呈正相关。(2)其机制可能与下调端粒酶活性,进而抑制肿瘤细胞生长有关。     

三氧化二砷体外诱导宫颈癌细胞株凋亡及其机制的研究

目的:研究三氧化二砷体外能否诱导宫颈癌细胞株(HeLa细胞)发生凋亡及其相关机制。方法:采用透射电镜、DNA Ladder、TUNEL的方法进行凋亡检测,用ECL Westernblot的方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果:三氧化二砷体外作用于HeLa细胞后,透射电镜观察到了凋亡小体;DNA Ladder法检测到了凋亡时DNA降解形成的梯带;TUNEL法也检测到HeLa细胞有DNA的断裂。在凋亡过程中,凋亡相关基因bcl-2的表达下调,而p53基因的表达没有明显改变。结论:三氧化二砷体外能诱导HeLa细胞发生凋亡,其机制与bcl-2基因的表达下调有关。     

SBHL对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的探讨澳洲茄胺盐酸盐（SBHL）对环磷酰胺（CTX）处理小鼠免疫功能的影响。方法 Balb/c小鼠用环磷酰胺造成免疫抑制模型,同时尾静脉注射SBHL7d,观察小鼠免疫器官重量,脾细胞特异性抗体的产生、血清凝集素滴度、溶血素CH50值、ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及血清中肿瘤坏死因子α含量的变化。结果 SBHL（40 mg/kg）尾静脉注射7 d,小鼠胸腺、脾脏重量增加。ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖明显。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能显著增强。给药组小鼠血凝素滴度、溶血素CH50值、TNF-α也高于对照组。结论 SBHL能明显的改善环磷酰胺抑制的小鼠免疫功能,这可能是澳洲茄胺盐酸盐抗肿瘤的另一作用机理。     

土槿甲酸对鼠肉瘤180细胞增殖的抑制作用

目的:探讨土槿甲酸对鼠肉瘤180细胞生长的抑制效应.方法:实验在辽宁省肿瘤医院附属肿瘤研究所完成.用不同浓度的土槿甲酸加入体外培养的鼠肉瘤180细胞中,观察加药后细胞在生长过程中数量及其形态的变化;用四甲基偶氮唑盐比色法检测土槿甲酸的细胞毒作用;用Hoechst33342和碘化丙啶双荧光染色法检测细胞凋亡.结果:药物浓度为0,10,1,0.1 μmol/L时,经土槿甲酸处理24 h后,鼠肉瘤180细胞凋亡率分别为1.5%,19.8%,49.9%,30.7%;经土槿甲酸处理48 h后,细胞凋亡率分别为1.3%,75.2%,59.6%,39.8%;经土槿甲酸处理72 h后,细胞凋亡率分别为0.9%,69.8%,50.3%,41.4%.土槿甲酸明显抑制鼠肉瘤180细胞生长,以10 μmol/L的抑制作用为最强.结论:土槿甲酸能有效抑制鼠肉瘤180细胞的增殖.细胞凋亡率与药物浓度及作用时间呈正相关.     

SBHL对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的探讨SBHL对肿瘤的作用效果及其抗肿瘤免疫效应机制。方法选用S180荷瘤小鼠,采用腹腔注射SBHL[103、0、50 mg/(kg.d)],连续注射10 d,观察肿瘤生长及SBHL对小鼠免疫功能的影响。结果 SBHL能显著抑制荷瘤小鼠S180肉瘤的生长。SBHL对荷瘤小鼠受抑的细胞免疫功能具有明显正向调节作用,能提高T淋巴细胞增殖及IL-2产生能力,增强NK和LAK细胞活性。结论 SBHL能明显抑制肿瘤的生长,SBHL的免疫增强效应可能是其发挥抗肿瘤作用的重要途径。     

苦参碱诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的相关机制研究

目的:观察苦参碱体外诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡效应并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度(0.00、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/ml)的苦参碱分别作用于体外培养的宫颈癌细胞,在不同时间点(24、48、72 h),采用MTT法检测细胞的增殖情况;采用Annexin-Ⅴ和PI双染法在流式细胞仪上检测细胞的凋亡率;采用Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:各组苦参碱对SiHa细胞的增殖均有抑制作用,MTT和流式细胞结果显示,不同浓度的苦参碱对细胞生长抑制率与对照组相比存在明显差异(P0.05),呈剂量效应正相关及时间效应正相关。加入Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK后,各组细胞凋亡率与只加苦参碱组相比凋亡率下降。Western blot检测结果显示Caspase-3蛋白水平随苦参碱浓度的提高而增加(P0.05)。结论:苦参碱可诱导宫颈癌SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与提高Caspase-3活性有关。     

咖啡酸锗诱导小鼠宫颈癌(U14)细胞凋亡的实验研究

目的:从分子水平探讨咖啡酸锗对小鼠宫颈癌(U14)细胞的抑制效应及作用机制.方法:抗肿瘤活性实验采用:(1)药理试验;(2)普通染色光镜观察;(3)免疫组化观察PCNA、p53、bcl-2、ER、PR的表达;(4)甲基绿.派诺宁染色法;(5)流式细胞仪(FCM)测定DNA含量.结果:(1)咖啡酸锗及环磷酰胺组瘤重明显减轻,抑瘤率分别为47.28%和54.27%;(2)咖啡酸锗及环磷酰胺组的凋亡率分别为23.32%和20.61%;(3)咖啡酸锗组在DNA直方图上出现"亚G1"峰(即凋亡峰),生理盐水组无明显"亚G1"峰;咖啡酸锗对U14细胞周期有明显影响,使U14细胞G2～M期减少、细胞周期延长、对细胞增殖的抑制作用增强.结论:咖啡酸锗对小鼠宫颈癌(U14)细胞生长有一定的抑制作用,诱导瘤细胞凋亡可能是其抑制U14细胞生长的机制之一.     

苦参碱诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡的实验研究

本研究探讨苦参碱对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的作用及其机制。用不同浓度苦参碱处理RPMI8226细胞24、48小时,通过形态学观察、Annexin-V分析、DNA琼脂糖电泳、线粒体膜电位检测观察苦参碱对RPMI8226细胞的促凋亡作用。结果表明：RPMI8226细胞经苦参碱处理后,出现典型的细胞凋亡形态,凋亡早期细胞膜外翻,DNA琼脂糖电泳出现典型的梯状结构,线粒体膜电位崩塌。结论：苦参碱能有效地诱导骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性。     

抗CD20单克隆抗体诱导B淋巴瘤细胞株凋亡的实验研究

本研究探讨抗CD20单克隆抗体体外诱导B淋巴细胞株凋亡情况及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namalwa细胞经Rituximab 20μg／ml作用24小时后Bcl-2的表达情况。结果表明：抗cD20单克隆抗体对Daudi、Raft和Namalwa淋巴瘤细胞有轻度的抗增殖作用,对Ramos细胞无抗增殖作用,抗增殖作用与单克隆抗体作用浓度无关。抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3％-10％之间波动。Na—malwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后,Bcl-2蛋白表达下调。结论：单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa和Raji细胞株有轻度抗细胞增殖作用,但与作用浓度和作用时间无明显相关。单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa、Raji和Ramos细胞株有微弱的诱导凋亡作用。Namalwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后Bcl-2表达下调,这可能是抗CD20单克隆抗体增敏细胞毒药物作用的机制之一。     

Velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡研究

为了研究velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡效应及机制，采用台盼蓝拒染法检测2、10、50和100nmol／L velcade处理U266细胞活率，用流式细胞术分析Annexin—V、线粒体跨膜电位（△ψm）和氧自由基（ROS），用半定量RT—PCR法检测bcl-2 mRNA的表达。结果表明：velcade抑制U266细胞增殖；诱导U266细胞凋亡，24小时Annexin—V阳性细胞比例增高，△ψm降低；12小时时活性氧明显增高，荧光强度增强；抗凋亡基因bcl-2表达降低。结论：velcade对U266细胞具有增殖抑制和杀伤作用。其可通过内源性细胞凋亡信号通路诱导U266细胞凋亡。     

Cobas 4800 HR-HPV 检测系统在宫颈癌筛查中的应用

目的：分析cobas 4800检测女性高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染宫颈癌状况。方法对2222例女性宫颈脱落细胞进行cobas 4800 HR-HPV检测宫颈薄层液基细胞（TCT ）检查,计算 HR-HPV感染的阳性率与年龄段关系,及与 TCT阳性率的比较。结果2222例标本中HR-HPV阳性者395例,阳性率17．8％,其中 HPV16感染86例（3．9％）,HPV18感染31例（1．4％）,其他12种高危型感染278例（12．5％）。所有样本在19～29岁、30～39岁、40～49岁、50～59岁、60～69、≥70岁6个年龄段HR-HPV的感染率分别为23．23％（84／361）、21．5％（147／686）、15．0％（92／613）、14．7％（56／380）、6．8％（9／132）、14．0％（7／50）。各年龄组的HR-HPV阳性检出率比较差异具有统计学意义（P＜0．01）。在HR-HPV 阳性例数中,TCT阳性97例,阳性率为24．56％（97／395）,高于阴性组的1．59％（29／1827）,两者比较差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论统计数据中 H R-HPV感染高峰在19～29岁,以其他12种 HR-HPV为主,HR-HPV检测可以提高宫颈癌筛查检测的敏感性,若同时联合 TCT检测可早期发现治疗宫颈癌前病变。     

上调人1型大麻素受体表达诱导人宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的通过构建基因真核表达载体,探讨人1型大麻素受体(hCB1R)对人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法构建GV230-hCB1R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞,免疫印迹(Western blot)法及免疫荧光细胞化学染色(ECL)联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测hCB1R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hCB1R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果 hCB1R转染HeLa细胞后表达相对分子质量为40 000的hCB1R蛋白,细胞膜和细胞质中均有hCB1R表达;过表达的hCB1R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,流式细胞术检测结果显示HeLa细胞株呈现凋亡,hCB1R对宫颈癌HeLa细胞株的生长表现出明显的抑制作用,促进宫颈癌HeLa细胞凋亡。结论上调HeLa细胞hCB1R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。     

外源性子宫珠蛋白基因对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨人子宫珠蛋白（UG）基因对宫颈癌Hela细胞系细胞增殖及凋亡的影响。方法构建真核细胞表达载体pcDNA3．1-UG（＋），以脂质体介导法稳定转染体外培养的人宫颈癌Hela细胞，同时转染空载体pcDNA3．1质粒，以未转染细胞为对照，转染成功后分别命名为pcDNA3．1-UG（＋）／Hela组、pcDNA3．1／Hela组、Hela组。应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、Western blot方法分析目的基因表达，并采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞凋亡。结果pcDNA3，1-UG（＋）／Hela组UGmRNA及UG蛋白出现明显的高表达，与对照组细胞相比差异有统计学意义（P〈0．05）；pcDNA3．1UG（＋）／Hela组细胞生长速度明显慢于未转染Hela细胞，其细胞凋亡率与未转染Hela细胞相比差异也有统计学意义；然而pcDNA3．1／Hela组细胞生长速度和凋亡率均无明显变化。结论转染UG基因能诱导Hela细胞凋亡及抑制Hela细胞生长。     

腹腔镜手术对子宫颈癌细胞增殖能力影响的实验研究

目的 探讨腹腔镜手术对子宫颈癌细胞增殖能力的影响.方法 分别采用流式细胞技术及实时荧光定量RT-PCR检测20例子宫颈癌患者腹腔镜术前、术后子宫颈癌细胞的凋亡率及N-myc、Fas基因表达水平的改变,并与20例子宫颈癌患者开腹手术组及20例腹腔镜下全子宫切除术组正常子宫颈组织相对照,分别对以上各组标本进行对比分析.结果 ①腹腔镜手术组子宫颈癌细胞术前及术后的凋亡率分别为(4.50±0.88)％和(31.37±1.66)％,差异有显著性(P＜0.001);开腹手术组子宫颈癌细胞术前及术后的凋亡率分别为(4.38±0.67)％和(4.31±0.53)％,差异无显著性(P＞0.05);腹腔镜下全子宫切除术组正常子宫颈细胞术前及术后的凋亡率分别为(16.95±1.64)％和(17.12±1.57)％,差异无显著性(P＞0.05).②腹腔镜手术组术前子宫颈癌组织中N-myc、Fas基因的表达量分别为(0.014±0.010)和(0.007±0.003),术后基因的表达量分别(0.002±0.002)和(0.022±0.011),差异有显著性(P＜0.001);开腹手术组术前子宫颈癌组织中N-myc、Fas基因的表达量分别为(0.006±0.003)和(0.008±0.003),术后基因的表达量分别(0.006±0.002)和(0.008±0.003),差异无显著性(P＞0.05);腹腔镜下全子宫切除术组术前正常子宫颈组织中N-myc、Fas基因的表达量分别为(0.001±0.000)和(0.024±0.007),术后基因的表达量分别(0.001±0.000)和(0.024±0.007),差异无显著性(P＞0.05).结论 腹腔镜手术并不增加子宫颈癌细胞的增殖能力,反而对子宫颈癌细胞的增殖能力有抑制作用,是一种安全的手术方法.     

TRAIL联合化疗药物对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)对人宫颈癌Hela细胞的作用 ,以及与化疗药物的协同作用。方法将Hela细胞接种至 96孔培养板后分别加入浓度为l.0、10 .0、10 0 .0 μl/L的TRAIL、0 .1、1.0、10 .0mg/L的阿霉素 (ADM )和丝裂霉素 (MMC) ,及不同匹配的TRAIL MMC和TRAIL ADM ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法分别检测肿瘤细胞的生存率 ;将Hela细胞接种至 12孔板 ,培育 2 4h后加入不同浓度的TRAIL、ADM、MMC、TRAIL ADM、TRAL MMC ,用流式细胞术检测不同处理组肿瘤细胞的凋亡率和死亡率。结果 10 0 μg/LTRAIL引起细胞的凋亡率为 2 0 .1% ,与无药物组 1.1%的凋亡率有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;单独采用 10mg/LMMC、ADM对细胞的抑制率为 3 6.0 %和 44 .1% ,而 10 0 μg/LTRAIL与 10mg/LMMC、ADM联合后对细胞的抑制率分别达到 5 8.4%和 73 .7% ,两者有协同作用 (P <0 .0 5 )。结论在体外实验中 ,TRAIL可通过诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡而产生抗肿瘤作用 ;TRAIL与化疗药物ADM、MMC有协同抗肿瘤作用。     

女性宫颈癌早期筛查认知程度的调查分析

目的 了解妇科门诊就诊女性对宫颈癌早期筛查的认知程度.方法 选取1 590例门诊就诊女性,采用自设问卷进行认知程度调查.结果 知道宫颈癌的占96.60％.城市女性对宫颈癌知识的认知程度高于农村;文化程度越高的女性对宫颈癌知识的认知程度越高,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 女性对宫颈癌早期筛查重要性的认知程度...     

高危型人乳头瘤病毒检测对宫颈病变的临床价值

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillom avirus,HR-HPV)检测在宫颈病变诊断中的应用价值。方法用二代杂交捕获法(hybird captureⅡ,HC-Ⅱ)对宫颈涂片结果异常的3426例患者进行HR-HPV DNA、阴道镜和宫颈多点活检组织病理学检查,对结果进行回顾性分析。结果检出宫颈浸润癌45例,宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2/3级670例,CIN1级、宫颈湿疣及宫颈炎2711例。高级别病变(CIN2/3 )及宫颈癌患者HPV DNA阳性率高于低级别宫颈病变和宫颈炎患者,宫颈病变组比宫颈炎组的病毒载量明显升高。结论单次HR-HPV DNA载量与CIN2/3 有一定相关性,HR-HPV检测多次阳性的患者有发生CIN2/3 的风险,检测HR-HPV并对其感染者密切随访对检出CIN2/3 有重要意义。