硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离DNA的方法学评价

目的:利用硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离的DNA并用荧光定量法测定,对方法学进行评价。方法:采用硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离的DNA,并纯化DNA。制成0ng/ml、8ng/ml、80ng/ml、800ng/ml标准品,并采用荧光定量法检测血浆中游离的DNA含量,从重复性、线性范围、回收率几方面进行方法学评价。结果:硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离DNA的重复性较好,其变异系数为5.1%和7.1%;在0-1000ng/ml范围呈线性;回收率在45%-55%之间。结论:硅胶吸附离心柱法提取血浆中游离DNA的回收率较高,适合于小片段DNA的提取。     

SDSPAGE结合125I示踪法与ELISA法测定血中rh-bFGF的比较

目的：比较和评价SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）结合^125I示踪法与ELISA法测定血浆中重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rh-bFGF)。方法：10只大鼠iv^125I-rh-bFGF1600ng/kg,用SDS－PAGE结合放射性计数测定血浆rh-bFGF含量。9只大鼠iv,rh-bFGF 1600ng/kg,用ELISA法测定血浆rh-bFGF含量。结果：两种方法的灵敏度、回收率和重现性好。ELISA法测定血浆rh-bFGF含量较SDS－PAGE结合^125I示踪法低。结论：SDS－PAGE结合^125I示踪法与ELISA均可满足药动学研究的要求。     

人血浆中卡维地洛的HPLC测定

建立了HPLC法测定血浆中卡维地洛的含量.采用C18柱,流动相为乙腈-水-三氟乙酸-二乙胺(43:57:0.1:0.1),荧光激发波长240nm、发射波长340nm.在0.25～160ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9996),检测限为0.25ng/ml.平均回收率大于96%,日内及日间RSD均小于8%.     

亚甲蓝光化学法灭活病毒的研究--抗坏血酸对血浆凝血因子的保护作用

目的探讨抗坏血酸对亚甲蓝光化学法处理血浆时指示病毒灭活的效果,以及对部分凝血因子的保护作用.方法采用CPE法评价病毒的灭活效果,用Clauss法测定纤维蛋白原的含量和一期法判定FⅧC的凝血活性.结果在单采人血浆中加入1 μmol·L-1亚甲蓝和240 μmol·L-1抗坏血酸,再给以40000 lx荧光强度照射60 min,VSV滴度下降＞8lgTCID50·ml-1,并且纤维蛋白原和FⅧC的回收率分别为83.55%和81.67%,比常规亚甲蓝/荧光光化学法显著提高(P＜0.01),而且凝血酶原时间延长值在正常允许值范围,活化部分凝血酶时间延长值也接近正常允许值范围.加入抗坏血酸和色氨酸可灭活病毒,而甘露醇不能.结论在亚甲蓝光化学法中,抗坏血酸不影响病毒的灭活,而且对部分凝血因子有保护作用.因此,抗坏血酸可以有效提高单份冷冻新鲜人血浆的质量.     

气-液色谱法测定人血浆中托哌松:药动学与比较生物利用度的研究

本文报道用新的毛细管GLC法测定人血浆中托哌松的含量,该方法相当灵敏,可检测人血浆中2ng/ml托哌松,回收率为65.1±4.5%.作者使用两种托哌松制剂,以po和iv给药进行药动学与比较生物利用度的研究.iv给药后消除半衰期为1.55±0.7h,表     

纳豆激酶抗凝血作用的研究

目的研究纳豆激酶 (NK)的活性和抗凝血作用。方法采用纤维蛋白平板法测定NK的活性 ;采用试管法测定家兔全血凝固时间、血浆复钙时间、凝血酶时间、大鼠凝血活酶时间、凝血酶引起的纤维蛋白凝固时间 ;采用Quick法测定大鼠凝血酶原时间。结果固体粉末NK的活性为 5 6 5 5 10U/g ,是尿激酶的 3.13倍 ;液体NK的活性为 15 2 34U/ml;NK能显著延长家兔全血凝固时间、血浆复钙时间、凝血酶时间、大鼠凝血活酶时间、凝血酶引起的纤维蛋白凝固时间、大鼠凝血酶原时间。结论NK对凝血过程的三阶段都有影响。     

大剂量尖吻蝮蛇凝血酶对家兔血浆纤维蛋白原的影响

目的探讨大剂量尖吻蝮蛇凝血酶对家兔血浆纤维蛋白原的影响,为临床应用提供参考。方法家兔耳缘静脉注射不同剂量的尖吻蝮蛇凝血酶,并于给药后不同时间检测其血浆纤维蛋白原含量。结果0.2～1.0U·kg-1剂量的尖吻蝮蛇凝血酶可导致家兔血浆纤维蛋白原明显下降(P<0.05),下降速度及下降幅度与剂量成正相关。剂量≥0.4U·kg-1时家兔血浆纤维蛋白原开始出现耗竭,剂量≥0.8U·kg-1时所有家兔血浆纤维蛋白原均出现耗竭。结论大剂量尖吻蝮蛇凝血酶具有明显降低家兔血浆纤维蛋白原的作用。     

LC-MS/MS法测定人血浆中氯吡格雷活性代谢物衍生物浓度的不确定度评定

目的:评定液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血浆中氯吡格雷活性代谢物衍生物(CAMD)浓度的不确定度。方法:对LC-MS/MS法测定人血浆中CAMD浓度的整个过程进行分析,对测定过程中的测量重复性、称量、工作液配制、生物样品制备、回收率、仪器允差和标准曲线拟合等因素引起的不确定度分别进行了评定,最后计算合成不确定度并进行扩展。结果:血浆CAMD低(0.107ng/ml)、中(4.467ng/ml)、高(155.667ng/ml)质量浓度质控的扩展不确定度分别为0.010 2、0.188、6.413ng/ml(k=2,P=95%)。结论:LC-MS/MS法测定人血浆中CAMD的不确定度在低浓度时主要由曲线拟合引入,在中浓度和高浓度时主要由生物样品配制、萃取过程、对照品配制和仪器允差引入。     

疫苗中残留卵清蛋白ELISA定量测定方法的建立

目的 建立ELISA法检测疫苗中残留卵清蛋白的含量.   方法 将进口纯化兔抗卵清蛋白抗体作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记兔抗卵清蛋白抗体作为酶标抗体,以系列含量的卵清蛋白溶液为标准,采用ELISA双抗体夹心法,对供试品中残留卵清蛋白进行定量测定.   结果 最佳线性范围为1.25～20 ng/ml,相关系数r≥0.99;定量限度为1.25 ng/ml;准确性试验回收率为89.2%～103.6%;精密性试验内和试验间变异系数分别为5.6%～6.7%和4.2%～9.4%.与马血清、羊血清、人血清白蛋白、牛血清白蛋白、流行性感冒病毒裂解疫苗基质液及其他无残留卵清蛋白的疫苗均无交叉反应.   结论 本方法特异性强、灵敏度高,准确性、重复性和稳定性好,可用于疫苗中残留卵清蛋白的定量检测.     

人血浆中氯氮平及去甲氯氮平的固相萃取HPLC测定

建立了HPLC法测定人血浆中的氯氮平及去甲氯氮平含量.采甩C18柱,流动相为甲醇-水-三乙胺-乙酸(600:400:4:2),检测波长254nm,固相萃取法处理血样,地西泮为内标.氯氮平及去甲氯氮平在50～2000ng/ml范围内线性关系良好.平均方法回收率分别为103.1%和102.1%.     

NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证

目的 建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法 使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证通过对5批样品进行检测。结果 采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时,DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用,方法的专属性良好;本法检测限为0.41 ng/ml;定量限为0.98 ng/ml;该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0～100 ng/ml范围内线性良好,R2≥0.9999;本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%,中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%,精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白,回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%);本方法检测实验条件发生微小变动时（不同人员、不同批次试剂盒）,对测定结果的影响...     

LC-MS/MS法测定人血浆及尿液中缬沙坦的浓度及其药动学研究

目的:建立测定人血浆及尿液中缬沙坦浓度的方法。方法:血浆样品经酸化后用乙醚提取浓度后进行分析;尿液样品直接稀释进样,均采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定,色谱柱为Aglient ZORBAX SB-C18,流动相为0.1%甲酸-乙腈(梯度洗脱),流速0.2 ml/min。电喷雾离子源(ESI),正离子多反应监测模式测定,缬沙坦定量分析的离子对为m/z 436.4→253.2,定性分析离子对为m/z 436.4→291.3;内标氯沙坦定量分析的离子对为m/z 423.4→207.1,定性分析离子对为m/z 423.4→180.2。结果:血浆和尿液中缬沙坦的线性范围分别为4~5 000 ng/ml(r=0.998 5)、20~50 000 ng/ml(r=0.998 8);最低定量限分别为4、20 ng/ml;血浆萃取回收率为61.21%~70.30%;内标归一化基质效应因子的RSD分别为3.20%、11.21%;日内和日间RSD均≤8.34%。结论:所用方法快速、灵敏度高,适用于人血浆及尿液中缬沙坦的浓度测定及药动学研究。     

测定脑膜炎球菌疫苗C群多糖的双抗体夹心ELISA法的建立

目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 meningococcal polysaccharide vaccine,MPV4)C群多糖含量的双抗体夹心ELISA法.  方法 制备抗C群多糖多克隆抗体,所得的多克隆抗体经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法对其标记辣根过氧化物酶.分别将抗C群多糖多克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对C群多糖进行特异性定量测定.  结果 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较好,未检出与A、Y、W135群多糖的交叉反应.C群多糖在2.5～20.0 ng/ml质量浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.99.该法的准确度和精密度均较好,试验内和试验间变异系数和多糖回收率分别为0.6％ ～9.1％和87.5％ ～ 100.0％,定量限度为4.0 ng/ml.采用该法测定3批MPV4显示,C群多糖含量及多糖分子大小KD值和回收率的测定结果均与先前的测定结果一致,均符合暂行质量标准.  结论 建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4 C群多糖的关键质量指标测定.     

用ELISA法测定基因转殖酵母菌发酵液中生物素

目的:采用一种简便、高灵敏度、高准确度的ELISA方法,对基因转殖可制造生物素的酵母菌发酵液中生物素含量的直接定量。方法:采用猪肺炎霉浆菌包被酶标板,再依次结合兔抗猪肺炎霉浆菌血清及生物素化羊抗兔IgG,形成生物素的固定相,用竞争抑制法测定生物素含量,各步实验条件均经优化。结果:测定的线性范围为 50～2 000ng/L,灵敏度I C_(50)=410ng/L,检测限为83 ng/L,线性相关系数r=-0.990;样品液1:1000稀释后,可消除基质效应的影响直接测定,加标平均回收率为101.13％。结论:用本文ELISA法测定基因转殖酵母菌发酵液中生物素的方法简便,结果可靠。     

重组人血管内皮抑制素的双抗体夹心ELISA特异性定量检测

建立了特异性检测重组人血管内皮抑制素(1)的双抗体夹心ELISA法,可区别内源性endostatin和1.1在7.8～1 000ng/ml浓度范围内线性良好,批内、批间RSD为3.9%～5.3%和4.4%～7.1%,平均回收率为97.70.     

恩诺沙星抗体免疫检测条件的建立

目的 制备恩诺沙星(ERLX)的多克隆抗体,以期建立通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测恩诺沙星抗体的效价和优化快速检测方法.方法 将牛血清白蛋白(BSA)和鸡血清白蛋白(OVA)偶联成功的恩诺沙星完全抗原(BSA-ERLX和OVA-ERLX)免疫新西兰家兔得到的血清分别保存在4、-20和-70℃半年后,用ELISA方法确定抗原包被的最适浓度、血清(一抗)的效价、一抗的最适稀释倍数及二抗的最适稀释倍数.首先将抗原包被浓度分为三组:20、10和5μg/ml,确定最适包被浓度,并在此基础上确定血清的效价和血清的最适稀释倍数.结果 不同温度下保存的BSA-ERLX和OVA-ERLX抗体的最适抗原包被浓度均为10μg/ml.在4、-20和-70℃保存的BSA-ERLX的抗体效价分别为12800、25600和25600:一抗的最适稀释倍数分别是:800、800和1600,二抗最适稀释倍数为1000.OVA-ERLX的效价在4、-20和-70℃分别为3200、6400和6400;一抗的最适稀释倍数分别为800、1600、1600,二抗的最适稀释倍数均为1000.结论 不同温度下保存的BSA-ERLX比OVA-ERLX抗体效价均高,综合考虑认为,-20℃保存的BSA-ERLX抗体,更加适合于进行ELISA检测.     

人血浆中盐酸左氧氟沙星的HPLC测定及药物动力学研究

建立了HPLC法测定血浆中盐酸左氧氟沙星的含量,并进行了两种制剂的人体生物等效性研究.采用C18柱,流动相为0.025mol/L磷酸-甲醇(75:25),检测波长290nm.盐酸左氧氟沙星在0.02～6μg/ml范围内线性关系良好(r≥0.9999),检测限10ng/ml,平均回收率98%.经统计学检验药动学参数,表明两制剂生物等效.     

MB-P对病毒灭活血浆有效成分的影响

目的 探讨亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活对血浆有效成分的影响.方法 使用血凝仪对血浆进行Ⅷ活性和纤维蛋白原含量检测 使用分光光度计测定血浆总蛋白浓度的变化.结果 新鲜冰冻血浆经MB-P病毒灭活后血浆Ⅷ因子活性为（0.66±0.06）IU/ml,比灭活前（0.75±0.07）IU/ml降低,纤维蛋白原含量为（1.31±0.1）mg/ml,比灭活前（2.19±0.2）mg/ml减少,两者比较差异均有显著性（P＜0.05）,总蛋白含量比较差异无显著性（P＞0.05）.结论 在制备冷沉淀时,可考虑先将新鲜冰冻血浆制备冷沉淀后再将血浆进行病毒灭活.灭活后血浆对于临床需要补充血浆蛋白的患者影响不大 对于需要输注Ⅷ因子、纤维蛋白原的患者则会有一定影响.     

大剂量尖吻蝮蛇凝血酶对家兔血浆纤维蛋白原的影响

目的 探讨大剂量尖吻蝮蛇凝血酶对家兔血浆纤维蛋白原的影响,为临床应用提供参考。方法 家兔耳缘静脉注射不同剂量的尖吻蝮蛇凝血酶,并于给药后不同时间检测其血浆纤维蛋白原含量。结果 0.2~1.0 U·kg^-1剂量的尖吻蝮蛇凝血酶可导致家兔血浆纤维蛋白原明显下降(P<0.05),下降速度及下降幅度与剂量成正相关。剂量≥0.4 U·kg^-1时家兔血浆纤维蛋白原开始出现耗竭,剂量≥0.8 U·kg^-1时所有家兔血浆纤维蛋白原均出现耗竭。结论 大剂量尖吻蝮蛇凝血酶具有明显降低家兔血浆纤维蛋白原的作用。     

抗体夹心酶免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3研究

将重组E. coli水蛭素HV3和BSA交联后免疫豚鼠和家兔,DEAE-纤维素柱层析纯化IgG.用这两种抗体和酶标二抗羊抗兔IgG-HRP建立三抗体夹心酶联免疫吸附法,测定重组E. coli水蛭素HV3的含量.本测定方法的线性范围为0～2 ng/ml,灵敏度为0.04 ng/ml.建立的三抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3具有良好的精密度、回收率、灵敏度和特异性.