包虫和猪囊虫抗原免疫化学性质及酶联免疫印斑技术临床应用研究

用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶联免疫印斑技术分别对人源细粒棘球蚴囊液、棘球蚴砂、猪囊尾蚴囊液抗原组分进行分析研究,并对两种病血清学交叉反应进行了试验。结果显示包虫囊液抗原有29条蛋白区带,有两条糖蛋白带。猪囊虫囊液抗原显示36条蛋白带谱,两条糖蛋白带。棘球蚴砂显示23条蛋白带谱。包虫病人血清与印有包虫囊液抗原的硝酸纤维膜反应显示23条反应带,其中特异带为6条。包虫病人、猪囊虫病人血清与此膜反应显示4条共同反应带。包虫病人血清与棘球蚴砂抗原膜反应显示4条主要特异反应带,包虫病人血清、猪囊虫病人血清与此膜反应显示1条共同反应带。猪囊虫病人血清与猪囊虫囊液抗原膜反应显示22条反应带,其中有5条特异反应带;包虫病人和囊虫病人血清与此膜反应显示3条共同反应带。     

囊性包虫病人细粒棘球蚴重组myophilin的抗体反应

人体囊性包虫病由细粒棘球绦虫(E.g)的幼虫引起。最近Martin(1995)等研究了一种E.g头节中的抗原特性,由于其独特的与肌肉关系称之为myophilin(亲肌肉抗原)。本文作者对包虫病患者的myophilin特异性抗体进行了研究。 羊包虫囊液(SHCF)取自E.g感染羊的肝和肺,重组E.g myophilin由具有多聚组     

囊虫IgG胶体金诊断试剂盒（层析法）的研制和考核

目的 在国内外率先开发成功用于囊虫病诊断的IgG金标层析法（一步法）诊断试剂盒。方法 采用独特制备猪囊尾蚴囊液抗原的方法;先进制备胶金试剂盒工艺并以比利时提供的囊虫IgG试剂盒(ELISA）做参照。结果 产品经中国药品生物制品检定合格。对试剂盒的特异性、敏感性进行了临床考核。其敏感性为93.23%,特异性为97.37%,该试剂盒检测包虫血清的交叉反应率为45.00%,与血吸虫、肝吸虫、肺吸虫等寄生虫病人血清无交叉反应。结论 该试剂盒敏感性、特异性良好,操作简单、快速,结果判读容易,特别适用于基层和现场应用。     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究

目的　建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法。方法　应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb) ,一株滴于硝酸纤维素膜上 ,另一株与胶体金结合为探针 ,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原 (CA)的滴金免疫测定法 ,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应 ,10min内即可用肉眼观察结果。对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测 ,确定本法的最低抗原检出量 (0 .4 5ng/ml)。将本法与ELISA作了比较。 结果　对 78例囊虫病患者血清进行检测 ,循环抗原阳性率为 87.18%。其中活动型脑囊虫病患者 5 2例 ,循环抗原阳性率为 98.0 8% ;非活动型脑囊虫病患者 2 0例 ,循环抗原阳性率为 6 5 .0 0 % ;单纯皮肌型囊虫病患者 6例 ,循环抗原阳性率为 6 6 .6 7%。 4 0份健康人血清仅有 1例 (2 .5 0 % )出现假阳性 ,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及 2 3例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应。该方法检出最低猪囊尾蚴囊液抗原量为 0 .4 5ng/ml。本法与ELISA的符合率为 98.19%。结论　DIGFA简便、快速 ,结果客观 ,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高 ,特异性强 ,值得进一步推广应用。     

棘球蚴感染绵羊并诱发休克期间特异性IgG、IgE抗体对特异性抗原的识别

目的 探讨细粒棘球蚴(E.g.)囊液粗制抗原和B抗原(EgB)识别绵羊感染E.g.后及诱发过敏性休克期间特异性IgG和IgE抗体的特异性反应,并对抗原特性及分子量进行描述。 方法 制备E.g.囊液粗制抗原及EgB,应用免疫印迹技术检测经剖杀证实感染E.g.并诱发过敏性休克的20只绵羊血清特异性IgG和IgE抗体对两种抗原的抗体反应性,并对抗原特性和分子量进行描述。 结果 特异性IgE抗体与耐热、低分子量的EgB(8、12和16 kDa)抗原未见明显的反应条带,而与E.g.囊液粗制抗原在43 kDa处可见明显的反应条带。IgG抗体与E.g.囊液粗制抗原未见明显的反应条带,但与EgB抗原反应后在31、43和66.2 kDa处可见较为明显的反应条带。 结论 EgB可能不是特异性IgE抗体的特异性抗原,而是IgG抗体的特异性抗原。E.g.粗制囊液抗原中含有特异性IgE抗体的特异性抗原组分,其分子量大于43 kDa,可能是导致棘球蚴病患者过敏性休克的主要致敏原。     

用于人包虫病免疫诊断的单克隆抗体

被棘球蚴感染后,人体血清中可测到特异性的IgM、IgG、IgA 和 IgE 抗体。人包虫病血清学诊断中最广泛应用的抗原是羊和马等中间宿主的包虫囊液,后者含有10多种寄生虫源抗原和宿主的多种血清成分。自从 Capron 等发现用包虫囊液中的抗原5检     

分泌抗包虫囊液抗原McAb杂交瘤细胞株的建立

应用Oriel法制备的包虫囊液抗原经腹腔注入供实验的小鼠,作为脾细胞供体。此脾细胞与不能分泌的骨髓瘤细胞株SP2/0和P3u_1相融合,以生成杂交瘤细胞株。用ELISA法从这些混合细胞培养基中筛选出上清液,用稀释法将上清液克隆,再克隆化之后,生成能分泌单克隆抗体、抗包虫囊液活性的杂交瘤,其染色体数目在80～100范围之内。单克隆抗体类及亚类13Fs和31G_(12)分别是IgG_1和IgA。DD和ELISA用于鉴定它们的敏感性和特异性。应用ELISA法比较杂交瘤和绦虫囊尾蚴液等其它寄生虫抗原制备物,包虫囊液和Pf抗原,表明单克隆抗体对包虫囊寄生虫有很高的特异性。     

脑囊虫病人血清中循环抗原特性的分析

本研究用免疫印渍法，以三种抗血清为探针，对脑囊虫病人血清中的循环抗原、囊虫头节和体壁抗原及囊液抗原进行了比较观察。结果表明循环抗原与两种囊虫抗原相同的组分有４个ＫＤ数为７５、４３、４０、２３的多肽；仅与虫头及囊壁相同的抗原为６５ＫＤ多肽；仅与囊液相同的多肽为８５、１９ＫＤ二组分。这显示循环抗原主要来源于虫囊的全部结构；循环抗原可诱发三种特异性免疫球蛋白的产生，依次为ＩｇＧ、ＩｇＡ及ＩｇＭ。可诱发ＩｇＧ的循环抗原多肽是８５、５３、４３、４０、３１、１９、１８．５及１７．５ＫＤ多肽；可诱发ＩｇＡ抗体的抗原多肽ＫＤ数为６５、４９、４３、４０及３５的组分；而ＩｇＭ特异性抗体产生于ＫＤ数为７５、４３、４０及３１的多肽。三种抗体血清用于检测血清中的循环抗原都显示出良好的应用价值。免疫兔血清的敏感性与特异性均不亚于单克隆抗体的识别结果。４３及４０ＫＤ多肽是循环抗原中的主要组分，是诊断的重要指标。     

间接血凝试验在囊虫病诊断中的应用

囊虫病是人畜共患疾病,严重损害人民健康。本文报道用间接血凝试验检测人血清中囊虫抗体,具有较高的特异性和敏感性。 1 囊虫抗原致敏血球的制备 1·1 囊虫抗原的制备,选取新鲜的含猪囊蚴的猪肉,用消毒空针抽取囊液,经3000rpm/分离心10min,上清即为囊液抗原。用分光光度计测量蛋白     

牛、羊、人体内寄生的细粒棘球蚴可溶性蛋白组分的SDS-PAGE分析及其分类意义评价

用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳对比分析了牛、羊、人源细粒棘球蚴囊液(EgCF)及原头节(EgPS)的蛋白组分,发现三源EgCF蛋白组分相似,而三源EgPS有所差异。以羊源与人源的EgPS蛋白组分相似,牛源EgPS蛋白组分则比前二者少且图形特别。推断寄生于甘肃的黄牛、绵羊、人的细粒棘球蚴很可能是同一虫株,牛源EgPS的差异可能由于同一虫株寄生于非适宜中间宿主致发育不良所致。     

棘球蚴3种抗原在包虫病斑点酶联免疫吸附试验中特异性和敏感性比较

用羊源细粒棘球蚴囊液、原头蚴及生发层３种抗原,用酶标记羊抗人ＩｇＧ,对９４例包虫病患者、４４例非包虫患者及５０例健康人血清进行了斑点酶联免疫吸附试验。结果用囊液、原头蚴、生发层３种抗原的敏感性分别为９２．６％、９３．６％和９３．６％,５０例健康人血清均未出现假阳性反应,与各种肿瘤、各种炎症、各种肝病及结核患者血清有一定的交叉反应     

Analysis of host components in hydatid cyst fluid and immunoblot diagnosis of human Echinococcus granulosus infection.

To improve serodiagnosis of cystic hydatidosis, immunoblotting studies were performed to look for a highly specific parasite antigen(s). First, commercially available hydatid cyst fluid antigen preparations were characterized by SDS-PAGE and by immunoblotting with sera specific for parasite and host animal proteins. One preparation, designed for use in complement fixation tests, did not appear to be suitable for immunoblotting because of the low concentrations of parasite antigens. Several host proteins, including serum albumin and IgG, were detected in the cyst fluid. Sera from patients with Echinococcus granulosus infections and other parasitic diseases were examined by immunoblotting for antibodies against specific cyst fluid parasite antigens. Several parasite antigens were variably recognized. Only one antigen, a 40 kDa protein, was recognized by all E. granulosus-infected patients. Reactivity against this antigen was also observed in all sera from E. multilocularis, cysticercosis, and schistosomiasis patients as well as in some filariasis cases. Two E. granulosus antigens, molecules of 12.5 and approximately 17 kDa, were only recognized by antibodies from some E. granulosus patients.     

不同源包虫囊液作为人体包虫病诊断性抗原的免疫化学分析

本文采用免疫印迹、免疫电泳(IEP)及ABC-ELISA等免疫化学方法系统地比较分析了羊、牛、人源细粒棘球蚴囊液(EgCF)作为人体囊型包虫病诊断性抗原的差别,发现三者蛋白组分及免疫原性蛋白大同小异;IEP中三源EgCF形成迁移距离不同但能识别同一抗体的沉淀弧,由此推知三源EgCF中寄生虫抗原决定簇相同而其载体蛋白有别;ABC-ELISA结果表明三源EgCF对30例包虫病人反应无显著差別。     

Immunochemical localization of major hydatid fluid antigens in protoscoleces and cysts of Echinococcus granulosus from human origin

Monospecific rabbit antisera obtained through experimental immunization with previously purified proteins were used in the structural localization of two hydatid fluid antigens, antigen 5 and antigen B, in cyst membranes and protoscoleces of E. granulosus from human origin. The antigen-antibody reaction was revealed by an avidin-biotin-peroxidase technique. Antigen 5 was not evident in the laminated membrane of the cyst wall, but it was associated with the germinal membrane of the cyst wall and brood capsules. The parenchyma of invaginated and evaginated protoscoleces was heavily labelled. The tegument, the calcareous corpuscles, the suckers and the hooks did not contain antigen 5. Degenerated protoscoleces were also labelled. Antigen B localization was essentially identical to antigen 5, but degenerated protoscoleces were not recognized by anti-antigen B antiserum. Technical aspects and differences with previously published work are discussed.     

感染细粒棘球蚴绵羊诱发过敏性休克期间IgG、IgG1和IgE水平的探讨

目的　测定感染细粒棘球蚴(E.g)绵羊诱发过敏性休克期间特异性IgG、IgG1和IgE抗体水平。了解抗原B对人工感染E.g绵羊IgG抗体的反应性。　方法　从绵羊E.g囊液中制备抗原B和E.g囊液粗制抗原,ELISA测定感染E.g绵羊诱发休克期间特异性IgG、IgG1和IgE抗体的动态变化。　结果　感染E.g绵羊6个月,特异性IgG、IgG1和IgE抗体水平较正常绵羊显著升高;诱发休克后特异性IgE抗体水平显著下降,尤其因休克致死的绵羊下降更为明显;IgG及IgG1抗体的衰减时间不同,趋势各不相同;抗原B和E.g囊液粗制抗原与血清IgG抗体反应阳性率分别为91%、32%。　结论　特异性IgE是导致棘球蚴病所致过敏性休克的主要抗体,而IgG和IgG1抗体也起着重要作用。抗原B与感染E.g绵羊IgG抗体的血清反应性较好,可作为一种血清免疫学诊断方法监测绵羊感染E.g的状况。     

''Arc 5'' antibodies in sera of sheep infected with Echinococcus granulosus, Taenia hydatigena and Taenia ovis

The 'arc 5' precipitin band, formed when test human serum is reacted against immunoelectophoresed hydatid cyst fluid antigen, has provided a positive diagnosis of Echinococcus granulosus infection. These antibodies to 'arc 5' antigen have now been found in the sera of sheep. They appear 2 weeks after infection with Taenia ovis, after 3 weeks with T. hydatigena and after 16 weeks with E. granulosus. An antigen similar to the 'arc 5' antigen of E. granulosus cyst fluid was also demonstrated in cyst fluid from T. hydatigena, but it would not be positively identified in T. ovis cyst fluid. The presence of 'arc 5' in immunoelectrophoresis tests is not suitable for specific immunodiagnosis of E. granulosus infections in sheep in New Zealand. 'Arc 5' antibodies were only associated with living E. granulosus cysts and were not present if cysts were dead. The location of the cysts in either liver or lungs and the onset of brood capsule production did not influence the presence of 'arc 5' antibodies.     

细粒棘球蚴生发细胞特异性抗原的ELIB分析

应用SDS－PAGE和免疫印渍试验（EITB），证明体外培养的细粒棘球蚴生发细胞和囊液含有特异性抗原，分子量为52kDa和38kDa，而囊壁则含有此2种抗原。生发细胞的52kDa抗原可识别感染小鼠和包虫病患者血清的特异性抗体，对囊虫病人和正常人血清则无反应条带。     

几种猪囊尾蚴抗原用于斑点-ELISA法诊断囊尾蚴病的观察

本研究以囊液10000g上清、囊液100000g上清、全囊抗原、头节抗原和头节尿素溶解性抗原等5种囊尾蚴抗原，对124份各类血清进行斑点-ELISA试验，结果除2种囊液抗原外，都有很高的假阳性反应。2种囊液抗原中以100000g离心者为优，检测70例囊虫病患者，阳性率为82．8％；30例正常人，假阳性率为6．7％；5例血吸虫、5例华支睾吸虫及5例并殖吸虫患者血清，均未出现阳性反应；但9例包虫病患者血清均出现交叉反应。