西藏小型猪的线粒体DNA控制区分析

目的 研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪的亲缘关系.方法 扩增102 头西藏小型猪以及16 头巴马小型猪、17 头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪进行比较.结果 西藏小型猪线粒体DNA D-loop区分三个区域.串联重复序列区处于中间位置,包含有15～29 个10 bp的重复片段,分为A、B 两种类型.D-loop 3′端340 bp,与国内其他猪的序列相同比较保守;5′端704 bp,共有22个变异位点.由22 个变异位点中归纳出25 个单倍型,其中有两种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%.根据三个转换位点:305、500、691,将西藏小型猪分成了两组,几乎与串联重复序列所分的A、B两组类型相对应.与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4 种和2 种单倍型,串联重复区也只有一个类型.结论 西藏小型猪可能有两个母系祖先并且与我国西南地区的品种猪有较近的亲缘关系;不同的串联重复片段类型和5′ 端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记.     

实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区碱基序列比较

目的：分析比较实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区D．100p区碱基序列的差异,探讨小型猪的遗传标记。方法：提取59头藏猪和16头巴马小型猪血液基因组DNA,设计特异引物扩增mtDNAD．100p,从凝胶中纯化后直接测序,进行比较。结果：2种小型猪mtDNAD-loop都存在串连重复序列区和非重复序列区（5’端和3’端）;重复序列区处于中间位置,藏猪有2种类型（A型和B型）,巴马小型猪只有1种类型（A型）;藏猪D—loop5’端（704bp）发现有20个变异位点,其中有3个主要的转换位点：305,500,691,巴马小型猪未发现多态位点,与藏猪以及其他猪相比,巴马小型猪D．100p5’端在180、404位有2个碱基差异。结论：藏猪mtDNA D-100p区碱基序列存在2种类型（A型和B型）;巴马小型猪mtDNAD—loop区碱基序列多态性较低,有2个遗传标记位点。     

广西巴马小型猪和贵州小型香猪的DNA指纹分析

目的　应用DNA指纹分析的方法研究广西巴马小型猪和贵州小型猪的遗传背景。方法　采用ECL核酸直接标记和检测系统 ,以HRP标记JL 0 2多位点小卫星探针 ,对广西巴马小型猪和贵州小型猪基因组DNA的HinfⅠ或HaeⅢ酶切DNA片段进行Southern杂交 ,以化学发光法进行检测 ,获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图。结果　广西巴马小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数为 11 7和 2 4 5 ;贵州小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数则为 15 8和 17 6。另外 ,广西巴马小型猪HinfⅠ和HaeⅢ酶切产生的不同个体DNA指纹的相似系数分别为 0 5 4± 0 0 7和 0 5 5± 0 0 8;而贵州小型猪则分别为 0 5 3± 0 0 4和 0 5 3± 0 0 7。结论　该探针适用于这两种猪的DNA指纹分析 ,不同酶切产生的DNA指纹图带数不同 ,但不同个体间相似系数的分析结果一致。同时说明这两种猪具有相当程度的种质均质性 ,符合封闭群动物的要求     

实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区变异类型及其血液指标比较研究

目的 分析实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区碱基序列变异分化类型,比较血液生理生化指标的差异,为实验动物新品种的培育奠定分子遗传学基础.方法 采集59头西藏小型猪血液,分别进行全基因组DNA提取、线粒体DNA控制区的扩增、测序并分类,同时进行血液生理生化指标的测定和比较研究.结果 根据串联重复区重复片段的变化,西藏小型猪线粒体DNA控制区分为A、B两种类型,分别占57.6%和42.4%,几乎与5'端序列在305、500和691的三个主要转换位点的变化相对应.A、B两类西藏小型猪18项血液生理生化指标统计结果显示,红细胞数(RBC)差异(P<0.01)有统计学意义,其他指标差异均无统计学意义.结论 根据线粒体DNA控制区序列碱基变异,西藏小型猪分为两个类群,两个群体之间红细胞数存在明显差异.

Abstract：

Objective To analyze the mitochondrial DNA (mtDNA) D-loop region sequence variation in Tibet Mini-Pigs in relation to the blood parameters and provide the molecular genetic basis for developing new species of laboratory animals.Methods The genomic DNA was extracted from the whole blood samples of 59 Tibet mini-pigs to amplifying the mtDNA D-loop for sequence analysis. Nine physiological and nine biochemical blood parameters of Tibet mini-pigs were measured .Results Based on the variation of the tandem repeat motif, the mtDNA D-loop region of Tibet mini-pigs was classified into two types, namely type A and B with the percentage of 57.6% and 42.4%, respectively, roughly matching the 3 transform sites (305, 500, 691) at the 5' end. In the 18 blood parameters, only red blood cell count showed significant differences between types A and (P<0.01). Conclusion Based on the sequence variation of the mtDNA D-loop region, Tibet mini-pigs can be divided into two types that show a significant difference in red blood cell count.     

西藏小型猪线粒体DNA控制区变异类型及其血液指标比较研究

目的分析实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区碱基序列变异分化类型,比较血液生理生化指标的差异,为实验动物新品种的培育奠定分子遗传学基础。方法采集59头西藏小型猪血液,分别进行全基因组DNA提取、线粒体DNA控制区的扩增、测序并分类,同时进行血液生理生化指标的测定和比较研究。结果根据串联重复区重复片段的变化,西藏小型猪线粒体DNA控制区分为A、B两种类型,分别占57.6%和42.4%,几乎与5′端序列在305、500和691的3个主要转换位点的变化相对应。     

西藏小型猪MSTN基因5''调控区的酶切多态性分析

目的对西藏小型猪MSTN基因进行PCR—RFLP基因多态性分析，并对五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪进行MSTN基因多态性的比较研究。方法以42头西藏小型猪、17头五指山小型猪、7头巴马小型猪和22头贵州香猪作为研究对象，对猪MSTN基因5’调控区进行了PCR—RFLP多态性研究。结果1、不同猪种之间的基因型频率和等位基因频率有显著性差异（P=0．000），西藏小型猪的MSTN基因表现出3种基因型TT（9．52％）、AA（61．90％）、TA（28．57％），T和A的频率分别为23．81％和76．19％；五指山小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（82．35％）、AA（17．65％），T和A的频率分别为82．35％和17．65％；贵州香猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（81、82％）、TA（18．18％），T和A的频率分别为90．91％和9．09％；巴马小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（71．43％）和TA（28.57％），T和A的频率为85．71％和14．29％。2、不同MSTN基因型的西藏小型猪的初生重（P=0．761）和离乳重（P=0．319）无显著性差异。结论西藏小型猪、五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪的MSTN基因5’调控区存在多态性，但暂不能把MSTN基因做为西藏小型猪繁殖性能的分子标记。     

融水小型猪线粒体DNA结构和系统进化的分析

目的研究融水小型猪的线粒体DNA结构和系统进化关系。方法选取了全基因组鸟枪法的测序策略对融水小型猪的外周血液样本进行测序,使用Illumina基因组分析测序技术构建paired-end文库进行末端测序,最后进行拼接及分析。结果融水小型猪的完整线粒体序列呈环形,总长为16888 bp,由13个编码蛋白基因、22个转运RNA和两个核糖体RNA构成。线粒体DNA的GC含量约为44%。系统进化分析、遗传多样性分析和中性检验证明了,在融水小型猪、兰屿猪、海南野猪和滇南7号这一类群中,发生了种群扩张。结论融水小型猪是中国传统猪种中比兰屿猪更为古老的小型猪。     

AFLP技术用于巴马小型猪遗传多样性的研究

目的 评价巴马小型猪的遗传多样性。方法 用与接头对应的10条AFLP引物，扩增经PstⅠ酶切且与接头连接的17头巴马小型猪的基因组DNA，用从Internet网上下载的软件RAPD istance package version 1．04对结果进行分析。结果 共获得104个AFLP标记，单引物得到的标记数在3～20个之间，巴马小型猪群体内的相似系数为0．903(0．791～0．982)。其多态性位点的比率为29．8％；总的等位基因数为136个，平均每个位点的等位基因数为1．31个，基因型数为119，平均每个位点的基因型数为1．41。结论 该实验为评价巴马小型猪遗传多样性的多寡提供了相关的参数，准确评价尚待和普通猪对比研究后确定。     

良性前列腺增生组织线粒体DNA控制区突变初探

目的：研究良性前列腺增生组织中线粒体DNA(mtDNA)控制区的突变情况。方法：取18例良性前列腺增生患者手术切除的增生组织和同一患者的门细胞,经PCR扩增和DNA测序得到DNA控制区序列,再与剑桥标准序列对比。以4名健康成年人前列腺组织为对照。对照无突变检出。结果：良性前列腺增生患者增生组织mtDNA控制区突变率为83％(15／18),突变频率2．1％(24／1120),全部为点突变。结论：良性前列腺增生细胞线粒体DNA控制区存在高突变率,在良性前列腺增生发病机制中的意义有待进一步研究。     

STR-PCR方法检测贵州小型香猪遗传变异性的研究

目的 准确分析贵州小型香猪种群遗传变异及近交程度。方法 采用１０对短串联重复序列（ＳＴＲ）引物,对贵州小型香猪个体进行ＰＣＲ检测。结果 在检测到的８８个有效等位基因型中,纯合基因型５０个,占５５．７％。个体平均杂合率为０．４０８１,位点平均杂合率为０．５５６２。结论 贵州小型香猪具有一定遗传稳定性,符合封闭群动物遗传学特征。     

封闭群小型猪遗传结构的RFLP分析

目的 应用RFIP分析的方法研究两种封闭群小型猪广西巴马小型猪和贵州小型猪的遗传背景。方法 采用ECL核酸直接标记和检测系统，以HRP标记JL-02多位点小卫星探针，对广西巴马小型猪和贵州小型猪基因组DNA的HInfⅠ或HaeⅢ酶切DNA片段进行Southern杂交，以化学发光法进行检测，获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图。结果 广西巴马小型猪〉2Kb的HInfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数为11．7和24．5；贵州小型猪〉2Kb的HInfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数则为15．8和17．6。另外，广西巴马小型猪HInfⅠ和HaeⅢ酶切产生的不同个体DNA指纹的相似系数分别为0.544-0．07和0．554-0．08；而贵州小型猪则分别为0．534-0．04和0．534-0．07。结论 该探针适用于这两种猪的砒IP分析，不同酶切产生的DNA指纹图带数不同，但不同个体间相似系数的分析结果一致。同时说明这两种猪具有相当程度的种质均质性，符合封闭群动物的要求。     

贵州小型香猪群体遗传结构的RAPD分析

目的 分析贵州小型行猪的群体遗传结构。方法 用经过筛选的３１条引物对贵州小型香猪个体基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增。结果 经ＲＡＰＤ反应,共扩增出２７１条带,其中多态性带７９条,多态性带频率在０～７１％之间,平均为２６．６％。不同个体猪 的ＲＡＰＤ条带具有差异,但拥有相同条带的个体猪比率较高。该群体猪的相似系数（Ｆ）为０．９３３（０．８３０～０．９８０）,平均等位基因频率（ｑ）为０．７４２,最低平均杂合率（Ｈ）为０．２５８。结论 贵州小型香猪个体间具有较好的遗传一致性和遗传稳定性,其群体分化程度处在一个较低的水平。     

两个品系普通级和SPF级小型猪部分血液学指标的比较

目的 了解不同微生物控制程度(屏障环境和普通环境)对小型猪部分血液学和生化指标的影响. 方法分别对10只SPF(无特定病原体)级五指山小型猪、10只普通级五指山小型猪和10只SPF级广西巴马小型猪、10只普通级广西巴马小型猪测定13项血液学指标和21项血清生化指标.结果 普通级小型猪红细胞数(RBC)、血球比积(HCT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、高密度脂蛋白(H DL-C)低于SPF级小型猪,白细胞数(WBC)、天门冬氨酸转移酶(AST)高于SPF级小型猪 (P<0.05);且部分指标在不同品种间有差别.结论 普通级小型猪和SPF级小型猪部分血液学和血清生化指标等生物学特性存在显著差异.     

贵州小型香猪麻醉方法的比较研究

目的　探索快速安全地麻醉贵州小型香猪的方法。方法　 90头贵州小型香猪随机分为肌内注射组、腹腔注射组、静脉注射组 ,比较用 3%戊巴比妥钠溶液麻醉的显效时间、麻醉效果及死亡率。结果　肌内注射显效时间 (15± 5 )min ,麻醉效果优 80 %、良 16 7%、死亡 3 3% ;腹腔注射显效时间 (13± 4 )min ,麻醉效果优 6 0 %、良2 0 %、差 16 7%、死亡 3 3% ;静脉注射显效时间 (10± 2 )min ,麻醉效果优 73 3%、良 16 7%、死亡 10 % ;结论　肌内注射麻醉是一种安全可靠的麻醉方法。     

四个品种小型猪血液学指标测定及比较

目的 分析比较四个品种小型猪的血液学生物学特性.方法 分别选取上海地区饲养的巴马小型猪、贵州小型猪和版纳小型猪及陆川小型猪,每个品种雌雄各20头,3～6月龄,测量其血液生理、血清生化与血凝指标,然后进行单因素方差分析,并进行数据比较.结果 四个品种的小型猪血液生理14个指标差异有统计学意义(P＜0.05),血清生化12个指标组间差异有统计学意义(P＜0.05),血凝4个指标差异都有统计学意义(P＜0.05).分别对各品种群体数据进行比较分析,巴马小型猪群体雌雄间血液常规、血清生化和血凝指标差异显著(P＜0.05)的指标分别有6项、4项和3项,而贵州小型猪、版纳小型猪和陆川小型猪雌雄间差异指标较少或差异不显著.四品种小型猪相同性别间比较,也有较多指标差异显著.结论 测定和比较的巴马小型猪、贵州小型猪、版纳小型猪和陆川小型猪在血液学、血清生化和血凝等方面数据,为应用和选择小型猪开展相关生物医学和药物研究提供了基础数据.     

三品种实验用小型猪繁殖性能测定

目的 选取饲养于上海地区的巴马小型猪、贵州小型猪和版纳小型猪,分别测定三品种母猪和公猪的繁殖性能.方法 采用场内结合实验室测定的方法,分别测定初情年龄、初配年龄等母猪繁殖性能指标及性行为年龄、初配年龄等公猪繁殖性能指标.结果 用单因素方差分析比较.结果对比巴马小型猪、贵州小型猪和版纳小型猪的母猪繁殖性能10个指标,贵州小型猪和版纳小型猪的初生窝重和断奶成活率存在显著差异(P＜0.05).分析三品种的公猪繁殖性能,群体间性行为年龄存在显著差异(P＜0.05);三品种初配年龄比较接近;比较初配年龄和初配体质量,表明三品种的小型猪在相同初配年龄时,巴马小型猪个体偏小,版纳小型猪的体质量最大.结论 系统测定了雌性和雄性巴马小型猪、贵州小型猪和版纳小型猪的繁殖性能,为实验用小型猪提供了遗传育种工作的基础,也为小型猪实验动物化提供了背景数据.     

巴马小型香猪口服洛伐他汀的药代动力学研究

目的建立巴马小型香猪的药物代谢研究模型,了解巴马小型香猪机体对药物的作用。方法选择抗动脉粥样硬化的HMG-CoA还原酶抑制剂型药物洛伐他汀(LV)为模型药,给6月龄雄性巴马小型香猪二组共8头,单剂量(6.0 mg/kg,2.4 mg/kg)灌胃,采用RP-HPLC法检测LV的血药浓度,并计算药代动力学参数。结果LV在巴马小型香猪的处置符合一室开放模型;Tmax分别为(2.54±0.18),(2.82±0.44)h;T1/2α分别为(1.53±0.05),(1.52±0.44)h;T1/2β分别为(2.04±0.32),(2.77±0.89);Cmax分别为(28.86±3.76),(10.93±1.77)ng/mL;AUC分别为(202.76±41.98)和(104.86±16.44)(ng/mL)×h。结论LV在巴马小型香猪的吸收速度约为正常人的0.5倍,消除速度为正常人的1.5~2倍,但整个代谢过程类似正常人,均属一室开放模型,提示巴马小型香猪可作为心血管系统药物LV药代研究的良好模型。     

云南地区恒河猴线粒体DNA控制区遗传多态性研究

目的 从分子水平探讨云南地区恒河猴遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理利用提供借鉴和背景资料.方法 采用PCR直接测序法测定云南地区恒河猴96份样品的线粒体DNA控制区全序列,用Mege 4.0和DNA SP软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析,基于邻接法(neighbor-joining,NJ)和最小进化法(minimum-evolution,ME)构建系统发生树.结果 在96份样品中,共检测出了149个多态性位点,定义了46种单倍型,单倍型多样度(Hd)为0.968±0.007,核苷酸多样度(Pi)为0.020.结论 云南地区恒河猴存在着较丰富的遗传多态性.     

贵州小型香猪心肌缺血模型建立的研究

目的：探索贵州小型香猪心肌缺血模型的制备方法,供心血管疾病研究使用。方法：贵州小型香猪15头在麻醉状态下,开胸、预结扎左冠状动脉前降支中下1/3稍偏上15~20分钟,后予结扎,用心电图监测,病理组织切片等确定模型建立情况。结果：15头贵州小型香猪中有11只存活3周,手术中因预结扎和结扎时发生房颤死亡4只,成功率为73.3%。结论：该法操作简单,术后可长期存活,为临床冠心病心肌缺血的实验研究提供一个有价值的动物模型。