镉与DNA损伤、癌基因表达、细胞凋亡

本文从 DNA损伤、癌基因 c- myc、c- fos、c- jun的表达、细胞凋亡的诱导等方面对镉的分子毒理学作用进行了概述。镉可以引起 DNA单链断裂 ,形成 DNA碱基修饰产物 8-羟基脱氧鸟苷 ,并损害 DNA修复系统。镉可以使癌基因 c- myc、c- fos、c- jun表达增强 ,其作用机制与镉破坏细胞内钙稳态、激活蛋白激酶 C等有关。镉通过使癌基因表达增强、增加细胞内钙水平以及造成氧化应激等 ,可诱导多种细胞凋亡。     

云锡矿工肺癌N-ras、c-myc和c-fos原位杂交检测

目的探讨云锡矿工肺癌发病机制。方法用原位分子杂交的方法，检测２０例云锡矿工肺癌（Ｍ组）、２０例其它地区非矿工肺癌（ＮＭ组）以及１０例死于非肺部疾患者的尸解肺组织（Ｃ组）中Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ及ｃ－ｆｏｓ癌基因的过表达情况。结果癌基因过表达出现率：Ｍ组Ｎ－ｒａｓ５５％（１１／２０）、ｃ－ｍｙｃ５０％（１０／２０）、ｃ－ｆｏｓ２５％（５／２０）；ＮＭ组Ｎ－ｒａｓ８０％（１６／２０）、ｃ－ｍｙｃ５５％（１１／２０）、ｃ－ｆｏｓ６０％（１２／２０）；Ｃ组３个癌基因过表达率均仅为１０％（１／１０）。表明Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ的过表达与肺癌的发生有关；ｃ－ｆｏｓ与矿工肺癌发生的关系不明显而与非矿工肺癌的发生有关。有２种或３种癌基因同时表达的，Ｍ组分别为４５％、２０％；ＮＭ组分别为７５％、２５％。癌旁增生上皮中发现有阳性反应。结论肺癌的发生可能与２种或２种以上癌基因过表达有关。矿工与其他人群肺癌的发生机制可能有不同之处。     

核转录因子c—fos和c—jun在新生鼠缺血缺氧脑细胞中的表达

目的 探讨新生鼠缺氧缺血性脑损伤中ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ表达的意义。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠２４只分为２组,实验组１８只,对照组６只,制备脑缺氧缺血动物模型,用ＲＴ－ＰＣＲ和斑点杂交方法检测新生鼠缺氧缺血性脑损伤后ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在神经细胞中的表达。结果 ２组ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达在不同时间段差异均有显著性（Ｐ〈０．００１）,其中７２ｈ组和９６ｈ组的表达均比２４ｈ高;缺氧缺血后２４～９６ｈ,ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在躯体感觉皮质区,海马回ＣＡ３区和基底节区表达比对照组高,２组比较差异有显著性（Ｐ〈０．００１）;２组ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达在不同脑区差异也有显著性（Ｐ〈０．００１）,海马区与基度节区大于皮质区。结论 ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达增加不仅是脑缺氧缺血的结果,而且可能参与了对神经细胞损害过     

MC3T3-E1成骨细胞生长过程中,低钙环境增强AP-1转录因子介导的基因表达

喂以低钙饲料的动物发生低钙血症和骨质疏松。起期，推测低钙环境可能是引发硬组织异常的一个因素。ＭＣ３Ｔ３－ＥＩ成骨细胞经历增生和分化，然后产生矿化的小结。在本研究中，研究了低钙环境对用１０％胎牛血清和抗坏血酸培养的类成骨细胞的影响。在培养条件下，具有正常骨特征的小结在３０天内出现，而不受含钙量高低的影响。但是，低钙环境增强。ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｊｕｎ及成骨细胞表型特殊标记物－骨钙素ｍＲＡＮ表达。而且，暴露于低钙培养基抑制骨小结的形成。进一步研究了在低钙血清环境下，ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的分化表达以及它…     

镉对大鼠肝细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交方法研究氯化镉对大鼠肝细胞原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达的影响。结果表明,５、１０和２０μｍｏｌ／ｋｇ氯化镉腹腔一次注射后,大鼠肝细胞ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ ｍＲＮＡ较对照组明显增多。结果提示,氯化镉可经引起大鼠在体肝细胞原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达过强。     

三种化合物对石棉致HEL细胞增殖周期及C—fos癌基因转录活性 …

目的 寻求一种适宜的石棉表面改性剂。方法 利用流式细胞技术测定细胞周期以及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术测定ｃ－ｆｏｓ癌基因转录活性,观察几种化合物对温石棉人胚肺（ＨＥＬ）细胞增殖作用的影响。结果 将ＨＥＬ细胞与温石棉共同孵育后,其Ｓ期细胞所占比例增加,ｃ－ｆｏｓ癌基因的转录活性也明显增强,用３种化合物预处理的石棉组,其Ｓ期细胞所占比例以及ｃ－ｆｏｓ癌基因的转录生均优于未处理石棉组,结论 用上述３种化合     

热休克蛋白在应激环境中对胚胎生长发育的影响

应激条件下热休克蛋白的表达与体内／体外胚胎、细胞生长发育关系极为密切。热休克蛋白７０具有双相作用，其合成以转录水平调控为主，主要被热休克因子控制，亦与Ｃ－ｆｏｓ、Ｃ－ｍｙｃ、ｐ５３等基因及钙／钙调蛋白、甘油二酯磷酸肌醇－３激酶、ｃ－ＡＭＰ、ＰＫＣ等在子有关。本文还介绍了热休克蛋白的５大家族及主要成员，同时纳了热休克蛋白研究中存在的问题。     

维生素A对小鼠造血微环境影响的研究

目的：　探讨维生素Ａ（ＶＡ）对造血微环境的影响,揭示ＶＡ缺乏影响红系造血的机制。方法：免疫细胞化学（ＳＰ）法检测视黄酸受体（ＲＡＲａ）蛋白,原位杂交技术动态检测原癌基因ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和粒－单集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ｍ ＲＮＡ 的表达,检测细胞因子生物活性和基质细胞层粘附能力。结果：　（１）全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）诱导的小鼠骨髓基质细胞条件培养液（ＢＭＳＣＣＭ）能显著促进红系早期祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）的增殖（Ｐ＜ ０．０１）。（２）ＡＴＲＡ明显促进基质细胞层的粘附能力。（３）ＲＡＲａ 蛋白在实验组和对照组ＢＭＳＣ持续表达,ＡＴＲＡ对其表达水平无影响。（４）实验组ＢＭＳＣ与对照组相比ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ的表达水平在３０ｍ ｉｎ 即有显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）,持续表达至６０ｍ ｉｎ,１２０ｍ ｉｎ 降至对照组水平。实验组ＧＭ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的表达在３０ｍ ｉｎ,６０ｍ ｉｎ 与对照组水平相比无显著性差别,直至１２０ｍ ｉｎ 才表现出显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。结论：　ＶＡ促进小鼠ＢＭＳＣ分泌造血细胞生长因子并增强其粘附能力,通过调节ＢＭＳＣ中ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ的信号传导通路调节ＢＭＳＣ分泌ＧＭ－Ｃ     

c-fos基因在乐果中毒后肌无力大鼠肌组织中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ技术,检测了有机磷农药乐果对大鼠骨骼肌细胞中即刻早期反应基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。结果表明,在乐果作用下,骨骼肌细胞ｃ－ｆｏｓ基因表达在ｍＲＮＡ以及蛋白质水平均明显增高。然而骨骼肌细胞ｃ－ｆｏｓ的表达是否与毒物刺激有关,其在农药中毒机制上的生物学意义有待深入研究。     

硫代反义bcl—2脱氧寡核苷酸对U937细胞凋亡的影响

为研究硫代反义ｂｃｌ－２脱氧寡核苷酸（ＡＮ－Ｓ－ＯＤＮｓ）对单核细胞病细胞系Ｕ９３７细胞株凋亡的影响,采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、ＤＮＡ电泳、电镜和流式细胞计数技术检测了单核细胞白血病细胞系Ｕ９３７细胞株ｂｃｌ－２基因的表达和ＡＮ－Ｓ－ＯＤＮｓ时Ｕ９３７细胞凋亡的影响。结果发现Ｕ９３７细胞有大量ｂｃｌ－２基因表达：适当浓度（３０μｍｏｌ／Ｌ）ＡＮ－Ｓ－ＯＤＮｓ使Ｕ９３７细胞出现凋亡ＤＮＡ电泳梯     

三种化合物对石棉致HEL细胞增殖周期及c-fos癌基因转录活性改变的影响

目的寻求一种适宜的石棉表面改性剂。方法利用流式细胞技术测定细胞周期以及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术测定ｃｆｏｓ癌基因转录活性,观察几种化合物对温石棉促人胚肺（ＨＥＬ）细胞增殖作用的影响。结果将ＨＥＬ细胞与温石棉共同孵育后,其Ｓ期细胞所占比例增加,ｃｆｏｓ癌基因的转录活性也明显增强。用３种化合物预处理的石棉组,其Ｓ期细胞所占比例以及ｃｆｏｓ癌基因的转录活性均低于未处理石棉组。结论用上述３种化合物预处理石棉,均可不同程度地抑制石棉的促细胞增殖作用。     

甲基叔丁基醚对原癌基因和功能基因表达的影响

甲基叔丁基醚（ＭＴＢＥ）是一种新型的汽油添加剂,被用来提高汽油燃烧效率,减少汽车尾气中有害物质的排放。ＭＴＢＥ具有一定的动物致癌性,但其机制目前并不清楚。本研究采用免疫组织化学方法,检测了ＭＴＢＥ对体外培养的ＮＩＨ３Ｔ３细胞中ｃ－ｍｙｃ和ｐ２１蛋白表达的影响;采用点杂交方法,从ＲＮＡ水平检测了ＭＴＢＥ亚慢性染毒大鼠肝组织中原癌基因ｃ－ｍｙｃ基因和功能基因ＧＳＴ－Ｐ基因的表达情况。免疫组化结果显示,ＭＴＢＥ可诱导ｃ－ｍｙｃ基因的高表达,对ｐ２１蛋白的表达未见明显影响。点杂交结果显示,ＭＴＢＥ可明显诱导大鼠肝组织中ｃ－ｍｙｃ基因的高表达,而对ＧＳＴ－Ｐ基因的表达未见明显影响。上述结果提示,ＭＴＢＥ可诱导细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达活性增高,可能是其动物致癌性的机制之一。     

铅对大鼠不同脑区IEG表达的影响

为了研究即刻早期基因（ＩＥＧ）在铅的神经毒性机制中的作用,本实验应用ＦＯＳ和ＪＵＮ蛋白免疫组织化学方法对腹腔注射染铅１３ｍｇ／ｋｇ及１３０ｍｇ／ｋｇ的大鼠不同脑区ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达水平进行了观察。图像分析及统计检验结果表明,急性染铅２小时后,大鼠脑组织皮层、海马ＣＡ３区及小脑的ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达的阳性面积比［Ａａ（％）］、平均灰度或阳性细胞个数等参数与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）,即染铅组ＩＥＧ表达高于对照组。这一结果提示第三信使ＩＥＧ作为转录调控因子可能参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。这对深入阐明铅神经毒性的分子机制提供了一定的实验依据。     

石棉诱导细胞凋亡改变的研究

目的探讨石棉诱导的细胞凋亡及其相关基因ｂｃｌ２及ｂａｘ表达的改变。方法大鼠石棉染尘。收集石蜡包埋的石棉作业工人肺癌组织块。ＴＵＮＥＬ法（ｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄ，末端脱氧核糖核酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法）观察凋亡细胞分布及数量。生物素抗生物素蛋白ＤＣＳ（ａｖｉｄｉｎＤｃｅｌｓｏｒｔｅｒ）间接免疫荧光法观察ｂｃｌ２及ｂａｘ表达改变，琼脂糖凝胶电泳进行ＤＮＡ梯状电泳分析。结果大鼠染尘后４０天，细胞凋亡增强、ｂｃｌ２表达减少、ｂａｘ蛋白含量升高，可见ＤＮＡ特征性梯度电泳条带；大鼠染尘后７０天，细胞凋亡明显减弱。在石棉作业工人肺癌组织中未见明显细胞凋亡。结论石棉可诱导肺组织细胞凋亡发生改变，这种改变有时段性。凋亡相关基因表达也有相应变化。     

c－fos原癌基因与心血管活性肽和心血管疾病关系的探讨

ｃ－ｆｏｓ原癌基因与心血管活性肽和心血管疾病关系的探讨第四军医大学生理教研室（７１００３２）胡春波综述牛国保，臧益民审校各种细胞中普遍存在着细胞癌基因，但在正常情况下不表达或有时间、空间限制的表达，对细胞无害。生理条件下内外环境中的一些刺激可激活癌基...     

温石棉表面改性对人胚肺细胞转化过程中c—myc癌基？…

目的 观察３种表面改性剂对炽石棉致人胚肺细胞转化过程中ｃ－ｍｙｃ癌基因的影响。方法 采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析技术。结果 ｃ－ｍｙｃ癌基因转录水平随石棉染毒剂理的增高而增高,但经３种化合物预处理的石棉组的ｃ－ｍｙｃ癌基因转录水平均明显低于未处理石棉组,用等量柠檬酸铝,混合稀稀土或亚硒酸钠处理过的石棉组的ｍ－ｃｙｃ癌基因转录水平分别降低了８１．６％,６９．５％,８９．９％。     

镉引起SD大鼠肾细胞的凋亡及钙稳态的失调

[目的]研究一定浓度镉离子诱导离体SD大鼠肾细胞的凋亡及引起细胞内钙稳态的失调，并分析亚硒酸钠对镉离子上述作用的影响。[方法]在37℃、5％CO3条件下，离体SD大鼠肾细胞分别在含不同浓度镉离子(150、75、30、15、0μmol/L CdCl2)和硒加镉离子(1．15μmol/L Na2SeO3 30μmol/L CdCl2)的FD培养液中孵育3h后，用吖啶橙／溴乙锭双荧光染色法检测细胞的凋亡率，以fluo-3／AM为探针研究细胞内游离钙离子浓度的变化。[结果]不同浓度的镉离子能不同程度地诱导SD大鼠肾细胞的凋亡(15～150μmol/L CdCl2各组凋亡率分别为57．5％、45．9％、39．3％、34．7％)，同时还能引起不同程度的细胞内游离钙离子浓度增加，并呈现剂量效应正相关。低浓度的亚硒酸钠有一定的降低镉离子诱导细胞凋亡的作用(硒加镉组的凋亡率仅为19．5％)。[结论]镉能引起离体SD大鼠肾细胞的凋亡并引起细胞内钙稳态的失调。     

镉对小鼠肢芽细胞增殖细胞核抗原和c—myc基因表达的影响

目的探讨镉对胚胎肢芽细胞增殖抑制的机制。方法运用免疫组化ＳＰ法结合图像分析技术观察了ＣｄＣｌ２对增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。结果ＰＣＮＡ和ｃ－ｍｙｃ基因在正常增殖的胚胎肢芽细胞中均呈强阳性免疫反应；０．１～０．８μｇ／ｍｌＣｄＣｌ２对细胞中ＰＣＮＡ和ｃ－ｍｙｃ的表达均有明显的抑制作用，并呈现明显的剂量－效应关系。结论ＣｄＣｌ２可通过抑制ＰＣＮＡ和ｃ－ｍｙｃ的表达而对胚胎细胞增殖产生抑制作用。     

镉对大鼠肝细胞原癌基因c-myc表达的影响

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交方法研究氯化镉对大鼠肝细胞原癌基因ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果表明,５ｕｍｏｌ／ｋｇ、１０ｕｍｏｌ／ｋｇ、２０ｕｍｏｌ／ｋｇ氯化镉腹腔一次注射邱,大鼠肝细胞ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ较对照组明显增多,用免疫组化技术在大鼠肝细胞中检测到ｃ－ｍｙｃ蛋白。结果提示,氯化镉可以引起在体大鼠肝细胞ｃ－ｍｙｃ表达增强。     

Bcl-2、c-myc基因在急性白血病中的表达及其意义

为探讨凋亡调控基因ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ对白血病的发生、疗效及预后判定的意义,采用免疫组化法检测ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ在７２例急性随系白血病患者骨髓细胞中的表达。结果发现初治和复发者ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ的表达比完全缓解组和对照组明显增高（Ｐ〈０．０１％）;初治组和复发组之间差异无显著性（Ｐ〉０．０５）;ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的表达呈正相关（Ｐ〈０．０１）;ｂｃｌ－２和／或ｃ－ｍｙｃ高度表达的患者