一氧化氮在再灌流肾损伤中的作用

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）在肾缺血再灌流过程中的作用。方法：制作肾缺血再灌流模型,检测缺血６０ｍｉｎ,再灌流１５ｍｉｎ和２４ｈ的肾组织ＮＯ浓度、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性、亚硝酸盐／硝酸盐浓度（ＮＯ＾－２／ＮＯ＾－３）及丙二醛（ＭＤＡ）浓度。结果：肾缺血６０ｍｉｎ后ＮＯＳ活性降低,ＮＯ水平下降,再灌流１５ｍｉｎ后ＮＯＳ活性有所提高,再灌流２４ｈ,ＮＯＳ活性明显提高,ＮＯ水平提高,同时肾损伤逐渐明显     

实验性脊髓缺血性损伤抗氧化酶活力及过氧化脂质含量的研究

目的；探讨自由基在脊髓缺血及再灌注损伤中的作用。方法：通过阻断兔腹主动脉，造成脊髓腰尾段缺血，对缺血前，缺血４０ｍｉｎ和再灌流４ｈ局部脊髓组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活力，谷胱甘肽（ＧＳＨ），过氧化脂质（ＬＰＯ）的含量进行研究。结果：缺血４０ｍｉｎＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ活力及ＧＳＨ含量明显降低，ＬＰＯ含量明显升高，与缺血前比较有显著性差异（Ｐ均〈０．０１）再灌流     

依那普利对沙土鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用

目的：研究血管紧张素转化酶抑制衣那普利对沙土鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法：（１）缺血再灌注组，阻断双侧颈总动脉血流３０ｍｉｎ，制备缺血再灌注模型。（２）缺血再灌注预防组：术前２ｈ依那普利混悬液灌胃，２ｍｇ／ｋｇ。（＃）缺血再灌注治疗组；再分３亚组，术后分别给予依那普利１，２，３ｍｇ／ｋｇ灌胃。（４）假手术对照组。再灌２０ｈ后，测定血浆神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）含量，脑组织ＮＳＥ免疫组化染     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后前角运动神经 …

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）对唯物事运动神经元的保护作用。方法：大鼠分为假手术组、生理盐水（ＮＳ）组和ＧＤＮＦ组,改良Ａｌｌｅｎ法撞击致伤Ｔ１２脊髓,蛛网膜下腔分别给予ＮＳ和ＧＤＮＦ,分别取不同时间的伤段脊髓进行切片,应用酶组织化学染色方法显示脊髓前角外侧核运动神经元中胆碱酯酶（ＣｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活性,并结合计算机进行图像分析。结果：ＧＤＮＦ组较ＮＳ组ＣｈＥ活性显著增     

脊髓缺血性二次瘫痪与脊髓血流量

目的：观察脊髓缺血后二次瘫痪与脊髓血流量（ＳＣＢＦ）的关系。方法：以清醒兔肾下主动脉（ＩＲＡ）阻断致腰骶段脊髓缺血为实验模型，采用氢气清除法观测脊髓灰质和白质血流量（ｇＳＣＢＦ和ｗＳＣＢＦ）及Ｔａｒｌｏｖ六级分类法观测脊髓功能变化。结果：ＩＲＡ阻断平均３４ｓ双下肢运动功能完全消失，５５ｓ双下肢感觉功能消失；缺血２０ｍｉｎ再灌流后１～３ｈ内８７％动物的双下肢功能恢复，但再灌流１７～２６ｈ出现二次瘫痪。ＩＲＡ阻断后股动脉血压由１１．３～１６．６ｋＰａ降至２．６２ｋＰａ以下，Ｌ６的ｇＳＣＢＦ由（５１．９４±１３）ｍｌ１００ｇ－１ｍｉｎ－１降至（５．８６±６．０）ｍｌ１００ｇ－１ｍｉｎ－１，Ｌ６的ｗＳＣＢＦ由（３５．８０±７．０）ｍｌ１００ｇ－１ｍｉｎ－１降至（６．７±８．０）ｍｌ１００ｇ－１ｍｉｎ－１；缺血２０ｍｉｎ再灌流即刻（１５ｍｉｎ）股动脉血压和Ｌ６ＳＣＢＦ恢复正常，但再灌流１、３和２４ｈＬ６的ｇＳＣＢＦ和ｗＳＣＢＦ与缺血前相比显著下降，再灌流４８ｈＬ６ｗＳＣＢＦ仍显著下降；但Ｔ１０的ｇＳＣＢＦ和ｗＳＣＢＦ在缺血期和再灌流不同时间均无显著性变化。结论：提示兔脊髓缺血性二次瘫痪可能与继发性ＳＣＢＦ下降有关。     

神经营养因子NGF、BDNF对鼠胚基底前脑胆碱能神经元发育生长的协同作用

目的：探讨神经营养因子ＮＧＦ、ＢＤＮＦ联合使用时对鼠胚基义离胆碱能神经元发育生长的协同作用。方法：实验分成ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＧＦ＋ＢＤＮＦ和对照４组。采用细胞培养和脑内移植手段及ＡＣｈＥ组化染色、显微测量和图象分析等技术。检测各组胚基底前脑培养４天和８天时的ＡＣｈＥ阳性神经元数、胞体直径、胞体发出的突直数及最长突起长度以及胚基底前脑移植至脑内４．５个月时移植区内ＡＣｈＥ阳性元数、细胞面积和纤维密     

脑缺血再灌流后大鼠海马脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子mRNA的表达

目的：观察大鼠脑缺血再灌流损伤后脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）和睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）ｍＲＮＡ在海马中的分布及其表达。方法：大鼠颈总动脉夹闭造成脑缺血３０ｍｉｎ，于６，１２，２４，７２ｈ进行点杂交和原位杂交，７２ｈ时进行神经元尼氏小体染色。结果：脑缺血后，海马ＣＡ１区神经元大量死亡，ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达于６ｈ开始增加，７２ｈ恢复正常。２４ｈ时齿状回ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达高于ＣＡ１区。ＣＮＴＦｍＲＮＡ表达于１２ｈ开始持续增加。结论：脑缺血再灌流损伤后，海马ＢＤＮＦｍＲ－ＮＡ和ＣＮＴＦｍＲＮＡ的表达均增加。ＢＤＮＦ可能有利于齿状回神经元耐受缺血，ＣＮＴＦ可能在局部发挥神经营养作用     

热休克对大鼠缺血—再灌心肌的保护作用探讨

目的；从离体和在体两方面探讨热休克反应对缺血－再灌心肌的保护作用。方法：实验采用ＳＤ大鼠，随机分为热休克组和对照组。动物经热休克处理恢复２４ｈ后，离体部分取心进行Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆ灌流，复制缺血３０ｍｉｎ／再灌３０ｍｉｎ的模型，实验中全程记录心电图（ＥＣＧ）及心肌收缩幅度，并测定冠脉流出液的流量变化、肌酸激酶（ＣＫ）活性及丙二醛（ＭＤＡ）含量；在体部分行冠脉左前降支结扎／松绑术复制缺血３０ｍｉｎ     

大鼠前脑短时反复缺血再灌流对海马神经元损伤的影响

报告了清醒ＳＤ大鼠４血管阻断（４一ＶＯ）前脑缺血动物模型的改良并观察了短时反复缺血再灌流对海马ＣＡ１区神经元损伤的影响。在９ｍｉｎ４一ＶＯ脑缺血３ｄ后，海马ＣＡ１区的锥体细胞（约占５０％）出现明显损伤，其受损程度较３×３ｍｉｎ４一ＶＯ（间隔１ｈ）缺血组大鼠严重（Ｐ＜０．０１）；但与３×５ｍｉｎ组相比，后者海马损伤更为显著（Ｐ＜０．０１）。提示一定时限内的短时反复脑缺血较持续性缺血对海马神经元的损伤可能有更大的危害性。     

脊髓缺血再灌流损伤后的电解质和水含量分布

本文观测清醒兔脊髓缺血２０ｍｉｎ及其再灌流２ｈ和２４ｈ、缺血６０ｍｉｎ及其再灌流２ｈ、缺血１０￣３５ｍｉｎ再灌流７ｄ，Ｌ７至Ｔ８脊髓Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｎａ、Ｋ和水含量的节段性变化。正常脊髓的各离子和水含量在各节段间均无显著的统计学差异，也未见明显的波浪式高低分布。不同程度缺血及再灌流后各离子和水含量均发生不程度变化，其中Ｃａ含量呈显著的波浪式节段分布Ｌ４和Ｌ６明显低于Ｌ７、Ｌ５和Ｌ３。结果表明脊髓     

谷氨酰胺合成酶在大鼠正常脊髓组织内的表达

目的探讨谷氨酰胺合成酶(GS)在大鼠正常脊髓组织内的表达。方法采用免疫组织化学法,检测脊髓组织内GS的表达。结果GS在脊髓灰质(前角、后角)和白质(前索、后索)广泛呈点状散在分布,且主要在免疫阳性细胞胞体内表达,少量免役阳性细胞突起内也有表达。结论GS在维持正常胞外谷氨酸浓度过程中起到重要作用,也提示其在某些病理环境下能阻止或减缓神经元神经毒性死亡的进程。     

腓肠神经活检的神经丝蛋白免疫组化染色在成人脊髓性肌萎缩的应用

目的：为了探讨神经丝蛋白在成年型脊肌萎缩症患者活检取材的腓肠神经中的免疫组化特性是否能够提供可信赖和有用的病理诊断信息，以期发现该病在腓肠神经中相应的病理改变特征。方法：对临床与电生理诊断的４例进行性脊肌萎缩症患者行腓肠神经活检，标本经４％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片经ＨＥ，坚牢蓝，银浸染和神经丝蛋白单克隆抗体的ＡＢＣ法免疫组化染色，镜下观察。结果：常规染色与神经特染的镜下主要特点为腓肠神经的轴索变性而髓鞘和许旺氏细胞相对保持完整，免疫组化结果显示轴索中神经丝蛋白明显减少，残留的神经丝呈细丝状或断裂状。结论：成年型进行性脊肌萎缩症的病理特点不仅只表现为脊髓前角神经元的缺失等下运动神经元受损的表现，而且可以累及周围感觉神经，进行性脊肌萎缩症患者的腓肠神经活检病理检查也有相应的特征性改变，即腓肠神经的轴索变性和神经丝蛋白的明显减少。     

猪神经元胞体和轴突神经细丝组分的初步分析

从猪神经元胞体和轴突中分离提取了神经细丝 (NF) ,对它们各自进行了电泳以分析其亚基构成并进行磷酸化程度定量分析 ,结果表明 NF分子由大中小三种亚基构成 ,胞体和轴突两种 NF的磷酸化程度存在显著性差异。这一方法将对阐明某些神经元退行性变疾病的机理提供有用的线索。     

视神经挤压伤后星形胶质细胞和轴突反应的免疫组织化学研究

目的 观察大鼠星形胶质细胞和视网膜节细胞轴突对视神经挤压伤的反应。方法 用免疫组织化学染色法和计算机辅助免疫组织化学技术研究视神经连续纵向切片,定量分析挤压伤后大鼠神神经细胞反应。结果 挤压伤后,视神经轴突标志物NF-160,星形胶质细胞标志物神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在直接机械损伤区活力降低并在其后数周内保持低表达,3wk时损伤近端神经段GFAP的光密度为正常的1.7倍。在实验观察的3wk时损伤近端神经段GFAP的光密度为正常的1.7倍,在实验观察的3wk期间挤压伤区近端的NF-160染色明显高于远端。结论 星形胶质细胞从位于胶质瘢痕和远端之间的损伤区消失可能是视网膜节细胞轴突不能伸长通过损伤区的原因。     

慢性砷中毒大鼠脊髓神经元蛋白免疫组织化学研究

目的：通过对慢性砷中毒大鼠脊髓神经丝蛋白（ＮＦ）的免疫组化观察，研究其脊髓神经元的病理学改变。方法：采用实验组和对照组，分别于大鼠砷中毒３５ｄ、３个月、６个月时取材，进行免疫组化研究。结果：中毒３５ｄ脊髓内ＮＦ免疫反应基本同对照组；中毒３个月脊髓内ＮＦ阳性反应强度明显低于对照组；中毒６个月ＮＦ阳性反应产物明显减少或消失。结论：实验表明砷中毒可影响ＮＦ的合成，且其毒性具有蓄积性。证实砷可直接损伤脊髓神经元     

NGF和BME对小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的探讨神经生长因子(NGF)β-疏基乙醇(BME)诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mousenarrow mesenchmal stem cells,mMSCs)分化为神经元样细胞的作用.方法密度梯度离心结合差异贴壁法分离、纯化mMSCs,用血小板源性生长因子(Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB)和表皮生长因子(Epidermal Growth Facotro,EGF)刺激促进mMSCs分裂增殖.以NGF和BME为诱导剂,观察诱导期间细胞的形态变化,并用免疫细胞化学法鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,甲苯胺蓝色法显示尼氏小体.结果免疫细胞化学显示:70%细胞表达NSE,74%细胞表达NF;实验组行尼氏染色出现尼氏小体.结论NGF和BME能诱导mMSCs分化为神经元样细胞,而且具有较高的诱导效率.     

人脐血干细胞培养及其向神经元样细胞定向诱导分化的研究

目的：通过体外培养脐血干细胞并诱导分化为神经元样细胞，为研究脐血干细胞移植修复脊髓损伤奠定基础。方法：用密度梯度离心法将脐血单个核细胞从脐血中分离出来，置于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中培养、扩增、传代，取体外扩增5代的脐血间充质干细胞（MSCs），接种于培养板内，将诱导剂3－叔丁基4－羟基茴香醚（BHA）和二甲基亚砜（DMSO）加入条件培养基静置培养，观察细胞的形态学和组织学变化，取神经元样细胞进行免疫组化检测细胞表面标志物神经元烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP），然后，在光镜下随机数取10个非重叠视野(×100), 计算NSE、NF及GFAP阳性细胞占总细胞数的比例，实验结果用统计学分析。结果:光镜下hMSC在预诱导液中处理24?h后,加入诱导液,1?h后细胞形态发生变化,原来宽大扁平的hMSCs胞质向核收缩,胞体向胞核收缩成锥形且变得致密并有折光性,有较多的长突起,6?h后多数细胞均转变为类似于神经元的形态，3?d后免疫组化检测NSE、NF及GFAP的阳性率分别为（35.24±3.63）％、（33.46±3.21）％、（15.12±1.65）%。结论:脐血MSC在体外有较强的扩增能力,并且在一定条件下可以诱导成为神经元样细胞。     

异氟醚和七氟醚对犬脊髓各区域γ-氨基丁酸表达的不同影响

目的 研究相同麻醉深度的异氟醚和七氟醚对犬脊髓不同区域γ-氨基丁酸(GABA)表达的影响.方法 24只12～18个月健康杂种犬,雌雄不拘,体重10～12 kg,随机平均分为异氟醚(A组),七氟醚(B组)和对照组(C组),每组八只.3组于犬尾中部皮下注射5％福尔马林300μL.3组分别吸入1.3％异氟醚,七氟醚和空气30 min,取犬脊髓前角、背角、中间带、前索、后索、外侧索组织,采用高效液相色谱法(HPLC)检测γ-氨基丁酸浓度.结果 A组和B组前角和背角γ-氨基丁酸浓度高于C组和A、B组其他区域浓度.结论 脊髓前角和背角是异氟醚和七氟醚抗伤害性刺激作用的关键部位之一.     

GDNF基因体内转染对大鼠脊髓损伤后轴突再生的影响

目的：研究脂质体介导的胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因在大 鼠损伤脊髓内的表达,观察外源性GDNF对损伤脊髓轴突再生的作用。方法：利用Nystrom法制备大鼠胸髓压迫损伤模型。以直接注射法将脂质体DC－Chol和重组质粒pEGFP－GDNF cDNA混合后注入大鼠损伤脊髓。采用RT－PCR技术和荧光显微镜检测GDNF基因转染后的体内表达,并通过辣根过氧化酶（HRP）顺行追踪技术和神经微丝（NF）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化活性的变化来评价GDNF基因转染对轴突再生的影响。结果：经脂质体DC－Chol介导GDNF基因可有效地转染脊髓组织 中并得到表达。GDNF转基因4周后可明显增加NF阳性轴突数目,促进皮质脊髓束再生并通过损伤区。结论：外源性GDNF在损伤区局部高表达具有神经损伤保护作用,提示阳离子脂质体介导GDNF体内转基因治疗创伤性脊髓损伤的方法是可行的。     

成人骨髓间质干细胞诱导分化为神经元样细胞及其与细胞分裂的关系

目的探讨成人骨髓间质干细胞(hMSC)向神经元样细胞分化过程中分化与细胞分裂的关系。方法从成人骨髓中分离骨髓间质干细胞(MSC),培养扩增。用参芪液诱导MSC分化为神经元样细胞,经免疫组化鉴定其神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。诱导后进行神经元样细胞计数,掺入Brdu测定,计算标记系数。采用双标记间接免疫荧光法检测神经元样细胞特异性表面标记(NSE、NF)与细胞分裂的标记Brdu的关系。抑制DNA合成,计算Brdu、NSE和NF阳性细胞数。结果MSC经参芪液诱导后,可见神经元样细胞。免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF阳性,GFAP阴性。MSC诱导分化后的细胞总数增加,诱导分化后12h内细胞增殖较快。30%以上分化的神经元样细胞在表达NSE和NF的同时可见Brdu标记,而另一部分分化的神经元则无Brdu标记。抑制DNA合成,并不会阻止神经元的分化,仍有70%的分化神经元表达神经元特异性标记蛋白NSE。结论MSC诱导分化的部分神经元样细胞可进行细胞分裂,但抑制细胞分裂不影响神经元分化。