转化生长因子-β1诱导新生大鼠肺成纤维细胞增殖的细胞周期调控研究北大核心CSCD

目的探讨转化生长因子（TGF）-β1刺激下细胞周期调控对肺成纤维细胞增殖的影响,了解支气管肺发育不良（BPD）的发病机制。方法对出生1 d新生大鼠的肺成纤维细胞进行分离、纯化和鉴定,将原代肺成纤维细胞经TGF-β1刺激后,应用免疫组织化学及Western blot技术检测周期蛋白依赖性激酶-2（CDK2）及p27的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测CDK2及p27的mRNA表达,并同时应用CCK8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果对鉴定后的新生大鼠肺成纤维细胞进行TGF-β1刺激后,可以观察到原代成纤维细胞的CDK2蛋白及mRNA表达增加,并伴p27蛋白及mRNA水平下降;CCK8显示吸光度值增高,增殖明显,S期细胞所占比例同时增加,G0/G1期逐渐减少。0、10 μg/L的TGF-β1刺激后S期细胞所占比例分别为4.63%、67.09%,G0/G1期为83.67%和67.09%。10 μg/L的TGF-β1刺激12 h和48 h后S期细胞所占比例分别为7.64%、9.11%,G0/G1期为73.99%和59.81%。随着TGF-β1水平增加（0 μg/L、5 μg/L及10 μg/L）,CDK2蛋白及mRNA表达进一步增加;并且相同水平TGF-β1刺激,随着时间的延长（10 μg/L的TGF-β1刺激12、24、48 h）,CDK2蛋白及mRNA表达进一步增加,48 h较对照组增加显著（P〈0.05和〈0.01）,p27蛋白及mRNA水平随之进一步下降,48 h较对照组增加显著（均P〈0.01）。结论TGF-β1能够使新生大鼠肺原代成纤维细胞CDK2/p27表达失衡,加速细胞周期进程,使成纤维细胞过度增殖。     

外源性结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ合成的影响

目的：结缔组织生长因子（CTGF）是一种重要的参与肾纤维化的细胞因子，为了进一步阐明外源性CTGF的作用机制，该文探讨了外源性CTGF对人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ合成中的作用。方法：将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2 分为3组：①对照组；②CTGF小剂量组（终浓度为2.5 ng/mL）；③CTGF大剂量组（终浓度为20 ng/mL）。用倒置显微镜观察细胞形态变化，RT-PCR检测HK2细胞胶原Ⅲα mRNA水平的变化，免疫组织化学方法观察HK2 细胞胶原Ⅲα的表达。结果：不同浓度的CTGF作用于HK2 细胞48 h后，均可使HK2 细胞由椭圆形变为梭形。大剂量CTGF刺激HK2 细胞48 h后胶原Ⅲα mRNA水平显著升高（P<0.05），大剂量CTGF组HK2 细胞胞浆表达胶原Ⅲα也显著增加（P<0.05）。结论：CTGF在体外能够诱导人肾小管上皮细胞发生形态改变，大剂量的CTGF刺激可以增加人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ的合成。     

LeftyA蛋白对转化生长因子β1所致肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的 观察LeftyA蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化的影响,并初步探讨其作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞,通过LipofectamineTM2000介导基因转染及药物筛选构建LeftyA蛋白稳定表达HK-2细胞系;TGF-β1(10ng/ml)刺激此细胞系,于0、6、12、24、48h通过Western blot分别检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及p-Smad2/3的表达变化,通过Real-time PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)及结缔组织生长因子(CTGF)基因的表达变化.结果 不同浓度的TGF-β1刺激24 h后HK-2细胞内E-eadherin、α-SMA蛋白的变化均表现出明显的剂量效应,而当TGF-β1浓度达到10ng/ml时,α-SMA蛋白合成达到平台期(P＞0.01),因此本实验中以10ng/ml的TGF-β1作为刺激剂量;TGF-β1(10 ng/ml)刺激HK-2细胞6 h可引起E-cadherin表达下降(P＜0.01),刺激24 h后可诱导其合成表达α-SMA(P＜0.05),同时细胞内ColⅠ基因转录增加(P＜0.01);正常HK-2细胞内没有p-Smad2/3的表达,TGF-β1(10 ng/ml)刺激30min即可诱导其激活表达,并在1 h时迅速达到高峰,其后开始下降;高表达LeftyA蛋白能够减轻TGF-β1所致上皮细胞转分化(EMT)及纤维化的程度,降低p-Smad2/3的表达高峰,并抑制CTGF的表达(P＜0.01).结论 LeftyA蛋白能够通过抑制TGF-β1所致Smad2/3磷酸化及CTGF表达发挥抗肾小管上皮细胞纤维化的作用.     

不同潮气量通气启动新生鼠肺纤维化的特点

目的：探讨不同潮气量机械通气后新生大鼠肺胶原合成的变化及其机制。方法：24只新生Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、常规通气组（潮气量10 mL/kg）及过度通气组（潮气量25 mL/kg）,每组8只。机械通气5 h后处死,取肺组织,左肺行肺组织病理损伤评分,以免疫组织化学方法观察结缔组织生长因子（CTGF）表达。PCR法检测右肺组织Ⅲ型前胶原蛋白mRNA（PcolⅢ mRNA）、半胱氨酰白三烯mRNA（CysLT1 mRNA）及CTGF mRNA水平。结果：肺损伤程度和纤维化程度随着潮气量增加而增加(P<0.05）。与对照组比较,过度通气组肺组织CTGF mRNA水平显著性增高（P<0.05）。肺组织PcolⅢ mRNA 和 CysLT1 mRNA水平随潮气量增加而增加,各组间差异有统计学意义（P<0.05）。肺组织中PcolⅢ mRNA表达与肺组织病理损伤程度呈正相关关系（r=0.78,P<0.01）;CTGF、CysLT均和PcolⅢ呈正相关关系(r＝0.59,0.86,P<0.01)。结论：不同潮气量机械通气导致不同程度肺损伤,并启动肺纤维化。肺纤维化程度与肺损伤程度一致。肺纤维化的启动与CysLT作用和CTGF激活有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（10）：799-803］     

碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子β1在心肌纤维化各时期的表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)在血管紧张素Ⅱ(AngII)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)纤维化不同时期的表达,及其可能作用。方法采用胰酶消化法和差速贴壁法分离1~3日龄新生SD大鼠的心脏CFs,将培养的第2~4代CFs随机分为实验组和对照组。对照组培养时不加干预药物;实验组用Ang II(10-6 mol/L)诱导CFs纤维化;培养12、24、48、72 h后,采用ELISA法测上清液胶原含量,采用RT-PCR法检测bFGF及TGF-β1的mRNA表达;Western Blot法检测bFGF及TGF-β1的蛋白表达。结果与对照组相比,实验组CFs的bFGF、TGF-β1 mRNA及蛋白的表达逐渐增高,在不同时间点的差异有统计学意义(P0.05),且均与上清液胶原呈正相关(r=0.881~0.932,P均0.05);bFGF与TGF-β1mRNA及蛋白的表达呈显著正相关(r=0.967、0.947,P均0.05)。结论 bFGF与TGF-β1可能协同促进心肌纤维化的发生发展。     

氯沙坦片对糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β1及结缔组织生长因子的影响

目的 观察糖尿病肾病（DN）大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）在肾组织中的表达，检测尿液中两者的水平。观察氯沙坦片对肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达及尿液中水平的影响。方法 Wistar大鼠摘除右肾后，注射链脲菌素制造DN大鼠模型。随机分为糖尿病肾病实验组和氯沙坦治疗组。于第6、12周用免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1、CTGF蛋白质的表达，ELISA法检测尿液中两者水平。结果 与治疗组相比，实验组12周时尿液TGF-β1、CTGF水平、肾间质纤维组织相对面积显著增加，肾组织TGF-β1、CTGF蛋白质的表达显著升高（P均〈0．01）；肾小球系膜基底膜相对面积扩大（P〈0．05）。与6周相比，实验组12周时尿液TGF-β1、CTGF水平，肾间质纤维组织相对面积显著增加。肾组织内TGF-β1、CTGF蛋白质的表达亦明显升高（P均〈0．01）；治疗组12周肾小球TGF-β1蛋白质的表达升高（P〈0．05），肾小管TGF-β1蛋白质的表达明显升高（P〈0．01）。肾组织内TGF-β1蛋白与CTGF蛋白的表达呈显著正相关（r=0．85P〈0．01），尿液中两者排泄量亦呈明显正相关（r=0．76P〈0．01）。结论 TGF-β1、CTGF蛋白在DN大鼠肾组织表达及尿液中的排泄显著升高。氯沙坦可减轻肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达，减少两者尿液中的排泄，具有肾保护作用。     

外源性结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞的转分化和胶原合成效应

目的：大量研究表明内源性结缔组织生长因子(CTGF)在肾小管间质纤维化(TIF)进程中发挥了重要作用,为进一步阐明外源性CTGF的作用机制,该实验探讨了重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)刺激对人肾小管上皮细胞(HK2)转分化和胶原合成的作用。方法：rhCTGF 5 ng/mL刺激HK2细胞,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,同时在刺激后0,3,6,12,24,48 h各点收集细胞,RT-PCR检测上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Iα1(Col Iα1)和胶原IVα1(Col IVα1)mRNA表达变化。结果：rhCTGF 5 ng/mL刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形,下调E-cadherin mRNA表达,上调-αSMA mRNA表达,但对Col Iα1和Col IVα1mRNA表达没有影响。结论：外源性CTGF能导致HK2细胞转分化,但不能促进其胶原合成。     

高氧诱导早产鼠肺纤维化中结缔组织生长因子的表达及其意义

目的：结缔组织生长因子（CTGF）是新近发现与纤维化发生密切相关的一种因子，但其与早产儿慢性肺疾病（CLD）的肺纤维化有何关系，迄今未见报道。该文旨在阐明CTGF在高氧致早产鼠CLD发生、发展的表达规律，并探讨其在纤维化中表达及意义。方法：采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型，应用酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，动态观察CTGF mRNA表达，并同时测定肺成纤维细胞的增殖性细胞核抗原（PCNA）指数及肺组织 Ⅰ 型胶原的含量和TGF-β1蛋白表达水平。结果：生后1 d，3 d，两组 Ⅰ 型胶原、PCNA指数、TGF-β1蛋白及CTGF mRNA表达水平无差异（P>0.05）；实验组肺组织TGF-β1蛋白表达7 d升高（P<0.05），Ⅰ 型胶原、PCNA指数及CTGF mRNA表达14 d升高（P<0.05），21 d均达高峰（P<0.01）；肺组织CTGF mRNA表达与 Ⅰ 型胶原呈明显正相关（γ=0.89, P<0.01）。结论： 高氧致CLD早产鼠肺组织CTGF mRNA表达水平与肺组织纤维化的程度相一致，CTGF与CLD的肺纤维化密切相关。［中国当代儿科杂志，2007，9（5）：449-452］     

香菇多糖对白介素-1β诱导人胚肺成纤维细胞表型转化的影响

目的：研究白介素-1β（IL-1β）对人胚肺成纤维细胞(FB)向肺肌成纤维细胞转化的影响及香菇多糖（LNT）的作用。方法：体外培养人胚肺FB,用不同浓度IL-1β和LNT作用于细胞后,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,RT-PCR检测纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）和α-SAM mRNA的相对表达量。结果：①IL-1β组细胞增殖的吸光度、α-SMA蛋白及FN、ColⅠ和α-SAM mRNA表达均高于对照组（P<0.01）,且随着IL-1β浓度的增加,表达逐渐增高。②LNT呈浓度依赖性抑制IL-1β诱导的细胞增殖及α-SMA蛋白、FN、ColⅠ和α-SAM mRNA表达（P<0.01）。结论：LNT可抑制IL-1β诱导人胚肺FB增殖和肌成纤维细胞转化及细胞外基质积聚。     

3I、7b型腺病毒感染对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的探讨3I、7b型腺病毒型感染对体外培养的人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA及其蛋白表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,另设正常细胞组。采用酶联免疫吸附试验及原位杂交法检测各组细胞TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA表达。结果3I、7b型病毒感染组较正常细胞组TGF-β1蛋白及mRNA表达均明显增强(Pa<0.01),而3I、7b型病毒感染组间比较无显著性差异(Pa>0.05)。结论肺成纤维细胞和TGF-β1可能参与腺病毒肺炎的发病过程。     

siRNA阻断肌成纤维细胞内源性Smad3表达的研究

目的观察Smad3基因的RNA干扰(RNAi)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肌成纤维细胞(C2C12)的Smad3表达。方法实验分为实验组、内对照组和空白对照组。用不同浓度TGF-β1干预C2C12细胞,利用体外转录合成的siRNA-Smad3,以阻断Smad3基因表达。用Westernblot检测Smad3和磷酸化的Smad3。结果5ng/mlTGF-β1干预C2C12细胞,促进Smad3磷酸化。0.5h开始诱导Smad3磷酸化,5h达高峰。TGF-β1干预C2C12细胞,诱导Smad3磷酸化呈剂量依赖性。siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h,Smad3表达逐渐被抑制到无表达。siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h后,加5ng/mlTGF-β1干预,Smad3无表达。结论TGF-β1促进C2C12细胞Smad3磷酸化呈剂量与时间依赖性;siRNA阻断C2C12细胞Smad3表达与Smad3磷酸化。     

内皮细胞损伤在马兜铃酸肾病中的作用及其机制

目的 通过观察马兜铃酸-I(AA-I)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡、分泌、转分化的影响,探讨其与共刺激分子CD40/CD40L、转化生长因子-β1(TGF-β1)/TGF-βⅡ型受体(TGF-βⅡR)的关系.方法 应用不同刺激浓度的AA-I作用于HUVEC,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪(FCM)检测AA-I对HUVEC增殖和凋亡的影响; FCM检测血管内皮细胞的标志分子血管内皮生长因子受体(Flk1),共刺激分子CD40L、促纤维化细胞因子TGF-βⅡR表达的变化;Western blot法测定肌成纤维细胞的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CD40、TGF-β1表达的变化;酶联免疫吸附法检测HUVEC分泌TGF-β1的变化.结果 不同浓度AA-I作用于HUVEC培养96 h后,高浓度AA-I导致细胞增殖受到抑制,各刺激浓度均可导致凋亡,Flk1表达下调、α-SMA表达上调,共刺激分子CD40/CD40L、TGF-β1/TGF-βⅡR 表达增加,明显促进TGF-β1的分泌(P<0.05),上述实验数据改变均呈明显的剂量相关性.结论 AA-I不仅能够抑制内皮细胞增殖,促进其凋亡,并能使其向平滑肌样细胞转化和纤维化.     

高氧对胎鼠肺成纤维细胞p53和增殖细胞核抗原表达的影响

目的 探讨高氧对胎鼠肺成纤维细胞（LFs）p53 和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法 原代培养胎鼠肺 LFs,待生长至亚汇合状态时,随机分为：空气组和高氧组（95% O2/5% CO2）。于培养 12 h 和 24 h 时,采用噻唑蓝（MTT）实验测定细胞增殖状况,半定量 RT-PCR 方法检测 p53 mRNA 表达,Western blot 技术检测 p53 和 PCNA 蛋白的表达。结果（1）与空气组比较,高氧组 12 h 和 24 h 的 LFs 生长抑制率分别为 8% 和 23%;（2）高氧组在 12 h 和 24 h 时 p53 mRNA 表达明显高于空气组（PPP结论 高氧暴露抑制 PCNA 表达、促进 p53 表达,从而抑制 LFs 增殖和 DNA 复制,是导致肺发育异常的重要因素。     

siRNA干扰转化生长因子β1表达对SD大鼠系膜细胞纤维连接蛋白的影响

目的利用能够表达大鼠转化生长因子β1（TGF-β1）siRNA的绿色荧光蛋白融合表达质粒载体（pGEFP-C1）转染SD大鼠系膜细胞系、干扰TGF-β1的表达,观察系膜细胞纤维连接蛋白（FN）的相应变化,探讨防治肾脏纤维化的新途径。方法根据大鼠TGF-β1基因序列第538-556（A）和895-913（B）核苷酸序列,将A、B二段序列分别构建成小发夹结构,分别（A／B）或共同（A＋B）插入一个pGEFP-C1载体中,得到3个重组载体,能够分别或同时表达针对A或（和）B序列的siRNA,分别转染系膜细胞后,通过ELISA和RT-PCR动态观察系膜细胞TGF-β1、FN的mRNA和细胞培养上清中蛋白浓度的变化,探讨二者变化的相互关系。结果载体表达的siRNA与TGF-β1基因第538-556序列相同者,能够显著干扰48h时间段TGF-β1 mRNA（RT-PCR）（P〈0．01）和蛋白分泌（细胞上清ELISA）（P〈0．01）,脂质体转染刺激系膜细胞FN分泌显著增加,表现为对照组和TGF-β1未被有效干扰组,FN分泌于24h时段达到峰值,而TGF-β1被干扰的实验组,FN峰值被推迟到48h才出现（P〈0．01）。结论siRNA干扰系膜细胞TGF-β1的表达,能够减少FN的表达,但FN的表达可能并不完全依赖于TGF-β1。     

福辛普利对肾小球系膜细胞 TGF-β1/Smad 信号通路的干预作用

目的观察新型血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)--福辛普利(fosinopril,FOS)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白分泌和Smad2、Smad7mRNA表达量的影响。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3～10代用于实验。实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组(加5ng/L TGF-β1和5%的胎牛血清)和FOS组(加5ng/L TGF-β1、10μmol/L FOS和5%的胎牛血清)3组,分别于6、24和48h后ELISA法测定细胞培养上清液中ColⅠ蛋白表达量,荧光定量PCR法检测Smad2、Smad7 mRNA表达量的变化。结果①正常培养的大鼠GMC均有一定量的ColⅠ蛋白表达;TGF-β1刺激组在各时间点ColⅠ蛋白分泌均高于对照组(P<0.01),FOS各组ColⅠ蛋白分泌均低于TGF-β1刺激组(P<0.05)。②正常培养的大鼠GMC可表达一定量Smad2、Smad7 mRNA,TGF-β1刺激组在各时间点Smad2、Smad7 mRNA表达量均高于对照组,FOS治疗组Smad2 mRNA表达量均低于TGF-β1刺激组;Smad7 ...     

γ-干扰素和黄芪浸膏对高氧肺损伤大鼠转化生长因子-β1、基质金属蛋白水解酶-2、9 mRNA表达的影响

目的探讨γ-干扰素（IFN-γ）和黄芪浸膏对高氧肺损伤大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白水解酶-2（MMP-2）和MMP-9 mRNA表达的影响。方法取空气对照组和高氧暴露7d的幼年Wistar大鼠肺组织,随机分为空气对照组、高氧损伤组、高氧损伤加IFN-γ干预组和高氧损伤加黄芪浸膏干预组。培养48h后收集沉淀肺组织,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定TGF-β1、MMP-2和MMP-9 mRNA水平。结果IFN-γ干预使TGF-β1 mRNA表达明显下降（P〈0.05）,且呈剂量依赖性;而对MMP-2、MMP-9 mRNA的影响仅在50000IU/mL时有显著性差异（P〈0.05）。黄芪浸膏对MMP-2和MMP-9的mRNA表达均有明显的抑制作用（Pa〈0.05）,且呈剂量依赖性,而对TGF-β1的抑制效应则相对较弱。结论IFN-γ和黄芪浸膏对高氧所诱导的TGF-β1和MMPs增高均有抑制作用。     

HGF对TGF-β1诱导尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成的保护作用

目的 探讨HGF对TGF-β1诱导尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成的保护作用.方法 收集尿道下裂术后瘢痕组织的标本,进行尿道瘢痕成纤维细胞的分离和培养.待细胞生长成单层后,以胰蛋白酶消化传代.取第四代成纤维细胞用于实验,当细胞达到80%融合时,培养液中加入TGF-β1(5ng/ml)及HGF(10～40ng/ml).培养72 h后,用RT-PCR检测各组α-SMA mRNA的变化;ELISA测定细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维结合素的表达.结果 TGF-β1能显著诱导α-SMA m-RNA表达.随HGF的加入,α-SMA m-RNA的表达则明显受到抑制(P＜0.05),且随HGF浓度的升高其阻抑作用呈逐渐增强趋势.对照组、单纯TGF-β1组、加入TGF-β1与10、20、40ng/ml HGF组的Ⅰ型胶原A值分别为0.51±0.04、0.78±0.05、0.71±0.02、0.63±0.03、0.57±0.02,Ⅲ型胶原A值分别为0.12±0.01、0.29±0.02、0.21±0.02、0.14±0.01、0.08±0.01,纤维结合素A值分别为0.24±0.03、0.51±0.02、0.49±0.01、0.38±0.02、0.28土0.01.表明TGF-β1同样能诱导Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维结合素的表达(P＜0.01),而HGF则可以有效地阻抑其表达,其效应呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 HGF对TGF-β1诱导的尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成具有抑制作用.这为临床预防和治疗尿道瘢痕狭窄提供了理论依据.

Abstract：

Objective To examine the inhibitory effects of HGF on TGF-β1 induced a-SMA and extracellular matrix synthesis in cultured fibroblasts derived from urethral scar. Methods Fibroblasts isolated from urethral scar were cultured ex vivo. After the fibroblasts reached confluence, cells were detached using trypsin/ethylenediamine tetra-acetic acid. All experiments were performed using the cells at the fourth passage. At 80% confluence, TGF-β1 (5 ng/ml) and HGF (10-40 ng/ml) were added to the culture medium. After 72 hours co-incubation, the mRNA of a-SMA was studied by RTPCR. The productions of collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin in supernatants were also examined using ELISA. Results TGF-β1 markedly induced a-SMA mRNA expression in cultured fibroblasts. However, HGF could abrogated TGF-β1-induced a-SMA mRNA expression in a dose-dependent manner (P＜0. 05). The levels of collagen type Ⅰ were 0. 51 ± 0. 04,0. 78 ± 0. 05,0. 71 ± 0. 02,0. 63 ± 0. 03, and 0. 57 ± 0. 02 in control, TGF-β1, TGF-β1 + 10 ng/ml HGF, TGF-β1 + 20 ng/ml HGF, and TGF-β1 +10 ng/ml HGF group, respectively. The levels of collagen type Ⅲ were 0. 12 ± 0. 01,0. 29 ± 0. 02,0. 21 ± 0. 02,0. 14 ± 0. 01, and 0. 08 ± 0. 01 in control, TGF-β1, TGF-β1 + 10 ng/ml HGF, TGF-β1 +20 ng/ml HGF, and TGF-β1 + 10 ng/ml HGF group, respectively. And the levels of fibronectin were 0.24±0.03,0.51 ± 0.02,0.49 ± 0.01,0.38 ± 0.02,0.28 ± 0.01 in control, TGF-β1, TGF-β1 +10 ng/ml HGF, TGF-β1 + 20 ng/ml HGF, and TGF-β1 + 10 ng/ml HGF group, respectively. TGF-β1 significantly stimulated collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin production in fibroblasts (P＜0. 01 ). However,HGF could reduced abrogated the up-regulation of collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin induced by TGF-β1 in a dose-dependent manner (P＜0. 05). Conclusions HGF can effectively inhibit TGF-β1 induced aSMA and extracellular matrix synthesis in cultured fibroblasts derived from urethral scar.     

转化生长因子β2在发育性髋关节发育不良患儿关节囊的分布和表达

目的：探讨发育性髋关节发育不良（DDH）患儿和非DDH儿童TGF-β2在关节囊的免疫组化分布规律与水平差异,并比较TGF-β2在mRNA水平的表达差异,以探索髋关节松弛的原因。方法：选取性别相同、年龄相近的8对DDH（发育性髋关节脱位）患儿与非DDH儿童进行配对研究,采用S-P法免疫组化技术和半定量RT-PCR技术检测关节囊中TGF-β2的分布规律与水平差异,以及mRNA水平的差异。结果：分泌TGF-β2的成纤维细胞于贴近关节侧的滑膜层呈强阳性表达,内部纤维层阳性表达细胞稀疏,强度减弱。DDH组与对照组配对比较,纤维层中有阳性成纤维细胞百分比及局部染色的灰度值较对照组明显减少,差异有统计学意义,P<0.01。DDH组关节囊TGFβ2 mRNA的表达较对照组减少,差异有统计学意义,P<0.05。结论：DDH患儿的髋关节松弛很可能与关节囊中TGF-β2的分布减少和表达异常有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：641-644］     

支气管肺发育不良新生儿支气管肺泡灌洗液IL-8 SP-A和TGF-β1的表达

目的：了解支气管肺发育不良（BPD）新生儿肺灌洗液IL-8、SP-A和TGF-β1的表达。方法：将我院2007年12月至2009年10月诊断为BPD的30名新生儿作为实验组。另外选同期30例非BPD患儿作为对照组,两组胎龄、性别、出生体重无差异。采用非纤维支气管镜支气管肺泡灌洗法进行肺灌洗,用ELISA法测定IL-8、SP-A和TGF-β1的含量。结果：BPD组肺泡灌洗液中TGF-β1、IL-8含量分别为47±15和54±16 μg/mL明显高于对照组的34±13和28±13 μg/mL（P<0.01）。BPD组SP-A含量明显低于对照组(35±16 μg/mL vs 42±14 μg/mL; P<0.05)。结论：TGF-β1和IL-8在BPD患儿肺灌洗液中有过高表达,可能与BPD患儿肺的异常发育与成熟有关。BPD组SP-A含量较低,提示给予SP-A外源性治疗有可能为BPD的治疗手段之一。 ［中国当代儿科杂志,2010,12（6）：444-446］     

低浓度紫杉醇对大鼠肺动脉平滑肌细胞外胶原沉积的作用及其机制研究

目的 探讨低浓度紫杉醇（PTX）对转化生长因子β1（TGF-β1）促进大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）外胶原沉积的作用及其机制。方法 原代培养大鼠PASMCs并分为空白对照组、模型组和干预组（n=3）。空白对照组不做任何处理,模型组施加终浓度为10 ng/mL的TGF-β1,干预组在模型组基础上施加终浓度为100 nmol/L的PTX。MTT比色法检测细胞增殖能力;实时荧光定量PCR法检测Ⅰ型胶原（COLⅠ）、Ⅲ型胶原（COLⅢ） mRNA相对表达量;ELISA法检测COLⅠ、COLⅢ蛋白的OD值;Western blot法检测COLⅠ、COLⅢ蛋白,以及TGF-β1/Smad3信号通路关键蛋白Smad3、p-Smad3的相对表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组细胞增殖能力、COLⅠ、COLⅢ mRNA及其蛋白、p-Smad3蛋白相对表达水平均明显增高（P < 0.05）;干预组上述指标较模型组均有所下降,但仍高于空白对照组（P < 0.05）;各组Smad3蛋白相对表达水平比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 低浓度PTX对TGF-β1促进PASMCs外胶原合成具有明显抑制作用,该作用可能是通过调控Smad3蛋白的磷酸化来实现。