雷公藤多甙片对AA大鼠调节T细胞及Foxp3表达的影响

目的:观察雷公藤多甙片(TPT)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的调节T细胞及Foxp3的影响。方法:将48只大鼠随机分为正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、甲氨喋呤组(MTX)、雷公藤多苷片组(TPT),每组12只,分别向(NC除外)各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(FCA)造模,造模后第19天给药,NC及MC给予生理盐水,其余2组分别给予MTX、TPT。观察各组大鼠体质量、足跖肿胀度、关节炎指数(AI)、调节T细胞(Treg)、Foxp3表达的变化。结果:1.与NC组相比,MC组大鼠的体质量明显减轻(P<0.05),足跖肿胀度、AI明显升高(P<0.01);与MC组相比,各治疗组体质量明显升高(P<0.05),足跖肿胀度、AI明显降低(P<0.01);与MTX组比较,TPT组大鼠体质量增加更为明显(P<0.05),足跖肿胀度减低更为明显(P<0.05)。2.与NC组比较,MC组CD4+ CD25+ Treg显著降低(P<0.01);与MC组比较,各治疗组CD4+ CD25+ Treg均升高(P<0.05或P<0.01);与MTX组比较,TPT组CD4+ CD25+ Treg升高(P<0.05)。3.与NC组相比,MC组Foxp3蛋白染色指数、蛋白积分光密度值、Foxp3 mRNA的表达水平均明显下调(P<0.01);与MC组比较,MTX组、TPT组Foxp3蛋白染色指数、蛋白积分光密度值、Foxp3 mRNA的表达水平均明显升高(P<0.01或P<0.05);与MTX组比较,TPT组Foxp3蛋白染色指数、蛋白积分光密度值明显升高(P<0.05)。结论:TPT能改善AA大鼠体质量、足跖肿胀度、AI同时能够调节调节T细胞、Foxp3的表达。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠心功能及血清细胞因子、调节T细胞的影响

目的观察新风胶囊对佐剂性关节炎(AA)大鼠心功能及血清细胞因子、调节T细胞的影响。方法将60只大鼠随机分为健康对照组(NC)、模型对照组(MC)、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TGT)组和新风胶囊(XFC)组,每组12只,分别向除健康对照组以外的其余动物右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎,致炎后第19天开始给药。健康对照组及模型对照组均给予0.9%氯化钠注射溶液,其余三组分别给予MTX、TGT、XFC。观察各组大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、心功能、血清细胞因子(TNF-α、IL-17、BNP、IL-10)、调节T细胞(CD4+Treg,CD4+CD25+Treg)的变化。结果与MC组比较,XFC组HI、LVSP和LVEDP显著降低(P<0.05),+dp/dtmax显著升高(P<0.05);与XFC组比较,MTX组体质量显著降低(P<0.01),E、AI、LVSP显著升高(P<0.05),+dp/dtmax显著降低(P<0.05)。与MC组比较,XFC组TNF-α、IL-17、BNP显著降低(P<0.05或P<0.01),IL-10、CD4+Treg、CD4+CD25+Treg显著升高(P<0.01);XFC组与其余两治疗组无显著差异(P>0.05)。结论 AA大鼠存在不同程度的心功能变化。新风胶囊在改善AA大鼠足跖肿胀度、关节炎指数的同时,也能改善其心功能,其机制可能与新风胶囊抑制异常炎症免疫反应有关。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠CD4+CD25+Treg和Foxp3表达的影响

目的:观察新风胶囊对佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠外周血CD4+CD25+调节T细胞(Treg)及脾脏组织Foxp3表达的影响.方法:将84只大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TPT)组和新风胶囊低剂量组、新风胶囊中剂量组、新风胶囊高剂量组,每组12只,除正常对照组以外的其余大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(Freunds'complete adjuvant,FCA)0.1mL致炎,致炎后第19d开始给药.第49天处死大鼠,观察各组大鼠上述指标的变化.结果:模型组大鼠CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA、Foxp3蛋白表达明显降低,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01);与模型组比较,各治疗组均能明显升高CD4+CD25+Treg的比例(P<0.01或<0.05),组间比较显示,XFC中剂量组升高最为明显,与正常组无明显差异(P>0.05);各治疗组均能显著升高脾脏Foxp3mRNA的表达(P<0.01),XFC中剂量组升高最为明显,明显优于MTX组和XFC低剂量组(P<0.05或<0.01),与正常组、TPT组、XFC高剂量组无明显差异(P>0.05);与模型组比较,TPT组、XFC中、高剂量组均能明显升高胸腺Foxp3蛋白表达(P<0.01),明显优于MTX组和XFC低剂量组(P<0.05或<0.01).结论:健脾化湿通络中药新风胶囊通过上调CD4+CD25+Treg比例,抑制致炎细胞因子分泌,抑制自身免疫T细胞活化,而达到抗炎抗免疫的治疗作用.     

新风胶囊对AA大鼠心功能及血清细胞因子、调节T细胞的影响

目的:观察新风胶囊对佐剂性关节炎(AA)大鼠心功能及血清细胞因子、调节T细胞的影响.方法:将60只大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TGT)组和新风胶囊(XFC)组,每组12只,分别向除正常对照组以外的其余动物右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1ml致炎,致炎后第19天开始给药.正常对照组及模型对照组均给予生理盐水,其余3组分别给予MTX、TGT、XFC.观察各组大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、心功能、血清细胞因子(TNF-α、IL-17、BNP、IL-10)、调节T细胞(CD4+Treg,CD4+CD25+Treg)的变化.结果:①与NC组比较,MC组的E、AI、心脏质量指数(HI)、左室收缩末压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0.05),左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)显著降低(P<0.05);与MC组比较,XFC组HI、LVSP和LVEDP显著降低(P<0.05),+dp/dtmax显著升高(P<0.05);与XFC组比较,MTX组体重显著降低(P<0.01),E、AI、LVSP显著升高(P<0.05),+dp/dtmax显著降低(P<0.05).②与NC组比较,MC组TNF-α、IL-17、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)显著升高(P<0.05),IL-10、CD4+Treg、CD4+CD25+Treg显著降低(P<0.01);与MC组比较,XFC组TNF-α、IL-17、BNP显著降低(P<0.05或P<0.01),IL-10、CD4+Treg、CD4+CD25+Treg显著升高(P<0.01);XFC组与其余2个治疗组无显著差异(P>0.05).结论:AA大鼠存在不同程度的心功能下降,新风胶囊在改善AA大鼠足跖肿胀度、关节炎指数的同时,也能改善其心功能,其机制可能是新风胶囊调节免疫反应,抑制异常炎症免疫反应对心肌细胞损害,从而改善心功能.     

佐剂关节炎大鼠心功能变化与细胞因子的相关性研究

目的:观察佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠一般情况、心功能变化、细胞因子以分析AA大鼠心功能变化与细胞因子的相关性.方法:将24只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组和模型组,每组12只,于模型组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(FCA)致炎,复制成AA模型.分别在造模前1天、致炎后第18天、给药后每3天检测2组大鼠体重、足跖肿胀度(E)及关节炎指数(AI),致炎48d后,通过小动物心功能仪检测心功能,采用ELISA法检测外周血中白介素-6(Interleukin 6,IL-6)、白介素-10(Interleukin 10,IL-10)、白介素-17(Interleukin 17,IL-17)和肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor alpha,TNF-α)水平.结果:①与正常组相比,模型组大鼠心功能各参数中心率(HR)、心脏质量指数(HI)、左室收缩末压(LVSP)显著升高(P<0.01),左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)显著降低(P<0.05或P<0.01);体重明显减轻、足跖肿胀度、关节炎指数明显增高(P<0.01);血清中TNF-α、IL-17、IL-6的表达水平明显升高(P<0.01或0.05),IL-10的表达水平则显著降低(P<0.01);②Spearman相关分析结果显示,AA大鼠心功能指标HI与体重、IL-10呈负相关,与足跖肿胀度、TNF-α呈明显正相关;LVEDP与足跖肿胀度、TNF-α呈明显正相关,而与IL-10呈明显负相关;LVSP与足跖肿胀度、TNF-α呈正相关;+dP/dtmax与足跖肿胀度呈明显正相关而与TNF-α呈正相关,IL-10呈负相关;HR与足跖肿胀度呈正相关而与TNF-α呈明显正相关,与IL-10呈明显负相关;并且以上相关性均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:AA大鼠在足跖肿胀度、关节炎指数升高的同时出现心功能下降,并且心功能变化与关节炎指数、足跖肿胀度、细胞因子呈相关性,提示炎症可能为AA大鼠心功能改变的重要因素.     

Foxp3磷酸化通过调控调节性T细胞功能对类风湿关节炎大鼠TNF-α抑制状态影响的分子机制

目的探究Foxp3磷酸化通过调节性T细胞功能改善类风湿关节炎大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抑制状态的分子机制。方法建立类风湿关节炎大鼠模型,分组为正常组(无特殊处理)、模型组(类风湿关节炎模型)和实验组(类风湿关节炎模型+尾静脉注射TNF-α阻滞剂进行治疗)。酶联免疫吸附(ELISA)检测炎症因子白介素10(IL-10)、白介素17(IL-17)和转化生长因子-β(TGF-β)水平;流式细胞术检测T细胞阳性率;Western Blot检测TNF-α表达以及试剂盒检测Foxp3磷酸酶活性。结果与正常组相比,模型组IL-10、TGF-β水平显著降低,IL-17水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,实验组IL-10、TGF-β的水平显著升高,IL-17的水平显著降低(P<0.05)。与正常组相比,模型组CD4^+CD25^+T细胞和CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞检测阳性率均显著降低(P<0.05);与模型组相比,实验组以上指标检测比率均显著增加(P<0.05);与正常组相比,模型组的TNF-α蛋白相对表达量显著增加(P<0.05);与模型组相比,实验组TNF-α蛋白的相对表达量显著降低(P<0.05)。与正常组相比,模型组的Foxp3磷酸酶活性显著降低(P<0.05);与模型组相比,实验组Foxp3磷酸酶活性显著升高(P<0.05)。结论通过尾静脉注射TNF-α阻滞剂治疗后,大鼠炎症反应水平、TNF-α蛋白表达及FOXP^3磷酸酶活性均降低,机制可能是Foxp3磷酸化通过调控调节性T细胞数量及炎症因子的变化参与对类风湿关节炎大鼠抑制状态,从而一定程度缓解类风湿关节炎不良症状。     

基于调节性T细胞研究雷公藤多苷片对佐剂性关节炎大鼠肺功能的影响

目的:观察雷公藤多苷片对佐剂性关节炎(AA)大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、肺系数(LI)、肺功能、细胞因子、调节性T细胞(Treg)及肺组织Foxp3表达的影响.方法:将48只大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TPT)组,每组12只,除NC组外的其余大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂(FCA)0.1ml致炎,致炎后第19d开始给药.NC组及MC组均给予生理盐水,其余5组分别给予MTX、TPT.观察各组大鼠各指标的变化.结果:①与NC组相比,MC组大鼠E、AI、LI、1秒内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺泡炎积分、TNF-α、ET-1表达明显升高(P<0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的最大呼气流量(FEF25)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)、IL-10、CD4+Treg、CD4+CD25+Treg、Foxp3的表达显著降低(P<0.01);②与MC组相比,各治疗组大鼠体质量、FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF及IL-10、Treg、Foxp3的表达升高(P<0.05或P<0.01);E、AI、LI、FEV1/FVC%及TNF-α、ET-1降低(P<0.05或P<0.01);③与MTX组相比,TPT组LI、肺泡炎积分及ET-1降低;体质量、FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF及血清IL-10、CD4+CD25+Treg、Foxp3表达升高(P<0.05或P<0.01).结论:AA大鼠存在肺组织形态变化和肺功能的降低,肺功能表现为通气功能及小气道功能障碍;TPT不但能抑制AA大鼠足跖肿胀度,降低关节炎指数,改善关节症状,也能显著降低肺组织炎症反应,其机制是通过上调血清IL-10、Treg及Foxp3的表达,下调血清TNF-α、ET-1及肺组织ET-1的表达,降低免疫复合物的沉积,减少炎症反应对肺组织的损伤,从而改善肺功能.     

大鼠CD4+CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差.目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达.方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组.荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达.结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因.表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达.     

骨髓间充质干细胞上调再生障碍性贫血患者CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的临床研究

目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17例慢性再生障碍性贫血(CAA)及10例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;(2)检测7例AA患者MSC治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达。结果:(1)AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显低于健康对照者(P<0.01);(2)SAA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达较CAA者低(P<0.05);(3)MSC治疗后AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达升高(P<0.05)。结论:(1)AA患者存在外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达减低,其表达异常可能参与AA的发病;(2)CD4+CD25+Foxp3+Treg表达在SAA患者更低,提示其表达水平可能可以作为判断AA病情轻重的指标;(3)MSC治疗可上调AA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达,为MSC纠正AA患者的免疫异常提供了临床依据。     

线粒体膜电位标记法检测新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠滑膜及胸腺细胞凋亡的影响

目的 :观察以线粒体膜电位 (MMP)标记法检测新风胶囊对佐剂性关节炎 (AA)大鼠滑膜及胸腺细胞凋亡的影响 ,探讨新风胶囊的作用机制。方法 :采用弗氏完全佐剂制成 AA大鼠模型 ,设立正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤 (MTX)对照组、雷公藤多甙 (TPT)对照组和新风胶囊 (XFC)治疗组。记录各组大鼠的关节炎指数 ,用线粒体膜电位 (MMP)标记法测定各组大鼠滑膜及胸腺细胞凋亡率。结果 :与治疗前相比 ,XFC组、TPT组及 MTX组治疗后大鼠的关节炎指数均显著降低 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;模型对照组滑膜及胸腺细胞凋亡率显著低于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ,XFC组细胞凋亡率显著高于模型对照组、TPT组及 MTX组 (P<0 .0 5或P<0 .0 1)。结论 :XFC与 MTX、TPT一样能降低 AA大鼠关节炎指数 ,在促进线粒体膜电位介导的滑膜及胸腺细胞凋亡方面 XFC优于 MTX和 TPT。促进滑膜细胞凋亡 ,抑制滑膜增生以及促进胸腺细胞凋亡 ,抑制自身免疫反应可能是 XFC降低关节炎指数、清除关节肿胀的机制之一     

雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠踝关节相关指标的影响

背景:类风湿性关节炎是常见的自身免疫性疾病。近年来雷公藤多甙广泛应用于类风湿性关节炎治疗,其治疗过程中对关节滑膜炎症的影响及对类风湿性关节炎的预防作用有待研究。目的:观察雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠踝关节相关指标的影响。设计:随机对照动物实验。单位:四川大学基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室。材料:选用20只健康清洁级雌性SD大鼠,体质量(200±15)g,鼠龄二三个月,由四川大学实验动物中心提供。氟氏完全佐剂为Sigma公司产品,雷公藤多甙为湖南株州制药三厂产品(批准文号:湘卫药准字(2005)第055172号。剂量:10mg/片)。方法:实验于2004-05/2006-03在四川大学组织胚胎学和神经生物学教研室完成。抽签法随机将大鼠分为正常组、模型组、预防组及治疗组,每组5只。正常组不造模,不给药物治疗;模型组于实验开始后,分别在各个大鼠左后足垫部皮下注射氟氏完全佐剂0.2mL,不给药物治疗;预防组造模方法同模型组,造模后第7天开始灌胃给予雷公藤多甙,用药剂量以大鼠体表面积换算公式计算,1次/d,每次30mg/kg,共7d;治疗组造模方法同模型组,造模后第19天开始灌胃给予雷公藤多甙,方式和疗程同预防组。①采用足跖容积法于造模前,造模后2,10,15,19,22,26d不同时间点观察记录大鼠原发侧与继发侧关节后肢肿胀程度。②根据其余未注射的3只肢体的病变程度及指间趾间关节是否发炎,评价大鼠关节炎指数(0分:肿胀度≤5%;1分:肿胀≤15%;2分:15%<肿胀≤30%;3分:30%<严重肿胀≤60%;4分:肿胀>60%),把每个关节的得分累计起来,即为每只大鼠的关节炎指数。③造模后28d取材,将大鼠灌注固定后,取完整踝关节切片,苏木精-伊红染色后观察大鼠踝关节滑膜组织的改变。主要观察指标:各组大鼠关节肿胀程度、关节炎指数及踝关节滑膜组织学观察。结果:大鼠20只均进入结果分析。①造模2d后,除正常组外,其他各组大鼠原发侧关节均出现明显肿胀,造模2～26d各时间点大鼠足跖容积均大于正常组(t=2.315～3.041,P<0.05);预防组大鼠造模后10,15,19,22,26d原发侧足跖容积小于模型组(t=2.064～2.683,P<0.05);治疗组大鼠造模后22,26d原发侧足跖容积小于模型组(t=2.112～2.578,P<0.05)。造模15d后,模型组和治疗组大鼠继发侧足跖容积均大于正常组(t=2.201～2.546,P<0.05),预防组大鼠造模15,19,22,26d继发侧足跖容积小于模型组(t=2.373～2.425,P<0.05);治疗组大鼠造模26d继发侧足跖容积小于模型组(P<0.05)。②造模14d,模型组大鼠关节炎指数为(8.3±2.0)分,预防组为(0.4±0.95)分,预防组较模型组明显降低(t=2.64,P<0.05);造模26天,治疗组为(7.3±1.3)分,明显低于模型组(11.2±0.9)分(t=3.26,P<0.05)。③正常组大鼠踝关节腔内干净,关节软骨表面光滑,软骨无退行性变,滑膜组织无增生。模型组大鼠原发侧踝关节滑膜增生,滑膜细胞数量增多,体积增大,排列为多层;滑膜下组织水肿,充血,炎性细胞浸润。模型组继发侧继发性病变表现为滑膜增生,踝关节滑膜下组织水肿。预防组原发侧踝关节滑膜与模型组比较,滑膜炎症反应减弱,增生程度减轻。继发侧踝关节滑膜未见明显增生。治疗组原发侧及继发侧踝关节滑膜与模型组比较,滑膜组织增生减少,炎症反应减轻。结论:雷公藤多甙能显著减轻大鼠足跖关节肿胀度,关节炎症指数,减轻踝关节滑膜病理改变,且能预防继发性病变的出现。     

佐剂性关节炎大鼠载脂蛋白高密度脂蛋白的变化及意义

目的观察佐剂关节炎(AA)大鼠载脂蛋白AI(ApoAI)、高密度脂蛋白(HDL)和血管内皮生长因子(VEGF)、E选择素(E-selection)的变化及相关性研究。方法将27只雄性大鼠随机分为正常组、模型组,分别为模型组15只,正常组12只,用弗氏完全佐剂(CFA)向模型组大鼠右后足跖皮内注射0.1 ml诱发大鼠产生关节炎,观察各组大鼠ApoAI、HDL和VEGF、E选择素的变化,并作相关性分析。结果(1)ApoAI模型组与正常组升高率分别为93.33%和50.00%,HDL模型组与正常组升高率分别为86.67%和41.67%,模型组升高率均显著高于正常组(P<0.05)。与正常组相比,模型组VEGF、E选择素、IL-1β、CRP显著升高(P<0.01或P<0.05);IL-10显著降低(P<0.01)。(2)模型组ApoAI、HDL与VEGF、E选择素、IL-1β呈显著负相关(P<0.05或P<0.01),与足跖肿胀度、关节炎指数、CRP呈显著正相关(P<0.05或P<0.01),与IL-10无明显相关。结论AA大鼠在足跖肿胀的同时出现ApoAI、HDL的升高及血管内皮细胞的损伤,提示免疫应激导致AA大鼠ApoAI、HDL的改变,并与疾病的活动度、细胞因子的紊乱、血管内皮的损伤密切相关。     

佐剂性关节炎大鼠行为和心肌超氧化物歧化酶、脂质过氧化物的变化及其相关性研究

目的观察佐剂性关节炎大鼠行为和心肌SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(脂质过氧化物)的变化,探讨AA大鼠行为改变的机制。方法用弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,FCA)诱发大鼠产生关节炎,观察AA大鼠行为和心肌SOD、MDA的变化以及足跖肿胀度、关节炎指数(arthritis index,AI)的变化,并进行相关性分析。结果(1)与健康对照组相比,模型对照组大鼠自主活动次数明显减少、跳台训练期和测试期的错误次数均明显增多、大鼠跳下平台的时间(step down latency,SDL)缩短而反应时间(escape la-tency,EL)延长;心肌组织SOD含量明显降低,而MDA明显升高。(2)AA大鼠自主活动次数、SDL与足跖肿胀度、关节炎指数、MDA呈负相关,与SOD呈正相关;EL、训练期和测试期的错误次数与足跖肿胀度、关节炎指数、MDA呈正相关,与SOD呈负相关。结论免疫应激可出现AA大鼠行为改变及心肌组织SOD、MDA的变化,其行为改变与心肌SOD、MDA的变化显著相关,提示AA大鼠心肌SOD、MDA的变化可能是其行为改变的机制。     

佐剂关节炎大鼠血小板参数和细胞因子的变化及其相关性研究

目的观察佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠血小板参数(血小板计数PLT、血小板压积PCT、血小板平均体积MPV、血小板分布宽度PDW)、细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)的变化并对其行相关性分析。方法将16只SD雄性大鼠随机分为健康对照组、模型组,每组8只,用弗氏完全佐剂(Freund's com-plete adjuvant,CFA)向模型组大鼠右后足跖皮内注射0.1ml诱发大鼠产生关节炎,观察两组大鼠血小板参数(PLT、PCT、PDW、MPV)和细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)的变化。结果与健康对照组相比,模型组大鼠血小板参数PLT、PCT、IL-1β、TNF-α显著升高,IL-10降低(P<0.05或P<0.01)。AA大鼠的血小板参数PLT、PCT与IL-1β、TNF-α、足跖肿胀度、关节炎指数呈正相关,与IL-10呈负相关(P<0.01或P<0.05)。结论佐剂关节炎大鼠PLT、PCT是升高的,且与IL-1β、TNF-α、IL-10、足跖肿胀度、关节炎指数具有正相关性;升高机制可能与致炎因子IL-1β和TNF-α升高,抑炎因子IL-10下降有关。     

Developments in the rat adjuvant arthritis model and its use in therapeutic evaluation of novel non-invasive treatment by SOD in Transfersomes.

The aim of this study was firstly to refine a rat model of arthritis, the adjuvant arthritis (AA) model, by studying the time course of the disease, introducing new evaluation methods such as haematological and biochemical parameters in order to identify the main stages of the disease. An optimisation of treatment schedule and evaluation criteria was developed. This refinement provided novel non-invasive anti-inflammatory treatment of the AA with SOD by using mixed lipid vesicles specially developed for transdermal delivery, Transfersomes (Tfs), this being the second major aim. The time course of AA includes a first stage: 1 day after the disease induction, the induced paw volume more than doubled and the paw circumference increased by approx. 50%. Two weeks later, another stage occurred where the disease shifted from the local arthritis form towards polyarthritis: an additional increase of volume and circumference of the induced and non-induced paws, occurred. The animals also started to loose weight around day 14 after the disease induction. Radiographic observable lesions increased correspondingly. Treatment of animals, started at day 1 after induction, by epicutaneous application of SOD-Tfs showed that 1 mg SOD/kg body weight is more efficient than 0.66 mg SOD /kg body weight. As a positive control, SOD liposomes intravenously injected were used for comparison and confirmed the biological efficiency of epicutaneously applied SOD in Tfs. SOD solution and empty Tfs epicutaneously applied exerted no effect. In addition, epicutaneous application of SOD-Tfs used prophylactically was able to suppress the induced rat paw oedema. Radiographic images showed less joint lesions in SOD-Tfs treated animals in comparison with control and placebo treated rats. It was shown for the first time that SOD incorporated into Tfs and applied onto a skin area not necessarily close to the inflamed tissue is able to promote non-invasive treatment of induced arthritis.     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的观察新风胶囊对佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响。方法以弗氏完全佐剂复制出大鼠AA模型,50只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤(MTX)对照组、雷公藤多甙(TPT)对照组和新风胶囊(XFC)治疗组,各组10只。分别采用电子显微镜技术、免疫组化法及流式细胞术检测了各组大鼠滑膜细胞凋亡情况。结果电镜观察显示,新风胶囊组滑膜细胞核染色质呈凝块状,边聚呈月芽状,胞浆内及胞膜外可见凋亡小体;免疫组化法观察显示,与模型组比较,XFC组FasL的表达显著增加,bcl2表达显著减少(P<0.05);与MTX组、TPT组比较,XFC组上述指标变化差异均无显著意义(P>0.05)。流式细胞术观察表明,XFC组滑膜细胞凋亡率显著高于模型组、TPT及MTX组(P<0.05)。结论新风胶囊通过促进滑膜细胞凋亡,抑制滑膜增生,从而消除关节滑膜肿胀,降低关节炎指数。     

参灵方防治佐剂性关节炎大鼠药源性胃黏膜损伤的实验研究

目的探讨参灵方对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠药源性胃黏膜损伤的防治作用。方法建立大鼠AA模型,造模后将出现二次反应的大鼠随机取48只分为模型组、复合模型组、雷尼替丁组、参灵方小剂量组、参灵方中剂量组、参灵方大剂量组,加上空白对照组,每组8只,共计7组。雷尼替丁组予雷尼替丁30 mg/(kg.d)灌胃,参灵方小剂量组、中剂量组、大剂量组分别予参灵方3.5 g、7.0 g、14.0 g/(kg.d)灌胃,空白对照组、模型组和复合模型组分别予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,均为14 d。计算治疗前后大鼠足爪肿胀率、关节炎指数及胃黏膜损伤指数、各灌药组对胃黏膜损伤的抑制率、胃黏膜的病理学变化,并进行组间比较。结果给药前后模型组、复合模型组、雷尼替丁组、参灵方各剂量组组间关节炎指数、足爪肿胀率差异均无统计学意义(P>0.05);给药前后各组与空白对照组比较,足爪肿胀率差异均有统计学意义(P<0.05);参灵方治疗后大鼠足爪容积、关节炎指数较模型组、复合模型组均有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。雷尼替丁组、参灵方小剂量、中剂量、大剂量组胃黏膜损伤指数与复合模型组比较差异均有统计学意义(P<0.01),参灵方小剂量、中剂量组与雷尼替丁组比较胃黏膜损伤指数差异无统计学意义(P>0.05),而参灵方大剂量组与雷尼替丁组比较差异有统计学意义(P<0.05)。雷尼替丁组、参灵方小剂量、中剂量、大剂量组胃黏膜损伤抑制率分别为74.05%、66.81%、74.41%、55.70%,参灵方小剂量组、大剂量组与中剂量组及雷尼替丁组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论参灵方对AA大鼠关节无明显影响,但对药源性胃黏膜损伤有保护作用。     

辛夷挥发油对佐剂性关节炎大鼠足肿胀及关节组织中前列腺素E2的影响

背景进一步验证辛夷挥发油所具有抗非特异性炎症的作用,为此实验的起因.目的探讨辛夷挥发油对大鼠佐剂性关节炎的作用.设计分层抽样,随机分组对照,量效分析.单位成都中医药大学药学院药理教研室.材料实验于1999-02/04在成都中医药大学药理实验室完成.选用Wistar大鼠120只,按体质量分层后随机分组.方法Wistar大鼠分成4组模型对照组,辛夷挥发油0.28 mL/kg及0.14mL/kg组,地塞米松25 mg/kg组.各组动物均在足跖部皮内注射完全弗氏佐剂(0.1 mL/只)致敏,以诱发多发关节炎.依给药方案不同,实验分3批次进行,各个批次每组大鼠10只.第1批次在致敏前3 d开始给动物灌药,连续给药3 d,观测药物对佐剂引起的急性非特异性炎症的作用;第2批次在致敏后第8天开始给动物灌药,连续给药7 d,观测药物对继发病变的预防作用;第3批次在致敏后第19天开始给动物灌药,连续给药7 d,观测药物对继发病变的治疗作用,.测量大鼠足肿胀程度及距小腿(踝)关节组织中前列腺素E2含量.主要观察指标①辛夷挥发油对佐剂引起的急性非特异性炎症的作用.②对佐剂性关节炎的预防作用.③对佐剂性关节炎的治疗作用.结果①辛夷挥发油能极显著抑制原发性足肿胀.②预防给药时辛夷挥发油0.28 mL/kg,0.14 mL/kg组均能极显著地抑制继发性关节肿胀[(0.231±0.065)mL,(0.206±0.082)mL],减少肿胀组织中前列腺素E2含量[(0.133 2±0.057 2),(0.138 5±0.042 6)A 278nm].③治疗性给药时,辛夷挥发油0.14 mL/kg组对继发性关节炎性肿胀无明显作用,但能显著减少肿胀组织中前列腺素E2含量;辛夷挥发油0.28 mL/kg组对上述参数有极显著或显著作用.结论辛夷挥发油对完全弗氏佐剂引起的原发性足肿胀和继发性关节炎都有抑制作用,预防作用优于治疗作用,治疗作用时大剂量组效果较好.     

Effects and mechanisms of catechin for adjuvant arthritis in rats

The present study was carried out to investigate the effects of catechin on adjuvant arthritis (AA) in the rat and its possible mechanisms of action. AA was induced by metatarsal footpad injection with complete Freund’s adjuvant in male Sprague-Dawley rats. The secondary inflammatory reaction was evaluated through assessment of hind paw swelling, polyarthritis index, and pain response. Proliferation of synoviocytes and the activity of interleukin-1 were examined by 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Tumor necrosis factor-α, prostaglandin E₂ (PGE₂), and cyclic adenosine monophosphate levels in synoviocytes were measured by radioimmunoassay. The PGE₂ receptor, EP₂, was analyzed by Western blot analysis. Intragastric administration of catechin (60 and 120 mg/kg) significantly suppressed secondary inflammatory paw swelling, pain response, and polyarthritis index. It also inhibited production of interleukin-1, tumor necrosis factor-α, and PGE₂ and increased cyclic adenosine monophosphate levels in rats with AA. In the immunoblot analysis, catechin could upregulate expression of EP₂ in the synoviocytes of rats with AA. The results showed that catechin reduced secondary inflammation in rats with AA; this outcome reflects its ability to mediate cAMP levels, upregulate expression of EP₂, and inhibit secretion of proinflammatory cytokines in rats with AA.     

Lymphocyte subsets and mitogen induced proliferation in adjuvant arthritis. Part I. Migration and function of the peripheral T lymphocytes.

Adjuvant arthritis (AA) was used as an animal model of rheumatoid arthritis in this study. Seventy 10-week-old inbred female rats of both Long-Evans rats (LE, high responder of adjuvant arthritis) and Sprague-Dawley rats (SD, low responder of adjuvant arthritis) were inoculated with adjuvant. Using monoclonal antibodies, we demonstrated that redistribution, migration, or an imbalance of T lymphocytes rather than the change of total T cells are involved in the pathogenesis of AA. After the adjuvant injection, the lymphocytic proliferative responses of LE and SD rats to phytohemagglutin (PHA) had no significant difference, whereas the response of LE rats to concanavalin A (ConA) was significantly lower than that of SD rats. In addition, a highly significant positive correlation was found between the absolute numbers of helper T cells and the lymphocytic proliferative response to PHA, and between absolute numbers of suppressor T cells and the lymphocytic proliferative response to Con A. We postulated high responder strain LE would have a defect in suppressor T lymphocytes leading to severe arthritis, while in low responder strain SD, adjuvant-activated suppressor T lymphocytes might reduce the severity of arthritis.