多重耐药铜绿假单胞菌整合子中发现2种新基因盒组合形式

目的研究多重耐药铜绿假单胞菌携带整合子的类型及耐药基因组合。方法 PCR检测多重耐药铜绿假单胞菌整合酶基因intI 1、intI 2、intI 3,Ⅰ类整合子恒定区基因qacEΔ1-sul1及可变区基因,扩增产物经胶回收、限制性片段长度多态性(RFLP)分析及基因测序分析。结果 30株临床分离铜绿假单胞菌中16株(53.3%)Ⅰ类整合酶基因及恒定区qacEΔ1-sul1基因扩增阳性,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因。Ⅰ类整合子可变区共检出5种不同的耐药基因组合形式,含有对氨基糖苷类、β-内酰胺类和喹诺酮类抗菌药耐药的基因,其中有2种为新型基因盒组合形式,包括aacA4-VIM2和aadA2-OXA10-aacA4-blaIMP-9-aatI1,GenBank登录号分别为GQ890658和GU122165,另外3种与GenBank登录号分别为FJ917747、FJ817423、GU367339的序列基本吻合。结论多重耐药铜绿假单胞菌携带的整合子主要为Ⅰ类整合子,在Ⅰ类整合子上首次发现2种新型基因盒组合形式。     

1株携带新型耐药基因盒Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌分析

目的对1株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌进行基因盒整合子分析。方法利用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对整合子进行检测及分型,用长片段PCR(Long-PCR)扩增整合子的可变区并进行DNA测序,分析整合子可变区含有的耐药基因。结果该株铜绿假单胞菌PA27携带Ⅰ类整合子,其可变区大小为3.0kb,含有编码对氨基糖苷类、氯霉素和β-内酰胺类抗生素耐药的基因,经与gene bank数据库进行同源性分析(BLAST),确定为一种新型基因盒组合形式:aac(6′)-Ⅱ—cmlA8—OXA-10,gene bank登录号为EU708817。结论本菌株携带新型基因盒组合形式的Ⅰ类整合子为天津地区首次报道。     

携带新型耐药基因盒组合形式Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌耐药特性分析

目的分析1株临床分离携有多重耐药基因盒整合子的铜绿假单胞菌的耐药特性。方法应用PCR-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）对整合子进行检测及分型，用长片段PCR（Long—PCR）扩增整合子的可变区并进行DNA测序，分析整合子可变区含有的耐药基因。同时应用PCR扩增金属酶基因和oprD2基因。结果该株铜绿假单胞菌PA27携带Ⅰ类整合子，其可变区大小为3.0kb，含有编码对氨基糖苷类、氯霉素和β内酰胺类抗生素耐药的基因，经与GenBank数据库进行同源性分析（BLAST），确定为一种新型基因盒组合形式：aac（6’）-Ⅱ-cm1A8-OXA-10，GenBank登录号为EU708817。oprD2基因检测阳性，未检出IMP-1、VIM-2和IMP-2型金属酶基因。结论该地区首次报道携带新型基因盒组合形式的Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌，并携有多重耐药基因，应引起临床高度重视。     

检出3株携带新型基因盒组合形式Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌

目的 研究整合子介导铜绿假单胞菌耐药及多重耐药的机制。方法 整合子PCR法扩增整合子的可变区;联合限制性片段长度多态性分析（RFLP）和DNA测序技术分析整合子可变区的耐药基因。结果 98株南京地区铜绿假单胞菌中有35株（35．7％）整合子可变区扩增阳性,扩增片段大小1．0-4．0kb。共检出6种不同的可变区,含有编码对氨基糖苷类、β-内酰胺类和磺胺类抗菌药耐药的基因,其中有3例为新型基因盒组合形式,包括aadA6-orfD、aadB-blaP1和aadB-aac（6′）-Ⅱa-blaCARB-8,Genbank基因号分别为DQ 091179、DQ 141316和DQ 288251。结论 整合子参与了铜绿假单胞菌的耐药和多重耐药,主要携带氨基糖苷类耐药基因,首次报道了3种携带新型基因盒组合形式的Ⅰ类整合子。     

广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子及其携带耐药基因的研究

目的研究广东地区医院分离铜绿假单胞菌整合子携带现状及其耐药基因与菌株耐药的关系。方法采用基因扩增法,对广东省5所医院临床分离的铜绿假单胞菌三类整合子及耐药基因进行了检测,并检测阳性菌株整合子可变区。结果在30株铜绿假单胞菌中检出23株携带Ⅰ类整合子,有7株携带Ⅱ类整合子,有1株携带Ⅲ类整合子的基因。随机选取三类整合子携带菌各1株进行测序及序列分析,Ⅰ类整合子得到aac-3+aad2的组合形式;Ⅱ类整合子得到CmlA耐药基因盒;Ⅲ类整合子得到bla-MAP耐药基因盒。结论广东地区医院分离铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子的检出率最高,检出1株携带Ⅲ类整合子基因。     

整合子基因盒系统与铜绿假单胞菌多重耐药的研究进展

在抗生素广泛使用后不久,人们就开始对细菌耐药性展开研究.1943年青霉素投放市场后,1947年美国亚特兰大疾病控制和防疫中心、英国劳动服务公共健康传染病检测中心就开始可耐药性传播及监测的相关工作,结果[1]显示,随着抗生素生产规模的扩大,应用领域的扩展,细菌耐药性问题日益突显.     

南京地区铜绿假单胞菌的整合子流行性调查

目的调查南京地区铜绿假单胞菌的整合子流行情况,并分析整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性。方法收集98株南京地区临床分离的铜绿假单胞菌,K-B法测定其药敏情况,简并引物PCR法扩增整合子的整合酶基因,对阳性PCR产物采用HinfⅠ内切酶作限制片段长度多态性(RFLP)分析进行整合子分类。结果98株铜绿假单胞菌对哌拉西林等14种抗菌药的耐药率从14.3%到82.7%。40.8%(40/98)的铜绿假单胞菌中检出整合子;PCR-RFLP结果显示均为Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。结论Ⅰ类整合子较广泛地存在于南京地区铜绿假单胞菌中;整合子与铜绿假单胞菌的耐药和多重耐药具有相关性。     

整合子系统介导铜绿假单胞菌多重耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa)原称绿脓杆菌(以下均以PA表示)。在自然界分布广泛,为土壤中存在的最常见的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在。铜绿假单胞菌广泛存在于医院环境中,并成为医院感染的主要病原菌之一,具有易定植、易变异和多耐药的特点[1,2]。由其引起的医院获得性肺炎(HAP)、呼吸机相关性肺炎(VAP)约占10%～35%,已成为医院获得性肺炎的主要致病菌。     

一株铜绿假单胞菌新型整合子检测与分析

目的了解临床分离铜绿假单胞菌PA 091701整合子携带耐药基因情况,探讨新的基因盒排列与多重耐药关系。方法药物敏感试验采用K-B纸片扩散方法,整合子及耐药基因盒的检测采用PCR方法。结果在所测试抗菌药物中,PA091701表现对多粘菌素敏感,对亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦中介,对其它种类抗菌药物耐药;基因盒检测结果显示,PA091701所携带aac（6）’IIa、adA13和oxA10a基因盒为首次出现新的基因盒排列方式,并已登录Gen BankJ：N118546。结论 PA091701携带的基因盒与其对氨基糖苷类、β-内酰胺类耐药有关,表明其多重耐药性除整合子外,还存在其它耐药机制。     

一株铜绿假单胞菌新型整合子检测与分析

目的了解临床分离铜绿假单胞菌PA 091701整合子携带耐药基因情况,探讨新的基因盒排列与多重耐药关系。方法药物敏感试验采用K-B纸片扩散方法,整合子及耐药基因盒的检测采用PCR方法。结果在所测试抗菌药物中,PA091701表现对多粘菌素敏感,对亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦中介,对其它种类抗菌药物耐药;基因盒检测结果显示,PA091701所携带aac(6)’IIa、adA13和oxA10a基因盒为首次出现新的基因盒排列方式,并已登录Gen BankJ:N118546。结论 PA091701携带的基因盒与其对氨基糖苷类、β-内酰胺类耐药有关,表明其多重耐药性除整合子外,还存在其它耐药机制。     

铜绿假单胞菌整合子分布及基因盒携带情况分析

目的 了解烟台地区临床分离铜绿假单胞菌整合子的分布及耐药基因盒携带情况,探讨整合子与菌株耐药的相关性.方法 菌株鉴定及药敏试验采用VITEK 2全自动细菌分析仪.整合子及可变区检测采用PCR法,并采用限制性片段长度多态性分析和测序分析进一步确定可变区耐药基因盒类型.结果 在100株铜绿假单胞菌中38株(38%)检出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子.Ⅰ类整合子常见基因盒类型为aac(6′)Ⅱ-aadA13-clmA8-oxA10a和aac(6′)Ⅱ-aadA13-oxA10a,其中aac(6′)Ⅱ-aadA13-oxA10a基因盒为首次出现的新基因盒排列方式,并已登录Genbank:JN118546.结论 烟台地区铜绿假单胞菌整合子类型分布为Ⅰ类整合子,整合子携带菌株与铜绿假单胞菌耐药密切相关.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌整合子的鉴定与分析

目的 鉴定并分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPa)中整合子及其携带耐药基因盒的特点。 方法 收集2003～2007年临床分离IRPa共74株,用PCR-RFLP筛查携带整合酶的菌株,并对整合子进行分类。整合酶阳性菌株用普通PCR扩增检测整合子的qacE△1sul1基因、整合子可变区及膜微孔蛋白基因oprD2,并对整合子可变区扩增产物测序分析。 结果 74株菌中有16株菌（21.6%）携带整合酶基因,均为Ⅰ类整合子;有14株检出整合子可变区,经测序共得到7种整合子耐药基因盒的组合形式,其中有4种为首次发现,在GenBank上的登录号分别为FJ917747、FJ817422、FJ655384和FJ817423;另携带IMP-9基因2株。16株IRPa中有8株oprD2基因检测为阳性,其余为阴性。 结论 在本地区临床分离的IRPa中,仅2株菌的Ⅰ类整合子中携带的IMP-9与亚胺培南的耐药有关,其他菌株的整合子中携带的基因盒主要是介导对氨基糖苷类与β内酰胺类抗生素的耐药。金属酶的产生并不是其对亚胺培南耐药的主要原因。     

739株革兰阴性杆菌中I类整合子的分布及其基因盒结构分析

目的 了解I类整合子在合肥地区革兰阴性杆菌中的分布状况,研究其整合的基因盒结构。 方法 PCR扩增I类整合子整合酶基因及其基因盒可变区和3′保守区,可变区产物进行测序分析。 结果 739株临床分离革兰阴性杆菌中,I类整合酶基因（IntI1）阳性菌株为399株（54.0%）;随机抽取的80株IntI1阳性菌中64株扩增出长度不等的9种基因盒产物,它们在所测的细菌中大致有17种不同的组合模式;77株扩增出3′保守区预期产物。出现频率较高的2种I类整合子基因盒可变区产物分别为dfrA15和aadA2,片段最长的基因盒可变区产物为aadB、aadA1和cmlA6。 结论 I类整合子在合肥地区临床分离革兰阴性杆菌中广泛分布,其整合的基因盒种类多样且在不同菌株中呈多种组合模式。     

老年病房铜绿假单胞菌感染耐药性变异及相关因素分析

目的统计分析老年病房铜绿假单胞菌感染危险因素、耐药性的变化。方法对我院老年综合病房2007年1月-2008年12月间三次以上培养铜绿假单胞菌（PA）生长的药敏结果进行回顾分析。结果有78例PA阳性,其中多重耐药铜绿假单胞菌（MDRP）27株占34.6%,泛耐药PA 8株占MDRP29.6%。结论PA是我院老年病房的首要致病菌,PA经抗生素治疗可转为MDRP及泛耐药PA,MDRP及泛耐药PA也可回转为对某些抗生素敏感的PA。     

不同年代铜绿假单胞菌1型整合子结构比较

目的研究1992-1996年和2003-2005年两个时间段90份铜绿假单胞菌1型整合子结构，比较其结构差异，以了解不同年代1型整合子变化趋势。方法用常规和长片段PCR方法扩增1型整合子及耐药基因，并对PCR产物进行测序和GenBank比对分析。结果41份1992—1996年间样本有13份检出1型整合子结构，长片段PCR扩增1型整合子DNA平均长度为1868bp，平均包含2个耐药基因，包括qaeE△1（n=6）、sul1（n=14）、aadA1（n=2）、aadB（n=1）、PSE-1（n=2）和tetA（n=1）等6种耐药基因，形成5种耐药基因盒组合。49份2003-2005年间样本中有19份检出1型整合子结构，长片段PCR扩增产物平均长度为3383bp，平均包含3．6个耐药基因，包括qaeE△1（n=18）、sul1（n：25）、aadA1（n=6）、aadB（n=7）、aaeA4（n=2）、PSE-1（n=3）、VEB-1（n=4）、OXA10（n=1）、cm1A（n=1）和tetA（n=2）10种耐药基因，形成9种耐药基因盒组合。结论根据整合子碱基数量和所携带耐药基因盒数量，发现2003--2005年间检出的1型整合子结构比1992—1996间检出的复杂程度增加。