利用自体富血小板血浆构建凝胶生物细胞支架的实验研究

目的分析富血小板血浆（PRP）凝胶作为组织工程细胞支架的可行性。方法抽取兔静脉血Eendersberg法制备PRP,测定PRP中血小板浓度,将PRP经激活剂激活后制备PRP凝胶生物细胞支架（PRG）,并进行扫描电镜观察。将兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）与PRG共培养,消化后将BMSCs接种再培养,观察BMSCs活性。结果通过Lendersberg两步离心法顺利制得PRP,血小板浓度与全血相比增加了3．74倍,PRP经过激活后5—10min形成胶冻状PRG,扫描电镜结果显示其具有复杂的立体网状结构,孔隙直径约50—100微米。兔BMSCs在PRG中培养3天后扫描电镜观察结果显示在PRG三维结构中,兔BMSCs在纤维素支架上附着良好,培养1周后将兔BMSCs消化分离后再接种培养,兔BMSCs生长良好。结论自体富血小板血浆凝胶生物细胞支架来源于自体,无免疫源性,本身含丰富的细胞生长因子,同时具有完整的三维结构和良好的组织相容性,是一种优良的组织工程细胞支架,具有良好的应用前景。     

富血小板血浆在口腔颌面外科中的应用

富血小板血浆（platelet-richplasma，PRP）是把自体全血经过离心、分离而得到的血液制品，含有多种大量的自体生长因子，富含较高浓度的血小板，实质上是自体源性、浓缩的含血小板的血浆，故亦称之为血小板凝胶，富生长因子血小板或自体浓缩血小板。PRP能够释放多种大量的高浓度生长因子，主要有血小板衍化生长因子（PDGF）、转化生长因子-β（TGF-β）、成纤维细胞生长因子（FGF）和胰岛素样生长因子（IGF）等。     

骨组织及软组织修复作用中富血小板血浆的制作及其原理

目的:富血小板血浆(platelet-richplasma,PRP)含有多种高浓度生长因子,可促进骨愈合及软组织修复。探讨通过离心法制作富血小板血浆的原理,为临床利用PRP修复组织缺损提供实验依据。方法:从肘前静脉取血5mL,选用4种不同离心次数、离心力和离心时间的PRP制作方法,制作的PRP均为0.7mL,对比研究各种PRP和全血中的血小板计数和活化率。结果:全血标本的平均血小板计数是214.41×109L-1。在不同方法制作的PRP中,血小板计数均明显高于全血,分别是629.95×109L-1(Anitua法),1093.00×109L-1(Petrungaro法),1323.80×109L-1(Landesbergo法)和1347.05×109L-1(Aghaloo法),是全血血小板计数的2.92,5.10,6.17和6.28倍。PRP中血小板计数与全血血小板计数呈正相关,相关系数分别为rAnitua=0.79,rPetrungaro=0.83,rLandesberg=0.93和rAghaloo=0.89。活性检测,CD62P的表达在全血中是0.85%,Anitua法4.87%,Petrungaro法9.79%,Landesberg法6.05%,Aghaloo法9.12%。PRP的CD62P表达率与全血的CD62P表达率以及各PRP之间均呈显著性差异。结论:二次离心法制作的PRP其血小板浓度和血小板回收率显著高于一次离心法。在这4种方法中,以Landesberg法制作的PRP中血小板浓度高、活化率小。     

不同抗凝剂和激活剂联合应用对富血小板血浆凝胶释放生长因子影响的比较

背景:富血小板血浆凝胶生物效应的发挥受多种因素的影响,如富血小板血浆制备的方法、血小板的完整性、抗凝剂及激活剂的选择等.目的:比较不同抗凝剂与激活剂联合应用对富血小板血浆凝胶释放生长因子影响的差异.方法:抽取新西兰兔全血制备富血小板血浆,再用牛凝血酶和Ⅰ型胶原激活,实验共分4组:依地酸钠钙-凝血酶组,依地酸钠钙-Ⅰ型胶原组,肝素-凝血酶组,肝素-Ⅰ型胶原组.分别计数各组富血小板血浆血小板数目.在激活富小板血浆后2 h,1 d,3 d,5 d使用酶联免疫吸附法测定空白对照组(全血)和各组富血小板血浆凝胶中转化生长因子β1及血小板源性生长因子AB的浓度,比较各组间2种生长因子释放方式和浓度的差异.结果与结论:依地酸钠钙-Ⅰ型胶原组合制备的富血小板血浆凝胶中转化生长因子β1和血小板源性生长因子AB累积释放量最大(P < 0.05);使用Ⅰ型胶原作为激活剂的富血小板血浆凝胶中上述2种生长因子的释放方式均为持续缓慢,并且转化生长因子β1的释放与激活时间呈正相关关系(r=0.873);而凝血酶激活的富血小板血浆凝胶释放生长因子的速度则较为快速(P > 0.05).结果证实,依地酸钠钙与Ⅰ型胶原制备的富血小板血浆凝胶所释放生长因子的浓度较大.     

富血小板血浆成分及其作用的研究新进展

富血小板血浆(PRP)是将新鲜全血通过特定离心方式得到的含高浓度血小板的血浆,是1种血小板浓缩物。现已知PRP富含多种生长因子,是自体生长因子库。作为自体血液成分,PRP输注在临床辅助治疗方法中,与其他重组生长因子或干细胞疗法相比更安全、更实际。目前PRP已广泛用于整形外科、口腔颌面外科及难愈合伤口和骨缺损的修复。但关于PRP中主要生长因子的作用、血小板的有效含量及最佳浓度和PRP中白细胞的临床效应等问题,至今并不完全明确,本文将对PRP中的主要成分及作用的最新研究进展做一综述,为富血小板血浆的标准化制备及临床应用现状做一理论总结。     

PRP在骨修复与再生中的研究进展

富血小板血浆(PRP)是从全血中提取出来的含有超过基线水平数倍的血小板浓缩物。PRP的概念始于血液学领域,20世纪70年代血液病学专家提出PRP这一术语,目的是描述最初被用来治疗血小板减少症患者而输注的血小板计数高于外周血的血浆[1]。进一步的研究发现,当PRP被激活后,其细胞质内含有的α颗粒和致密颗粒会释放出大量的生长因子和细胞因子,如血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)-1等,通过多种信号通路介导细胞增殖分化、胶原等细胞外基质合成、新生血管形成[2],进而促进肌腱、韧带、周围神经、软骨和骨等多种组织的修复与再生。     

骨组织及软组织修复作用中富血小板血浆的制作及其原理

目的：富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)含有多种高浓度生长因子，可促进骨愈合及软组织修复。探讨通过离心法制作富血小板血浆的原理，为临床利用PRP修复组织缺损提供实验依据。方法：从肘前静脉取血5mL，选用4种不同离心次数、离心力和离心时间的PRP制作方法，制作的PRP均为0．7mL，对比研究各种PRP和全血中的血小板计数和活化率。结果：全血标本的平均血小板计数是214．41&;#215;10^9L～^-1。在不同方法制作的PRP中，血小板计数均明显高于全血，分别是629．95&;#215;109L～^-1(Anitua法)，1093．00&;#215;109L～^-1(Petrungaro法)，1323．80&;#215;109L～^-1(Landesbergo法)和1347．05&;#215;109L～^-1(Aghaloo法)，是全血血小板计数的2．92，5．10，6．17和6．28倍。PRP中血小板计数与全血血小板计数呈正相关，相关系数分别为rAnitua=0．79，rpetrungaro=0．83，rLandesberg=0．93和rAghaloo=0．89。活性检测，CD62P的表达在全血中是0．85％，Anitua法4．87％，Petnmgaro法9．79％，Landesberg法6．05％，Aghaloo法9．12％。PRP的CD62P表达率与全血的CD62P表达率以及各PRP之间均呈显著性差异。结论：二次离心法制作的PRP其血小板浓度和血小板回收率显著高于一次离心法。在这4种方法中，以Landesberg法制作的PRP中血小板浓度高、活化率小。     

过期单采血小板来源富血小板血浆的制备及体外功能研究

目的探讨过期单采血小板(SDP)制备富血小板血浆(PRP)的方法及在体外对内皮细胞迁移和成血管能力的影响。方法采用过期SDP使用离心浓缩法制备PRP,并采用凝血酶法激活PRP,应用ELISA试剂盒测定血小板衍生生长因子-AB(PDGF-AB)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)水平,通过划痕试验和成血管试验评估其对内皮细胞的迁移和成血管能力的影响。结果过期SDP来源的PRP和SDP中血小板浓度分别为(1 723±352)×10~9/L和(398±52)×10~9/L,前者更高,差异有统计学意义(P0.05);ELISA检测PDGF-AB、VEGF和TGF-β_1水平,在过期SDP来源的PRP中分别为(43.23±15.13)ng/mL、(327.61±72.55)pg/mL、(77.13±17.27)ng/mL;在SDP中分别为(7.16±2.49)ng/mL、(136.91±25.97)pg/mL、(18.90±4.59)ng/mL,差异均有统计学意义(P0.05);划痕试验中,与SDP比较,过期SDP来源的PRP对内皮细胞的迁移能力有明显影响(P0.05);成血管试验中,过期SDP来源的PRP促成血管能力优于SDP。结论过期SDP能制备具有高浓度生长因子的PRP,并在体外对内皮细胞的迁移和成血管能力有明显的促进作用。     

不同处理方式对富血小板血浆相关生长因子的影响

目的:探究超声、冻融、钙离子及其组合等处理方法对富血小板血浆(PRP)释放生长因子含量的影响。方法:20份PRP来自健康献血者,根据不同处理方式将每份分为9组,即超声组、冻融组、葡萄糖酸钙组、氯化钙组、超声+葡萄糖酸钙组、超声+氯化钙组、冻融+葡萄糖酸钙组、冻融+氯化钙组、超声+冻融组,采用ELISA检测每组处理后的PRP中转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)的含量。结果:样本的血小板浓度为(966.7±202.6)×10⁹/L。TGF-β1含量最低的是冻融组,最高的是超声+冻融组;VEGF含量最低的是葡萄糖酸钙组,最高的是冻融+氯化钙组;PDGF-BB含量最低的是葡萄糖酸钙组,最高的是超声+冻融组。3种生长因子的含量在葡萄糖酸钙组与氯化钙组间比较均没有统计学差异(P>0.05)。结论:9种PRP处理方式中,两种钙离子激活剂无差异;反复冻融及超声处理可能是促进PRP释放生长因子的最佳方式,葡萄糖酸钙则是作用最弱的方式。     

血小板裂解液与血小板凝胶生长因子谱的表达差异研究

目的 研究富血小板血浆（PRP）在不同制备条件下生长因子表达谱的变化,为临床治疗选择不同类型PRP提供实验依据。方法 使用血液成分分离机单采7份PRP(30m L/份),同一份PRP各留取10m L并随机分成贫血小板血浆（PPP）对照组、PRP凝胶上清组和PRP裂解液组,PRP凝胶上清组采用牛凝血酶和葡萄糖酸钙制成预混剂,预混剂与PRP按照1∶9的比例添加以获取PRP上清液;PRP裂解液组采用在–20℃和37℃反复冻存融化5次,获取血小板裂解液。应用Quantibody?生长因子蛋白芯片检测获取的样品中生长因子谱的变化,并采用ELISA对差异生长因子进行验证。结果 与PPP对照组比较,在PRP凝胶上清组中共有5个生长因子表达升高,分别为脑源性神经营养因子（BDNF,14.64倍）,血小板衍生生长因子（PDGF-AA,4.53倍）,表皮细胞生长因子（EGF,4.52倍）,血管内皮生长因子（VEGF,3.45倍）和肝细胞生长因子（HGF,2.16倍）,GO和KEGG分析表明这些因子主要富集于细胞迁移和Ras及PI3K-Akt信号通路激活,参与组织修复;而在PRP裂解液组中升高的生长因子分别...