新型细菌β-内酰胺酶的发现与研究进展

细菌产生β-内酰胺酶是细菌耐药性的重要机制之一。按Ambler分类法分为A、B、C、D四大类(相当于Bush-jacob分类的2、3、1和4类)。各类中的酶由于基因改变而致氨基酸的替代使新的酶种层出不穷。随着对酶的分子结构、氨基酸组成。酶的等电点以及酶的动力学测定技术的进步,研究人员不断发现新的酶种。现仅就近年来国内外新发现的β内酰胺酶作一介绍。1 A类酶目前A类酶约有200余种,其中的TEM酶有121种、SHV酶57种、CTX-M酶28种,其他有PER、VEB、CME、SFO、TLA、HER酶等较少见。新发现的A类酶以超广谱酶为主。1.1 TEM酶1.1.1 TE…     

革兰阴性杆菌中AmpC酶的检测

AmpC酶是由革兰阴性杆菌产生的不被克拉维酸抑制，属β-内酰胺酶BushI型酶或Amblerc类酶，能水解青霉素类，1、2、3代头孢菌素类和单环类的β-内酰胺酶。AmpC不但由染色体编码，而且也可由质粒介导，质粒介导的AmpC酶的出现增强了耐药菌株的横向传播。高产AmpC酶菌株引起的感染使抗感染治疗面临严峻挑战。AmpC酶检测有头孢西汀三维试验、等电聚焦电泳和PCR等方法，但难以在临床细菌室开展，近年报道的几种AmpC酶表型筛选法是一种简便、有效的方法，可供各级临床实验室选用。     

ESBLs的研究进展

超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumbeta-lactamases,ESBLs)是由质粒介导的能赋予细菌对多种β-内酰胺类抗生素和单酰环类抗生素耐药的一类酶,它主要由革兰阴性细菌产生,可来源于TBM和SHY酶(由于其固有序列的基因点突变导致),该酶最早发现于肺炎克雷伯菌中[1],可水解头孢菌素及单酰胺类抗菌药物,特别表现在对头孢噻肟、头孢他啶利氨曲南的耐药[2],并可引起对氨基糖苷类等抗菌药物的多重耐药.产ESBL肠杆菌的耐药问题已经成为当前全球最重要的医院耐药问题之一,本文就其分型及耐药机制作一综述。1β-内酰胺酶分类β-内酰胺酶种类较为复杂,几乎所有的肠杆菌细菌其β-内酰胺酶阳性,到目前已发现有二百多种。对它的分类方法有多种,而主要分类方法有二种:一种为分子生物学的分类,根据末端氨基酸序列及编码基因的位点来分,可分为四类:A类,丝氨酸酶,由质粒编码。B类,金属酶,由染色体编码。C类,丝氨酸酶,由染色体编码。D类,丝氨酸酶,由质粒编码[3]。另一种为临床上较为实用的分类方法,即1989年Bush创建的方法[4],此分类方法是根据各种酶的等电点、水解底物、是否被克拉维酸抑制及酶的分子结构类别...     

OXY型β-内酰胺酶研究进展

OXY型β-内酰胺酶是由产酸克雷伯菌产生的染色体β-内酰胺酶,迄今至少发现6种（OXY-1-OXY-6）。OXY酶属于Ambler分类的A类和Bush分类的2be亚群。其特点是优先水解青霉素类,表现为对氨基和羧基青霉素的耐药,也可水解一些广谱头孢菌素和氨曲南,其活性可被克拉维酸所抑制;OXY酶具有多样性,一种酶可表现为多种不同的等电点;bla基因的启动子区和Ω环的点突变可能改变它的水解底物谱。     

OXA-48的相关特性

苯唑西林酶OXA-48是一种D类碳青霉烯酶,近年来在肠杆菌科中报道日益增多。该酶对青霉素类水解能力很强,对碳青霉烯类药物活性较弱,酶活性不能被β-内酰胺酶抑制剂抑制。blaOXA-48基因上下游分别有一插入序列IS1999,共同组成转座子Tn1999。大多数菌株中,blaOXA-48基因位于一个可转移并且不携带其他耐药基因的62kb的质粒上,因此可以在细菌间广泛传播。PCR技术是检测菌株是否携带blaOXA-48基因的金标准。     

质粒介导头孢菌素酶的研究进展

质粒介导的头孢菌素酶（pAmpC酶）能水解青霉素类、头孢菌素类和头霉素类药物,根据基因同源性可分成6组,常见的有DHA、MIR、CMY、MOX、FOX等基因型。pAmpC酶可以在同种或不同种细菌中进行传播,造成院内感染的暴发,所以必需引起临床的高度重视。目前对pAmpC酶稳定的药物主要有碳青霉烯类和第4代头孢（头孢吡肟、头孢匹罗）以及某些喹诺酮类和氨基糖甙类抗生素。     

AmpG在AmpC酶表达中的调控作用及研究进展

AmpC酶,是由革兰氏阴性菌产生的一种β-内酰胺酶[1]。近年来,由于β-内酰胺类抗菌药物的过度使用,使得β-内酰胺酶介导的耐药情况越来越严重,最终给临床抗菌药物的选择和治疗带来了困难[2]。AmpC酶能够水解三代头孢菌素酶,单环类和头霉素类抗生素,而且不受酶抑制剂所抑制[3,5]。AmpC酶的作用机制目前还没有完全确定,它的出现与细胞壁肽聚糖循环相关,至少有四个基因参与了AmpC酶的表达,分别为ampR,ampD,ampG和ampE,其中ampR和ampD的相关性研究较多,而ampG和ampE的研究甚少。现就其调控因子之一,AmpG的研究进展作一综述。     

儿童戈谢病三例报导

戈谢病原名高雪氏病,是一种脂类代谢酶的遗体性缺陷导到类脂质在一种或多种组织沉积的疾病.我科从1996年以来发现三例,报告如下:     

谷胱甘肽-s-转移酶、幽门螺杆菌感染与胃癌关系的研究进展

谷胱甘肽-s-转移酶（GST）是一种多功能的Ⅱ相代谢酶家族,也是一个同源二聚体酶的超基因家族,普遍存在于各种生物体内。在哺乳动物各组织中均含有不同种类的GST,其含量和活性亦各不相同。GST可分为膜结合微粒体家族和胞质家族2大类。哺乳动物GST至少具有8类同工酶：     

鲍曼不动杆菌整合子相关耐药基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌整合子流行情况，证实整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系，建立一种快速简便的整合酶聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法收集我院2005年9月至2006年2月临床分离的鲍曼不动杆菌共52株，用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌耐药性及用整合酶PCR检测其整合子基因。结果在52株鲍曼不动杆菌中，整合酶PCR检测出Ⅰ类整合子33株（63％），未检测出Ⅱ类整合子。统计学分析结果显示，整合子阴性和阳性的鲍曼不动杆菌对各种抗生素的耐药率存在明显差异，前者仅对几种抗生素耐药而后者对多种抗生素耐药。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌中主要为Ⅰ类整合子，整合酶PCR是一种快速、简便、易在临床开展的检测方法，同时也是控制医院感染的有效检测手段。     

痰标本分离革兰阴性杆菌整合子分布及分型研究

目的研究临床痰标本分离革兰阴性杆菌中整合子的分布与分型。方法用Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类3种整合酶基因通用引物扩增398株痰标本分离革兰阴性杆菌的相应基因;用琼脂对倍稀释法检测临床菌株的MIC。结果Ⅰ类整合酶基因总阳性率为48.7%,Ⅱ类整合酶基因总阳性率为2.3%,未检出Ⅲ类整合酶基因阳性菌株,Ⅰ类和Ⅱ类整合子同时阳性率为1.5%。肠杆菌科细菌Ⅰ类整合酶基因阳性率为69%,Ⅱ类整合子阳性率为2.7%;非发酵菌中Ⅰ类整合子阳性率为34%,Ⅱ类整合子阳性率为1.8%。在肠杆菌科细菌中,Ⅰ类整合酶基因阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率均明显高于阴性菌株。结论在痰标本分离的革兰阴性杆菌中,肠杆菌科细菌Ⅰ类整合子的携带率高于非发酵菌,Ⅱ类整合子则无明显区别。     

分支杆菌裂解型噬菌体在结核病中的研究进展

分支杆菌噬菌体是一种专性寄生于分支杆菌的DNA或RNA病毒,有裂解型和温和型（溶原性）两类,裂解型噬菌体感染宿主菌后,依赖宿主菌的代谢酶系合成子代噬菌体,最终产生一种裂解酶破坏、杀灭宿主菌。现就裂解型噬菌体的特性、在结核病的快速诊断、药敏试验及试验性治疗中应用研究进展作一综述。     

一株对3种碳青霉烯类抗菌药物均耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究临床分离的一株肺炎克雷伯菌(K30)对碳青霉烯类抗菌药物耐药的机制。方法采用琼脂稀释法测定肺炎克雷伯菌K30对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;聚合酶链反应(PCR)检测A类碳青霉烯酶(KPC)、B类碳青霉烯酶(NDM、IMP、VIM、SIM)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs,CTX、TEM、SHV)、头孢菌素酶(AmpC,FOX、EBC、ACC、DHA、CIT、MOX)基因和Ⅰ类整合子;实时荧光定量PCR分析肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的mRNA表达;利用质粒接合试验研究肺炎克雷伯菌K30耐药基因的水平传播能力。结果药物敏感性试验显示,肺炎克雷伯菌K30对包括碳青霉烯类抗菌药物在内的11种抗菌药物均耐药,仅对头孢西丁钠中介,对阿米卡星敏感。肺炎克雷伯菌K30的改良Hodge试验为阳性。PCR扩增A类碳青霉烯酶基因KPC和2种ESBLs基因CTX、SHV为阳性,其PCR产物经测序后同GenBank数据库比对证实分别为KPC-2、CTX-M3和SHV-38。其余耐药基因和Ⅰ类整合子扩增均为阴性。与肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)相比,膜孔蛋白基因ompK35、ompK36的表达没有降低。质粒接合试验未成功获取结合子。结论临床分离的一株对碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌主要耐药机制与产A类碳青霉烯酶KPC-2合并产ESBLs有关,且KPC-2可能不由质粒介导。     

降纤酶对高纤维蛋白原患者降纤作用的动态观察

降纤酶是类凝血酶的一种制剂,其前身是蛇毒抗栓酶.以往我国生产的蛇毒抗栓酶是多成份的,临床药理机制复杂,个别患者在使用过程中出现不良后果,且与国际上对药品应尽量单一化的要求不符.最近,根据国家卫生部颁布的降纤酶的生产标准,国内已有厂家开始生产单一组分的类凝血酶产品,并按要求统一命名为降纤酶.     

克倍宁治疗难治性肺炎

克倍宁是一种新型抗生素(碳青霉烯类),用于治疗对三代头孢类和氟喹诺酮类耐药的难治性肺炎,特别是超广谱β-内酰酶(ESBLs)阳性的患者,取得了满意的效果,现将使用该药治疗难治性肺炎共21例的疗效报道如下。     

CIM，mCIM 和MHT 筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的方法评价

目的 评估碳青霉烯类抑制法(carbapenem inactivation method,CIM)、改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和改良Hodge试验(modified hodge test, MHT )对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选能力。方法 以PCR检测碳青霉烯酶基因作为金标准,对120株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterbacteriaceae,CRE)和50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌,分别进行CIM,mCIM和MHT表型筛选试验,评估三种方法的表型筛选能力。结果 120株CRE中,93株携带碳青霉烯酶耐药基因,表型筛选试验显示,CIM,mCIM和MHT的敏感度分别是95.6%,96.8%和95.8%,特异度分别为72.7%,92.3%和50%。三种方法筛选碳青霉烯酶,差异有统计学意义(χ²=12.796,P<0.05)。与PCR结果相比较,CIM,MHT和mCIM的一致率分别为90%,95%和77.4%,Kappa值分别为0.898,0.949和0.771。mCIM和CIM试验与PCR高度一致。50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌PCR检测和三种方法均为阴性。结论 三种表型筛选方法均有较高的敏感度,但mCIM较CIM,MHT具有更高的特异度和一致率,是筛选CRE的有效方法。     

mCIM 和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测CRE 和CRPA 产酶表型的方法学评价

目的 综合评估改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM）和碳青霉烯酶抑制剂增强试验对碳青霉烯酶检测和分型能力。方法 采用mCIM 和碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测中山大学肿瘤防治中心2019 ～ 2022 年临床分离并保存的47 株耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌（carbapenem-resistant Enterobacterales, CRE）和42 株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌（carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa, CRPA）的产酶表型,胶体金法对检测结果进行验证比对,通过卡方检验进行统计分析,并从多角度综合评价。结果 mCIM 检测CRE 和CRPA 的阳性率分别为70.2% 和35.7%,碳青霉烯酶不确定占比为25.5% 和11.9%。增强试验检测47 株CRE:44.7% 产B 类金属β 内酰胺酶,17.0% 产A 类碳青霉烯酶,不产A 或B 类碳青霉烯酶的菌株占38.3%;增强试验检测42 株CRPA:2.4% 产B 类金属β 内酰胺酶,90.4% 产A 类碳青霉烯酶,同时产A 类碳青霉烯酶和B 类金属β- 内酰胺酶的菌株占4.8%,不产A 或B 类碳青霉烯酶的菌株占2.4%。两种方法检测CRE 差异有统计学意义（χ2=17.803,P =0.01）,检测CRPA 差异无统计学意义（χ2=4.632,P=0.592）。胶体金法验证:产碳青霉烯酶的阳性符合率为84.6%,产丝氨酸酶的阳性符合率为80%,产金属酶的阳性符合率为100%。结论 检测CRE两种方法均适用且差异不大, CRPA更推荐碳青霉烯酶抑制剂增强试验,胶体金值得推广,临床实验室应根据实际条件选择检测方法。     

简易纸片扩散法检测肠杆菌科细菌中AmpC和ESBLs

AmpC酶可以水解头霉素类、第三代头孢菌素和单环β内酰胺类抗菌药物,β内酰胺酶抑制剂如克拉维酸对其抑制作用差.ESBLs可以水解第三代头孢菌素和单环β内酰胺类抗菌药物,不能水解头霉素类,可被β内酰胺酶抑制剂所抑制.目前推荐使用头孢噻肟、头孢他啶或头孢泊肟并检测其与克拉维酸之间的协同作用以确定对上述头孢菌素耐药菌株是否产ESBLs.但由于克拉维酸可诱导细菌产生AmpC酶,该酶可以水解上述头孢菌素,所以这个方法用于同时存在AmpC酶和ESBLs时并不理想.对头孢西丁的耐药性常作为产AmpC酶的检测标准,但某些类型AmpC酶对头孢西丁敏感.而且由于渗透率的下降和种属特异的耐药性,细菌对头孢西丁的耐药性也会上升.作者等报道一种简易纸片扩散法在未鉴定菌种的肠杆菌科细菌中检测单独或同时存在的ESBLs和AmpC酶(包括去抑制和可诱导).     

加贝酯与头孢匹胺钠存在配伍禁忌

我科于2008年8月收治1例胆总管结石行ERCP术病人.在遵医嘱给药过程中,发现一组配伍禁忌,现报道如下. 1.临床资料:加贝酯为白色或类白色的疏松块状物或粉末,0.1 g/瓶,由常州金远药业制造有限公司生产.加贝酯是一种非肽类蛋白酶的抑制剂.可抑制胰蛋白酶、激肽释放酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶等蛋白酶的活性,从而制止这些酶所造成的病理变化.     

细菌β内酰胺酶表型纸片检查法的进展

细菌的β内酰胺酶,尤其是革兰阴性菌产生的超广谱酶（ESBLs）、AmpC（C类酶）、金属酶（B类酶）和D类酶（主要有OXA酶）引起的耐药性,已成为临床和临床微生物学家关注的热点。尤其是B和D类酶均可使碳青霉烯类抗生素失效,使细菌的耐药问题更加严重。现C、B、D类酶的实验室检测尚无公认的推荐法。国内外的实验室依据自己的需要和经验摸索出一些检测法。现对应用纸片的、较实用的新方法做一些评价。当然,耐药基因检测更为可靠。本文介绍的方法大多以基因检测法做过对照研究,但有些仍需进一步研究验证。[第一段]