紫草素对乳腺恶性肿瘤细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的：探讨紫草素对乳腺恶性肿瘤MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡以及PI3K/AKT信号通路表达的影响。方法：将MDA-MB-231及MCF-7细胞系用含不同浓度紫草素的完全培养基(分组为0、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/mL)进行培养,CCK-8法检测细胞活性,Annexin V-FTIC/PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法测定细胞内PI3K/AKT表达情况。结果：与空白对照组(0 mg/mL)比较,紫草素浓度为0.8 mg/mL以上时对乳腺癌MDA-MB-231及MCF-7细胞生长具有显著抑制作用,最佳作用浓度为1.0 mg/mL;与空白对照组比较,MDA-MB-231及MCF-7细胞的凋亡水平随紫草素浓度增加而增加,且差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,经紫草素处理的MDA-MB-231及MCF-7细胞PI3K表达均出现不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：紫草素具有针对MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞系的抗肿瘤作用,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

中药QHF复方抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

摘要：目的 研究中药QHF复方对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其可能的作用机制,为QHF的临床应用提供理论依据。方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,以对数生长期的细胞为研究对象,予以不同浓度QHF复方及其他药物,CCK8法检测QHF复方对乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响。细胞划痕实验和Transwell实验检测QHF复方对乳腺癌MCF-7细胞迁移、侵袭的影响。Western blot检测QHF复方对乳腺癌MCF-7细胞HGF/c-Met及其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK信号通路的影响。结果 CCK8实验结果显示：中药QHF复方可不同程度抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖且这种抑制作用可显著拮抗HGF对乳腺癌MCF-7细胞增殖的促进作用。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示：中药QHF复方能明显抑制MCF-7细胞迁移、侵袭且这种抑制作用可拮抗HGF 对MCF-7细胞迁移、侵袭的促进作用。Western blot实验结果显示：中药QHF复方可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞HGF、p-c-Met、p-Akt、p-ERK、VEGF、MMP-2、MMP-9的表达。结论 中药QHF复方抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的机制可能与抑制乳腺癌MCF-7细胞异常活化的HGF/c-Met及其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK信号通路有关。     

灰树花多糖对宫颈癌细胞增殖和转移的影响及机制

目的探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响。方法 50、100、200μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p-AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase-3(裂解的半胱天冬酶3)和E-cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10μmol/L LY294002和200μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达。结果随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase-3和E-cadherin表达升高(P0.05)。LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin表达的影响。结论灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

木香烃内酯通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移

目的:探讨木香烃内酯对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:不同浓度(10、20、40μmol/L)木香烃内酯作用结直肠癌细胞SW480,并设空白对照组、溶剂对照组和紫杉醇组,MTT和平板克隆实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot检测与增殖、凋亡、侵袭和迁移相关蛋白、LASP1、PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。应用Lipofectamine~(TM)2000将真核表达载体pCDNA-LASP1和空载体pCDNA导入SW480细胞,观察LASP1过表达后木香烃内酯对SW480增殖、凋亡、迁移和侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。结果:与空白对照组比较,40μmol/L木香烃内酯组SW480细胞活力、细胞迁移和侵袭数量显著降低、凋亡率显著升高,CDK1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、LASP1、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达显著降低,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著升高。空白对照组和溶剂对照组各检测指标差异无统计学意义(P0.05)。LASP1过表达可逆转木香烃内酯对SW480细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K、AKT、mTOR蛋白表达的抑制作用,并逆转木香烃内酯对SW480细胞的凋亡促进作用。结论:木香烃内酯可能通过抑制PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。     

白头翁皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用研究

目的探讨白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用及其机制。方法采用MTT法和吉姆萨染色,考察白头翁皂苷D对人MCF-7细胞体外增殖抑制的影响;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,考察白头翁皂苷D体内抗肿瘤作用;HE染色和透射电镜实验考察肿瘤组织形态学和超微结构的变化;采用Western Blot法检测MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT/mTOR途径相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K的表达。结果白头翁皂苷D可抑制MCF-7细胞的增殖,且呈剂量依赖关系;裸鼠体内实验结果显示白头翁皂苷D可抑制肿瘤的生长,30.0 mg·kg~(-1)剂量组瘤体质量明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01);形态学观察结果也显示白头翁皂苷D对MCF-7细胞具有凋亡作用,且随着给药剂量的增加变化越明显;白头翁皂苷D(15.0,20.0,25.0μmol·L~(-1))不同剂量组均可抑制MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.01);白头翁皂苷D还可下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达,20.0,25.0μmol·L~(-1)剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论白头翁皂苷D对MCF-7细胞有显著的体内外抗肿瘤作用,其机制可能是通过下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路诱导细胞凋亡。     

基于JAK/STAT通路研究化瘀消癥颗粒治疗异位妊娠的网络药理学分析及实验验证

目的 本文旨在通过网络药理学和体外实验,研究化瘀消癥颗粒治疗异位妊娠（EP）的作用机制。方法 筛选化瘀消癥颗粒的潜在有效成分,建立了PPI、MCODE、GO富集和KEGG途径分析。在JAK/STAT通路抑制剂与激动剂对照下,通过划痕实验和Transwell实验分别检测化瘀消癥颗粒对滋养细胞（HTR-8/SVneo细胞）迁移和侵袭的影响,通过Western blot检测化瘀消癥颗粒对JAK/STAT通路及相关蛋白的影响。结果 共获得375个活性成分、45个已知靶点和207个预测靶点,通过构建PPI网络筛选出STAT3、MMP9、TLR4、HIF1-α等15个关键目标。划痕实验提示化瘀消癥颗粒对HTR-8/SVneo细胞迁移具有抑制作用,呈时间、剂量依赖性;化瘀消癥颗粒作用48 h后,Transwell实验提示HTR-8/SVneo细胞的过膜细胞数明显下降（P<0.05）;Western blot实验提示,JAK/STAT信号通路蛋白表达显著降低（P<0.05）;与JAK/STAT通路相关的uPA、HIF1-α和N-cadherin蛋白表达均受到抑制（P<0.05）,趋势...     

均一猪苓多糖对肿瘤微环境中RAW264.7细胞表达IL-10及相关机制的影响北大核心

目的:探讨在肿瘤微环境中均一猪苓多糖对RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10及其相关机制的影响。方法:建立小鼠膀胱癌细胞MB49与小鼠巨噬细胞RAW264.7共培养的细胞模型,体外模拟肿瘤微环境。实验分为对照组、IL-4(20 ng/mL)组及均一猪苓多糖低(50μg/mL)、中(100μg/mL)、高(200μg/mL)浓度组。采用CCK-8实验检测均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法和RT-qPCR法分别检测共培养体系细胞上清中IL-10水平及RAW264.7细胞中IL-10的mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7细胞中IL-10蛋白及激活IL-10的上游信号通路PI3K/AKT/mTOR和下游信号通路JAK1、STAT3、SOCS3、IL-1Ra蛋白表达。结果:与对照组比较,均一猪苓多糖及IL-4对RAW264.7细胞增殖均无明显影响;均一猪苓多糖中、高浓度组及IL-4组促进了肿瘤微环境中RAW264.7细胞IL-10的分泌及细胞中IL-10 mRNA及蛋白表达;不同浓度均一猪苓多糖干预后,均上调了肿瘤微环境中RAW264.7细胞SOCS3、IL-1Ra蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、p-STAT3/STAT3、p-JAK1/JAK1水平。结论:在膀胱癌肿瘤微环境中均一猪苓多糖可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进RAW264.7细胞表达抗炎因子IL-10,同时通过IL-10/JAK1/STAT3通路,上调SOCS3及IL-1Ra协同IL-10发挥抗炎功能。     

化瘀解毒方含药血清通过JAK2/STAT3通路抑制人肺癌H1299细胞侵袭迁移

目的:探讨化瘀解毒方含药血清(HJRMS)对人肺癌细胞(H1299细胞)的增殖、侵袭与迁移的影响及其机制。方法:通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测化瘀解毒方含药血清对肺癌细胞增殖的抑制能力;利用划痕实验和Transwell小室法检测肺癌细胞的侵袭与迁移作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导及转录激活因子3(STAT3),磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测JAK2,STAT3 mRNA表达水平。结果:(1)与空白组比较,1%~16%化瘀解毒方含药血清分别处理24,48 h,H1299细胞增殖能力受到显著抑制(P<0.01),并呈一定的浓度依赖性。(2)H1299细胞在经化瘀解毒方含药血清处理24 h,与空白组比较,4%,8%化瘀解毒方含药血清组细胞划痕愈合能力受到抑制(P<0.05,P<0.01)。(3)在侵袭实验和迁移实验中,与空白组比较,2%,4%,8%化瘀解毒方含药血清肺癌细胞透膜数均明显减少(P<0.05,P<0.01)。(4)Western blot显示,与空白组比较,4%,8%化瘀解毒方含药血清组均对肺癌H1299细胞中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白(JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3)表达具有抑制作用(P<0.05,P<0.01)。(5)与空白组比较,使用8%化瘀解毒方含药血清处理肺癌H1299细胞24 h,JAK2,STAT3mRNA表达水平均下降(P<0.05)。结论:化瘀解毒方含药血清能够抑制肺癌H1299细胞的增殖、侵袭与迁移,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

大半夏汤提取物对食管癌EC9706细胞恶性生物学行为及JAK1/STAT3通路的影响

目的 观察大半夏汤提取物对食管癌EC9706细胞恶性生物学行为及JAK1/STAT3通路的影响,以期为食管癌的防治提供参考。方法 人食管癌EC9706细胞分别以半夏汤提取物（200、100、50、25、12.5μg/mL）、STAT3信号通路抑制剂（Stattic,4、3.5、3、2.5、2μmol/L）处理,MTT法检测细胞抑制率,拟合细胞抑制率-浓度曲线计算50%抑制浓度（IC50）。人食管癌EC9706细胞分为空白对照组、大半夏汤组、Stattic组与大半夏汤+Stattic组。大半夏汤组、Stattic组分别以IC50浓度的大半夏汤提取物及Stattic干预,大半夏汤+Stattic组予以大半夏汤提取物及Stattic联合干预,空白对照组不做特殊处理。MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测各组GES-1细胞侵袭能力;q RT-PCR法及Western blotting法检测JAK1/STAT3信号通路相关mRNA及蛋白表达情况。结果 随着大半夏汤提取物、Stattic干预浓度的增加,EC9706细胞的抑制率增加（P <0.05）;拟...     

白头翁皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用研究北大核心CSCD

目的探讨白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用及其机制。方法采用MTT法和吉姆萨染色,考察白头翁皂苷D对人MCF-7细胞体外增殖抑制的影响;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,考察白头翁皂苷D体内抗肿瘤作用;HE染色和透射电镜实验考察肿瘤组织形态学和超微结构的变化;采用Western Blot法检测MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT/mTOR途径相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K的表达。结果白头翁皂苷D可抑制MCF-7细胞的增殖,且呈剂量依赖关系;裸鼠体内实验结果显示白头翁皂苷D可抑制肿瘤的生长,30.0 mg·kg^(-1)剂量组瘤体质量明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01);形态学观察结果也显示白头翁皂苷D对MCF-7细胞具有凋亡作用,且随着给药剂量的增加变化越明显;白头翁皂苷D(15.0,20.0,25.0μmol·L^(-1))不同剂量组均可抑制MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);白头翁皂苷D还可下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达,20.0,25.0μmol·L^(-1)剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论白头翁皂苷D对MCF-7细胞有显著的体内外抗肿瘤作用,其机制可能是通过下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路诱导细胞凋亡。     

南蛇藤提取物联合miR-302通过PI3K/Akt信号通路调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)联合miR-302对人食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及对PI3K/Akt信号通路的调控作用。方法实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人正常食管上皮细胞Het-1A及不同食管癌细胞株中miR-302表达情况。将miR-302mimic和阴性对照mimiccontrol转染至人食管癌TE-1细胞中,q RT-PCR检测质粒转染后TE-1细胞中miR-302的表达情况。单独或联合使用COE作用TE-1细胞,CCK-8实验检测TE-1细胞增殖情况,Transwell实验检测TE-1细胞侵袭和迁移能力,Westernblotting分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达情况。结果食管癌细胞株中miR-302的表达明显低于正常食管上皮细胞(P0.05)。转染miR-302mimic能够有效提高TE-1细胞中miR-302的表达(P0.05)。单独使用COE或过表达miR-302可抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移(P0.05),下调PI3K和p-Akt蛋白表达;二者联合使用对TE-1细胞增殖、侵袭和迁移抑制及对PI3K和p-Akt蛋白表达下调作用更显著(P0.05)。结论 COE联合miR-302可协同抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

没食子酸通过PI3K/AKT信号通路抑制胃癌MGC-803细胞侵袭性的研究

目的探讨没食子酸(gallic acid,GA)对胃癌MGC-803细胞侵袭能力的影响及机制。方法体外培养胃癌MGC-803细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的抑制率;Transwell小室法检测GA对MGC-803细胞侵袭能力的影响;Western blotting检测没食子酸对PI3K/AKT通路相关因子(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT)及细胞基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)蛋白表达的影响。结果 MTT法检测表明6.250~50.000μmol·L~(-1)GA可抑制MGC-803细胞的生长,并呈剂量依赖性(P0.05);Transwell小室法显示,与对照组比较,经GA处理后MGC-803细胞侵袭能力明显降低(P0.05);Western blotting结果显示,没食子酸处理后的MGC-803细胞p-PI3K、p-AKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降,同时加入PI3K抑制剂后,可抑制PI3K/AKT通路活化,抑制MMP2和MMP9的表达。结论没食子酸可有效抑制胃癌MGC-803细胞侵袭能力,其机制可能是与通过调控PI3K/AKT信号通路,抑制MMP2和MMP9的表达有关。     

益气小复方通过PI3K/AKT通路逆转乳腺癌他莫昔芬耐药的机制研究

目的:研究益气小复方在乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药中的作用及对胞内磷脂酞肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的影响。方法:建立乳腺癌TAM耐药细胞(MCF-7/TAM)模型,细胞形态观察及MTT法测定细胞抑制率;不同浓度益气小复方处理MCF-7/TAM细胞,MTT法测定增殖抑制率,流式细胞仪测定凋亡率,蛋白印迹法(WB)测定细胞bax、bak、Bcl-2、PI3K、AKT、p-AKT、P-gp、PTEN蛋白表达水平。结果:与MCF-7细胞相比,MCF-7/TAM细胞形态不规则,细胞变大,触角延伸,细胞呈簇状生长,同浓度TAM处理后,MCF-7/TAM细胞抑制率明显降低,IC_(50)值显著升高(P0.05)。进一步研究益气小复方对MCF-7/TAM细胞增殖抑制发现,与MCF-7细胞相比,同浓度益气小复方处理后,MCF-7/TAM细胞细胞抑制率、IC_(50)值无差异(P0.05);选取40mg/ml、80mg/ml、160mg/ml进行后续实验,与MCF-7/TAM细胞组相比,低、中、高剂量益气小复方处理MCF-7/TAM细胞48h后,细胞凋亡率显著升高(P0.05);与MCF-7细胞组相比,MCF-7/TAM细胞组PI3K、P-gp、Bcl-2蛋白表达水平、AKT磷酸化水平显著升高(P0.05),PTEN蛋白表达水平、bax、bak显著降低(P0.05);与MCF-7/TAM细胞组相比,低、中、高剂量益气小复方组PI3K、P-gp、Bcl-2蛋白表达水平、AKT磷酸化水平显著降低(P0.05),PTEN蛋白表达水平、bax、bak显著升高(P0.05),呈剂量依赖性。结论:益气小复方可能通过抑制PI3K/AKT通路活化,逆转乳腺癌他莫昔芬耐药。     

PI3K/AKT 信号通路抑制剂对食管癌细胞 TE1 的侵袭及迁移影响的机制研究

〔摘 要〕 目的：探讨 PI3K/AKT 信号通路抑制剂对食管癌细胞 TE1 迁移及侵袭能力的影响,并分析其可能机制。方法： 培养食管癌 TE1 细胞株,用 30 μmol·L-1 的 LY294002 处理 TE1 细胞 1 h,24 h 后采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞 增殖抑制率,采用细胞划痕实验、细胞侵袭实验观察细胞迁移及侵袭情况,采用Western blot实验检测PY14 Cav–1的表达水平。 结果：LY294002 能明显抑制食管癌细胞株 TE1 的增殖,并抑制其迁移及侵袭能力,与对照组比较,差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）。同时 LY294002 能够使 PY14Cav–1 表达水平下调。结论：PI3K/AKT 信号通路正向调节食管癌细胞的增殖,并参 与细胞的侵袭及迁移,LY294002能够抑制食管癌细胞的生长、迁移及侵袭,其可能机制与通过下调PY14 Cav–1表达水平有关。     

中医药调控肺癌相关信号通路分子研究进展

近年来中医药在调控肺癌的相关信号通路方面进展较大,其中涉及JAK2/STAT3信号通路、Wnt信号通路、PI3K/AKT/mTOR信号通路、NF-κB信号通路及其他信号通路,为治疗肺癌提供了新思路。笔者就近5年关于中医药调控肺癌的相关信号通路分子及其作用机制的相关研究进展做一综述,以期为临床治疗肺癌提供相关的理论依据。     

褐藻素通过PI3K/AKT信号通路抑制食管鳞癌细胞迁移和侵袭

目的 研究褐藻素对人食管鳞癌EC109和EC9706细胞迁移和侵袭的影响,并初步探究其作用机制。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的褐藻素对食管鳞癌细胞活性的影响;采用划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验分别考察褐藻素对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响;使用Western blotting实验检测褐藻素对细胞中PI3K、p-PI3K (Tyr607)、AKT、p-AKT (Ser473)、MMP-2、MMP-9、N-Cadherin和E-Cadherin蛋白表达的影响。结果 褐藻素对食管鳞癌细胞EC109和EC9706的生长活性具有抑制作用,其IC₅₀分别为(51.49±4.15)和(52.44±3.38)μmol·L^-1;此外,褐藻素能够明显地抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭,并降低MMP-2、MMP-9和N-Cadherin的蛋白水平,同时促进E-Cadherin的蛋白表达。进一步研究发现,褐藻素对p-PI3K (Tyr607)和p-AKT(Ser473)具有明显地抑制作用,但不改变PI3K和AKT总蛋白的表达。结论 褐藻素能够显著地抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭,其分子机制可能是通过下调PI3K/AKT信号通路实现。     

高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的:观察高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通的影响。方法:采用MTT法检测高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白及Caspase-9蛋白表达情况。结果:高良姜素抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性,顺铂和高良姜素(5.4、10.8、21.6、43.2、86.4μg/ml),72 h抑制率分别为69.4%、34.3%、44.9%、60.8%、73.9%、79.1%。流式细胞术检测结果显示高良姜素(10.8、21.6、43.2μg/ml)可使细胞周期阻滞于G1期。高良姜素(10.8、21.6、43.2μg/ml)处理24h凋亡率分别为9.8%、15.3%、18.6%。Western印迹法检测相关蛋白,药物处理组PI3K、AKT、P-AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加。结论:高良姜素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导人肝癌SMMC-772细胞凋亡。     

贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路减缓上皮-间质转化进程抑制人肺癌A549细胞侵袭及迁移的研究

目的探讨贝母素乙对人肺癌A549细胞侵袭及迁移的影响。方法采用终浓度为0、50、100、200μmol/L贝母素乙处理A549细胞,通过细胞侵袭实验、细胞划痕实验、实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法、ELISA法及Western blotting实验检测贝母素乙对A549细胞侵袭、迁移的影响及潜在机制。结果与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞穿膜数、细胞间划痕的愈合率及MMP-9、MMP-2表达显著下降(P0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞E-cadherin m RNA表达明显增加(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA表达均显著降低(P0.01);与对照组比较,除50μmol/L贝母素乙处理A549细胞24h后的FN蛋白表达无显著性变化外(P0.05),其余贝母素乙各浓度组在各时间点上的FN蛋白表达均显著下降(P0.05、0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR值及100、200μmol/L贝母素乙组的p-Akt/Akt值显著下降(P0.05、0.01)。结论贝母素乙具有抑制A549细胞侵袭及迁移能力的作用,该作用与贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路活性进而减缓上皮-间质转化(EMT)进程有关。     

没食子酸通过P13K/AKT 信号通路影响胃癌MGC-803细胞侵袭性

目的 探讨没食子酸(gallic acid,GA)对胃癌MGC-803细胞侵袭能力的影响及机制。方法 体外培养胃癌MGC-803细胞,噻唑蓝（MTT）法观察细胞的生存率;transwell 小室法检测GA 对MGC-803细胞侵袭能力的影响;Western-blotting 技术检测没食子酸对P13K/AKT 通路相关因子( PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT) ,细胞基质金属蛋白酶( MMP2、MMP9) 蛋白表达的改变。结果 MTT检测6.25～50μmol·L-1 GA可抑制MGC-803的生长,并呈剂量依赖性（P＜0.05）;transwell 小室法显示,与对照组比较,经GA处理后MGC-803细胞侵袭能力明显降低（P＜0.05）;Western-blotting结果显示,没食子酸处理后的MGC-803细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降,同时加入P13K 抑制剂后,显示可抑制P13K/AKT 通路活化,抑制MMP2 和MMP9 的表达;结论 没食子酸可有效抑制胃癌MGC-803细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT 信号通路,抑制MMP2 和MMP9 的表达有关。     

甘草查尔酮A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肾癌细胞自噬的研究

研究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对肾癌细胞自噬的影响,并探讨其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路的调控作用。实验以肾癌细胞系786-O,769-P细胞为研究对象,采用MTT检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞自噬状态;Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞中绿色点状聚集的自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白的表达,PI3K/Akt/m TOR信号通路的变化,以及抑制该通路后检测诱导自噬的变化。结果表明,LCA抑制细胞增殖呈时间-浓度依赖性,同时剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;LCA能够诱导细胞内酸性自噬泡和自噬小体的增多;LCA可明显诱导LC3-Ⅱ,beclin 1,Atg5蛋白表达,降低p62蛋白表达,同时减少Akt,m TOR的磷酸化。使用PI3K/Akt抑制剂(LY294002)以及m TOR抑制剂(rapamycin,Rap)可促进LCA诱导自噬的发生。以上结果提示,LCA通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路进而抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导肾癌细胞发生自噬。