枸杞多糖对大鼠腰椎间盘退变影响的形态学观察

目的探讨枸杞多糖(LBP)对大鼠退变腰椎间盘的形态学的影响。方法将健康雄性SD大鼠42只,随机分为假手术组、椎间盘退变组、LBP干预组,每组14只。采用手术方法制作大鼠腰椎间盘退变模型,LBP干预组在造模后4周,每天上午8:00灌胃给药,80mg.mL-1,容量为1mL.kg-1,连续4周。假手术组及椎间盘退变组分别给予等容量生理盐水灌胃,连续4周。在造模后8周三组所有大鼠再次麻醉,取出椎间盘组织,分别在光镜及电镜下观察椎间盘形态学的变化。结果 HE染色光镜观察假手术组髓核细胞丰富,形态不规则,集中成簇;椎间盘退变组髓核细胞稀少,细胞基质见大量的空泡;LBP干预组髓核细胞有变性、坏死,但较椎间盘退变组退变程度减轻。电镜下假手术组的髓核细胞多见,核膜完整,细胞器丰富;椎间盘退变组髓核细胞减少,细胞器缺失,见大量的空泡;LBP干预组髓核细胞减少,有变性、坏死,退变较椎间盘退变组减轻。结论 LBP可能对大鼠腰椎间盘髓核组织退变有延缓作用。     

The effect of Lycium Barbarum Polysaccharid on the expression of MMP-3 of the experimental degenerative lumbar intervertebral disc

目的 探讨枸杞多糖(LBP)对大鼠退变腰椎间盘中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响.方法 将雄性SD大鼠42只,分为假手术组、模型组、LBP药物组,每组14只.采用手术方法制作大鼠腰椎间盘退变模型,LBP药物组在造模后4周,每天上午8时灌胃给药,80 mg/kg,容量为1 ml/kg,连续4周.假手术组及模型组分别灌胃给予等容量生理盐水,连续4周.在造模后8周3组所有大鼠再次麻醉,取出椎间盘组织,HE染色观察椎间盘的形态学变化,免疫组织化学法检测腰椎间盘中MMP-3表达的变化.结果 形态学观察结果显示,假手术组髓核细胞数目较多,形态多样性;模型组髓核细胞稀少,细胞基质见大量的空泡;LBP药物组髓核细胞有不同程度的变性、坏死,但较模型组退变程度轻.免疫组织化学结果显示,模型组腰椎间盘组织中MMP-3阳性染色强度高于假手术组(P＜0.05);LBP药物组腰椎间盘组织中MMP-3阳性表达较模型组低(P＜0.05),而与假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LBP抑制大鼠退变腰椎间盘组织中MMP-3的表达,可能对细胞外基质中蛋白多糖有间接降解的作用,从而延缓或抑制实验性椎间盘的退行性改变.     

枸杞多糖对实验性退变腰椎间盘中基质金属蛋白酶-3表达的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对大鼠退变腰椎间盘中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响。方法将雄性SD大鼠42只,分为假手术组、模型组、LBP药物组,每组14只。采用手术方法制作大鼠腰椎间盘退变模型,LBP药物组在造模后4周,每天上午8时灌胃给药,80 mg/kg,容量为1 ml/kg,连续4周。假手术组及模型组分别灌胃给予等容量生理盐水,连续4周。在造模后8周3组所有大鼠再次麻醉,取出椎间盘组织,HE染色观察椎间盘的形态学变化,免疫组织化学法检测腰椎间盘中MMP-3表达的变化。结果形态学观察结果显示,假手术组髓核细胞数目较多,形态多样性;模型组髓核细胞稀少,细胞基质见大量的空泡;LBP药物组髓核细胞有不同程度的变性、坏死,但较模型组退变程度轻。免疫组织化学结果显示,模型组腰椎间盘组织中MMP-3阳性染色强度高于假手术组(P<0.05);LBP药物组腰椎间盘组织中MMP-3阳性表达较模型组低(P<0.05),而与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LBP抑制大鼠退变腰椎间盘组织中MMP-3的表达,可能对细胞外基质中蛋白多糖有间接降解的作用,从而延缓或抑制实验性椎间盘的退行性改变。     

活血健腰汤对大鼠退变椎间盘IL-6表达的影响

目的观察活血健腰汤对腰椎间盘退变大鼠髓核组织白介素-1β(IL-6)表达的干预作用,探讨活血健腰汤防治腰椎间盘退变的疗效机制。方法 40只10月龄SD大鼠随机分为造模组30只、假手术组10只;采用纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型,造模组造模成功后随机分为模型组、活血健腰汤组、布洛芬组,每组各8只、造模成功给药20天后检测大鼠髓核组织IL-6的表达水平。结果模型组腰椎间盘髓核组织IL-6表达较假手术组增高,差异均有非常显著性意义(P0.01);活血健腰汤组腰椎间盘髓核组织IL-6的含量均低于模型组,差异均有明显统计学意义(P0.01);布洛芬组腰椎间盘髓核组织IL-1的含量低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论活血健腰汤可能是通过抑制大鼠退变腰椎间盘髓核组织中致炎因子IL-6的表达来减轻腰椎间盘的退行性改变。     

白藜芦醇对大鼠退变腰椎间盘髓核组织形态学的影响

目的观察白藜芦醇对大鼠退变腰椎间盘髓核组织影响的病理改变及超微结构变化。方法将大鼠36只随机分为正常对照组、椎间盘退变组和白藜芦醇药物干预组各12只,应用HE染色光镜观察各组腰椎间盘髓核组织的病理改变,在电镜下对其进行超微结构的观察。结果光镜下可见正常对照组较多的脊索细胞和类软骨细胞增殖活跃,椎间盘退变组髓核的细胞减少,白藜芦醇药物干预组髓核细胞减少较椎间盘退变组程度轻;电镜下正常对照组的椎间盘髓核组织超微结构的病理改变不显著,而椎间盘退变组表现为髓核细胞减少,出现不同程度的退变、坏死,白藜芦醇药物干预组中退变程度明显减轻。结论通过光镜、电镜下观察白藜芦醇对大鼠退变腰椎间盘髓核组织有延缓或抑制作用,可为白藜芦醇预防和治疗椎间盘退变提供相关的实验依据。     

椎间盘内注射碱性成纤维细胞生长因子对大鼠腰椎间盘针刺退变的预防作用

目的: 观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）对SD大鼠腰椎间盘针刺退变的预防效果。方法： 24只成年SD大鼠随机分为实验组、对照组、空白组,每组8只。实验组在术中透视引导下用27G针头对L4-5,L5-6椎间盘后侧针刺后以微量注射器向椎间盘内注射bFGF 50 μL, 对照组椎间盘穿刺后注射生理盐水50 μL,空白组椎间盘不予穿刺,术后8周3组SD大鼠统一行MRI检查,观察T2加权像腰椎间盘信号强度的改变,以Pfirrmann分级法对椎间盘退变程度进行分级,取出椎间盘行病理学观察。结果： MRI结果显示,术后8周实验组及空白组髓核信号强度明显高于对照组,各组间Pfirrmann评分结果差异有统计学意义（P<0.05）,病理学检查显示实验组及空白组髓核细胞数量无明显改变,纤维排列整齐,对照组髓核细胞数量明显降低,胶原纤维排列紊乱。结论：bFGF注射对于后侧纤维环针刺术后SD大鼠椎间盘的退变有预防作用。     

补肝健腰方对腰椎间盘退变大鼠髓核组织TNF-α、IL-1β干预作用的研究

目的 观察补肝健腰方对腰椎间盘退变大鼠髓核组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的干预作用,探讨补肝健腰方防治腰椎间盘退变的疗效机制.方法 40只10月龄SD大鼠随机分为造模组30只、假手术组10只;采用纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型,造模组造模成功后随机分为模型组、补肝健腰方组、布洛芬组,每组各8只.造模成功给药6周后检测大鼠髓核组织TNF-α、IL-1β的表达水平.结果 模型组腰椎间盘髓核组织TNF-α、IL-1β表达较假手术组增高,差异均有非常显著性意义(P＜0.01);补肝健腰方组腰椎间盘髓核组织TNF-α、IL-1β的含量均低于模型组,差异均有明显统计学意义(P＜0.01);布洛芬组腰椎间盘髓核组织IL-1β的含量低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 补肝健腰方可能是通过抑制大鼠退变腰椎间盘髓核组织中致炎因子TNF-α、IL-1β的表达来减轻腰椎间盘的退行性改变.     

纤维环针刺损伤大鼠模型的腰大肌被动拉伸张力变化研究

目的 观察针刺损伤纤维环大鼠腰大肌被动拉伸张力变化及机理.方法 将20只Wistar大鼠随机分为模型组与假手术组,每组10只.模型组采用前入路腹膜手术法针刺损伤L4～5,L5～6两节段纤维环造模;假手术组仅切开腹部皮肤,肌肉暴露椎间盘后缝合.术后分别于第2周、第5周观察2组大鼠行为学表现.于术后5周取双侧腰大肌进行被动拉伸测试,并取L4～5,L5～6椎间盘,进行形态学观察.结果 术后5周大鼠垂直方向运动红外线计数模型组较假手术组减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.显微镜下可见模型组椎间盘形态学改变明显,纤维环排列轻度改变,髓核组织稀疏,分布不均,髓核中有大量不定形物质;假手术组椎间盘可见纤维环层次分明,与髓核界线明显,髓核组织呈中央密集分布,周围呈均匀分布,细胞数目较多.右侧腰大肌弹性模量模型组较假手术组减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 针刺损伤腰椎间盘后可引发腰大肌被动拉伸张力降低,提示静力平衡结构损伤可能造成动力平衡结构变化.     

白藜芦醇对大鼠腰椎间盘退变的影响

目的探讨白藜芦醇(RES)对大鼠退变腰椎间盘病理组织学改变及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照组、椎间盘退变组和白藜芦醇药物干预组,每组12只,手术方法制作大鼠腰椎间盘退变模型。白藜芦醇药物干预组在造模后4周,将RES超细粉末制成20mg.mL-1的溶液,按50 mg.kg-1,每天1次腹腔注射,持续2周。正常对照组和椎间盘退变组给予腹腔注射生理盐水,三组大鼠在造模后8周取腰椎间盘组织,HE染色观察各组椎间盘病理组织学改变;免疫组织化学法观察MMP-9的表达。结果 HE染色显示白藜芦醇药物干预组可见不同程度的髓核的脊索细胞及软骨样细胞减少,周围基质和水分亦较少,但比椎间盘退变组退变程度轻。免疫组织化学染色结果 MMP-9阳性染色的灰度值分析显示白藜芦醇药物干预组阳性染色弱于椎间盘退变组(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇具有减轻实验性腰椎间盘组织退变的作用,抑制MMP-9的表达可能是其作用机制之一。     

腰椎间盘组织的超微结构观察

对4例胎儿,1例正常成人和14例腰椎间盘突出症患者以及5例Wistar大鼠,2例家兔的腰椎间盘做了透射电镜观察,结果发现胎儿不同年龄的脊索细胞的演变,显示脊索细胞在形成髓核,尤其是在髓核的基质中发挥重要作用。不同物种、不同时期的腰椎间盘在早期即有髓核组织的退行性改变,并随年龄增长日趋明显,但四肢动物退变程度不如人类明显。腰椎间盘突出症组织的超微结构变化主要为细胞及基质的退行性改变,但其程度和某些变化有别于正常生理退变。     

骨质疏松大鼠椎间盘的超微结构研究

目的:观察骨质疏松大鼠椎间盘中髓核组织的超微结构改变,探讨其发病机理.方法:6月龄雌性SD大鼠64只,实验组32只,行双侧卵巢切除术;对照组32只,行假手术.术后3个月两组分别以Prodigy骨密度仪作大鼠腰椎骨密度值(BMD)测定;同时分别处死5只大鼠,摘取子宫组织,进行病理学检查;术后3个月分别取两组大鼠L4-L5椎间盘,应用电镜技术,对取出的髓核组织进行超微结构观察.结果:术后3个月大鼠腰椎BMD,实验组和对照组之间有非常显著性的差异(P＜0.01);同时实验组子宫病理学检查和对照组比较,明显萎缩.证实骨质疏松模型建立的成功.电镜结果显示:(1)软骨细胞减少,多呈不同程度地退变、死亡,细胞外用致密颗粒增多.(2)胶原纤维发生不同程度的变性、融合、扭结或钙化,胶原纤维束间裂隙增大.(3)弹力纤维数量减少,伴老化、变性.结论:骨质疏松大鼠椎间盘都有不同程度的退变.     

MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达及意义

目的检测MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达,探讨其在大鼠腰椎间盘退变中的作用。方法雄性大鼠24只,随机分为两组,实验组建立大鼠手术制备腰椎间盘退变模型,正常组不做处理,采用免疫组织化学方法检测两组椎间盘组织中MMP-13的表达。结果组织病理学显示实验组髓核细胞数目较正常组减少。实验组和正常组椎间盘组织中均有MMP-13的表达,实验组表达较对照组显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 MMP-13在腰椎间盘退变的过程中发挥着重要作用。     

补肾活血汤对大鼠腰椎间盘退行性变模型Fas/FasL信号通路的影响

目的 探索补肾活血汤对大鼠腰椎间盘退行性变模型脂肪酸合成酶（fatty acid synthase, Fas）/脂肪酸合成酶配体（fatty acid synthase ligand, FasL）信号通路的影响。方法 50只大鼠随机分成空白组、假手术组、补肾活血汤组、腰痹通组、模型组,每组10只。空白组、假手术组、模型组每日10 mL/kg生理盐水灌胃;补肾活血汤组每日28.98 g/kg补肾活血汤灌胃;腰痹通组每日0.34 g/kg腰痹通灌胃,各组均干预4周。干预结束后,取腰椎间盘组织,番红固绿、Masson染色观察病理学变化,免疫组织化学法计算积分光密度（integral optical density, IOD）值,Western bolt检测Fas、FasL蛋白表达水平,RT-PCR检测Fas、FasL mRNA表达水平。结果 空白组、假手术组细胞形态基本正常,细胞核清晰可见;模型组纤维环碎裂明显,纤维环与髓核间中断,结构不清晰,且染色较深;补肾活血汤组纤维环轻度破裂,髓核细胞及空泡数量略有减少,髓核中基质轻度凝结。与空白组比较,模型组Fas、FasL IOD值均明显升高（P&...     

Hartley豚鼠增龄过程中腰椎间盘退变髓核组织形态变化及其生化研究

目的 研究Hartley豚鼠腰椎间盘自然老化及退变过程中脊索性髓核向纤维软骨髓核转化的规律及其血液生化指标与腰椎间盘退变的关系.方法 Hartley雌性豚鼠40只,分别为1、1、5、2、2、5、3月龄,每组各8只.通过HE观察豚鼠椎间盘髓核退变情况,测定其血清中蛋白多糖水平.结果 2月组椎问盘形态即有退变.血清蛋白多糖含最随年龄的增长而下降,各组间差异显著.结论 随着年龄的增长,椎间盘退变的同时,出现血清蛋白多糖含量的降低.随着椎间盘的不断老化,终板的软骨细胞向髓核迁移,脊索性髓核向心性皱缩并最终完全被纤维软骨性髓核取代.在Hartley雌性豚鼠椎间盘退变的过程中,这一转化完成得更快、更早.     

护卵汤对卵巢储备功能减退大鼠卵巢指数及卵泡数量的影响

目的:观察中药护卵汤对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠卵巢指数及卵泡数量的影响。方法:选取动情周期为4～5 d的雌性大鼠48只为实验动物,随机数字表法,将其分为空白组、模型组、护卵汤组和补佳乐组4组,每组12只。采用环磷酰胺(CTX)单次腹腔注射的方法制备DOR大鼠模型。自造模第1天开始,每天给予护卵汤组大鼠1 mL/100 g护卵汤浓缩液灌胃;每天给予补佳乐组大鼠1 mL/100 g补佳乐稀释液灌胃;空白组、模型组大鼠每天按相同剂量给予生理盐水灌胃。每天1次,连续4周,每周休息1 d。给药4周后称取卵巢湿重并计算卵巢指数,观察卵巢组织形态学变化,累积计数原始卵泡、初级卵泡、窦状卵泡和闭锁卵泡数目。结果:与空白组相比,模型组大鼠双侧卵巢湿重、卵巢指数均降低(P0.01),卵巢组织损伤明显,原始卵泡、初级卵泡、窦状卵泡数量均减少(P0.05,P0.01),闭锁卵泡数量增加(P0.01);与模型组相比,护卵汤组和补佳乐组大鼠双侧卵巢湿重、卵巢指数均增高(P0.01,P0.05),卵巢组织损伤较轻,护卵汤组大鼠卵巢组织中原始卵泡、初级卵泡数量均增加(P0.05,P0.01),闭锁卵泡数量减少(P0.05);补佳乐组大鼠卵巢组织中初级卵泡数量增加(P0.05),闭锁卵泡数量减少(P0.05)。结论:护卵汤具有改善CTX所致DOR大鼠模型的卵巢指数,减轻卵巢组织损伤,提高卵泡数量,从而保护卵巢功能的作用。     

回医烙灸对大鼠腰椎间盘退变模型软骨基质的影响

目的:观察回医烙灸疗法对大鼠腰椎间盘退变模型软骨细胞外基质的影响。方法:将SD大鼠40只,随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组和回医烙灸组,每组10只。采用针刺间盘方法制备大鼠腰椎间盘退变模型。回医烙灸组在造模4 w后,在腰椎局部行回医烙灸疗法,每周2次,每次20 min,干预6 w。正常对照组、假手术组和模型组不予干预。4组动物干预8 w后处死取材,采用分光光度法检测椎间盘蛋白多糖,II型胶原纤维、MMP-3、TIMP-1蛋白的表达采用免疫组化方法进行检测。结果:回医烙灸组蛋白多糖和II型胶原纤维阳性细胞数明显高于模型对照组(P0.05)。回医烙灸组间盘软骨组织MMP-3的阳性细胞数低于模型对照组(P0.05),软骨组织TIMP-1的阳性细胞数高于模型对照组(P0.05)。结论:回医烙灸疗法可以减少大鼠腰椎间盘退变模型软骨组织基质的降解,并可以调节软骨基质降解相关因子的表达,从而延缓腰椎间盘的退变。     

转化生长因子-β1和胰岛素样生长因子-1对兔退变髓核细胞生物学活性的影响

目的 观察在体外培养条件下转化生长因子-β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对兔退变髓核细胞生物学活性的影响.方法 建立兔腰椎间盘退变模型及体外培养兔退变髓核细胞,台盼蓝染色法测定活细胞率.将每份髓核细胞样本分为空白组、TGF-β1组和TGF-β1+IGF-1组.TGF-β1和IGF-1干预后第0、2、4、6天,采用RT-PCR和Western blot方法测定细胞内Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达. 结果 体外培养兔退变髓核细胞的活细胞率为88%～95%.干预后第4天和第6天TGF-β1+IGF-1组与TGF-β1组、空白组比较细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原均显著增加(P<0.05).结论 TGF-β1和IGF-1能够促进兔退变髓核细胞合成Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖,改善其生物学活性.     

回医烙灸疗法对大鼠腰椎间盘退变模型软骨细胞凋亡的影响

目的 :观察回医烙灸疗法对大鼠腰椎间盘退变模型软骨细胞凋亡及相关凋亡因子的影响。方法 :将SD大鼠40只,随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组和回医烙灸组,每组各10只。采用针刺间盘方法制备大鼠腰椎间盘退变模型。回医烙灸组在造模4周后,在腰椎局部行回医烙灸疗法,每周2次,每次20 min,干预6周。正常对照组、假手术组和模型组不予干预。4组动物干预8周后处死取材,软骨细胞凋亡用TUNEL法检测,Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达采用免疫组化方法进行检测。结果 :回医烙灸组凋亡指数明显低于模型对照组(P0.05);回医烙灸组和正常对照组、假手术组比较,差异无明显统计学意义(P0.05)。回医烙灸组间盘软骨组织Bax和Caspase-3的阳性细胞平均数低于模型组(P0.05),软骨组织Bcl-2的阳性细胞平均数高于模型对照组(P0.05)。结论 :回医烙灸疗法可以减少大鼠腰椎间盘退变模型软骨细胞的凋亡,并可以调节软骨细胞凋亡相关因子的表达,从而延缓腰椎间盘的退变。     

雌激素在大鼠颈椎间盘退变中的作用

目的:研究雌激素在SD大鼠颈椎间盘退变过程中的作用。方法:30只8月龄雌性SD大鼠随机平分为对照组、模型组、实验组,通过切除双侧卵巢和颈后肌肉创建雌激素缺乏大鼠颈椎动静失衡模型,实验组补充外源性雌激素。造模后3月通过观察颈椎间盘形态、细胞凋亡率及测量蛋白多糖含量来比较3组之间颈椎间盘退变程度。结果:形态学观察比较实验组椎间盘退变程度重于对照组而轻于模型组;椎间盘细胞凋亡率模型组>实验组>对照组,3组之间具有显著差异(P<0.01);蛋白多糖含量模型组<实验组<对照组,3组之间具有显著差异(P<0.01)。结论:雌激素对大鼠颈椎间盘退变具有抑制作用,能够延缓椎间盘的退变进程。     

经皮微创纤维环穿刺法制作兔椎间盘退变模型

目的应用经皮微创穿刺方法制造兔腰椎间盘退变模型。方法在C型臂X光机监控下,定位18只兔子的L3/4、L4/5、L5/6椎间盘,应用经皮穿刺方法穿刺纤维环,每组行MRI检查后予以处死,取L3/4、L4/5、L5/6椎间盘髓核组织行HE染色观察髓核细胞,用免疫组化染色法观察Ⅱ型胶原蛋白染色情况,取L2/3及L6/7正常间盘组织作为对照。结果造模前后椎间盘髓核的MRI信号强度有随造模手术后的时间延长而逐渐降低的趋势(L3/4、L4/5及L5/6,P<0.05)。病理HE染色观察发现,对照组正常的髓核组织中有大量的髓核细胞,随着通过微创法制作兔腰椎间盘退变动物模型后时间的延长纤维环细胞、髓核细胞数量逐渐减少,到第12周时,髓核组织中只有很少量的髓核细胞,却有很多纤维软骨组织。对照组及术后4、8、12周组Ⅱ型胶原免疫组化染色的灰度值单因素方差分析结果 F=41.82,P<0.05,组间比较LSD-t检验结果显示除术后4周与8周组比较差异无统计学意义外,其余组间比较均有显著差异(P<0.05)。结论成功建立了新的微创兔腰椎间盘退变动物模型。