补肾健脾法对骨质疏松大鼠骨组织形态学影响的实验研究

目的研究补肾健脾法对骨质疏松症大鼠骨组织形态学改变的影响。方法取10月龄大鼠36只随机分成3组：补肾健脾组（BSJP）、正常组、模型组。BSJP组及模型组无茵条件下摘取双侧卵巢制造骨质疏松模型,正常组采取假手术。术后1周开始给药,12周后处死。取大鼠股骨远端1／3近关节部位,制作不脱钙骨切片,进行骨组织形态学研究。结果BSJP组大鼠静态组织学各项参数与模型组比较,有显著差异（P〈0．01）;动态组织学各项参数与模型组比较,有显著差异（P〈0．01）。结论中医药补肾健脾法可以明显降低破骨细胞活性,抑制绝经后骨质疏松症的高转换率,能够有效地防治骨质疏松症。     

补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的:观察补肾健脾方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化能力的影响。方法:大鼠随机分为正常组、悬吊组、补肾健脾方高、中、低剂量组共5组。除正常组外,其余各组大鼠头低位-30度尾部悬吊连续21 d模拟失重,后3组大鼠从实验第1天开始分别按剂量11.4,5.7,2.8 g·kg-1·d-1给予补肾健脾方ig 21 d,其余各组大鼠ig等容积的生理盐水。全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并进行成脂分化诱导,油红O染色法检测脂滴形成情况,Real Time PCR法和Western bolt法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白表达,在成脂诱导分化的第7,14,21天分别检测细胞内甘油三酯(TG)含量。结果:较正常组,悬吊组大鼠BMSCs经成脂诱导后7,14,21 d TG含量均明显升高(P0.01),成脂诱导21 d成脂能力,PPARγmRNA和蛋白表达明显增强(P0.01);较悬吊组,补肾健脾高、中、低剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导7,14,21 d后TG含量降低(P0.01,P0.05),经成脂诱导21 d后成脂能力均明显减弱(P0.01),PPARγmRNA和蛋白表达减少(P0.01,P0.05);较补肾健脾中剂量组,补肾健脾高剂量组大鼠BMSCs经成脂诱导14,21 d后TG含量降低(P0.05),经成脂诱导21 d后补肾健脾高剂量组成脂能力均减弱(P0.05),PPARγmRNA和蛋白表达均减少(P0.05,P0.01),补肾健脾低剂量组PPARγ蛋白表达增多(P0.05)。结论:补肾健脾方具有抑制尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的作用,以补肾健脾方高剂量作用为优,其机制可能与下调PPARγ表达有关。     

补肾、健脾和补肾健脾方对尾部悬吊大鼠钙、磷代谢的影响

目的:观察补肾、健脾和补肾健脾3方对模拟失重大鼠钙、磷代谢的作用,比较其促进骨矿化能力的异同.方法:大鼠随机分为正常对照、悬吊、补肾、健脾和补肾健脾共5组.后4组大鼠头低位-30度尾部悬吊连续21 d模拟失重,补肾、健脾和补肾健脾组大鼠从实验第1天开始依次按2.4,3.2,5.7g·kg-1·d-1给予补肾方、健脾方和补肾健脾方灌胃,其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水.实验第22天取材,双能X射线骨密度仪测左侧胫骨骨密度,全自动生化分析仪检测血和尿中钙磷含量,EDTA法检测粪钙和饲料钙含量.结果:较之正常对照组,悬吊组大鼠左侧胫骨骨密度显著降低(P＜0.01),血钙和血磷含量、钙的表观吸收率明显降低(P＜0.01),尿钙、尿磷、粪钙含量明显增高(P＜0.01);较之悬吊组,补肾健脾组大鼠左侧胫骨骨密度、血钙和血磷含量、摄入钙量、钙的表观吸收率明显升高(P＜0.01),尿钙、尿磷、粪钙含量明显降低(P＜0.01),补肾组和健脾组大鼠左侧胫骨骨密度、血钙升高(P＜0.05),钙的表观吸收率均明显升高(P＜0.01),补肾组大鼠血磷含量明显升高(P＜0.01),尿钙、尿磷含量显著降低(P＜0.01),粪钙含量降低(P＜0.05),健脾组大鼠血磷和摄入钙量增加(P＜0.05),尿钙、尿磷和粪钙含量降低(P ＜0.05,P＜0.01);较之补肾健脾组,补肾组和健脾组大鼠左侧胫骨骨密度、血钙含量降低(P＜0.05),补肾组大鼠钙的表观吸收率明显降低(P＜0.01).结论:补肾、健脾和补肾健脾3方均能改善模拟失重引起的钙磷代谢异常,健脾方在促进钙吸收和维持血钙处于正常水平方面对补肾方具有协同增效作用.     

补肾健脾方药对卵巢切除大鼠骨生物力学的影响

为探讨补肾健脾方药对去卵巢大鼠骨生物力学性能的影响 ,取 10月龄SD雌性大鼠 4 0只 ,随机分为模型组、正常对照组、阳性对照组、中药组 ,每组 10只 ,正常对照组行假手术 ,其余 4组行完整双侧卵巢摘除术。术后第 3天开始灌胃给药 ,连续用药满 12周后处死 ,分离出L3腰椎体及左侧股骨 ,进行骨生物力学测试。结果显示补肾健脾方药能明显提高和改善去卵巢大鼠椎体及股骨的生物力学性能。     

补肾和补肾健脾方对尾部悬吊模拟失重大鼠腰椎和股骨生物力学性能的影响

目的：观察补肾和补肾健脾方对尾部悬吊模拟失重大鼠腰椎和股骨生物力学的影响.方法：大鼠随机分为正常组、悬吊组、补肾组和补肾健脾组共4组.后三组大鼠头低位-30°尾部悬吊连续21天,补肾和补肾健脾组大鼠从实验第1天开始分别给予补肾和补肾健脾方灌胃,其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水.实验第22天处杀各组大鼠,取左侧股骨和第4腰椎,进行股骨三点弯曲试验和椎体压缩试验,计算最大载荷、最大挠度、弹性载荷、弹性挠度.结果：与正常组比较,悬吊组大鼠股骨和腰椎L4最大载荷、最大挠度、弹性载荷、弹性挠度均明显降低（P＜0.01）;与悬吊组比较,补肾组大鼠股骨最大载荷和弹性载荷升高（P＜0.05）,腰椎L4最大载荷、最大挠度、弹性载荷、弹性挠度均升高（P＜0.01,P ＜0.05）,补肾健脾组大鼠股骨和腰椎L4最大载荷、最大挠度、弹性载荷、弹性挠度均升高（P＜0.01,P＜0.05）;与补肾组比较,补肾健脾组大鼠股骨最大载荷、腰椎L4最大载荷和弹性挠度均升高（P＜0.05）.结论：补肾和补肾健脾方均能够改善尾部悬吊大鼠腰椎和股骨生物力学性能,以补肾健脾方作用为优.     

针灸对去势大鼠骨组织形态学影响的实验研究

目的:以去势大鼠为研究对象,通过观察骨组织形态学的变化以探讨针灸对骨质疏松症的干预机制。方法:将40只Wister大鼠随机分为4组,即假手术组,模型组,针刺组,艾灸组。造模后,针刺组和艾灸组每日进行相应处理。各组大鼠在造模3个月后进行骨组织形态学实验。结果:去势大鼠针刺及艾灸治疗后,骨小梁面积和活性成骨细胞表面均有增高,活性破骨表面下降,单标记表面、双标记表面、标记间距离、类骨质表面、矿化骨表面、矿化沉积率、纠正矿化沉积率均显著下降。类骨质宽度无明显改变,矿化延迟时间有显著延长。结论:针刺及艾灸对去势后大鼠的骨组织形态学指标有良性调整作用。     

骨宝对正常大鼠骨组织形态学影响的定量研究

分别用５、１５ｇ／ｋｇ的骨宝给３月龄ＳＤ大鼠灌胃，每周６次，持续１８０ｄ。不脱钙骨制片，用图象定量法，测量大鼠胫骨近端骨小梁。结果：高剂量骨宝组与对照组比较，骨吸收减少３１％，骨面积增加３９％。     

骨宝对正常大鼠骨组织形态学影响的定量研究

分别用５、１５ｇ／ｋｇ的骨宝给３月龄ＳＤ大鼠灌胃、每周６次，１８０ｄ。不脱钙骨制片，用图象定量法，测量大鼠胫骨近有小梁。结果：高剂量骨宝组与对照组比较，骨吸收减少３１％，骨面积增中３９％。     

补肾健脾活血方药对实验性老年骨质疏松大鼠骨微结构的影响

目的 :探讨补肾健脾活血方药对老年骨质疏松症的防治作用 ,寻求符合老年骨质疏松症病机特点的防治方法。方法 :采用 15月龄雌雄性大鼠肌注地塞米松复制老年骨质疏松症模型 ,观察补肾健脾活血方药对老年骨质疏松大鼠股骨病变的影响 ,并与补肾活血方药、健脾活血方药进行比较。结果 :补肾健脾活血组、补肾活血组、健脾活血组的相对骨体积 ,平均骨小梁宽度均高于病理对照组 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;补肾健脾活血组的相对骨体积、平均骨小梁宽度均高于补肾活血组和健脾活血组 (P <0 0 5～ 0 0 1)。结论 :补肾健脾活血方药防治老年骨质疏松症作用优于补肾活血方药和健脾活血方药 ,补肾健脾活血法是符合老年骨质疏松症病机特点的有效防治方法     

补肾健脾活血方药对老年骨质疏松大鼠血清IL-6的影响

目的：观察补肾健脾活血方药对老年骨质疏松大鼠血清IL－6的影响，探讨其作用机理。方法：用地塞米松肌注15月龄雌雄性大鼠诱发骨质疏松。实验分正常对照组、模型组、补肾健脾活血组。用排开丙酮法测各组BMD，用放免法测各组血清IL－6。结果：模型组BMD明显低于正常对照组（P＜0．01），模型组血清IL－6水平明显高于政党对照组（P＜0．01）；补肾健脾活血组BMD明显高于模型组（P＜0．01）。IL－6水平明显代于模型组（P＜0．01）。结论：补肾健脾活血方药可减少IL－6分泌，降低血清IL－6水平，从而发挥抗骨丢失的作用。     

山茱萸总苷对去势大鼠骨组织形态学影响的实验研究

目的 观察去势大鼠骨组织形态学的变化,探讨山茱萸总苷对骨质疏松症的干预机制。方法 将50只Wistar大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、山茱萸总苷高剂量组、山茱萸总苷中剂量组及山茱萸总苷低剂量组。复制骨质疏松动物模型,并于术后第4天开始给药,假手术组和模型组均灌服蒸馏水（20ml／kg）,山茱萸高剂量组服用量为3．56g／kg（1．6倍等效剂量）,山茱萸中剂量组为2．16g／kg（1倍等效量）,山茱萸低剂量组为1．08g／kg（0．5倍等效剂量）。各组动物灌胃容量相同,均为8ml。每日灌胃1次,每周6次,连续灌胃3个月。各组大鼠在造模3个月后进行骨组织形态学实验。结果 去势大鼠经过不同浓度的山茱萸总苷治疗后,各组的骨小梁面积和活性成骨细胞表面均有增高,活性破骨表面下降,单标记表面、双标记表面、标记间距离、类骨质表面、类骨质宽度、矿化骨表面、矿化沉积率均显著下降。纠正矿化沉积率、矿化延迟时间无明显改变,其中以中剂量组促进骨形成作用最明显。结论 山茱萸总苷对去势后大鼠的骨组织形态学指标有良性调整作用。     

补肾、健脾和补肾健脾3方对尾部悬吊大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的：观察补肾、健脾和补肾健脾3方对尾部悬吊模拟失重大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法：大鼠随机分为正常组、模型组、补肾组、健脾组和补肾健脾组共5组。后4组大鼠头低位-30°尾部悬吊连续21天,补肾、健脾和补肾健脾组大鼠从实验第1天开始分别给予补肾、健脾和补肾健脾方灌胃,其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水。实验第22天处死各组大鼠,全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,取第3代细胞进行成骨分化诱导实验,成骨分化诱导第4、7、10天采用p-NPP法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,成骨分化诱导第7、14、21天采用ELISA法检测细胞上清液中骨钙素（OC）含量,成骨分化诱导第21天茜素红染色法检测钙结节形成情况。结果：与正常组比较,模型组大鼠BMSCs经成骨诱导4、7、10天ALP活性均显著降低（P<0.01）,经成骨诱导7、14、21天细胞上清OC含量显著降低（P<0.01）,经成骨诱导21天后钙结节形成显著减少（P<0.01）;与模型组比较,补肾组和补肾健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导4、7、10天ALP活性均明显升高（P<0.05或P<0.01）,健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7、10天ALP活性均明显升高（P<0.05）,补肾、健脾和补肾健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7、14、21天细胞上清OC含量明显升高（P<0.05或P<0.01）,经成骨诱导21天后钙结节形成显著增多（P<0.01）;与补肾组比较,健脾组大鼠BMSCs经成骨诱导7天ALP活性降低、经成骨诱导21天细胞上清OC含量明显降低（P<0.05）,而补肾健脾组明显升高（P<0.05）,经成骨诱导21天后补肾健脾组钙结节形成明显增多（P<0.05）。结论：补肾、健脾和补肾健脾3方具有促进尾部悬吊模拟失重大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用,以补肾健脾方作用为优。     

仙灵骨葆对卵巢切除大鼠骨组织形态学的影响

采用卵巢切除的方法建立原发性骨质疏松症的动物模型 ,观察中药仙灵骨葆和西药倍美力对去势大鼠骨组织光镜、电镜及骨组织形态计量学等指标的影响。结果表明 ,应用仙灵骨葆治疗以后 ,模型大鼠的骨组织形态学发生明显改变 ,单位面积内骨小梁的体积增加 ,骨小梁宽度增加 ,但骨小梁之间的间距并不减少 ,在光镜和电镜下可以观察到类似改变 ,与所应用对照药物倍美力的治疗效果相似 ,无统计学差异。说明仙灵骨葆可以在一定程度上改善骨质疏松大鼠的骨结构 ,恢复骨组织的形态 ,在骨质疏松症的治疗中发挥作用。     

补肾方药对去卵巢大鼠骨质疏松的骨组织ER表达的影响

目的：探讨雌激素受体在骨质疏松发病中的作用及补肾方药对其调整作用。方法：通过切除大鼠卵巢造成骨质疏松模型,补肾方药和尼尔雌醇分别灌胃治疗3个月,观察补肾中药对骨质疏松的治疗作用,并且采用免疫组织化学,RT－PCR方法检测大鼠去卵巢前后骨组织中雌激素受体的变化,及补肾中药治疗对其的影响。结果：卵巢切除后大鼠的血清雌二醇水平,腰椎中的雌激素受体表达水平及股骨干骺端雌激素受体mRNA表达均下降。补肾中药能够提高去卵巢大鼠的骨密度,改善其病理变化,提高大鼠血清E2水平,并且可以从RNA,蛋白质两种水平,提高骨组织中的ER的表达,结论：补肾方药对去卵巢实验性骨质疏松大鼠有治疗作用,其作用机制不仅与其拟雌激素样作用有关,而且与其提高ERa在骨组织中的表达有关,进一步表明了雌激素受体在骨质疏松发病中的作用。     

延经丸对骨质疏松症大鼠骨组织形态学及血清骨钙素含量的影响

目的:观察延经丸治疗地塞米松诱导的大鼠骨质疏松症的疗效。方法:先将60只SD大鼠(雌雄各半)按照随机数字表随机分为空白组(12只)和模型组(48只)。模型组皮下注射地塞米松诱导大鼠骨质疏松模型。造模成功后再随机分4组分别是:生理盐水组、葡萄糖酸钙组、延经丸大剂量组、延经丸小剂量组。观察各组大鼠骨组织形态学,血清骨钙素的变化。结果:与生理盐水组比较,延经丸大剂量组骨钙素有显著性差异(P<0.01);葡萄糖酸钙组和延经丸小剂量骨钙素有显著性差异(P<0.05);与葡萄糖酸钙组比较,延经丸大剂量组骨钙素有显著性差异(P<0.01);与延经丸小剂量组比较,延经丸大剂量组骨钙素有显著性差异(P<0.01)。结论:延经丸可以显著升高大鼠血清骨钙素水平。     

仙灵骨葆对卵巢切除大鼠骨组织形态学的影响和

采用卵巢切除的方法建立原发性骨质疏松症的动物模型，观察中药仙灵骨葆和西药倍美力对去势大鼠骨组织光镜、电镜及骨组织形态计量学等指标的影响。结果表明：应用仙灵骨葆治疗以后；模型大鼠的骨组织形态学发生明显改变，单位面积内骨小体积增加，骨小梁宽度增另，但骨小梁之间的间距并不减少，在光镜和电镜下可以观察到类似改变，与所应用对照药物倍美力的治疗效果相似，无统计学差异。说明仙灵骨葆可以在一定程度上改善骨质疏松大     

淫羊藿总黄酮对去势大鼠股骨骨组织形态学及生物力学的影响

目的：探讨淫羊藿总黄酮（TFE）对去势大鼠股骨骨组织形态及生物力学的影响及其机制。方法：采用卵巢切除的方法建立大鼠骨质疏松模型,将60只大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,TFE低、中、高剂量组,β-雌二醇组6组,每组10只,分别予相应药物灌胃90天。脱钙完成后将股骨近端沿矢状面切开,制成常规石蜡,切片,光镜下观察骨小梁结构;采用三点弯曲实验机,支点跨距18 mm,加载速度2 mm/min,分别从载荷-变形曲线和应力-变形曲线上获得结构力学参数和材料力学参数。结果：与正常对照组相比,模型对照组大鼠骨小梁出现断裂、间隙增宽、数量减少;与模型对照组相比,各给药组骨组织形态明显改善,以TFE高剂量组最为明显;与正常对照组相比,模型对照组股骨结构力学和材料力学均显著下降,其差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型对照组相比,TFE低、中、高剂量组及β-雌二醇组生物力学各项指标均上升或显著上升,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：TFE可改善去势大鼠股骨骨组织结构,从而改善其生物力学性能。     

尾部悬吊3周及中药干预对模拟失重大鼠全身骨密度的影响

目的观察3周尾部悬吊模拟失重对大鼠不同部位骨的骨密度（BMD）的影响,并探讨中药复方对其干预作用。方法2月龄雄性WiStar大鼠,按体重随机分为3组：空白组、模型组、中药组。中药组全程给予中药复方（含刺五加、熟地黄、牛膝、牡蛎等）水煎剂灌胃,空白组和模型组则仅给予与中药组等量、等形式的牡蛎（均以等量醋酸水解）;自第2周始,模型纽和中药组均以尾部悬吊模拟失重3周。第4周末大鼠被处死后,分别测量其7个不同部位骨的BMD,其中头盖骨和第二胸椎用浮力法测量,第四腰椎、肱骨、股骨、桡尺骨和胫骨用双能X线骨密度仪测量。结果与空白组相比,模型组头盖骨BMD显著增加（P〈0．05）,胸椎、桡尺骨、肱骨无变化（P〉0．05）,腰椎、股骨、胫骨BMD显著下降（P〈0．05,P〈0．01）;与模型组比较,中药组腰椎、股骨、肱骨BMD显著提高（P〈0．05,P〈0．01）,同时胫骨BMD有提高趋势,而头盖骨、桡尺骨、胸椎无变化（P〉0．05）。结论3周尾吊模拟失重大鼠全身BMD变化呈现特定趋势,头部BMD提高,上肢及第二胸椎BMD保持不变,第四腰椎及后肢BMD下降;中药复方对缓解失重骨质疏松、纠正失重性骨钙再分布有积极意义。