蛭草茶合剂对糖尿病小鼠视网膜Müller细胞的保护作用及炎症因子表达的影响

目的:观察蛭草茶合剂对糖尿病小鼠视网膜Müller细胞的保护作用及对炎症因子表达的影响。方法:健康清洁级雄性C57BL/6J小鼠75只,采用随机数字表法随机分为正常对照组、糖尿病组、低浓度蛭草茶合剂治疗组(低浓度治疗组)、中浓度蛭草茶合剂治疗组(中浓度治疗组)、高浓度蛭草茶合剂治疗组(高浓度治疗组),每组15只。糖尿病组、不同浓度治疗组小鼠按60 mg/kg剂量腹腔注射STZ诱导糖尿病动物模型。建模后4周,低浓度治疗组、中浓度治疗组、高浓度治疗组大鼠分别按30、60、120 ml/kg的浓度行蛭草茶合剂灌胃治疗。每两周测定各组小鼠体重及血糖。第8周后,采用Western blot检测各组小鼠视网膜Müller细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;免疫荧光检测GFAP、谷氨酰胺合成酶(GS)表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、ELISA分别检测VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析。结果:糖尿病组小鼠体重较正常对照组降低,血糖升高;不同浓度治疗组小鼠血糖呈降低趋势。与正常对照组比较,糖尿病组小鼠视网膜Müller细胞GFAP蛋白表达升高(t=38.318,P<0.001),GS蛋白表达降低(t=29.737,P<0.001),差异有统计学意义;与糖尿病组比较,低浓度治疗组、中浓度治疗组、高浓度治疗组小鼠Müller细胞GFAP蛋白表达下降(t=13.677、19.387、16.305,P<0.05),GS蛋白表达升高(t=5.170、19.399、6.705,P<0.05),差异均有统计学意义。糖尿病组小鼠视网膜Müller细胞VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白表达均升高,不同浓度治疗组均降低。结论:蛭草茶合剂可降低糖尿病小鼠血糖,减轻糖尿病视网膜炎症反应。     

色素上皮衍生因子对氧诱导视网膜神经节细胞凋亡及Bcl2表达的影响

目的 探讨色素上皮衍生因子(pigmentepitheliumderivedfactor,PEDF)对氧诱导缺血性视网膜病变(oxygeninducedischemicretinopathy,OIR)小鼠视网膜神经节细胞(retinalganglioncell,RGC)凋亡的抑制作用及其可能的机制。方法 选择7d龄C57BL/6J小鼠140只,随机分为正常对照组、OIR模型组、PBS治疗对照组和PEDF药物治疗组。选择右眼为实验眼,将除正常对照组外的所有小鼠建立OIR模型。PEDF药物治疗组分别于小鼠12d龄和14d龄给予两次玻璃体内注射PEDF(2μgμL-1)各1μL,PBS治疗对照组玻璃体内注射等量的PBS(10mmolL-1,pH7.4)。于17d龄处死小鼠,各组随机抽取5只,摘除右眼球,采用TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况以及免疫荧光染色法检测Bcl2蛋白在小鼠视网膜中的表达情况;其余小鼠过量麻醉处死后取出视网膜,采用Westernblot检测Bcl2蛋白以及RealtimeRTPCR检测bcl2mRNA的表达。结果 视网膜眼科新进展 2014年6月 第34卷 第6期细胞的凋亡主要在RGC层,OIR模型组小鼠RGC层细胞凋亡率为(55.044±14.538)%,明显高于正常对照组的(3.317±1657)%,差异有统计学意义(P<0.01);PBS治疗对照组细胞凋亡率为(55.852±4.490)%,明显高于PEDF药物治疗组的(5897±2.079)%,差异有统计学意义(P<0.01);正常对照组与PEDF药物治疗组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光显示,OIR模型组与PBS治疗对照组Bcl2蛋白阳性染色较正常对照组明显减少,PEDF药物治疗组阳性染色较PBS治疗对照组增多。Westernblot以及RTPCR结果显示,OIR模型组Bcl2蛋白和mRNA的表达量显著下降,分别为03869±0.0713和0.6942±0.2352,与正常对照组的0.7787±0.0974和1.0000比较,差异均有统计学意义(均为P<005);PEDF药物治疗组Bcl2蛋白和mRNA的表达量分别为0.6101±0.1095和0.8183±0.3080,与PBS治疗对照组的0.2848±0.1536和0.4810±0.1008比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PEDF药物治疗组Bcl     

米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞损伤中的保护作用及分子机制

目的 探讨米诺环素在L-谷氨酸诱导的视网膜神经节细胞(RGC)毒性中的保护作用和分子机制.方法 实验研究.原代小鼠RGCs体外培养24 h后,随机分为3组:对照组,L-谷氨酸组(100 μmol/L、500 μmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L)及L-谷氨酸+米诺环素组(30 μmol),观察不同浓度L-谷氨酸对RGC的存活率与轴突生长的损伤作用及米诺环素的保护作用.体内实验,将雌性B6小鼠随机分为实验组(30只)和对照组(30只).两组小鼠腹腔内分别注射米诺环素(实验组,60 mg/kg)或生理盐水(对照组),每天1次,连续7 d.第2天时,两组小鼠玻璃体腔内注射2μl L-谷氨酸(2 mmol/L),诱导RGC损伤.免疫组化染色分析β-Ⅲ-tubulin阳性细胞数目变化及视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达情况,Real-time PCR和免疫印迹法分别检测小鼠视网膜组织中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、GFAP与波形蛋白(Vimentin)的mRNA及蛋白表达水平.结果 体外实验显示,与对照组相比,L-谷氨酸降低RGC的存活率,与剂量和干预时间呈负相关.同时L-谷氨酸可明显抑制RGC轴突的生长,RGC轴突长度>2BL、1～2 BL、<1 BL占总细胞数比例分别从50.38%、7.83%和3.72%降至31.43%、5.05%和1.29%.而米诺环素能明显减轻L-谷氨酸对RGC的毒性作用,改善RGC轴突生长,各组细胞比例回升至51.00%、8.10%和2.43%,谷氨酸与对照组相比、米诺环素组与谷氨酸相比,差异有统计学意义(F=18.87,P<0.01).体内实验结果显示,与对照组相比,L-谷氨酸组小鼠RGC数目显著减少(45.00±10.21和68.50±2.86),而米诺环素治疗后可明显改善L-谷氨酸诱导的RGC损伤,RGC数目恢复至62.00±11.65,(F=7.6,P<0.01).谷氨酸处理后视网膜组织中GFAP的表达水平明显增高,而米诺环素明显降低视网膜组织中GFAP的表达.同时,L-谷氨酸显著提高小鼠视网膜组织中炎症相关因子IFN-γ、IL-1、TNF-α及胶质细胞相关蛋白Vimentin和GFAP的基因及蛋白表达水平,而米诺环素可显著抑制这些因子的表达.结论 L-谷氨酸损伤可诱导RGC凋亡、抑制RGC轴突生长,并上调炎症因子及视网膜相关胶质蛋白的基因与蛋白表达水平,米诺环素对L-谷氨酸所导致的视网膜神经节细胞损伤具有明显的保护作用.     

miR-26a/PTEN在糖尿病小鼠视网膜神经变性中的作用及其机制

目的　探讨 microRNA-26a-5p (miR-26a)/PTEN在早期糖尿病小鼠视网膜神经变性（DRN）中的作用及其机制。方法　66只C57BL/6J小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病动物模型。实验组小鼠造模成功后随机分为糖尿病组和miR-26a组,miR-26a组小鼠玻璃体内注射miR-26a mimic上调视网膜组织中miR-26a的表达。玻璃体内注射2周后所有小鼠用100 g·L^-1水合氯醛腹腔注射麻醉并处死,立即摘除眼球。HE染色及透射电镜分别观察各组小鼠视网膜形态学及超微结构变化,免疫荧光半定量检测并定位PTEN、胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）在小鼠视网膜各层的表达,qRT-PCR测量各组小鼠视网膜中miR-26a、PTEN和GFAP的mRNA表达。结果　糖尿病组小鼠视网膜神经上皮层厚度较对照组变薄,视网膜神经节细胞(RGC)数量减少,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）;视网膜组织中miR-26a mRNA表达下降（P<0.05）,GFAP及PTEN的mRNA表达较对照组小鼠均明显升高（均为 P<0.05）。与糖尿病组小鼠相比,miR-26a组小鼠视网膜全层厚度明显增厚（均为 P<0.05）,RGC丢失减少,视网膜组织中miR-26a mRNA表达升高,而GFAP及PTEN的mRNA表达均降低,差异均有统计学意义（均为 P<0.05）。结论　miR-26a可能通过下调视网膜组织中PTEN的表达减轻糖尿病小鼠的DRN。     

超声微泡造影剂促进重组腺相关病毒载体介导基因转染视网膜神经节细胞的体内实验

目的 观察超声微泡造影剂提高重组腺相关病毒(rAAV2)介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在体内转染视网膜神经节细胞(RGC)的效率.方法 Sprague-Dawley大鼠40只,随机分为A、B、C、D 4组,每组各10只大鼠.A组玻璃体腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)5μl;B组玻璃体腔注射rAAV2-EGFP 5 μl;C组玻璃体腔注射rAAV2-EGFP 5 μl后立即用超声波辐照眼球;D组玻璃体腔注射rAAV2-EGFP和微泡造影剂的混悬液5 μl后立即用超声辐照眼球.玻璃体腔注射21 d后,3%荧光金逆行标记RGC.逆行标记7 d后取出眼球,制作视网膜铺片及视网膜冰冻切片,在激光共聚焦显微镜下观察并计算EGFP基因在RGC的转染率及在RGC表达的平均吸光度[A,旧称光密度(OD)]值;用RGC计数判断损伤情况.结果 荧光金标记RGC后,B、C、D 3组均可观察到RGC中有EGFP表达.其中,D组平均A值为95.02±7.25,RGC转染率为(20.10±0.74)%、均明显高于B、C组,差异有统计学意义(F平均A值=25.970,F转染率=25.799;P<0.01);A、B、C、D组RGC计数差异无统计学意义(F=0.877,P>0.05).结论 在低频和一定能量的超声和微泡造影剂作用下,rAAV2介导EGFP基因转染体内RGC的效率能够安全、有效地提高.     

天麻素及乙酰天麻素对糖尿病视网膜神经节细胞的保护作用

目的比较乙酰天麻素和天麻素灌胃给药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)的保护作用。方法取56只SD大鼠随机分为7组:对照组、糖尿病模型组、生理盐水治疗组、乙酰天麻素低浓度组及高浓度组、天麻素低浓度组及高浓度组,每组8只。链脲佐菌素腹腔注射建立SD大鼠糖尿病模型,血糖高于16.7 mmol·L-1确定为造模成功。模型鼠出现高血糖1周后,分别给予100 mg·kg-1、200 mg·kg-1乙酰天麻素及50 mg·kg-1、100 mg·kg-1天麻素溶液灌胃给药8周,对照组只给予生理盐水灌胃。模型组和对照组大鼠处死后摘除眼球,做视网膜冰冻切片,PI染核,观察神经节细胞层细胞数量变化并计数。结果造模后8周,糖尿病模型组和对照组的细胞计数分别为5.50±4.50和24.75±3.50,差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病大鼠给予天麻素灌胃给药后,神经节细胞层的RGC细胞的损伤减轻。免疫荧光显示低、高浓度组糖尿病大鼠RGC细胞数量较糖尿病模型组大鼠及对照组大鼠增加,其中高浓度天麻素组增加更明显,生理盐水治疗组及低、高浓度天麻素组的细胞计数分别为6.10±3.75、14.00±3.50和18.01±4.00,差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病大鼠给予乙酰天麻素治疗后,神经节细胞层的RGC细胞数量较糖尿病模型组增加,其中高浓度组增加更明显,低、高浓度乙酰天麻素组的细胞计数分别为18.25±5.50和21.88±5.50,差异有统计学意义(P<0.05);与天麻素组比较,高浓度乙酰天麻素组RGC的细胞数量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙酰天麻素比天麻素能更有效保护糖尿病RGC。     

荧光金逆行标记检测CNTF基因眼内转移对视神经损伤大鼠的影响

目的通过荧光金逆行标记的方法,检测腺病毒(adenovirus,Ad)介导的睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对视神经钳夹伤大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)数目的影响。方法采用钳夹视神经法制作大鼠视神经损伤模型,夹伤后向大鼠伤眼内注射Ad-CNTF,在取材前7d进行荧光金逆行标记RGC,于伤后28d,对大鼠的视网膜铺片进行荧光金标记的RGC记数。结果伤后28d,单纯损伤组、PBS组、Ad-LacZ组视网膜标记RGC数均较低;CNTF处理组视网膜标记RGC数为每视野(12.11±2.29)个(n=9),高于前3组,且差异非常显著(P<0.01)。Ad-CNTF组视网膜标记RGC数为每视野(20.93±2.67)个(n=8),在各组标记RGC数中最多,也好于CNTF组,2组间差异非常显著(P<0.01)。结论视神经损伤后眼内单次注射Ad-CNTF,可明显增加钳夹伤后28d大鼠视网膜的标记RGC数。与单次注射CNTF相比,对损伤的RGC具有更加显著的神经保护作用。     

红景天苷对NMDA介导的小鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷（Sal）对视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的抑制作用。方法：实验研究。36 只C57BL6J小鼠随机分为空白组、模型对照组、不同浓度Sal实验组，每组6 只，均以右眼为实验眼。空白组仅注射0.9%PBS溶液，模型对照组和实验组玻璃体腔注射N-甲基-D-天（门）冬氨酸（NMDA）1.5 μl建立RGCs损伤模型；建模前48 h，模型对照组注射1.5 μl 0.9% PBS溶液，实验组玻璃体腔注射不同浓度Sal（0.1、0.4、2、8 mmol/L，1.5 μl）。建模5 d后制备视网膜标本，观察视网膜RGCs存活及凋亡情况，Western Blot法检测视网膜中Caspase-3、Caspase-8 蛋白的表达。数据采用单因素方差分析。结果：HE染色显示空白组视网膜RGCs无变化，模型对照组RGCs显著减少，不同浓度Sal实验组RGCs细胞核染色数目较模型对照组逐渐增加，并呈浓度依赖性；经视网膜平铺片测定RGCs 存活情况，发现空白组RGCs正常存活，模型对照组仅少量RGCs存活，不同浓度Sal组RGCs存活率较模型对照组提高，各组小鼠RGCs阳性细胞数比较差异有统计学意义（F=212.0，P < 0.001）。同时，8 mmol/L浓度的Sal实验组Caspase-3、Caspase-8 蛋白表达明显低于模型对照组，差异有统计学意义（F=168.3，P < 0.001）。结论：Sal可以抑制NMDA介导的RGCs凋亡，对RGCs损伤有保护作用。     

人脐血干细胞玻璃体腔移植对大鼠外伤性视神经损伤的保护作用

目的观察人脐血干细胞(human umbilical cord blood stem cells,h UCBSC)移植对视神经部分受损SD大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)的保护作用。方法将48只健康成年SD大鼠随机分为2组,2组SD大鼠暴露视神经,应用40 g夹持力的视神经夹在大鼠眼球后2 mm处夹视神经30 s造成部分视神经损伤模型,均损伤左眼。A组:伤后1周玻璃体腔注射脐血干细胞载体PBS,24只。B组:伤后1周玻璃体腔注射h UCBSC,24只;2组均于注射后7 d、14 d、21 d、28 d处死动物。处死前7 d双上丘注射50 g·L-1荧光金逆行标记双眼RGC。然后按时间先后处死大鼠分离视网膜置于荧光显微镜下,计数2组RGC并计算RGC标识率。结果 A、B两组视神经损伤眼RGC计数均低于未损伤眼(均为P<0.05),且随时间延长两组RGC标识率均呈下降趋势(均为P<0.05),但B组注射后7 d、14 d、21 d、28 d RGC标识率(77.52±6.33)%、(74.12±8.23)%、(64.78±5.21)%、(59.93±9.00)%下降幅度明显较A组(75.68±8.74)%、(68.21±10.59)%、(56.24±9.34)%、(48.91±8.81)%平缓。同时间段B组RGC标识率均高于A组,且差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论玻璃体腔注射h UCBSC可减缓外伤性视神经损伤大鼠视网膜中RGC的凋亡,对RGC具有一定的保护作用。     

灯盏细辛对NMDA所致的大鼠视网膜神经元损伤的保护作用

目的:探讨灯盏细辛(EBHM)是否对N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)导致的大鼠视网膜神经节细胞层(RGCL)神经元兴奋毒性损伤有保护作用。方法:60只健康SD大鼠随机分为4组,其中6只为正常对照组(A组),其余54只随机分为3组,分别为B组(EBHM组),C组(生理盐水加NMDA组),D组(EBHM加NMDA组),每组各18只大鼠。C、D两组大鼠右眼玻璃体内注射NMDA 10 nmol/2 μl制成视网膜损伤模型,左眼玻璃体内注射相同剂量PBS液作为自身对照。B组及D组均在NMDA注射前7d起按15 mg·100 g-1·d-1剂量予6％EBHM腹腔内注射,C组予生理盐水0.5 ml腹腔内注射。在NMDA处理后4,7和14 d处死动物剥取视网膜作全层铺片行RGCL神经元计数分析。结果:正常对照组双眼RGCL神经元计数比较差异无显著性意义(P=0.200)。NMDA干预后4、7 d和14 dEBHM组RGCL神经元计数,双眼与正常对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。生理盐水加NMDA及EBHM加NMDA组实验眼在以上各时段RGCL神经元计数与正常比较差异均有非常显著性意义(P<0.001),左眼与正常对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。实验眼14 d时RGCL神经元计数EBHM加NMDA组高于生理盐水加NMDA组,两者比较差异有显著性(P=0.044),但仍低于正常对照组(P<0.05)。结论:单独使用EBHM对正常大鼠RGCL神经元计数无影响,EBHM可对N     

Colivelin对视神经保护作用的初步研究

目的初步探讨Colivelin对大鼠外伤性视神经损伤后的神经保护作用和机理,及其保护效果是否具有剂量依赖性。方法 40只健康2月龄Wistar大鼠,随机分为模型组、安慰剂组及Colivelin低剂量组(10-6 μmol·L-1 Colivelin)、Colivelin中剂量组(10-4μmol·L-1Colivelin)、Colivelin高剂量组(10-2 μmol·L-1 Colivelin),每组8只。40只大鼠均做单侧视神经损伤模型,模型组另一侧未做任何处理的8眼为空白对照组。应用无创血管夹建立大鼠视神经夹伤模型,造模后30 min Colivelin治疗组玻璃体内分别注射不同浓度Colivelin 5 μL,安慰剂组注射5μLPBS缓冲液,模型组和空白对照组不给予任何治疗。注药后7d,通过视网膜切片技术,进行HE染色观察视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的形态及数目,TUNEL染色法检测RGC的凋亡以及免疫组织化学法检测视网膜中caspase-3的表达。结果 HE染色可见空白对照组视网膜各层细胞排列整齐密集,模型组、安慰剂组、Colivelin治疗组均可见部分RGC核固缩,但随着Colivelin注射浓度的增加,RGC发生核固缩的数量减少。RGC计数:空白对照组每400倍光镜视野下RGC数量为25.750±1.264,模型组为8.236±1.239,安慰剂组为8.514±1.222,Colivelin低剂量组为14.500±1.021,Colivelin中剂量组为16.250±1.319,Colivelin高剂量组为18.097±1.323,除模型组与安慰剂组之间差异无统计学意义(P>0.05)外,其他各组之间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TUNEL染色:模型组和安慰剂组注药后7 d TUNEL染色可见大量凋亡细胞,Colivelin治疗组凋亡细胞数量随Colivelin注射浓度的增加依次递减。RGC细胞凋亡率:模型组为(60.928±2.961)%,安慰剂组为(61.446±2.755)%,Colivelin低剂量组为(58.432±2.835)%,Colivelin中剂量组为(51.948±2.802)%,Colivelin高剂量组为(47.656±2.331)%。Caspase-3表达:模型组、安慰剂组及Colivelin低剂量组、中剂量组、高剂量组均可见caspase-3表达。平均光密度值显示,模型组和安慰剂组相比caspase-3表达无明显差异(分别为0.482±0.012和0.486±0.012),均高于Colivelin治疗组(均为P<0.05),并且Colivelin低剂量组、中剂量组、高剂量组组间差异亦均有统计学意义(分别为0.411±0.017、0.326±0.018、0.234±0.016;均为P<0.05)。结论 Colivelin能有效增加视神经损伤后RGC的数量,抑制其凋亡,减少caspase-3表达,且这一作用呈剂量依赖性。     

Alterations of kynurenic acid content in the retina in response to retinal ganglion cell damage

The present study is the first to examine the modulation of retinal kynurenic acid (KYNA) content in response to N-methyl-D-aspartate (NMDA)-induced cell death in adult rat retinal ganglion cells (RGC). Adult Brown Norway rats were intravitreally injected with NMDA or PBS. Surviving RGC were retrogradely labeled with fluorogold and counted in wholemounts of retinas 2, 7 and 14 days after injection. Retinal KYNA content was measured by HPLC at the same time points. RGC numbers decreased significantly 2, 7 and 14 days after NMDA injection if compared to control retinas. KYNA concentration increased significantly two days after NMDA-injection. However, 7 and 14 days after injection retinal KYNA content was found markedly decreased in NMDA-treated eyes as compared to controls. It is conceivable that KYNA deficiency is causally related to the pathology of excitotoxic retinal diseases.     

Adenosine agonist regulation of outward active transport of fluorescein across retinal pigment epithelium in rabbits

To investigate the effect of an adenosine agonist, 2-5'-N-ethylcarboxamidoadenosine (NECA), on the outward active transport of fluorescein across the retinal pigment epithelium (RPE) in rabbits. High (5x10(-4)-2x10(-3) M) and low (1x10(-5)-1x10(-4) M) concentrations of NECA or phosphate buffered saline (PBS) were intravitreously injected into Dutch-belted rabbits. Sodium fluorescein was injected intravenously 180 min after NECA. Differential vitreous fluorophotometry was performed 3 hr after the sodium fluorescein injection and the vitreal fluorescein/fluorescein monoglucuronide (F/FG) ratio then was calculated. The F/FG ratios are inversely proportional to the outward active transport of fluorescein across the RPE. Retinal detachments were induced by injection of PBS into the subretinal space after the intravitreous injection of low- or high-dose NECA or PBS, and the size of the blebs was monitored. In eyes that received a low-dose injection of NECA, the F/FG ratio was higher compared with controls (P<0.05); in eyes that received a high-dose intravitreal injection, the F/FG ratio was significantly lower compared with controls (P<0.05). The effect of low-dose NECA on the F/FG ratio was suppressed by the A2 receptor antagonist, ZM241385, and the effect of high-dose NECA was suppressed by the A1 receptor antagonist, 8-cyclopentyl-1, 3-dipropylxanthine. The A3 receptor antagonist MRS1191 did not influence the effect of low- or high-dose NECA. Intravitreal injection of high-dose NECA enhanced the reabsorption of subretinal fluid compared with PBS; however, low-dose NECA inhibited reabsorption of subretinal fluid (P<0.02 and 0.05, respectively). Intravitreous injection of high-dose NECA accelerates the active outward transport across the RPE via A1 receptors and low-dose NECA decelerates it via A2 receptors.     

血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响

目的 观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(A组)5只和糖尿病组55只,糖尿病组通过链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型成功后再饲养3个月行眼底荧光血管造影检查,确定DR大鼠模型且视网膜病变程度相仿的大鼠,随机抽取45只分为DR对照组(B组,5只)、PBS缓冲液对照组(C组,10只)、VEGF ASODN干预组(D组,10只)、Ang-1干预组(E组,10只)、联合干预组(F组,10只).C组玻璃体内注射PBS缓冲液5μL;D组玻璃体内注射浓度为100 μmol·L-1 VEGF ASODN 5 μL;E组玻璃体内注射浓度为160 mg·L-1Ang-1 5 μL;F组玻璃体内注射100 μmol·L-1 VEGF ASODN及160 mg·L-1 Ang-1各5μL;3 d后再次行上述操作.各组大鼠行眼底荧光血管造影检查,对比观察不同组别大鼠视网膜血管渗漏情况,病理组织切片光学显微镜下突破内界膜的观察视网膜新生血管芽细胞核数.结果 A、B、C、D、E和F组视网膜新生血管渗漏面积分别为0、( 20.98±1.14) mm2、(21.47±1.65) mm2、(14.60±1.55) mm2、(13.80 ±1.19) mm2、( 10.81±1.35) mm2;D、E、F组新生血管渗漏面积低于B、C组,差异有统计学意义(F=103.99,P ＜0.05);F组渗漏面积低于D、E组,差异有统计学意义(F=190.94,P＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t =0.22,P＞0.05).A、B、C、D、E和F组突破内界膜的新生血管芽细胞核数分别为(1.13±0.31)个、(80.31±5.21)个、(81.08 ±2.57)个、(37.37±3.41)个、(41.07±2.09)个、(14.41±1.23)个;D、E、F组突破内界膜的血管芽细胞核数均低于B、C组,差异有统计学意义(F=1339.41,P＜0.05);F组突破内界膜的血管芽细胞核数低于D、E组,差异有统计学意义(F =714.91,P ＜0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.35,P＞0.05).结论 VEGFASODN联合Ang-1玻璃体内注射能明显抑DR大鼠视网膜新生血管的生成,减少视网膜血管渗漏.     

Neuroprotective effect of Erigeron Breviscapus (vant) Hand -Mazz on NMDA -induced retinal neuron injury in rats

To investigate whether Erigeron Breviscapus (vant) Hand-Mazz (EBHM) has neuroprotective effect against N-methyl-D-aspartate (NMDA)-induced neuron death in retinal ganglion cell layer (RGCL). · METHODS: Sixty healthy SD rats were randomly divided into four groups. 6 animals were normal control group (group A). The others were divided as group B (EBHM group), group C (normal saline+NMDA group) and group D(EBHM + NMDA group), each group had 18 rats. 10nmol NMDA was intravitreally injected to induce partial damage of the neurons in RGCL in the right eyes of Groups C and D. Same volume PBS was intravitreally injected into the left eyes as self-control. Groups B and D were pretreated intraperitoneally with 6g/L EBHM solution at a dose of 150mg/kg body weight/day seven days before and after NMDA treatment. Group C were administrated intraperitoneally with 9g/L normal saline at the same time of EBHM injection. Rats were sacrificed at 4,7,14 day after NMDA treatment. Flat whole retinas were stained with 5g/L cresyl violet and neuron counting in RGCL from both eyes were observed. Each subgroup had 6 rats. · RESULTS: There was no significant difference of neuron counting in RGCL between the right eye and the left eye in group A. There was no significant difference between normal control group and EBHM group either in the right eyes or in the left eyes at 4, 7 and 14 day respectively after intravitreal injection of 10nmol NMDA in group C and group D. (P = 0.636, P =0.193). Neuron counting of RGCL in group C and D was significantly decreased in the NMDA- treated eyes 4, 7 and 14 days after intravitreal injection (P < 0.001). There was no significant difference between self-control eyes group and normal control group. However, neuron counting was significantly higher in the EBHM+NMDA group than normal saline +NMDA group 14 days after intravitreal injection (P = 0.044), but lower than normal control group (P <0.05). · CONCLUSION: EBHM has no effect on neuron counting of RGCL when administered alone in normal rats. The results indicate that EBHM plays a partial protective role in NMDA-induced neuron loss in RGCL in rats.