环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80 μmol/L)处理24,48,72 h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P＜0.01;TE-13:F=46.99,P＜0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P＜0.01;TE-13:r=0.925,P＜0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P＜0.01;TE-13:r=-0.703,P＜0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P＜0.01;TE-13:r=-0.753,P＜0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.     

尼美舒利和5-氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的协同抑制作用及机制

目的 体外研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利和5-氯尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制作用及机制。方法 以胃癌细胞株MKN45、MKN28为研究对象．观察尼美舒利和5-FU单独或联合应用对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。应用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡（FITC-Annexin-V/PI双标记）和细胞剧期，RT-PCR观察朋药前后COX-2 mRNA在两株细胞中的表达，Western免疫印迹法观察经两种药物单独和联合作用48h后细胞内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 在MKN45和MKN28细胞中均可观察到不同水平的COX-2 mRNA表达，尼美舒利和5FU联合应用可明显抑制COX-2 mRNA表达。尼美舒利可抑制两株细胞的增殖并诱导凋亡。尼美舒利和5-FU具有协同抑制细胞增殖及诱导凋亡的作用，该作用与两种药物作用顺序无关，但在联用时作用最强。两药协同抑制增殖的作用主要通过协同杀伤和诱导凋亡而实现。5-FU增强了凋亡诱导蛋白Bax的表达，而尼美舒利则减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。两药联用可明显抑制胃癌细胞株生长。结论 选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利和5-FU通过抑制COX-2 mRNA的表达硬增强Bax／Bcl-2的表达比率诱导胃癌细胞凋亡．从而对胃癌细胞起到协同抑制增殖的作用。     

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-KB活性及蛋白表达的抑制

目的: 探讨环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞核转因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)活性和蛋白表达的影响.方法:不同浓度的塞来昔布作用于HepG2细胞后,应用凝胶电泳迁移率改变分析技术检测H印G2细胞中NF-κB DNA结合活性;用Western blotting法检测H印G2细胞NF-κB p65蛋白表达.结果:25、50μmol/L塞来昔布作用于HepG2细胞后,药物处理组HepG2细胞NF-κd DNA结合活性明显降低,与空白对照组相比有显著性差异(t=12.58,P=0.000;t=17.97,P=0.000);塞来昔布可明显抑制HepG2细胞NF-κB p65蛋白表达水平,与空白对照组相比,差异均有统计学意义(t=4.24,P=0.013;t=6.38,P=0.003).结论:塞来昔布能有效抑制HepG2细胞NF-κB活性及NF-κB p65蛋白表达.     

NF-κB对肺癌细胞生长、细胞周期及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的探讨核因子(NF)-κB对肺癌细胞生长、细胞周期及分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法用NF-κB抑制剂SN50处理肺癌细胞,MTT测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养液上清中TNF-α含量,Western印迹测定细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)B1、Cyclin D1、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、NF-κBp65蛋白水平。结果 SN50能够抑制肺癌细胞的增殖,且随着SN50作用浓度和作用时间的增加抑制增殖作用越强。SN50组凋亡率明显高于对照组(P0.05)。SN50组肺癌细胞G2/M比例明显高于对照组(P0.05)。SN50组TNF-α水平明显高于对照组(P0.05),Cyclin B1、Cyclin D1、NF-κBp65蛋白水平明显低于对照组,而酶切Caspase-3、Bax水平明显高于对照组(P0.05)。结论抑制NF-κB信号通路可以阻碍肺癌细胞增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,促进细胞中酶切Caspase-3、Bax表达,下调细胞中Cyclin B1、Cyclin D1蛋白水平。     

白花蛇舌草注射液诱导人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡及其分子机制的研究

目的探讨白花蛇舌草注射液诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡及其分子机制。方法采用MTT法检测癌细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化检测野生型P53、Bcl-2和NF-κB(P65)蛋白表达。结果白花蛇舌草注射液能抑制SPC-A-1细胞增殖,且呈剂量依赖性;DNA直方图上呈现凋亡细胞所特有的亚二倍体峰(sub-G1),5和50ml/L白花蛇舌草注射液组细胞凋亡显著升高,P53蛋白表达显著上升,Bcl-2和NF-κB蛋白表达显著下降。结论白花蛇舌草注射液能诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡,其机制可能与上调P53蛋白表达以及下调Bcl-2和NF-κB蛋白表达有关。     

姜黄素上调NF-κB诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡

目的观察姜黄素诱导人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞凋亡的作用,并探讨作用机制。方法用台盼蓝计数观察姜黄素对HL-60细胞生长的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA的表达,Western blot检测细胞内NF-κB p65蛋白的表达。结果姜黄素对HL-60细胞生长有抑制作用,并诱导细胞凋亡。姜黄素作用前后HL-60细胞中抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl表达无明显变化;促凋亡基因Bax和Bid表达增高;P53基因均不表达;NF-κB mRNA和蛋白表达均增高,并呈剂量依赖性。结论姜黄素能诱导HL-60细胞凋亡和上调促凋亡基因Bax和Bid,这可能与NF-κB表达上调有关。     

HMGB1 siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)siRNA对缺氧复氧胃黏膜上皮细胞凋亡的影响及机制。方法将体外培养的人胃黏膜上皮GES-1细胞随机分为对照组(正常培养)、A/R组(缺氧复氧培养)、A/R+si NC组(转染Control siRNA后,缺氧复氧培养)和A/R+si HMGB1组(转染HMGB1 siRNA后,缺氧复氧培养),MTT法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blotting检测细胞中HMGB1、NF-κB p65和IκB-α、Bcl-2和Bax蛋白表达,ELISA法检测LDH含量。结果 A/R处理能够引起GES-1细胞存活率降低,细胞凋亡率和LDH含量升高,Bcl-2和IκB-α蛋白表达下降,HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达上调;HMGB1siRNA则能够抑制A/R的作用,升高GES-1细胞存活率,降低细胞凋亡率和LDH含量,上调Bcl-2和IκB-α蛋白表达,下调HMGB1、Bax和NF-κB p65蛋白表达。结论缺氧复氧可引起胃黏膜上皮GES-1细胞中HMGB1表达升高,下调HMGB1表达可明显抑制缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

核转录因子-κB对β-淀粉样肽25-35诱导下PC12细胞周期的影响

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)在β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)肽段诱导的PC12细胞周期异常中的机制.方法 应用流式细胞仪检测技术及Western印迹方法,在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中检测NF-κB的活性和细胞周期相关蛋白周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白E(cyclin E)、周期蛋白依赖性激酶2(CKD2)、周期蛋白依赖性激酶4(CKD4)、周期蛋白依赖性激酶6(CKD6)表达量的变化.分别将PC12同步化于G0期和S期,再检测Aβ25-35诱导对上述指标的影响.抑制NF-κB活性后,进一步检测上述细胞周期相关蛋白在Aβ25-35诱导下的变化.结果 Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中NF-κB活性增加(P＜0.05),同时细胞周期相关蛋白量升高;细胞同步化于G0期,Aβ25-35处理PC12细胞,细胞凋亡率下降,NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均受抑制;而同步化于S期,则细胞凋亡率、NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均无显著性变化;Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,抑制NF-κB活性则会引起细胞周期相关蛋白表达受抑制.结论 NF-κB主导了Aβ25-35诱导PC12细胞周期的异常变化,异常发生在G0期到G1期的过渡以及G1期到S期过渡,而不是S期到G2期以及G2期到M期的过渡.     

miR-145抑制NF-κB p65表达促进ROS产生诱导卵巢癌细胞凋亡的机制

目的探讨微小RNA-145(miR-145)诱导卵巢癌细胞凋亡的潜在作用机制。方法收集卵巢癌临床组织样本,采用RT-qPCR法检测miR-145表达。体外培养OVCAR3人卵巢癌细胞,使用活性氧(ROS)试剂盒、脂质氧化产物丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、流式细胞仪、Western印迹检测细胞中ROS、MDA、SOD水平,细胞凋亡和B-淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bax、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3蛋白表达。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western印迹法验证miR-145和核因子(NF)-κB p65的靶向关系。抑制或激活NF-κB信号通路,检测细胞中ROS、MDA、SOD水平和细胞凋亡。结果 miR-145在卵巢癌组织中的表达低于显著癌旁组织(P0.05)。在OVCAR3细胞中过表达miR-145,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著增加(P0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.05),Caspase-3蛋白表达显著上调(P0.05)。miR-145可靶向调控NF-κB p65蛋白表达。抑制NF-κB信号通路,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05);细胞凋亡率显著增大(P0.05);激活NF-κB信号通路可减弱miR-145对OVCAR3细胞凋亡的诱导作用(P0.05)。结论 miR-145能够通过抑制NF-κB信号通路,上调ROS水平从而诱导卵巢癌细胞凋亡。     

蛇孢菌素A对人直肠癌细胞生长的抑制作用及其机制研究

背景:蛇孢菌素A(OphA)是一种由双极霉属真菌产生的二倍半萜化合物,已被证实在多种实体瘤中具有抗癌效应,但其在直肠癌中的作用尚不明确。目的:研究OphA对人直肠癌细胞生长的抑制作用及其可能作用机制。方法:体外人直肠癌细胞株SW480经OphA和(或)活性氧簇(ROS)清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)作用后,以光学显微镜观察细胞形态,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和ROS表达,蛋白质印迹法检测线粒体凋亡途径相关蛋白表达和NF-κB活化情况。结果:OphA可剂量依赖性地抑制体外SW480细胞增殖,诱导细胞凋亡,促进细胞内ROS表达,细胞色素C、cleaved caspase-3、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达上调,Bcl-2、p-NF-κBp65表达下调。以NAC清除ROS可明显阻断OphA对SW480细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,同时逆转上述相关蛋白表达。结论:OphA可能通过ROS介导线粒体途径细胞凋亡,抑制人直肠癌细胞生长。NF-κB信号通路可能参与了ROS介导的细胞凋亡的调控。