低剂量电离辐射对小鼠免疫器官Bcl—2蛋白表达的影响

目的：研究低剂量电离辐射对小鼠胸腺、脾和肠系膜淋巴结Ｂｃｌ蛋白表达的影响,以揭示辐射诱导细胞凋亡Ｊ型曲线的分子机理。方法：采用免疫组织化学及图像分析定量方法。结果：假照组各免疫器官存在Ｂｃｌ－２蛋白的基础表达;而照射组随着后时间的推移,Ｂｃｌ蛋白表达逐渐增高,２４ｈ达峰值,且差异显著;７２ｈ回复至假照水平。结论 上述结果为揭示低剂量辐射免疫兴奋效应和辐射诱导细胞凋亡Ｊ型曲线的分子机理提供了有意义的     

照射时间延长对小鼠LEWIS肺癌细胞杀伤作用影响

目的 模拟调强适形放射治疗(IMRT)模式,观察照射时间延长对小鼠LEWIS肺癌细胞杀伤作用的影响及凋亡相关基因蛋白Bcl-2、Bax表达的变化.方法 荷LEWIS肺癌的C57BL/6 雄性小鼠40只,随机分成假照组、常规照射组(A组)及IMRT模拟组(B1组、B2组).按设计要求对各个照射剂量点进行照射,每个剂量点分5 次照射,其间分别间隔7.0、10.5 min,照射后取出肿瘤,用末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数,并采用免疫组化技术检测凋亡相关基因蛋白Bcl-2、Bax的表达水平.结果 各组凋亡指数的差别有显著性(F=161.54,P＜0.01),其中假照组的凋亡指数最低,A组的凋亡指数最高.各组间Bcl-2蛋白的半定量测定结果比较差别有统计学意义(F=737.40,P＜0.01),其中假照组的Bcl-2蛋白含量最高,A组的含量最低.各组Bax蛋白的半定量测定结果比较差别有统计学意义(F=161.45,P＜0.01),其中假照组的Bax蛋白含量最低.结论 在一定的范围内,随着照射时间延长,小鼠LEWIS肺癌细胞Bax表达降低,而Bcl-2表达升高,凋亡指数下降.照射时间延长可导致高能X线对小鼠LEWIS肺癌细胞杀伤作用降低.     

电离辐射诱导pEgr-hPTEN 表达增强其体外抗肿瘤作用

目的：研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外稳定转染联合X射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG-44增殖和诱导细胞凋亡的作用。 方法：以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的表达载体pEgr-hPTEN转染人胶质瘤SHG-44细胞,筛选稳定转染细胞克隆并扩增培养,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞仪及生长曲线测定稳定转染联合0~10 Gy X射线照射对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。 结果：SHG-44-hPTEN稳定转染细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5 Gy以内呈剂量依赖性增加。稳定转染联合辐射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,照射后第8天稳定转染不同剂量组细胞数仅为稳定转染0 Gy假照组的30.0%~50.0%和未转染0 Gy假照组的7.7%~13.0%;稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0 Gy假照组的1.5~2.3倍、未转染照射组的1.9~4.4倍及未转染0 Gy假照组的3.4~5.1倍。 结论：体外基因-放射联合作用可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,具有显著的肿瘤抑制作用。     

低剂量X线照射诱导小鼠胸腺细胞凋亡适应性反应的相关凋亡基因p53、Bcl-2和Bax蛋白表达

目的：探讨低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡适应性反应的相关基因蛋白调控机制。方法：用X射线全身照射Kunming系雄性小鼠,其诱导剂量（D1）为25、50、75、100和200 mGy（剂量率12.5 mGy•min^-1）,攻击剂量（D2）为1.5 Gy（剂量率287 mGy•min^-1）,D1和D2间隔6 h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。 结果：D2组与假照射组比较,其胸腺细胞Bcl-2蛋白阳性百分率明显降低（P<0.05）,Bax蛋白明显增加（P<0.05）,而Bcl-2/Bax比值非常明显降低（P<0.001）;p53蛋白非常明显增加（P<0.001）。D1+D2组与D2组比较,D1在25～75 mGy时,Bcl-2蛋白阳性百分率不同程度增加,Bax蛋白不同程度降低,而Bcl-2/Bax比值非常明显增高（P<0.01）;p53蛋白明显降低（P<0.001或P<0.05）。 结论：在25～75 mGy低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡的适应性反应中,其相关凋亡基因蛋白Bcl-2表达增加,Bax降低,Bcl-2/Bax比值增高,p53降低,导致凋亡的胸腺细胞减少。     

低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤(U251)细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响

目的：研究低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤U251细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响。方法：35只荷人胶质瘤U251瘤裸小鼠,随机分为7个实验组,假照组：0 mGy;D₁组：75 mGy;D₂组：4 Gy;D₁-12 h+D₂组：D₁照射后12 h予以D₂;D₁-24 h+D₂组：D₁照射后24 h予以D₂;D₁-48 h+D₂组：D₁照射后48 h时予以D₂;D₁-72 h+D₂组：D₁照射后72 h予以D₂。每组5只。各实验组不同方式照射后4 d,荷瘤裸鼠全部处死,采用原位杂交技术检测荷瘤组织的p53、Bcl-2 和Bax的mRNA表达水平。结果：D₁（75 mGy）和D₂（4 Gy）照射后,胶质瘤细胞的p53和Bax的mRNA表达分别呈上升趋势,Bcl-2的mRNA表达呈下降趋势,但与假照组比较,差异无显著性（P＞0.05）; D₁+D₂组（D₁和D₂间隔24、48及72 h）的p53和Bax的mRNA表达明显增多,Bcl-2 mRNA表达显著下降,与假照组比较差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。结论：低剂量辐射在一定程度上可能上调了胶质瘤细胞的p53、Bax的mRNA表达,下调了Bcl-2 mRNA的表达,同时对其后的大剂量辐射有协同作用。     

电离辐射对小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的作用机制

目的:研究不同剂量X射线照射对小鼠胸腺bcl-2 蛋白表达及细胞凋亡的作用机制.方法:用免疫组织化学、图像分析技术及透射电镜技术分别检测小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡.结果:假照组胸腺实质内bcl-2蛋白表达主要分布于髓质,胸腺皮质内可有少量凋亡的胸腺细胞.2 Gy照射后4、8和12 h胸腺髓质内bcl-2表达减少,皮质内出现许多典型的凋亡细胞;0.075 Gy照射后bcl-2蛋白表达增多,皮质内凋亡细胞减少,且可见较多的细胞分裂像.结论:不同剂量电离辐射对胸腺细胞凋亡的影响与胸腺髓质内bcl-2蛋白表达水平有关.     

低剂量辐射对HCT-8细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的：研究低剂量照射(LDR)对人结肠癌细胞(HCT-8)增殖、细胞周期及其相关信号蛋白表达的影响,为低剂量辐射临床应用提供理论依据。方法：体外培养人结肠癌细胞HCT-8,分为7个实验组：假照组（0 mGy）,25、50、75、100和200 mGy低剂量X线照射组和1 000 mGy高剂量X线照射组。照射后用细胞计数法及噻唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖率,用流式细胞术测定细胞周期中G₀/G₁、S、G₂/M期的比例。应用蛋白法分析检测细胞周期及相关信号蛋白（共9个蛋白）的表达。结果：经细胞计数及MTT实验证实,25、50、75、100和200 mGy低剂量辐射组HCT-8细胞增殖率与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）,与高剂量组比较差异均有显著性（P<0.05）。经流式细胞术检测,与假照组比较,75 mGy低剂量辐射12和24 h后,HCT-8细胞 G₀/G₁期比例增高(P>0.05),S期比例显著降低(P<0.05);G₂/M期比例显著升高（P<0.05）;48 h后G₀/G₁、S及G₂/M期HCT-8细胞比例与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）。蛋白分析检测,低剂量辐射后HCT-8细胞中Akt、PCNA、P27、CDK2、cyclin E、EGFR、ERK1/2、p-ERK、p-GSK-3α/β等 9种蛋白表达量均较假照组降低。结论：低剂量辐射对HCT-8细胞增殖无促进作用,但在一定程度抑制细胞增殖及细胞周期相关蛋白的表达。     

放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2蛋白表达水平的影响.方法:6MV-X射线照射细胞,采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2的表达.结果:Bax和Bcl-2的表达在照射时间和照射剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048).4Gy照射剂量作用细胞48h后,Hep-G2细胞中Bax的表达达高峰、Bcl-2的表达至低谷.结论:放射线可能通过促进Bax表达和抑制Bcl-2表达诱导肝癌细胞凋亡.     

Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用

目的通过体外试验,研究Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用。方法NCI-H446肺癌细胞株分5组,分别为空白对照、单纯照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组。培养至6h、12h、24h、48h和72h,分别收集各组细胞,瑞吉染色做细胞形态学分析,应用RT-PCR半定量测定p53、Bcl-2和PTEN基因的mRNA表达,流式细胞仪检测各组细胞DNA倍体,分析细胞凋亡指数。结果Bcl-2反义寡核苷酸联合照射后p53和PTEN表达明显增加,Bcl-2mRNA表达则明显降低。流式细胞仪检测照射后72h空白对照组、照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组凋亡率分别为0.14±0.09,13.17±2.47,11.84±1.76,13.72±1.4,21.26±2.97,反义寡核苷酸加照射组与其余4组比较差别有显著性意义(P<0.01)。结论Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡有促进作用;细胞凋亡受p53和Bcl-2基因调控,p53基因的表达促进了细胞的凋亡,而Bcl-2基因的高表达抑制细胞的凋亡,PETN的表达与凋亡也有相关性。     

NADH抗紫外线诱导的肝细胞株L02凋亡

目的研究还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)抗紫外线照射所致的细胞损伤的分子机制。方法采用UVB紫外线照射正常肝细胞株L02(照射剂量为200J/m2),实验组加/对照组不加NADH(400μg/ml)培养24h。AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率,DNA凝胶电泳观察DNA断裂片断,流式细胞仪检测p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果NADH可明显抑制紫外线诱导的肝细胞凋亡,并且能够上调Bcl-2蛋白表达,下调p53、Bax蛋白表达。经紫外线照射后的肝细胞存在自身修复。结论NADH能够抗紫外线诱导的细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2,下调p53、Bax表达有关。     

低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞P53和Bcl-2蛋白表达的影响

目的：研究低剂量X射线对小鼠睾丸生精细胞P53和Bcl-2蛋白表达的影响。方法：采用免疫组织化学方法（SABC法）观察不同低剂量X射线照射后各类生精细胞P53和Bcl-2蛋白表达的剂量及时程效应关系。 结果：低剂量照射后各类生精细胞不同程度表达P53和Bcl-2。P53蛋白表达主要见于精原细胞和精母细胞,前者阳性率高于后者,并且随照射剂量增加而逐渐升高,而精子细胞和精子阳性率较低;Bcl-2蛋白主要表达于精子细胞和精子,并且随照射剂量增加而逐渐降低,而精原细胞和精母细胞Bcl-2蛋白表达阳性率较低。 结论：低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸各类生精细胞p53和Bcl-2蛋白表达具有一定规律性,两者在生精细胞表达的结果相反。     

丹红注射液预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞损伤的影响

目的研究丹红注射液预处理对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的作用。方法体外培养大鼠心肌细胞,将丹红注射液以2%、4%、8%、16%四种浓度分别加入培养基中,预处理24 h后,置于缺血再灌注（I/R）环境中培养,采用流式细胞仪技术检测各组细胞的凋亡率,免疫组织化学法检测凋亡基因Bax及Bcl-2蛋白表达变化。结果与正常对照组比较,缺血再灌组细胞凋亡率及Bas表达明显升高,Bcl-2表达则显著降低;而用丹红注射液预处理后呈浓度依赖性地下调凋亡率及Bas表达,上调Bcl-2表达。结论丹红注射液对缺血再灌心肌细胞有保护作用,且与浓度有一定的依赖关系,其作用可能是通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达实现的。     

Bcl-2蛋白及caspase-3基因表达与暴发性肝衰竭肝细胞凋亡关系的研究

目的：研究Bcl-2蛋白与caspase-3基因表达在实验性暴发性肝衰竭（FHF）中对肝细胞凋亡的作用。方法：用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型；免疫组化法检测肝组织内Bcl-2蛋白表达；原位杂交法检测肝组织内ccqspcqse-3基因表达；缺口原位末端标记技术检测肝细胞凋亡。结果：模型组用药后2h Bcl-2有较多表达，4h表达最多，以后逐渐减少，4h与2h比较差别显著（P〈0．05），与8h、12h比较差别十分显著（P〈0．01）。模型组用药后2h caspase-3开始少量表达，8h达最高峰，并出现典型的肝细胞凋亡改变。12h表达下降，且同时存在肝细胞凋亡和坏死。Bcl-2与caspase-3表达及肝细胞凋亡均呈负相关。结论：在FHF中，肝细胞凋亡与caspase-3的激活有关；Bcl-2可能通过抑制caspase-3的活性而抑制肝细胞凋亡。     

低剂量电离辐射对糖尿病小鼠肾脏ICAM-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的：研究低剂量电离辐射（LDR）对链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病（DM）小鼠肾脏细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA及蛋白表达的影响,阐明LDR抗炎作用可能是其治疗糖尿病的主要机制。方法：选取健康适龄C57BL/6J小鼠,分为4组（对照、DM、LDR和DM/LDR组）。其中DM与DM/LDR组经腹腔注射STZ,建立DM模型,另2组给予等量枸橼酸溶液。造模后DM/LDR与LDR组给予25 mGy隔日照射,共照射4周。在照射后2、4、8、12及16周,利用RT-PCR及Western blotting方法检测其肾脏ICAM-1 mRNA及蛋白表达。结果：小鼠造模后照射前各组肾脏总ICAM-1 mRNA及蛋白表达差异无显著性（P>0.05）。给予LDR 2周时DM组肾脏ICAM-1 mRNA及蛋白表达显著高于其他3组（P<0.05）。照射后4周时DM/LDR 组ICAM-1 mRNA表达水平明显高于非DM组（P<0.05）,但仍显著低于DM组,这种差异一直保持到照后16周。而LDR组其表达水平显著高于对照组（P<0.05）。免疫组织化学检测：与非DM组比较,DM组小鼠肾小球、肾小管结构异常,且阳性细胞染色数量明显增多。但DM/LDR组肾小球肾小管损伤较DM组有所减轻,且阳性细胞数量显著少于DM组。结论：在糖尿病状态下LDR能有效降低ICAM-1 mRNA及蛋白表达水平,缓解肾脏的炎症反应;在正常机体LDR可提高免疫力,促进免疫相关因子释放,提示LDR视机体所处不同状态发挥不同的调节功能。     

内毒素血症幼年大鼠小肠Bcl-2、Bax mRNA的变化

目的：通过内毒素血症幼年大鼠小肠Bcl-2度BaxmRNA表达的变化。探讨小儿胃肠功能障碍的机制。方法：腹腔注射内毒素制备18d龄大鼠内毒素血症模型，注射同等量生理盐水为对照组。分别取全部回肠。半定量RT-PCR法检测Bcl-2、BaxmRNA的表达。结果：正常对照和内毒素组小肠各时间点的Bcl-2 mRNA均为阴性表达，正常对照BaxmRNA表达较弱。内毒素组小肠各时间点的BaxmRNA表达均明显增强（P〈0．01）。死亡组与24h之内其他各组的表达无显著差异，比72h亚组表达明显增高（P〈0．05）。内毒素组Bax与Bcl-2mRNA表达的比值明显高于对照组。结论：内毒素通过调节基因Bcl-2、BaxmRNA表达的变化促进幼年大鼠小肠细胞凋亡可能为严重感染时胃肠功能障碍机制之一。     

垂体腺瘤中Bcl-2和Bax的表达与其侵袭性的关系

目的通过对垂体腺瘤中Bcl-2和BaxmRNA和蛋白表达水平的检测,探讨它们与垂体腺瘤侵袭性之间的关系。方法RT-PCR检测8例垂体腺瘤中Bcl-2和BaxmRNA的表达,免疫组化检测78例垂体腺瘤中Bcl-2和Bax蛋白的表达,分析侵袭组和非侵袭组垂体腺瘤之间Bcl-2和BaxmRNA和蛋白表达的差异和相关性。结果侵袭组中Bcl-2的表达较非侵袭组显著增高,而Bax的表达差异无显著性。Spearman等级相关分析显示,Bcl-2蛋白表达的阳性率与Bax蛋白表达呈负相关关系。结论Bcl-2在侵袭性垂体腺瘤中表达水平显著增高,而Bax的表达差异无显著性,提示垂体腺瘤侵袭性生长主要是由于Bcl-2的抗凋亡效应的增强,并非Bax的促凋亡效应减弱的结果。     

凋亡相关基因Bcl-2/Bax和Fas/Fas L在应激性溃疡发生发展过程中的表达及作用

目的　探讨应激性溃疡发生发展过程中 ,凋亡相关基因Bcl 2 /Bax、Fas/FasL表达的变化及其与细胞凋亡发生的关系。方法　SD大鼠按水浸 束缚应激 (WRS)实验 2h、3.5h及WRS结束后2、5、8、12、2 4h分 7组 ,每组 8只鼠 ,对照组 8只鼠。原位末端标记 (TUNEL)法检测WRS结束前后不同时间点细胞凋亡的发生情况 ;用原位杂交方法检测WRS结束前后大鼠胃粘膜组织Fas、FasL、Bcl 2mRNA的表达 ,免疫组化法检测Bcl 2 /Bax蛋白质的表达。结果　 ( 1)正常大鼠胃粘膜上皮散在TUNEL细胞 ,WRS 2h～WRS后 5hTUNEL细胞较对照组明显增多 (P <0 0 1)并逐渐达高峰 ;WRS后 8～ 12hTUNEL 细胞逐渐减少 ,至WRS后 2 4h仍高于正常水平 (P <0 0 5 )。 ( 2 )正常对照组Fas、FasLmRNA无明显表达 ,FasLmRNA在WRS 3 5h至WRS后 8h在粘膜层基底部出现弱阳性～中等阳性表达。FasmRNA在WRS后 5～ 8h在粘膜层基底部出现弱阳性表达 ,WRS后 8h后表达基本消失。 ( 3)正常胃粘膜组织Bcl 2mRNA及蛋白质在胃腺部呈中等阳性表达 ,Bax蛋白质在上皮细胞层呈弱阳性表达 ;WRS 2h～WRS后 5hBcl 2表达明显减弱 (P <0 0 1) ,Bax表达增加并达高峰 (P <0 0 1) ;WRS后8～ 12hBcl 2表达增加 (P <0 0 1) ,Bax表达逐渐减弱 ,WRS后 2 4hBcl 2表达基本恢复至正常水