细菌脂多糖联合高体积分数氧对未成熟大鼠脑发育的影响

目的 探讨细菌脂多糖(LPS)、高体积分数氧(高氧)单独或联合应用对新生大鼠脑发育的影响及其相关机制.方法 2日龄(P2)新生SD大鼠120只随机分为4组:空气组、LPS组、高氧组、LPS+高氧组,分别观察各组大鼠的一般情况,记录其每日体质量.7日龄(P7)时,免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、核转录因子P65(NF-κB P65)的表达情况,ELISA法检测各组大鼠脑组织中IL-6、8-异-前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平;12日龄(P12)时,免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织碱性髓鞘蛋白(MBP)的表达.结果不同处理组中Caspase-3及NF-κB P65表达水平高低依次为LPS+高氧组、LPS组/高氧组、空气组,前3组与空气组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),且LPS+高氧组与高氧组、LPS组相比差异亦均有统计学意义(P均＜0.01);MBP的表达水平高低依次为空气组、高氧组、LPS组、LPS+高氧组,后3组与空气组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),且LPS+高氧组与高氧组、LPS组相比差异亦均有统计学意义(P均＜0.01).各组新生大鼠IL-6表达水平高低依次为LPS+高氧组、LPS组、高氧组、空气组;8-iso-PGF2α表达水平高低依次为LPS+高氧组、高氧组、LPS组、空气组,而且各组之间比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 感染及高氧均可致新生大鼠脑损伤,导致神经细胞凋亡和MBP表达减少,且感染与高氧同时存在时能加重二者单独作用时脑损伤的程度.其机制可能为炎性反应及氧化应激通过Toll样受体后发生协同作用,激活核转录因子NF-κB P65,并通过Caspase-3介导神经细胞凋亡及脑白质损伤.     

热休克蛋白70对新生大鼠缺氧性肺动脉高压的保护作用

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)在新生大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)中的保护作用。方法 将128只新生大鼠随机分为空白对照组、HPH模型组、空病毒对照组和HSP70组(n=32)。建立HPH模型前分别向空白对照组和HPH模型组大鼠通过尾静脉注射5μL无菌盐水,向空病毒对照组大鼠通过尾静脉注射5μL Ad-GFP(1 010 PFU/m L),向HSP70组大鼠通过尾静脉注射5μL Ad-HSP70(1 010 PFU/m L),转染后除空白对照组外,其余3组建立HPH模型。分别于建模后3、7、10、14 d,采用多导生理记录仪记录各组平均肺动脉压力(m PAP),光学及电子显微镜观察肺血管组织结构及重塑指标,Western blot法检测各组新生大鼠肺组织中HSP70、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缩血管因子内皮素-1(ET-1)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达水平。结果 HPH模型组与空病毒对照组在3、7、10、14 d时的m PAP水平高于空白对照组(P0.05)。缺氧7、10 d时,空白对照组及HSP70组MA%、MT%低于HPH模型组和空病毒对照组(P0.01);缺氧14 d时,HPH模型组、空病毒对照组和HSP70组MA%、MT%比较差异无统计学意义(P0.05),但高于空白对照组(P0.01)。缺氧3、7、10 d时,HSP70组HSP70的蛋白表达水平高于HPH模型组、空病毒对照组和空白对照组(P0.01);HSP70组HIF-1α、ET-1和i NOS表达水平低于HPH模型组和空病毒对照组(P0.05),而与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 转染HSP70可以提高HPH新生大鼠肺组织HSP70表达,下调HIF-1α、ET-1、i NOS表达,减轻肺血管重塑,降低肺动脉压力,可能成为治疗新生儿HPH的一种新策略。     

热休克蛋白70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺血管重塑的作用研究

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉压力及肺血管重塑的作用。方法 将128只Wistar新生大鼠按随机数字表法分为HPH模型组和空白对照组,根据转染液不同将HPH组再分为盐水组、空病毒组(标有绿色荧光信号但未携带目的基因的病毒载体)和病毒+HSP70组(标有绿色荧光信号同时携带目的基因的病毒载体)。以吸入8%氧浓度的氮氧混合气(1.5 L/min)建立HPH模型,并分别于缺氧3、7、10、14 d检测各组新生大鼠的肺动脉压力(mPAP)及肺血管重塑指标(MT%、MA%)。结果 缺氧3、7、10 d时,盐水组和空病毒组HSP70表达较空白对照组增强(P<0.01),病毒+HSP70组HSP70表达均高于空白对照组、盐水组和空病毒组(P<0.01),缺氧14 d时各组间HSP70表达差异无统计学意义(P>0.05)。缺氧3、7、10 d时,盐水组和空病毒组新生大鼠mPAP持续增高,且均高于空白对照组(P<0.05),病毒+HSP70组新生大鼠mPAP与空白对照组比较未见明显增高(P>0.05);缺氧14 d时,盐水组、空病毒组、病毒+HSP70组新生大鼠mPAP比较差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于对照组(P<0.05)。缺氧7 d后盐水组和空病毒组MT%、MA%明显高于空白对照组(P<0.05),病毒+HSP70组较对照组差异无统计学意义(P>0.05);缺氧14 d时,盐水组、空病毒组、病毒+HSP70组MT%、MA%比较差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于对照组(P<0.05)。结论 HSP70可能可以降低HPH新生大鼠肺动脉压力,减轻其肺血管重塑。     

急性肺损伤新生大鼠血清及支气管肺泡灌洗液CC16的变化及意义

目的 探讨急性肺损伤(ALI)早期Clara细胞蛋白CC16的变化及意义.方法 70只健康新生SD大鼠随机分为无菌生理盐水对照组(NS组)及内毒素急性肺损伤组(LPS组,又按注射LPS后处死时间分为7个亚组).LPS组新生大鼠经腹腔注射5 ms/kg LPS,注射后按时间点收集肺组织标本行病理学观察及测定肺湿/干重比值,并收集血清.另取70只健康新生SD大鼠按上述方法分组(NS组及LPS组),收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以双抗体夹心ELISA法检测血清及BALF中的CC16含量变化.结果 LPS注射0.5 h后新生大鼠即出现针尖样肺出血,随着时间延长,从局灶性向弥漫性发展;注射2、4 h新生大鼠肺湿/干重比明显增高,差异有非常显著性(P＜0.01),之后回落;BALF中CC16水平在注射LPS后迅速下降,各时点较NS组差异有非常显著性(P＜0.01);血清中CC16水平较NS组上升.以LPS 4 h达高峰,8、16 h组较前下降,但较NS组差异仍有非常显著性(P＜0.01).结论 ALI早期BALF与血清CC16浓度即发生改变,BALF中CC16下降,血清中CC16上升,血清CC16浓度与肺泡上皮及血管内皮完整性相关,血清CC16可作为早期诊断ALI的外周性生物学标志物.     

水苏糖对新生大鼠NEC发病影响及其机制的研究

目的建立新生SD大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型,探索水苏糖防治NEC的作用及其机制。方法 SD新生大鼠随机分为6组,每组6只,分别为正常对照组,NEC对照组,水苏糖高、中、低剂量治疗组,以及益生菌(主要为双歧杆菌)治疗组。除正常对照组新生大鼠继续与母鼠同笼饲养外,其余组新生大鼠出生48h后与母鼠分开,置入保育箱中采用鼠乳代用品人工喂养,并定期给予缺氧冷刺激,建立新生大鼠NEC模型。同时,NEC对照组大鼠灌服蒸馏水,水苏糖高、中、低剂量治疗组分别灌服不同剂量的水苏糖,益生菌治疗组灌服益生菌。于实验第4天处死大鼠并采血留取小肠标本,检测小肠组织内毒素(LPS)、血浆血小板活化因子(PAF)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果与正常对照组大鼠比较,NEC对照组、水苏糖高、中、低剂量治疗组、益生菌治疗组的LPS、PAF、TNF-α水平均升高,差异有统计学意义(P均<0.01);与NEC对照组大鼠相比,中、高水苏糖组及益生菌组的LPS、PAF、TNF-α水平均降低,差异有统计学意义(P均<0.01),低水苏糖组与NEC对照组间的差异无统计学意义(P均>0.01)。结论 LPS、PAF、TNF-α水平与NEC的发病相关;水苏糖对NEC的治疗有益。     

肾上腺素对内毒素致大鼠肠道损害的保护作用

目的 探讨肾上腺素对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)所致大鼠肠道损害的保护作用及其作用机制.方法 50只SD大鼠随机分为5组(每组10只):对照组:大鼠静脉输注0.9％生理盐水24 ml/(kg·h);LPS组:大鼠静脉注射LPS 6m/kg后,静脉输注生理盐水2.4 ml/(kg·h);低、中和高剂量肾上腺素组:大鼠静脉注射LPS 6 mg/kg后,分别静脉输注肾上腺素0.12 μg/(kg·min)、0.3μg/(kg·min)和0.6μg(kg· min).在LPS注射前、注射后2h和注射后6h3个时点取血,检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-10水平,并在24h观察肠道的组织病理学变化.结果 LPS组大鼠在LPS注射后2h血清TNF-α浓度为(1164±145) ng/L,IL-1β浓度为(521±68)ng/L,IL-10浓度为(303±20) ng/L,较对照组均明显升高(P＜0.05).病理结果显示,LPS组小肠黏膜充血、水肿、出血及炎症细胞浸润,上皮细胞坏死、脱落.高剂量肾上腺素组2h血清TNF-α浓度为(576±105) ng/L,2h和6h的IL-10浓度分别为(424±29) ng/L和(24.5±14) ng/L,与LPS组相比血清TNF-α水平明显降低(P＜0.05)且IL-10水平明显升高(P＜0.05),但IL-1β水平无明显变化(P＞0.05).高剂量肾上腺素组大鼠肠道病理损伤明显减轻.中、低剂量肾上腺素组各时间点血清细胞因子水平与LPS组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),未见肠道病理损害减轻.结论 肾上腺素可以通过抗炎作用减轻LPS素诱导的肠道损害.     

谷酰胺对高体积分数氧肺损伤新生大鼠的保护作用

目的探讨谷酰胺对新生大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤的保护作用。方法将足月2日龄新生SD大鼠24只随机均分为空气组、谷酰胺组和高氧组,每组8只。空气组新生大鼠不做处理,谷酰胺组新生大鼠实验前腹腔注射0.75 g·kg-1·d-1谷酰胺溶液,高氧组新生大鼠腹腔注射等容量9 g·L-1盐水,连续3 d;高氧组与谷酰胺组新生大鼠置于氧体积分数大于900 mL·L-1模型箱内,空气组新生大鼠置于同一室内常压空气中。分别于实验开始3 d、6 d比较各组新生大鼠体质量,于实验开始6 d无菌条件下处死新生大鼠,取肺组织,24 h后制成石蜡标本,观察病理改变及热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果 1.高氧组6 d存活率明显低于空气组(P<0.05);谷酰胺组6 d存活率与空气组比较差异无统计学意义(P>0.05)。高氧下暴露3 d,3组体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);高氧暴露6 d,高氧组体质量明显低于空气组(P<0.01),谷酰胺组体质量与空气组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.高氧组肺水肿程度最严重,其肺湿质量/干质量值明显高于空气组(P<0.05);谷酰胺组肺湿质量/干质量值与空气组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.高氧暴露6 d,高氧组肺泡内有出血和大量渗出的炎性细胞、大量粉染的蛋白性液体,肺泡壁严重充血水肿;谷酰胺组肺泡内极少量红细胞渗出,肺泡腔内见粉染的水肿液,肺泡壁增厚。4.高氧暴露6 d,高氧组、谷酰胺组肺组织HSP70蛋白表达量均较空气组显著增加(Pa<0.01),谷酰胺组肺组织HSP70蛋白表达量较高氧组显著增加(P<0.01)。结论预防性使用谷酰胺可明显改善高氧肺损伤新生大鼠的生存率,有利于新生大鼠的生长发育;预防性使用谷酰胺能增加高氧肺损伤新生大鼠肺组织HSP70的表达,表明谷酰胺对高氧肺损伤的保护作用与HSP70表达相关。     

急性肺损伤新生大鼠肺组织水通道蛋白5的变化及意义

目的 探讨早期急性肺损伤(ALI)肺组织水通道蛋白5(AQP 5)的变化及意义.方法 70只新生SD大鼠随机分为生理盐水对照组及内毒素(LPS)急性肺损伤组(LPS组,7个亚组).LPS组新生大鼠腹腔注射5 mg/kg LPS,各亚组分别在注射后0.5、1、2、4、8、16 h和24 h处死,收集肺组织行病理学观察及测肺湿/干重比值,用免疫印迹法测肺组织AQP 5的表达,观察其动态变化.结果 注射LPS后0.5 h病理可见针尖样肺出血,随时间延长,肺出血从局灶性向弥漫性发展;注射后2、4 h新生大鼠肺湿/干重比值较对照组增高(P＜0.05),之后回落;注射后0.5 h,肺组织AQP 5表达开始下调,1～2 h达到最低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),随后AQP 5表达逐渐升高,8 h时AQP 5表达接近正常水平,8 h后又出现下调直至24 h,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 新生大鼠ALI早期即出现明显的AQP5表达下调,并与肺组织湿/干重比值呈负相关,可能是导致肺泡水肿的重要因素之一.     

地塞米松对内毒素诱导新生鼠心肌cAMP、cGMP及形态学的影响

目的动态观察内毒素(LPS)诱导新生大鼠心肌cAMP、cGMP和超微结构改变及Dex对其的影响,探讨Dex的保护作用.方法7日龄新生大鼠117只,随机分组(n=9),对照组(A,生理盐水),LPS组(B,LPS 5 mg/kg);治疗组(C,LPS 5 mg/kg+Dex 5mg/kg).各组在注射后2、4、6、24h处死留取心肌,放免法检测cAMP和cGMP含量,电镜观察超微结构;同时测血糖和血气.结果①cAMPB组2 h显著增高(P＜0.05)后渐下降,24 h最低;C组2 h增高,但低于B组(P＜0.05),24h显著高于A、B两组;②cGMPB组渐增高24h显著高于A、C两组;C组2 h显著增高(P＜0.05),6 h后下降至24h显著低于B组(P＜0.05);③心肌形态学B组24h严重损害,C组仅轻微异常;④血糖、血气B组示应激性高血糖和继发性低血糖;血气B组24h显著异常.结论LPS诱导后新生大鼠心肌cAMP下降,cGMP增高.心肌损害严重,内环境紊乱,Dex通过间接调节心肌细胞第二信使对心肌有部分保护作用.     

坏死性小肠结肠炎诱导新生大鼠全身炎症反应综合征动物模型的建立

目的将新生Wistar大鼠进行缺氧、低温、鼠乳代用品人工喂养、不同剂量脂多糖(LPS)灌胃等综合因素刺激,造成坏死性小肠结肠炎(NEC),并导致全身炎症反应综合征(SIRS)的动物模型。方法 40只新生Wistar大鼠,出生36～48h随机分成4组,每组各10只。A组为正常对照组,B、C、D组采用低温缺氧(给予1 L.L-1氮气缺氧90s,4℃冷刺激10 min,每天2次,连续2 d)、鼠乳代用品人工喂养、不同剂量LPS(5 mg.kg-1、10 mg.kg-1、20 mg.kg-1)灌胃。实验结束后处死动物,HE染色光镜下观察其回盲部近端肠组织形态学改变,采用肠损伤病理评分进行评价,组织学评分≥2分确定为NEC,根据血液白细胞总数及呼吸改变确定为SIRS。结果 B、C、D组大鼠逐渐出现腹泻、腹胀、活动减少,D组大鼠50%发生死亡。A、B、C、D4组肠损伤病理评分分别为(0.33±0.10)分、(2.03±1.16)分、(3.77±0.41)分、(3.13±0.69)分,组间差异有统计学意义(H=29.83,P<0.01)。NEC发病率分别为0%、50%、100%和100%;SIRS发生率分别为0%、30%、70%和70%。结论在鼠乳代用品人工喂养、缺氧低温刺激条件下,给予LPS灌胃可诱导新生鼠发生NEC,并导致SIRS发生,本模型与新生儿SIRS病理改变接近,是一种比较理想的研究新生儿SIRS的动物模型。     

早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。     

Range of Motion of the Joints of the Lower Extremities of Newborns

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