选择性COX-2抑制剂celecoxib对子宫肌瘤细胞的增殖抑制及其分子机制

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对子宫肌瘤细胞的增殖抑制作用和分子机制.方法 给予原代培养的子宫肌瘤细胞不同浓度的celecoxib处理,MTT法测定细胞生长抑制率;半定量RT-PCR法检测子宫肌瘤细胞Wnt信号通路的关键基因Wnt5b、β-catenin、c-myc的表达及塞来昔布对子宫肌瘤细胞增殖活化的影响.结果 塞来昔布可显著抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,随着药物剂量的增加和时间的延长,子宫肌瘤细胞的增殖和活化明显抑制,呈剂量和时间依赖性,而这种作用是通过抑制Wnt信号通路实现的.结论 子宫肌瘤细胞中存在Wnt信号通路且celecoxib在体外能抑制此通路活化,从而抑制肌瘤细胞的增殖.     

丝裂霉素联合塞来昔布对膀胱癌T24细胞增殖的影响研究

目的:研究体外丝裂霉素(MMC)联合塞来昔布对浅表性膀胱癌T24细胞增殖的影响及其可能机制。方法:体外培养浅表性膀胱癌T24细胞,分为MMC[0(对照组)、2、5、10、25、50μmol/L]组及其与塞来昔布(50μmol/L)混合组,每个浓度5个复孔,采用MTT法检测作用24h后细胞的增殖抑制率。采用免疫组化法、实时定量聚合酶链式反应法、酶联免疫吸附测定法检测对照组、MMC(50μmol/L)组和混合[塞来昔布+MMC(50μmol/L)]组作用48h细胞中Bcl-2蛋白、作用24h细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达及作用96h内VEGF蛋白浓度。结果:MMC能明显抑制细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性;塞来昔布能明显增强MMC对细胞的增殖抑制作用(P<0.05);与对照组比较,MMC组和塞来昔布+MMC组细胞中Bcl-2蛋白、VEGF mRNA表达均明显降低(P<0.05),且后2组组间比较有统计学差异(P<0.05);塞来昔布+MMC组细胞中VEGF蛋白浓度随作用时间延长明显降低(P<0.01)。结论:塞来昔布可协同增强MMC抑制T24细胞增殖的作用,其机制可能与降低Bcl-2、VEGFmRNA表达水平和抑制细胞分泌VEGF蛋白作用有关。     

塞来昔布对肺癌的抑制作用机制研究

目的探讨环氧化酶抑制剂（COX-2）抑制剂塞来昔布对于A549肺癌细胞增殖及其小鼠移植瘤生长的抑制作用及可能机制。方法加不同浓度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖。流式细胞仪法检测细胞凋亡情况。A549细胞移植入BALB／c裸小鼠皮下后,随机分为实验组和对照组,实验组隔日腹腔注射塞来昔布30mg．kg^-1,对照组隔日腹腔注射等体积生理盐水,24d后处死移植瘤小鼠,计算抑瘤率,RT-PCR检测移植瘤组织中COX一2和VEGFmRNA表达水平,同时酶联免疫检测小鼠血清中MMP-9浓度,免疫组化检测瘤组织中微血管密度（MVD）。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性,且经塞来昔布作用后,A549细胞G0／G1期比例增加,S、G2／M期比例下降。在体实验显示,塞来昔布具有明显的抑制A549肺癌移植瘤增殖的作用,同时能抑制移植瘤组织中COX-2、VEGF表达,降低血清MMP-9浓度,减少移植瘤中微血管密度（P〈0．05）。结论塞来昔布在体内外均可显著抑制A549肺癌细胞的增殖,而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤血管生成和降低癌细胞侵袭能力是其可能的作用机制。     

塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞迁移、MMP-9和VEGF表达的影响

目的观察塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞迁移能力及其对MMP-9 mRNA和VEGF mRNA表达的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为对照组及塞来昔布低、中、高剂量组（分别加入塞来昔布25、50、100μmol/L）,处理SGC-7901细胞24 h后,应用损伤修复实验观察塞来昔布对SGC-7901细胞迁移能力的影响;RT-PCR法检测塞来昔布对SGC-7901细胞MMP-9 mRNA和VEGF mRNA表达的影响。结果 SGC-7901细胞的迁移距离随塞来昔布浓度的增加而减少,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义（322.33±0.75、245.51±0.58 vs 713.23±0.44,P＜0.05）。RT-PCR法检测结果显示,随着塞来昔布处理浓度的增高,胃癌细胞MMP-9 mRNA和VEGF mRNA的表达均降低,且与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论塞来昔布可抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移,其抗肿瘤机制可能与抑制COX-2下游的MMP-9和VEGF表达有关。     

塞来昔布对人乳腺癌SKBR-3细胞生长的影响

目的探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对乳腺癌SKBR-3细胞生长的影响及机制。方法用不同浓度的塞来昔布处理SKBR-3细胞后,采用CCK-8法检测塞来昔布对SKBR-3细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞周期;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)的释放水平;Western Blot法测定各浓度塞来昔布刺激SKBR-3细胞后Caspase-3被酶解激活情况。结果塞来昔布对SKBR-3细胞的增殖抑制作用呈剂量-时间依赖性;随着塞来昔布浓度的增加,G0/G1期细胞阻滞,S期细胞比例明显减少;塞来昔布明显减少PGE2的释放水平;Caspase-3在细胞凋亡早期被激活,在凋亡晚期则无表达。结论塞来昔布能有效抑制乳腺癌SKBR-3细胞的增殖,诱导其凋亡;其作用机制可能与COX-2表达下调、抑制PGE2水平和促进Caspase-3的活化有关。     

塞来昔布联合PDTC对人胃癌细胞株SGC-7901生长的抑制作用

目的:研究塞来昔布及吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对人胃癌细胞株SGC-7901的生长抑制作用及其相关机制。方法:分别应用塞来昔布50、100μmol/L,PDTC50、100μmol/L及2药联合25/25、50/50μmol/L处理SGC-7901胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率。TUNEL法检测细胞的原位凋亡。RT-PCR检测环氧合酶-2(COX-2)、核因子(NF)-κB、caspase-3mRNA的表达。结果:塞来昔布、PDTC及2药联合作用于胃癌细胞72h细胞的生长均受到抑制(P<0.05),72h时25/25μmol/L的2药联合组与50μmol/L塞来昔布组相比,细胞的生长抑制率无明显差异(P>0.05),50/50μmol/L的2药联合组细胞生长抑制率高于100μmol/L的单独用药组(P<0.01)。100μmol/L的单独用药组和50/50μmol/L的2药联合组在作用于细胞24h后,细胞凋亡指数均高于阴性对照组,且2药联合组凋亡指数高于单独用药组(P<0.01)。100μmol/L的塞来昔布及PDTC单独作用于细胞12h后均可见COX-2、NF-κB表达降低(P<0.05),100μmol/L的塞来昔布和PDTC及2种浓度的2药联合caspase-3表达升高(P<0.05)。结论:塞来昔布与PDTC联合应用具有显著抗胃癌细胞增殖,促进其凋亡的作用,其机制可能与抑制COX-2、NF-κB的表达,促进caspase-3表达有关。     

塞莱昔布对急性白血病原代细胞增殖、凋亡及促血管新生因子表达的影响

目的 探讨选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞莱昔布对急性白血病(AL)原代细胞增殖、凋亡及促血管新生因子表达的影响.方法 收集30例初诊AL患者骨髓单个核细胞标本进行原代细胞培养,加入浓度为20、40、60、80、100、120 μmol/L的塞莱昔布培养24、48、72 h后,采用MTT、法测定细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR测定80μmol/L塞莱昔布作用48 h前后促血管新生因子(VEGF、b-FGF、TGF-β) mRNA的表达.结果 不同浓度塞莱昔布作用后,细胞增殖均受到明显抑制,呈剂量和时间依赖性.同一时点不同浓度和同一浓度不同时点的塞莱昔布对AL细胞增殖的抑制率均有统计学差异(P＜0.05).与对照组的凋亡率(3.98±0.6)％相比,40、60、80 μmol/L塞莱昔布作用24h后凋亡率明显增高,分别为(8.1±0.9)％、(10.97±1.4)％、(19.78±2.3)％,呈剂量依赖性(P＜0.01),VEGF、b-FGF和TGF-β mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).结论 塞莱昔布能有效抑制AL原代细胞的增殖并诱导其凋亡;其作用可能与下调促血管新生因子表达以抑制血管新生有关.     

比卡鲁胺联合塞来昔布对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响

目的观察比卡鲁胺联合塞来昔布对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法培养前列腺癌LNCaP细胞,采用MTT法测定细胞生长的抑制情况,化学发光法检测细胞培养液中总前列腺特异抗原(PSA)的浓度,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western Blot检测各组细胞Caspase 3和Caspase 8蛋白的表达情况。结果 MTT检测结果显示,对照组在24,48和72 h的细胞生长抑制率均为0。比卡鲁胺组、塞来昔布组和联合组在24,48和72 h的生长抑制率均明显较高(P<0.05)。对组间细胞的生长抑制率联合组显著优于单一组(P<0.05)。化学发光法检测结果显示,与对照组相比,比卡鲁胺组、塞来昔布组以及联合组PSA浓度明显降低,其中联合组对PSA的抑制程度明显优于比卡鲁胺组和塞来昔布组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,对照组在24,48和72 h的细胞凋亡率均低于比卡鲁胺组、塞来昔布组和联合组在24,48和72 h的生长抑制率。组间细胞的生长抑制率联合组显著优于比卡鲁胺组和塞来昔布组(P<0.05)。Western Blot结果提示,与对照组相比,给药组Caspase 3和Caspase 8蛋白的表达水平均显著升高,且联合组明显高于比卡鲁胺组和塞来昔布组(P<0.05)。结论比卡鲁胺联合塞来昔布能有效抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖,其机制可能与促进相关蛋白Caspase 3和Caspase 8凋亡进而促进肿瘤细胞的凋亡有关。     

塞来昔布顺铂对卵巢癌细胞HO-8910增殖与凋亡影响的研究

目的探讨选择性环氧化酶(COX)-2抑制剂塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖与凋亡的影响及Survivin、增殖细胞核抗原(PCNA)、COX-2蛋白表达情况。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度塞来昔布单用及其与顺铂联用时HO-8910细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;免疫组织化学法检测Survivin、PCNA、COX-2蛋白的表达情况。采用方差分析和LSD-t检验进行统计分析。结果塞来昔布、顺铂均可抑制HO-8910细胞的生长(P<0.01);当两者合用时G0/G1期细胞增加,凋亡率增高更加明显(P<0.01),Survivin、PCNA、COX-2蛋白表达下调(P<0.01)。结论塞来昔布、顺铂对卵巢癌细胞株HO-8910均有抑制作用,塞来昔布能增强顺铂的抗卵巢癌作用。     

环氧化酶-2抑制药对肺癌细胞和骨肉瘤细胞生长的抑制作用

目的观察选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制药塞来昔布、罗非昔布对人骨肉瘤细胞株（HOS-8603）、肺癌细胞株（A-549）的作用以及罗非昔布、塞来昔布对两种细胞抑制效应的比较。方法MTT法测定体外培养的细胞株HOS-8603、A-549对不同浓度的罗非昔布和塞来昔布的敏感性，流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响及凋亡。结果塞来昔布、罗非昔布均可明显抑制HOS 8603、A-549细胞的生长（P＜0.05），抑制效应呈现浓度依赖型和时间依赖型。HOS-8603和A-549细胞分裂阻滞在G2/M期，出现凋亡峰，塞来昔布对HOS 8603的作用强于罗非昔布。结论COX-2抑制药塞来昔布尼罗非昔布对骨肉瘤细胞、肺癌细胞的生长有抑制作用，有望成为抗肿瘤新药。     

姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2mRNA和COX-2蛋白表达的影响

目的：探讨姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及对环氧酶-2（C0X-2）基因及蛋白表达的影响。方法：应用MTT法考察浓度姜黄素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;应用RT-PCR、Western-blotting法检测COX-2 mRNA及蛋白的表达。结果：5～80μg.mL-1姜黄素对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。姜黄素对COX-2mRNA和COX-2蛋白的表达有不同程度的抑制作用,随着剂量的增加,抑制作用增强,较高浓度（20～80μg.mL-1）的姜黄素对COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达有显著抑制作用（P〈0.01）。结论：姜黄素可能通过抑制COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达抑制胃腺癌细胞SGC-7901的增殖,可能成为一种胃癌预防剂。     

黄芪皂苷对人胃癌细胞系MKN-74 增殖与侵袭的影响

目的探讨黄芪属植物黄芪的根部的一种提取物——黄芪皂苷(astragaloside,AST)在体外对胃癌MKN-74细胞增殖与侵袭力的影响。方法用五个不同剂量(0,2.5,5,10,20μmoL.L-1)的和胃癌MKN-74细胞共培养24、48、72小时,通过MTT法检测黄芪皂苷(AST)对细胞的抑制作用;Transwell侵袭实验检测黄芪皂苷对MKN-74细胞侵袭力的抑制作用。结果 (1)AST在体外能够显著抑制胃癌MKN-74细胞的增殖,2.5μmoL.L-1,5μmoL.L-1,10μmoL.L-1,20μmoL.L-1黄芪皂苷处理72小时生长抑制率分别为4.65%,7.58%,20.73%,30.38%,呈现明显的剂量和时间依赖性。(2)AST显著抑制MKN-74细胞的侵袭力,呈现剂量和时间依赖性。结论 AST在体外对人胃癌MKN-74细胞有显著的抑制细胞增殖作用。     

紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用研究

目的:研究紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用。方法:以紫苏醇溶液为对照,采用MTT比色法检测不同浓度(0、50、100、200、400、800μmol·L-1)紫苏醇亚微乳剂处理不同时间(24、48、72h)后对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制率及半数抑制量(IC50)值,并设立空白组进行比较。结果:与空白组比较,试验组与对照组在作用24h、浓度高于400μmol·L-1,48h、浓度高于100μmol·L-1,72h、浓度高于50μmol·L-1时均表现出明显抑制作用(P<0.05);后2组抑制作用比较无显著性差异;试验组与对照组对MCF-7细胞株的IC50值分别为353.9、377.9μmol·L-1。结论:紫苏醇制成亚微乳剂后与其溶液比较,对人乳腺癌细胞MCF-7具有相同的抑制作用。     

人参皂苷Rg3抑制人膀胱癌细胞增殖作用的研究

目的：探讨人参皂苷R静对人膀胱癌细胞增殖作用的影响及作用机制。方法：采用人膀胱癌T24细胞株进行细胞培养,将人参皂苷Rg3分别以0,5,10,20和40p,mol·L^-1的剂量处理细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测人参皂苷R邸对人膀胱癌他4细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对T24细胞凋亡的诱导作用,应用RT-PCR和Westernblot方法检测不同浓度人参皂苷Rg3处理后124细胞中EphB4mRNA及其蛋白的表达情况。结果：人参皂苷Rg3对膀胱癌T24细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间增加而增大,呈浓度依赖关系（P〈0．05）。不同浓度人参皂苷Rg3作用下的膀胱癌T24细胞中,EphB4mRNA及其蛋白的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降（P〈0．05）。结论：人参皂苷Rg3的抗癌活性与其抑制EphB4表达有关。     

普罗布考对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及转化生长因子-β1的影响

目的探讨普罗布考（probucol,PRB）对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（rat mesangial cells,RMCs）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。方法①将RMCs分为正常对照组（葡萄糖5．5mmol·L^-1）、高糖组（葡萄糖30．0mmol·L^-1）、高糖＋不同浓度PRB纽（葡萄糖30．0mmol·L^-1＋10、20、50μmol·L^-1PRB）,MTT法检测培养24、48、72h后细胞的增殖情况,ELISA法检测培养24h后TGF-β1分泌量。②将RMCs分为正常对照组（葡萄糖5．5mmol·L^-1）、渗透浓度对照组（5．5mmol·L^-1葡萄糖＋24．5mmol·L^-1甘露醇）、高糖组（葡萄糖30．0mmol·L^-1）、高糖＋20μmol·L^-1PRB组,ELISA法检测培养12、24、48、72h后TGF-β1分泌量。结果①培养24h后,高糖刺激RMCs增殖,PRB呈时间依赖性和剂量依赖性地抑制RMCs的增殖（P〈0．05）。②高糖刺激24h后,TGF-β1分泌量增多,PRB能抑制高糖诱导的TGF-β1,分泌（P〈0．05）。结论PRB可能通过抑制肾小球系膜细胞TGF-β1的分泌,抑制高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞的增殖,发挥肾脏保护作用。     

蛇葡萄素对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探究蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L^-1)和不同干预时间(24、48、72 h)的AMP对SiHa细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258法、Annexin-FITC/PI法检测AMP对SiHa细胞凋亡的影响;流式细胞术检测细胞周期变化;Rh-123法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测AMP对SiHa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达的影响。结果AMP对SiHa细胞抑制率呈浓度和时间依赖性(P<0.05),最低IC 50值为40.33μmol·L^-1;随着AMP浓度的增加或作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05);当AMP浓度为80μmol·L^-1时,细胞周期阻滞在G 2/M期,呈一定的时间依赖性;线粒体膜电位随AMP浓度上升而下降;Bax/Bcl-2和Cleaved-caspase-3表达水平均上调,呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论AMP明显抑制SiHa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G 2/M期,可能通过线粒体途径诱导SiHa细胞凋亡。     

戊地昔布联合阿霉素对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的:研究戊地昔布联合阿霉素对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制作用及其机制。方法:将人MCF-7细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、阿霉素(0.25mg·L-1)组、戊地昔布(25、50、100μmol·L-1)组及联用组(阿霉素0.25mg·L-1+戊地昔布25、50、100μmol·L-1),加入相应药物继续培养,检测培养24、48、72h(n=6)后各组人MCF-7细胞的增殖抑制率;检测戊地昔布25μmol·L-1时培养48h后各组细胞周期和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白、细胞周期蛋白(CyclinD1)及环氧酶2(COX-2)蛋白表达。结果:与溶剂对照组比较,除戊地昔布25μmol·L-1培养24h外,阿霉素组、戊地昔布组及联用组增殖抑制率均明显增加(P均<0.01),且呈浓度、时间依赖性;与阿霉素组和戊地昔布组比较,联用组增殖抑制率均明显增加(P均<0.01)。戊地昔布组细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞比例明显减少(P<0.05);联用组细胞阻滞于G0/G1期和G2/M期。与溶剂对照组比较,戊地昔布组、阿霉素组及联用组PCNA、CyclinD1蛋白表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),仅戊地昔布组和联用组COX-2蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:戊地昔布与阿霉素联用具有协同抑制人MCF-7细胞增殖的作用,可能与抑制CyclinD1和PCNA蛋白表达从而阻滞细胞周期有关。     

褪黑素增强紫杉醇对膀胱癌 T24细胞增殖的抑制作用 #br#

摘要：目的 观察褪黑素（melatonin,Mel）与紫杉醇（paclitaxel,PTX）协同对膀胱癌 T24细胞的抑制作用,并探讨 其作用机制。方法 Mel和化疗药物 PTX单独使用或者联合使用处理 T24细胞,用 CCK-8法和平板克隆形成实验检 测 Mel和 PTX对 T24细胞的增殖抑制作用及半数抑制浓度（IC50）;RT-PCR和 Western-blot检测 T24细胞中环氧化物 酶-2（COX-2）的 mRNA和蛋白水平;采用双荧光素酶报告基因检测 NF-kB的启动子区活性。结果 与单独 PTX组 相比,Mel能够显著增强 PTX对 T24细胞增殖的抑制作用并降低 PTX的 IC50值,T24细胞的增殖能力、克隆形成能力显 著下降（P＜0.05）;联合用药可以显著降低 COX-2的 mRNA和蛋白水平及其相关信号通路核转录因子（NF）-kB的启 动子活性。结论 Mel与 PTX可协同抑制 T24膀胱癌细胞的增殖,其机制可能与抑制 NF-kB信号通路启动子活性, 从而降低 T24细胞内 COX-2的表达有关。