锰超氧化物岐化酶模拟化合物诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制。方法以人白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;Annexin V/PI双标记和细胞形态学法检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2和bax基因mRNA的表达水平;流式细胞术(FCM)测定Bcl-2和Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm)、细胞色素C(Cyt C)释放和Caspase-3活性变化。结果0.5~10mg·mL-1MnSODm明显抑制K562细胞增殖(P<0.01),Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;bcl-2基因mRNA和蛋白表达下调,bax基因mRNA和蛋白表达上调,线粒体Δψm降低,Cyt C释放增多,Caspase-3活性增强。结论MnSODm调控Bax/Bcl-2表达,通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

艰难梭菌毒素A对白血病细胞株K562增殖、凋亡及相关基因调控的研究

目的探讨艰难梭菌毒素A（TcdA）对白血病细胞株K562增殖、凋亡的作用及其机制。方法采用四唑蓝比色试验（MTT）检测TcdA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测TcdA作用后细胞Bcl-2/Bax,Egr-1mRNA表达的变化。结果 TcdA能抑制K562细胞的增殖,作用48h后的抑制率（IR）为47.67%,流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰（凋亡峰）。TcdA作用后K562细胞Bcl-2基因表达下调,Bax基因表达上调,而Egr-1基因表达上调,并呈量效关系。结论艰难梭菌毒素A可诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax,上调Egr-1基因表达水平有关。     

α-维尼非林经线粒体凋亡途径诱导K562细胞凋亡

目的旨在研究α-维尼非林(α-viniferin)对人慢性髓系白血病细胞K562的作用与相关机制。方法 MTT法评价α-viniferin对K562细胞的细胞毒活性。采用细胞形态学和生物化学方法检测细胞凋亡。通过化学荧光法对细胞内线粒体膜电位、caspase-9、caspase-3活性分析。通过半定量RT-PCR表达分析来确定Bcl-2家族相关基因在α-viniferin诱导K562细胞凋亡中的作用。结果α-viniferin能抑制K562细胞增殖,呈剂量和时间依赖性,IC50为13.61 mg·L-1。α-viniferin引起K562细胞出现死亡并伴随有染色质聚集、核破碎、凋亡小体等典型的凋亡形态学特征;此外还伴随有线粒体膜电位显著降低,caspase-9、caspase-3活性升高等现象;α-viniferin(2~32 mg·L-1)引起K562细胞caspase-3 mRNA表达持续升高,Bax、Bad、Bim、Bid促凋亡基因mRNA表达增加,而Bcl-2、Bcl-xL抗凋亡基因mRNA表达持续下降。结论α-viniferin通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷诱导Hela细胞凋亡及其机制的研究

目的研究花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖作用并从细胞学和分子生物学水平探讨其作用机制。方法从黑米中提取出花色素苷,再分离出矢车菊素-3-葡萄糖苷单体;用不同浓度的花色素苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷分别处理Hela细胞后,CCK-8法测细胞生长抑制率;Hoechst 33258染色,激光共聚焦镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;SABC染色检测Bax/Bcl-2的蛋白表达。结果25~400 mg/L花色素苷和12.5~200μmol/L矢车菊素可抑制Hela细胞生长,抑制率呈时间剂量依赖性;激光共聚焦镜下可见到明显的凋亡细胞;流式细胞仪检测药物处理后出现明显凋亡率;药物可使Bax表达上调,Bcl-2表达下降。结论花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷都可抑制Hela细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用的机制与凋亡相关基因促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调有关。     

MEK抑制剂联合三氧化二砷对髓系白血病细胞凋亡的研究

目的:研究MEK抑制剂PD98059联合三氧化二砷(As2O3)对髓系白血病细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:将PD98059、As2O3单独或联合作用于髓系白血病细胞系HL-60、K562细胞,用AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡,用流式细胞术检测Bcl-2、Caspapse-3表达。结果:联合组与单用组相比,细胞凋亡率明显增高。Bcl-2在HL-60、K562细胞均高水平表达。As2O3明显抑制HL-60细胞Bcl-2表达,对K562细胞Bcl-2无明显抑制作用。单用PD98059、As2O3及两药合用在诱导HL-60、K562细胞凋亡过程中,活化caspapse-3均明显上升,两药合用较单用PD98059或As2O3活化caspapse-3明显升高。结论:PD98059联合As2O3同时抑制ERK/MAPK和Bcl-2,激活Caspase酶,对HL-60细胞有协同促凋亡效应。两药联合同时靶向作用ERK/MAPK和BCR/ABL,活化Caspase酶,协同诱导K562细胞凋亡。PD98059可增强As2O3对髓系白血病细胞的凋亡诱导作用。     

大黄素对荷人K562细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察大黄素对白血病K562细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的表达水平,探讨其作用机制。方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12d,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜方法观察肿瘤细胞的凋亡情况,免疫组化方法观察肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的mRNA水平。结果:各用药组抑瘤作用与阴性对照组相比差异均具有显著性(P<0.05),高浓度组与羟基脲组具有同等的抑瘤效应(P>0.05),光镜和电镜检测发现大黄素低、中、高浓度组均可见瘤细胞凋亡和坏死,其中以高浓度处理组最为显著,羟基脲处理组部分瘤细胞以坏死为主。免疫组化和RT-PCR结果表明大黄素处理后肿瘤组织中Bax蛋白和Bax mRNA表达上调,Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA表达下调。结论:大黄素可以明显抑制K562细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bax及Bcl-2的表达,从而促进细胞凋亡。     

PPMP对人白血病多药耐药细胞凋亡相关基因的影响

目的研究苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)对人红白血病多药耐药细胞K562/AO2葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的调节及对凋亡相关基因的影响。方法应用体外细胞培养技术观察GCS特异性化学抑制剂PPMP对K562/AO2细胞GCS基因的抑制作用,采用RT-PCR技术分析GCS基因被抑制前后K562/AO2细胞中GCS、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)基因的表达。结果 PPMP可抑制K562/AO2细胞GCS mRNA的表达,同时致相应细胞的Bcl-2基因表达下降;但Bax基因则无明显变化。结论 GCS可能是通过Bcl-2信号转导途径使细胞的抗凋亡能力增强,从而导致白血病细胞的多药耐药。     

Effect of PPMP on apoptosis-related genes in human leukemia multidrug resistance cell strain K562/AO2 GCS

目的 研究苯基棕榈酰胺吗啡丙醇( PPMP)对人红白血病多药耐药细胞K562/AO2葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的调节及对凋亡相关基因的影响.方法 应用体外细胞培养技术观察GCS特异性化学抑制剂PPMP对K562/AO2细胞GCS基因的抑制作用,采用RT-PCR技术分析GCS基因被抑制前后K562/AO2细胞中GCS、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)基因的表达.结果 PPMP可抑制K562/AO2细胞GCS mRNA的表达,同时致相应细胞的Bcl-2基因表达下降;但Bax基因则无明显变化.结论 GCS可能是通过Bcl-2信号转导途径使细胞的抗凋亡能力增强,从而导致白血病细胞的多药耐药.     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

人参皂苷Rg1对PC12细胞凋亡保护作用的可能机制

目的探讨人参皂苷Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法用流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白表达率,RT-PCR分析bcl-2和baxmRNA表达水平,荧光分光光度计法检测CPP32活力.结果经10μmol·L^-1Rg1预处理后,由多巴胺诱导的PC12细胞凋亡受到明显的抑制.同时,Bcl-2蛋白和mRNA表达增加,Bax蛋白和mRNA表达减少,CPP32活力明显下降.结论Rg1可抑制多巴胺诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能通过调节Bcl-2与Bax蛋白的比值和抑制CPP32的激活而起作用.     

葛根异黄酮对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根异黄酮(Total isoflavones from puerarialobata,TIP)对甲基-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyr-idinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法用不同浓度TIP预处理体外培养的PC12细胞后,加入MPP+诱导多巴胺能神经损伤模型,用MTT法检测PC12细胞活力,采用实时定量RT-PCR检测Bcl-2和BaxmRNA的表达水平。结果MPP+处理48~96 h,细胞活力较空白对照组降低,阴性对照组Bax 2-ΔΔCt升高,而Bcl-22-ΔΔCt降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,葛根异黄酮组Bax 2-ΔΔCt降低,而Bcl-2 2-ΔΔCt升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论葛根异黄酮对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,下调Bax和上调Bcl-2 mRNA表达可能是其作用的机制之一。     

IL-23诱导人外周血单个核细胞对MUTZ-1细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的 白介素-23(IL-23)诱导人外周血单个核细胞对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1增殖、凋亡及相关基因表达的影响.方法 采用密度梯度离心法分离获得正常人外周血单个核细胞(PBMNC),细胞分4组:阴性对照组(未加IL-23),3个浓度IL-23组(2、10、50 ng/ml),体外诱导72 h,并与MUTZ-1共培养.MTT实验检测MUTZ-1细胞增殖.流式细胞仪检测MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化.Real time-PCR和Western-blot检测MUTZ-1细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、survivin mRNA和蛋白表达.结果 2、10、50 ng/ml IL-23诱导的PBMNC与MUTZ-1细胞共培养后,MUTZ-1细胞增殖速度、S期细胞比例明显降低,细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例明显增加,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);同时Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2、survivin mRNA和蛋白表达明显下调,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IL-23诱导PBMNC能够明显抑制MUTZ-1细胞增殖,促进MUTZ-1细胞凋亡,其机制与上调Bax、caspase-3表达、下调Bcl-2、survivin表达有关.     

小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

蛇葡萄根提取物的含药血清对肝星状细胞凋亡及基因Bax/Bcl-2表达的影响

目的:研究中药蛇葡萄根提取物的含药血清对HSC/T6凋亡及凋亡基因Bax/Bcl-2表达的影响,从细胞学和分子生物学水平探讨中药蛇葡萄根抗纤维化的作用机制。方法:用流式细胞仪测定各体积分数(5%,10%和20%)的含药血清对HSC/T6作用后的DNA含量,计算细胞凋亡率;用SABC染色检测凋亡基因Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果:含药血清体积分数为5%,10%和20%的蛇葡萄根提取物对HSC/T6的凋亡率分别为8.50%,14.30%和22.65%,均显著大于含生理氯化钠溶液的血清对照组(P<0.01);且均上调HSC/T6的促凋亡基因Bax的蛋白表达,同时下调抗凋亡基因Bcl-2的基因表达。结论:蛇葡萄根提取物含药血清能诱导HSC/T6的凋亡,上调促凋亡基因Bax的表达,下调抗凋亡基因Bcl-2的表达。     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的:观察硒酸酯多糖(Kappaselenocarrageenan,KSC)对K562ADM耐药细胞的诱导凋亡效应,并探讨其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)观察K562ADM细胞凋亡;FCM测定K562ADM细胞Fas、P53和Bcl2蛋白表达水平;RTPCR检测Caspase3mRNA的表达。结果:50～500mg·L-1KSC抑制K562ADM细胞增殖,并诱导K562ADM细胞凋亡,细胞出现呈典型凋亡形态改变,DNA电泳可见DNA梯状条带(DNAladder);FCM分析出现亚G1期细胞群,S期细胞比例增高。Fas蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,Caspase3mRNA表达显著增强,但P53蛋白表达无明显改变。结论:KSC通过Fas依赖性Caspase3激活途径诱导K562ADM细胞凋亡。     

土槿乙酸衍生物PB-LY体外抗肿瘤作用及其机制研究

目的通过研究土槿乙酸衍生物PB-LY对肿瘤细胞的影响,探讨PB-LY的抗肿瘤活性及其作用机制。方法采用MTT法和绘制细胞生长曲线等方法检测PB-LY对多种肿瘤细胞的抑制作用;采用荧光染色、DNAladder和流式细胞术等方法检测PB-LY诱导肿瘤细胞凋亡的作用;采用RT-PCR法检测PB-LY对肿瘤细胞相关凋亡基因Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响。结果PB-LY作用于多种肿瘤细胞的IC50在1.35μmol.L-1～3.68μmol.L-1之间,且有明显的量效关系,能够诱发肿瘤细胞产生凋亡小体、DNAladder和细胞凋亡峰,上调相关促凋亡基因Caspase-3和Bax的表达,同时协同下调抑凋亡基因Bcl-2的表达。结论PB-LY能抑制肿瘤细胞的生长,同时影响肿瘤细胞内相关促凋亡和抑凋亡基因的表达,从而诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

乙酰氧基胡椒酚乙酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与侵袭的影响

目的:研究乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(ACA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与侵袭的影响。方法:通过RT-PCR法检测ACA对人乳腺癌MCF-7细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,免疫细胞化学法检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达。结果:MCF-7细胞经50、100、150μmol·L-1ACA干预后,Bcl-2 mRNA表达显著下降,Bax mRNA表达显著升高(P<0.01);50、100、150μmol·L-1ACA作用后细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:ACA诱导的Bcl-2 mRNA表达的下调和Bax mRNA表达的上调可能参与了其诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用。ACA能抑制人乳腺癌MCF-7细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白表达从而抑制其侵袭。     

Octylphenol induces apoptosis in cultured rat Sertoli cells

In this study, the effects of 4-tert-octylphenol (OP) were examined on the viability of rat cultured Sertoli cells using the MTT assay and OP-induced apoptosis was detected by transmission electron microscope (TEM), flow cytometric analysis and Hoechst staining. In addition, RT-PCR was used to analyze the levels of Bcl-2 and Bax mRNA. Bcl-2, Bax and caspase-3 protein expressions were determined by Western blot analysis. Sertoli cells were treated with OP from 30 to 60microM for 6-24h. Decreased viability of Sertoli cells and increased apoptosis occurred in a concentration- and a time-dependent manner. The expression of Bcl-2 was down-regulated, while the expression of Bax up-regulated. OP also down-regulated the expression of 32kDa procaspase-3, which was cleaved to generate active subunit (17kDa). These results suggest that OP may induce Sertoli cell apoptosis by regulation of Bcl-2/Bax and caspase-3 activation.     

一种海洋来源的ETP类化合物HDN-1诱导K562细胞凋亡作用及机制初探

目的 探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制。方法 采用MTT法检测HDN-1对K562细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33342染色,Western Blotting以及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果 HDN-1能显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化并且出现了基因组DNA的梯状剪切条带;Caspase-9、8、3逐渐被激活,Caspase3的作用底物PARP被活化裂解出现89KD的剪切条带,并且Caspase蛋白的激活可被特异性抑制剂所阻断;抑凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1的表达降低,促凋亡蛋白Bax的表达量增高。另外,融合蛋白Bcr-Abl的表达被HDN-1抑制并呈剂量依赖性。结论 来源于南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1可能是通过抑制Bcr-Abl融合蛋白的表达进而诱导K562细胞凋亡,并且凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导发生的。     

槲皮素抗阿霉素诱导的培养心肌细胞的凋亡

目的观察槲皮素对阿霉素(adriamycin,ADR)致大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、阿霉素损伤组、槲皮素对照组、阿霉素+槲皮素(低、中、高浓度)组。比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,MTT法测定心肌细胞存活率,电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,用RT-PCR和Western blot检测caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与正常对照组相比,槲皮素对照组各指标无明显改变,阿霉素组LDH活性增强,细胞存活率降低,Bcl-2表达减少,Bax表达增加,心肌细胞超微结构损伤明显,caspase-3 mRNA和蛋白的表达均升高;高中低剂量槲皮素均可减轻阿霉素所致的损伤。结论槲皮素对ADR致培养心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制与调节细胞内凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的表达有关。