谷胱甘肽耗竭在芹菜素诱导成骨肉瘤MG- 63 细胞凋亡中的作用

目的研究芹菜素（apigenin）诱导体外培养人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用及其机制。方法体外培养MG-63细胞,分光光度法测定细胞内谷胱甘肽（GSH）含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 apigenin显著降低MG-63细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。apigenin以浓度依赖方式诱导MG-63细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂;500μmol/LGSH预孵育1h,能有效阻断apigenin诱导MG-63细胞内GSH耗竭和细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论 apigenin通过耗竭MG-63细胞内GSH诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

GSH 耗竭介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导肺癌A 549 细胞凋亡

目的探讨5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用是否涉及细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）耗竭。方法体外培养A549细胞,分光光度法测定细胞内GSH含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 DMF以浓度依赖方式诱导A549细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂。DMF显著降低A549细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。500μmol·L-1GSH预孵育1h,能有效阻断DMF诱导细胞内GSH耗竭,并减弱DMF触发细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论细胞内GSH耗竭是DMF诱导人肺癌A549细胞凋亡作用机制之一。     

活性氧介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导结肠癌HT- 29 细胞凋亡

目的研究5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导体外培养人结肠癌HT-29细胞凋亡作用及其机制。方法以HT-29细胞为研究对象,利用ELISA法测定细胞DNA断裂,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧（ROS）水平。结果DMF激活HT-29细胞ROS生成（P〈0．05）,呈浓度依赖性。DMF以浓度依赖方式促进HT-29细胞DNA断裂（P〈0．05）,同时,诱导细胞凋亡率增高（P〈0．05）;10μmol．L^-1N-乙酰半胱氨酸预孵育30min,能有效阻断DMF诱导ROS生成和细胞凋亡作用（P〈0．05）。结论DFM通过促进结肠癌HT-29细胞ROS生成诱导细胞凋亡。     

谷胱甘肽耗竭促成紫花牡荆素诱导肝癌细胞凋亡

目的研究紫花牡荆素（casticin）诱导肝癌细胞（HCC）凋亡作用及其作用分子机制。方法体外培养人肝癌PLC/PRF/5细胞系细胞,MTT测定细胞活性;细胞凋亡ELISA检测试剂盒和碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测凋亡性细胞死亡。二氯二氢荧光素二乙酯（DCFH-DA）探针标记FCM测定活性氧（ROS）生成。谷胱甘肽检测试剂盒测定细胞内谷胱甘肽（GSH）含量。结果 Casticin以剂量依赖方式抑制PLC/PRF/5细胞生长（P〈0.05）。Casticin诱导PLC/PRF/5细胞系Sub-G1细胞百分率增加（P〈0.05）;并增加细胞组蛋白/DNA碎片的含量,呈浓度依赖性。Casticin降低PLC/PRF/5细胞内GSH含量（P〈0.05）,但不影响胞内ROS的生成。巯基抗氧化剂,N乙酰半胱氨酸和添加外源性GSH能恢复GSH含量,并减弱casticin诱导细胞凋亡作用;而不含巯基的抗氧化剂,丁羟茴醚和甘露醇无明显作用。结论 Casticin诱导肝癌细胞凋亡涉及细胞内GSH耗竭。     

不同浓度依托咪酯诱导人肝癌HepG2细胞体外凋亡的研究

目的探讨不同浓度的依托咪酯是否具有直接诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,寻找依托咪酯临床治疗的新途径。方法人肝癌细胞株HepG2体外扩增培养备用,选取不同浓度的依托咪酯E1、E2、E3和对照组（空白）,分别培养12h、24h、48h后观察。结果与空白对照组相比,培养12h、24h、48h后E1组、E2组人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率无明显差异（P〉0．05）,E3组凋亡率不断增加,具有显著性差异（P〈0．05）;随着培养时间的延长及浓度的不断增加,E1与E2组对比人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率无明显差异（t=1．732,P〉0．05）,E1与E3组对比人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率具有显著性差异（t=1．864,P〈0．05）,E2与E3组对比人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡率具有明显差异（f=1．691,P〈0．05）。结论依托咪酯在临床安全有效的浓度下不直接诱导人肝癌HepG2细胞的体外凋亡,浓度及时间达到一定峰值时可具有直接诱导人肝癌HepG2细胞体外凋亡的作用。     

谷胱甘肽合成抑制对人胚肾细胞的毒作用

目的：研究细胞谷胱甘肽（GSH）合成抑制对人胚肾细胞的影响。方法：用GSH合成特异抑制剂（BSO）抑制GSH合成，从而降低胞内GSH的水平。测定BSO处理不同时间人胚肾细胞内GSH的水平、细胞周期的变化、活性氧水平、细胞凋亡率和细胞存活率。结果：细胞内总GSH水平随BSO处理时间的延长而下降。处理24时，总GSH水平下降至对照的10％，分析发现细胞周期G2－M期增多（P＜0．01），S期减少（P＜0．05）；但活性氧水平、细胞凋亡率及细胞存活率没有明显改变。处理48h时，总GSH水平下降至对照的4％，细胞存活率明显降低（P＜0．01），活性氧水平明显升高（P＜0．01）。细胞凋亡率直到处理72h时升高才能显著性（P＜0．01，n=3），此时细胞内总GSH已基本耗竭。结论：由于GSH水平下降而引起的氧化还原状态失衡可能是凋亡发生的普遍诱导因素。     

大葱精提取物对人胃癌细胞MGC-803诱导分化和凋亡的实验研究

目的本实验采用大葱精提物处理体外培养的人胃癌细胞MGC-803,观察其对胃癌细胞诱导分化和凋亡的作用,探讨大葱抗癌的有效成分。方法将大葱精提物分成脂溶性和水溶性两部分,大葱粗提物作对照组,分别作用于体外培养的人胃癌细胞MGC-803后：（1）每日计数细胞,计算增殖抑制率。（2）应用流式细胞仪分析细胞DNA含量和H周期分布,检测分化与凋亡。（3）采用TUNEL法检测细胞凋亡。（4）HE染色光镜下观察细胞分化和凋亡,计算细胞凋亡指数。（5）电镜观察细胞超微结构变化。结果（1）A组与C1组细胞72h内细胞数逐日增加,但C1组细胞生长增殖缓慢。72h以后,A组与C1组细胞均呈下降趋势（P〈0．05）。（2）C3组24h凋亡率高,但较c1、c2组差异无统计学意义（P〉0．05）;C1组分化比例低于C3组（P〈0．05）,c2组24h凋亡比例和二倍体比例均低于前两者（P〈0．05）,作用明显弱于前两者。（3）倒置显微镜下观察,10％浓度大葱粗提物作用16h,培养细胞由原来的梭状或多角状变为圆形细胞,24h后细胞从瓶壁脱落。0．5％大葱油作用2h细胞变为圆形,4h后细胞从瓶壁脱落。（4）光镜下爬片HE染色0．05％大葱油和10％大葱粗提物作用后的细胞,体积缩小,核质比例减小,细胞分裂相减少。（5）透射电镜下观察,0．05％大葱油和10％大葱粗提物作用后,均可出现典型的凋亡细胞形态学改变。结论大葱提取物能明显抑制体外培养的胃癌细胞生长增殖,即可诱导胃癌细胞分化,又可诱导胃癌细胞凋亡,其起主要作用的部分为脂溶性（大葱油）部分,水溶性部分作用较弱。作用机制有待深入研究。     

雷公藤甲素诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡

目的探讨雷公藤甲素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法应用不同浓度雷公藤甲素(10、20、40、80、160ng/ml)作用于体外培养的人胰腺癌PANC-1细胞。MTT方法观察药物对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法和Western blot法分别检测热休克蛋白70(HSP70)mRNA和蛋白表达;半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性检测分析其凋亡机制。结果雷公藤甲素明显呈剂量依赖性抑制人胰腺癌PANC-1细胞的增殖,诱导细胞凋亡(P<0.05)。应用雷公藤甲素后,PANC-1细胞内HSP70mRNA和蛋白表达明显呈浓度依赖性降低,同时细胞质内Caspase-3活性随剂量增加而增加(P<0.05)。结论雷公藤甲素体外能够抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长,诱导细胞凋亡发生。其机制可能与抑制细胞HSP70表达和增加Caspase-3活性有关。     

莪术油对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨莪术油（zedoary turmeric oil）对体外培养胃癌SGC-7901细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法胃癌SGC-7901细胞经常规培养,给予不同浓度的莪术油处理,观察细胞生长情况,MMT比色法检测细胞增殖,计算抑制率;流式细胞技术检测SGC-7901细胞的凋亡,并计算凋亡指数。结果莪术油对SGC-7901细胞增殖的抑制率随浓度的增加而增高（P〈0．01）,莪术油诱导SGC-7901细胞凋亡率较对照组显著增加（P〈0．01）。结论莪术油在体外可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡。     

拉马克啉对内皮素-1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C表达的作用

目的：探讨拉马克啉（levcromakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）表达的影响。方法：体外培养Wistar大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMCs），用ET-1诱导其增殖，用不同浓度拉马克啉共培养，MTT法评价VSMCs增殖情况，3H—TdR检测DNA合成，流式细胞术检测VSMCs凋亡，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR），Western blot检测PKCamRNA及蛋白表达。结果：拉马克啉对ET-1所致VSMCs增殖有显著抑制作用，随浓度增加，其MTT活性细胞含量和3H—TdR掺入量都明显减少（P〈0．05）；拉马克啉呈剂量依赖性地增加G0／G1期VSMCs（P〈0．05），促使VSMCs凋亡增多（P〈0．05）；拉马克啉抑制VSMCs内PKCamRNA及蛋白表达。结论：拉马克啉抑制ET-1诱导的VSMCs增殖作用，可能的机制是通过下调VSMCs内PKCa表达水平而影响vSMCs增殖和凋亡。     

紫花牡荆素对卵巢癌CoC1 细胞凋亡和Mcl-1 表达的影响

目的研究紫花牡荆素（casticin）诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用。方法用不同浓度的casticin处理体外培养的CoC1细胞,碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率,比色法测定细胞caspase-3活性,Western Blot分析Mcl-1蛋白表达水平。结果紫花牡荆素以浓度依赖方式增高CoC1细胞凋亡率和激活caspase-3（P〈0.05）。1.0μmoL·L-1casticin以时间依赖方式降低Mcl-1蛋白表达水平（P〈0.05）。结论 casticin诱导CoC1细胞凋亡与其抑制Mcl-1蛋白表达相关。     

Acrolein-induced cytotoxicity in cultured human bronchial epithelial cells. Modulation by alpha-tocopherol and ascorbic acid

Acrolein is a highly reactive unsaturated hazardous air pollutant of human health concern, particularly as a component of cigarette smoke. In this study, the mechanisms of acrolein-induced cytotoxicity in human bronchial epithelial cells (HBE1) and the modulating effects of antioxidants were examined. Our results show that acrolein induces a cell death pathway in human bronchial epithelial cells, which retain key features of apoptosis, as indicated by phosphatidylserine (PS) externalization and DNA fragmentation. Acrolein-induced apoptosis was associated with depletion of cellular GSH and intracellular generation of oxidants. Supplementation of cells with either alpha-tocopherol or ascorbic acid was found to strongly inhibit acrolein-induced apoptosis and to prevent the increase in the generation of intracellular oxidants, although GSH depletion was unaffected. Moreover, recovery of cellular GSH levels after acrolein exposure was enhanced following either alpha-tocopherol or ascorbic acid supplementation. The intracellular generation of oxidants following acrolein exposure seems to be an important event triggering the apoptotic response in this model system.     

Survivin-siRNA在体外诱导Panc-1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨RNA干扰技术抑制Survivin对人胰癌细胞株Panc-1细胞凋亡的影响。方法:体外设计、合成针对sur-vivin基因的小分子干扰RNA(survivin-siRNA),应用脂质体介导survivin-siRNA转染Panc-1细胞后,MTT试验测定转染细胞的增殖抑制率,RT-PCR检测细胞survivin mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc-1细胞凋亡诱导作用。结果:转染survivin-siR-NA的Panc-1细胞增殖明显受抑制,与对照进行比较,具有显著性差异(P<0.01);经琼脂糖凝胶电泳,转染survivin-siRNA的Panc-1细胞可见到DNA梯形条带,而对照细胞未见到。结论:survivin-siRNA能够显著诱导Panc-1细胞凋亡。     

二甲双胍对人肝癌Hep-G2细胞表皮生长因子及其受体表达的影响

目的 观察二甲双胍对人肝癌Hep-G2细胞表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）的影响.方法 体外培养人肝癌Hep-G2细胞,用不同浓度二甲双胍进行干预,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氨唑溴盐法检测二甲双胍对Hep-G2细胞生长的影响;Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术观察细胞凋亡;蛋白质印迹法（Western blot）检测EGF、EGFR的表达.结果 二甲双胍对肝癌细胞的活性具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;以10 mmol/L作用终浓度抑制效果最明显,其48 h的细胞吸光度为（0.477 ±0.025）,与对照组（0.602±0.026）比较差异有统计学意义（P＜0.01）;逐渐增加二甲双胍的作用浓度,细胞凋亡率随之逐渐增加,药物组细胞凋亡率分别为（10.76±0.96）％、（20.77±1.16）％,与对照组（5.21±0.13）％相比差异均有统计学意义（P＜0.05）;Hoechst33342染色可见明显的细胞皱缩,核染色质浓缩,核碎裂等凋亡形态学变化;Western blot结果显示,EGF及其受体蛋白的表达随着二甲双胍作用浓度的增加而逐渐下调.结论 在体外,二甲双胍能够抑制人肝癌Hep-G2细胞增殖及诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与细胞内EGF及EGFR表达下调有关.     

Mechanism of ricin-induced apoptosis in human cervical cancer cells

The mechanism of ricin-induced apoptosis in human cervical cancer cell line HeLa was studied. The present study demonstrated that ricin induces apoptosis of human cervical cancer cells (HeLa) in a time dependent manner with an IC(50) for cell viability of 1 microg/ml. Ricin treatment resulted in a time dependent increase in LDH leakage, DNA fragmentation, percent apoptotic cells, generation of reactive oxygen species and depletion of intracellular glutathione levels. DNA agarose gel electrophoresis showed typical oligonucleosomal length DNA fragmentation. Additionally, DNA diffusion assay was performed to confirm DNA damage and apoptosis. Ricin activated caspase-3 as evidenced by both proteolytic cleavage of procaspase-3 into 20 and 18 kDa subunits, and increased protease activity. Caspase activity was maximum at 4h and led to the cleavage of 116 kDa poly(ADP-ribose) polymerase (PARP), resulting in the 85 kDa cleavage product. Ricin-induced caspase-3 activation also resulted in cleavage of DNA fragmentation factor-45 (DFF45/ICAD) and DFF40 or caspase-activated DNase in HeLa cells. Activation of caspase-3, cleavage of PARP and DNA fragmentation was blocked by pre-treatment with caspase-3 specific inhibitor Ac-DEVD-CHO (100 microM) and broad-spectrum caspase inhibitor Z-VAD-FMK (40 microM). Ricin-induced DNA fragmentation was inhibited by pre-treatment with PARP inhibitors 3-aminobenzamide (100 microM) and DPQ (10 microM). Our results indicate that ricin-induced cell death was mediated by generation of reactive oxygen species and subsequent activation of caspase-3 cascade followed by down stream events leading to apoptotic mode of cell death.