两种不同成分培养基制备CIK细胞的生物学特征

目的:采用细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK cell)培养基(含低浓度IL-2、IFN-γ、IL-12和anti-CD3)和NK培养基(含高浓度IL-2和anti-CD3)体外刺激诱导CIK,分析CIK细胞的扩增、表型和细胞因子分泌情况。方法:健康自愿者来源的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别加入CIK培养基和NK培养基进行诱导培养,24 h后,换用含IL-2的1%自体血浆培养基继续诱导培养2周。在培养的第6天和第10天检测培养上清中IFN-γ的分泌情况,在培养的第10天以流式细胞术检测两组培养细胞表面CD3、CD4、CD8、CD16、CD56的表达情况。结果:CIK培养基和NK培养基均可使培养细胞在第7天时开始明显扩增,第10天时可扩增至200倍。其中,CIK培养基获得的细胞扩增倍数明显高于NK培养基,其IFN-γ分泌明显高于NK培养基组[(724.7±434.8)vs(108.9±60.6)pg/ml,P<0.01];而以NK培养基培养的细胞,CD3-CD16+CD56+细胞比例高于CIK培养基[(6.27±3.33)%vs(2.88±1.88)%,P<0.05]。结论:不同成分的CIK培养基和NK培养基均可促进CIK细胞的扩增和成熟,但呈现不同的生物学特征。     

CIK细胞-肿瘤过继免疫治疗的新希望

1 概述CIK细胞（cytokine－induced killer）是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗CD3McAb、IL－2、IFN－γ、IL－1α等）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子1,故又被称为NK细胞样T淋巴细胞,兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。因此,应用CIK细胞被认为是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。2 CIK细胞表型特点CIK细胞中的效应细胞CD3＋CD56＋细胞在正常人外周血中极其罕见,仅1％～5％,在体外经多因子培养28～30天,…     

CIK细胞辅助治疗Ⅲ期胃癌

目的 分析细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)辅助治疗Ⅲ期胃癌的临床意义.方法 对 88 例Ⅲ期胃癌根治术后行6周期化疗患者资料进行回顾性分析,其中43例患者于辅助化疗结束后接受CIK细胞治疗至少3个周期为CIK治疗组,45例患者单纯化疗为对照组.对CIK细胞治疗前后T细胞亚群检测结果进行随访观察,对2组总生存期与无瘤生存期进行比较.结果 第1次CIK细胞治疗后2周时,CD3+细胞与CD4+/CD8+ 比值显著升高,2个月时又下降到接近治疗前水平,而CIK细胞连续治疗3周期后2个月CD3+细胞与CD4+/CD8+ 比值均维持在高水平.CIK治疗组与单纯化疗组的中位生存期分别为(42.0±2.6)个月与(36.0±2.9)个月,2组中位无瘤生存期分别为(34.0±2.7)个月与(25.0±2.8)个月,2组总生存期与无瘤生存期比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 采用CIK细胞辅助治疗Ⅲ期胃癌可以改善患者免疫功能,延缓肿瘤复发,延长患者生存期.     

CIK细胞过继免疫治疗复发性卵巢癌的临床疗效分析

细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced kil-ler cell,CIK）细胞回输治疗是一种新型的、对肿瘤细胞杀伤能力强的过继免疫细胞治疗方法,与其他肿瘤治疗方法相比,具有杀伤肿瘤细胞能力强、杀瘤谱更广、不良反应小等特点［1］。本研究将其应用于复发性卵巢肿瘤患者,并对其疗效进行观察。     

CIK细胞实验研究及治疗肿瘤的临床疗效观察

目的 研究CIK细胞体外增殖特性及对CIK细胞治疗肿瘤的临床疗效观察.方法 提取外周血的PBMC,第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-2、抗CD3单抗和IL-1培养CIK细胞,用流式细胞仪进行表型测定,并与LAK细胞进行比较;静脉输注CIK细胞对43例肿瘤患者进行治疗.结果 体外培养5 d后,CIK扩增倍数明显高于LAK细胞,表型分析发现CIK细胞中杀伤作用细胞CD8和CD3+CD56+的比例分别为70.9%和36.9%,LAK细胞为50.6%和1.63%,CIK细胞治疗肿瘤的总有效率为32.6%;治疗过程中的主要毒副反应是发热,占治疗总人数的20.9%.体温37.5～38.5℃,发热在2 h内自动缓解.结论 CIK细胞治疗肿瘤是一种安全有效的方法.     

嵌合抗原受体修饰CIK细胞抗肿瘤研究进展

在过去的20多年中,CIK细胞已逐步从实验室研究走向临床应用研究并展现了一定的抗瘤效果.然而,CIK细胞存在缺乏抗原特异性、靶向性不足、体内存活时间短等问题限制了其在临床上的应用.随着嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞(CAR-T)技术的兴起,CIK细胞的CAR修饰潜力也倍受关注.本文就CAR-CIK细胞的构建思路、效应细胞来源和简化治疗优势、基础研究和临床转化现状以及目前CAR-CIK面临的瓶颈问题等的研究进展作一综述.     

CIK细胞治疗晚期大肠癌的临床研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)治疗晚期大肠癌的疗效。方法经确诊并采用标准治疗方案治疗的晚期大肠癌患者30例作为观察组,取外周血分离单个核细胞(PBMC),体外细胞因子诱导培养CIK细胞,流式细胞仪检测细胞表型,接受CIK细胞免疫治疗。以30例采用标准治疗方案治疗而未经CIK治疗的晚期大肠癌患者作为对照组。结果观察组经CIK细胞治疗后检测T淋巴细胞亚群,发现CD3+、CD3+CD4+、CD56+(NK)效应细胞的比例和CD4+/CD8+比值显著上升,CD3+CD56+效应细胞比例下降,无进展生存期为(50.9±10.8)个月,生存期为(62.5±13.8)个月;对照组无进展生存期为(26.2±8.3)个月,生存期为(35.6±10.2)个月,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论经CIK细胞治疗后晚期大肠癌患者免疫功能增强,无进展生存期及生存期延长。     

CIK细胞抗白血病的研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer,CIK)是由多种细胞因子诱导而成的对多种肿瘤具有杀伤活性的细胞毒性T细胞,且是一种非主要组织相溶性复合体(MHC)限制的免疫效应细胞,同时表达CD3和CD56,其增殖能力强、杀瘤活性高、副作用小,是目前白血病细胞免疫疗法中最具前景的细胞之一。文章综述了CIK细胞的特点、抗白血病机制和科研及临床的应用现状。     

CIK细胞联合化疗治疗进展期胰腺癌的临床观察

目的探讨细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞联合化疗治疗进展期胰腺癌的临床疗效。方法 126例胰腺癌患者分为CIK细胞联合化疗组(58例,吉西他滨+CIK细胞治疗)和单纯化疗(68例,吉西他滨)组,观察2组治疗前后瘤体变化、Karnofsky评分及药物毒副反应。结果 CIK细胞联合化疗组疾病控制率、Karnofsky评分提高率均高于单纯化疗组,差异有统计学意义(χ2=6.587、2.543,P=0.010、0.011)。2组主要毒副反应相似,均为骨髓抑制。结论 CIK细胞回输安全,毒副反应轻,联合化疗治疗进展期胰腺癌能有效改善患者的生活质量。     

CIK细胞对晚期非小细胞肺癌预后的影响

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）体外培养后,对晚期非小细胞肺癌的疗效。方法收集经确诊的、并发生转移、且采用标准治疗方案的非小细胞肺癌患者20例作为观察组,取外周血分离单个核细胞（PBMC）,体外细胞因子诱导培养CIK细胞,流式细胞仪检测细胞表型。20例患者均接受CIK细胞免疫治疗,观察其免疫活性及生存期。并以20例采用标准治疗方案而未经CIK治疗的晚期非小细胞肺癌患者作为对照组。结果观察组培养后的细胞表型CD3、CD3＋CD56＋明显升高,生存期为（16.15±3.8）个月,对照组生存期为（9.12±3.2）个月。结论经CIK细胞治疗后晚期非小细胞肺癌患者的生存期明显延长。     

自身细胞因子诱导的杀伤细胞过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床观察

背景与目的:细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)具有增殖快、杀瘤活性强和杀瘤谱广的特点。但用于临床肿瘤治疗的报告较少,本文旨在评估用CIK细胞过继回输治疗晚期肿瘤的疗效。方法:用淋巴细胞分离液分离患者末梢血单个核细胞,然后将末梢血单个核细胞加入含有IFN-γ、IL-2和CD3单抗的培养基中进行培养扩增,再将培养后的CIK细胞回输给病人;患者一个疗程接受CIK细胞总数在5×109～15×109之间。在CIK细胞治疗前有47例患者做了化疗,3例做了放疗。化放疗与CIK细胞治疗间隔时间在2～4周以上。结果:在63例接受治疗者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为28例(44.46%)。20例CEA增高者,治疗后有14例减低,6例增加;10例AFP增高者,治疗后有9例减低,1例增加。CD3、CD4和CD8T淋巴细胞绝对值在CIK细胞治疗后均增加45%以上。治疗后63例中有51例患者有食欲增加、32例患者睡眠和体力改善,18例患者中有13例疼痛减轻,结论:用自身CIK细胞过继性回输治疗能明显提高癌症患者细胞免疫功能,改善临床体征,且无毒副作用。     

DC疫苗联合CIK细胞免疫治疗B细胞淋巴瘤的初步临床观察

近年来非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）的发病率不断上升,化疗联合美罗华免疫治疗使NHL获得了较高的缓解率,但仍有部分患者因为原发耐药或者缓解后复发而无法获得治愈,因此研发新的淋巴瘤治疗方法对于提高疗效,延长患者生存具有重要的意义。近年来树突状细胞（dendritic cell, DC）疫苗免疫治疗各类肿瘤的基础与临床研究受到广泛的关注,通过给患者免疫接种携带肿瘤抗原的DC,可以诱导患者机体产生特异性的、持久的抗肿瘤免疫应答\[1-2\];细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer,CIK）细胞输注可以调节和增强患者机体免疫功能\[3\]。因此本研究选择在淋巴瘤化疗完全缓解期,采用淋巴瘤抗原体外冲击的自体DC皮下免疫接种患者,其后静脉回输自体CIK细胞的方法免疫治疗B细胞淋巴瘤, 进行了初步的临床观察,现报道如下。     

脐血CIK细胞的体外扩增特性研究

目的动态观察脐血CIK细胞体外扩增特性及其表面抗原变化,并对其细胞毒活性进行检测。方法提取健康足月产妇的胎儿脐带血单个核细胞,第0天加入rh-IFN-γ,第1天加入rhIL-2、抗CD3单克隆抗体来诱导培养CIK细胞,以后每3d更换培养液1次,并补加rhIL-2及抗CD3McAb。用流式细胞仪动态检测培养物的免疫表型变化,同时进行细胞计数,并使用MTT法检测各阶段脐血CIK细胞的细胞毒活性。结果脐血CIK细胞在培养2￣3周后大量增生,扩增约(64.4±16)倍,其中CD3+CD5+6细胞扩增约900倍,是CIK的主要效应细胞,且CD+3CD+8的T细胞达(74.7±10.42)%,CD2+5细胞比例也明显增加,而CD3+4细胞比例却减少。另外CD+3CD1+6CD5+6细胞比例升高最显著;脐血CIK细胞对白血病细胞株K562,HL-60及原代白血病细胞有较高的杀伤活性。结论脐血单个核细胞在体外可以被培养为CIK细胞,且扩增潜能极大,扩增倍数极高,细胞毒活性强,脐血CIK细胞有望应用于恶性肿瘤的生物免疫治疗。     

CIK细胞体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性的研究

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞的体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性。方法：收集8名健康献血者和8名宫颈癌患者的新鲜外周血,分别通过常规方法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,应用相应细胞因子体外诱导分化出CIK细胞,动态观察CIK细胞的体外增殖活性、细胞表型和对HeLa细胞的杀伤活性;在BALB/c裸鼠皮下接种效应细胞,观察宫颈癌患者CIK细胞对接种HeLa细胞的荷瘤鼠的抑瘤作用,同时设淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells,LAK）和PBMC细胞作为对照。结果：源于健康人和宫颈癌患者的CIK细胞间的增殖活性无明显区别（P〉0.05）。表型分析结果表明,两种来源的CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞均得到了大量扩增,宫颈癌患者CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞在实验开始前约占0.13%,到实验后第28天上升到25.8%。体外实验表明,宫颈癌患者的CIK细胞杀伤宫颈癌HeLa细胞的细胞毒活性明显高于PBMC细胞。裸鼠体内实验表明,宫颈癌患者CIK细胞能够显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率可达80.6%,高于LAK细胞的59.1%和PBMC细胞的38.3%（P〈0.01）。CIK治疗后肿瘤体积明显比空白对照组缩小（P〈0.05）。结论：宫颈癌患者CIK细胞具有较强的体内外抗宫颈癌细胞活性,有可能用于临床上宫颈癌的过继性免疫治疗。     

进展期胃癌术后自身CIK细胞和树突状细胞联合治疗的临床观察

目的：评估进展期胃癌术后用CIK细胞联合树突状细胞（DC）治疗的疗效.方法：将110例进展期胃癌术后患者随机分为两组.1）细胞免疫治疗组52例：常规诱导培养患者自身CIK和DC，再将培养的自身CIK细胞回输，DC给予患者腹股沟、腋下浅表淋巴结内和淋巴结附近皮下注射以及静脉回输 患者1个疗程接受CIK细胞总数在1.1～8.0×10^10之间，DC总数在3～7×10^7之间.每周回输CIK细胞2次，8～12次为1个疗程，3～6个月后行第2次治疗 每例患者每个疗程接受3～5次成熟DC注射.2）化疗组58例：全部采用CF＋5-FU＋ADM＋DDP方案，3例治疗2个周期，6例治疗3个周期，49例治疗4个周期以上.结果：细胞免疫治疗组（Ⅰ b、Ⅱ和Ⅲa）中，3年生存率为86.8%（33/38），5年生存率为78.9%（30/38），化疗组分别为65.1%（28/43）、53.5%（23/43），细胞免疫治疗组生存率明显高于化疗组.细胞免疫治疗后患者食欲增加、疼痛减轻、睡眠改善、体重增加较化疗组明显.CEA增高患者治疗后恢复正常高于化疗组.结论：进展期胃癌术后的自身CIK细胞和树突状细胞（DC）联合治疗组（Ⅰ b、Ⅱ和Ⅲa）3、5年生存率明显高于化疗组，细胞免疫治疗能改善患者细胞免疫功能和临床体征，无不良反应，对进展期胃癌术后防止复发是一种安全有效的治疗方法.[第一段]     

CIK细胞联合白介素-2对鼻咽癌病人免疫功能及EB病毒指标的影响

目的：细胞因子诱导杀伤细胞（cytokine-induced killer cells，CIK细胞）是目前抗肿瘤过继细胞免疫治疗最为有效的方案。本研究通过治疗30例鼻咽癌病人，探讨CIK细胞联合IL-2对鼻咽癌病人免疫学功能及EB病毒指标的影响。方法：将符合条件的30例病人配对分为两组。治疗组病人接受CIK细胞过继细胞免疫治疗，每周一次，连续4周与对照组比较。免疫功能及EB病毒学指标分别通过测定外周血T淋巴细胞亚群，EB病毒VCA—IgA、EA—IgA、EDAb、DNA免疫荧光定量进行评估。结果：随访8—18个月，中位随访时间12个月。CIK治疗1个月后患者CD4^＋CD25^＋％明显下降，EB病毒VCA—IgA、EA—IgA、DNA免疫荧光定量下降显著。结论：CIK细胞可改善鼻咽癌病人的免疫功能，加速EB病毒抗体及DNA拷贝数下降。提示CIK治疗可消灭肿瘤微小残留灶及转移灶，可作为一种鼻咽癌的辅助治疗。     

CIK细胞治疗对肿瘤患者外周血免疫细胞亚型的影响

目的： 分析接受细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞治疗后肿瘤患者外周血免疫细胞亚型的变化,探讨CIK细胞治疗对肿瘤患者免疫功能的影响。 方法： 采集2012年3月7日至2012年8月30日期间河北医科大学第四医院生物治疗科收治的60例肿瘤患者（肺癌25例、胃癌8例、直肠癌6例、食管癌11例、黑素瘤7例和乳腺癌3例）外周血及对照组20名健康志愿者外周血,分离外周血单个核细胞,常规方法体外扩增CIK细胞,分3次回输患者体内,流式细胞术检测CIK细胞治疗前后肿瘤患者外周血淋巴细胞亚型的变化。 结果： 与治疗前相比,经1次CIK细胞治疗后,CD3+CD4+T细胞比例升高（P=0.016）、CD4+/CD8+细胞比值升高（P=0.013）且均达到正常水平,CD3+CD8+细胞比例降低（P=0109）但仍高于对照组（P=0.048);3次CIK细胞治疗后相比1次治疗后无显著变化（P>0.05）。CD4+CD25+Treg比例经1次CIK治疗后较治疗前显著下降（P=0.007）,达到正常水平;3次治疗后持续下降（P=0.005）。CIK治疗对CD3-CD19+B细胞和CD3-CD56+自然杀伤（natural killer,NK）细胞水平无显著影响（P>0.05）。 结论： CIK细胞治疗能够降低肿瘤患者外周血Treg比例,升高CD3+CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+细胞比值,从而减轻或消除肿瘤患者的免疫抑制状态。     

DC／CIK细胞在非小细胞肺癌治疗中的研究进展

树突状细胞／细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cells／cytokine－induced killer cells,DC／CIK）是新型的异质性免疫效应细胞群,其主要的效应细胞同时表达CD3＋和CD56＋两种膜蛋白分子,兼有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和自然杀伤（natural killer,NK）细胞的非主要组织相容性复合体（non－major histocom-patibility complex,MHC）限制性杀瘤特点。其与手术、放疗、化疗等方法相结合治疗非小细胞肺癌（non－small cell lung cancer,NSCLC）,可以使患者获得更高的生存率,显著提高患者的生活质量。DC／CIK由于其强大的体外扩增能力和抗肿瘤活性而迅速成为目前过继免疫治疗的有效方法之一。     

自体CIK细胞治疗对恶性肿瘤患者免疫功能和生活质量的影响

目的：探讨自体细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞对恶性肿瘤患者免疫功能和生活质量的影响。 方法： 回顾性分析在我院经过CIK细胞治疗的58例恶性肿瘤患者临床资料,流式细胞仪检测患者治疗前后外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+ CD 56+和CD3+CD16+ CD 56+细胞的表达水平;42例患者治疗前后采用世界卫生组织生活质量测定简表(WHOQOL-BREF)分别进行问卷调查;治疗过程中监测相关的不良反应。 结果： 患者CIK细胞培养液体取样标本中CD3+总T淋巴细胞、CD3+CD4+T辅助淋巴细胞以及CD3+CD8+T抑制淋巴细胞的亚群水平分别为（8279±11.98）%、（30.32±11.23）%和（49.10±11.65）%,CD4+/CD8+的比值为0.67±0.34,而CD3-CD16+CD56+NK细胞和CD3+CD16+CD56+CIK细胞亚群水平分别为（16.58±11.83）%和（13.74±8.66）%。与治疗前相比,治疗后的患者外周血中CD3+总T淋巴细胞亚群、CD3+CD4+T辅助淋巴细胞亚群、CD3+CD8+T抑制淋巴细胞亚群和CD3+CD16+ CD 56+CIK细胞亚群水平均明显升高(P<0.05),CD3-CD16+ CD 56+NK细胞亚群水平较治疗前下降(P<0.05)。经过CIK细胞治疗后,患者的生理、心理、社会关系和环境关系均得到很好的改善(P<0.05)。自体CIK细胞治疗过程中不良反应发生率低,均可控制。 结论： 自体CIK细胞治疗增强了患者的免疫功能,改善了患者的生活质量,且不良反应较轻。     

老年高危淋巴瘤化疗联合CIK细胞免疫治疗临床观察

目的 老年高危淋巴瘤预后不佳,高剂量化疗相关死亡率高.为了改善老年高危淋巴瘤患者的预后,本研究探讨化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)免疫疗法治疗老年高危淋巴瘤的安全性及有效性.方法 对北京大学第三医院2009-01-08-2014-01-31收治的21例＞60岁老年高危淋巴瘤患者进行化疗,根据病理类型分别采用RCHOP、RCHOPE及ABVD方案化疗.化疗后分离采集自体外周血单个核细胞,体外经细胞因子(IL-2,anti-CD3 McAb,INF-γ)诱导培养.通过流式细胞技术测定体外培养后CIK细胞表型及亚群分布,经静脉回输CIK细胞,观察治疗相关不良反应,评价治疗安全性.通过影像学评价及生存随访分析,统计1、3和5年的总生存率(overall survival,OS)及无进展生存率(disease free survival,PFS),评价该治疗方法的近期和远期疗效.结果 21例患者化疗后,5例完全缓解,10例部分缓解,6例疾病进展.所有患者均可通过体外诱导扩增获得足够数量的CIK细胞,患者输注细胞量(3.00～8.27)×109,平均(5.64±1.90)×109,其中CD3+ CD56+细胞亚群百分比中位数为(19.32士8.52)％.CIK细胞输注过程中13例(61.90％)患者仅出现1～2级的轻微发热,无其他不良反应.近期疗效评价结果显示,与CIK细胞治疗前状态相比,4例(19.00％)患者获得进一步治疗反应.1、3和5年OS分别为(85.70±7.60)％、(74.90±9.80)％和(67.40±11.30)％.1、3和5年PFS分别为(81.00±8.60)％、(61.20士10.80)％和(49.00±11.50)％.结论 老年高危淋巴瘤患者采用化疗联合CIK细胞治疗,安全性良好,一定程度上可进一步提高疗效,改善远期生存.