非小细胞肺癌不同中医辨证分型患者血清microRNA表达谱分析研究

目的:研究不同中医辨证分型晚期肺癌患者血清microRNA (miRNA)表达谱差异。方法:将经病理诊断明确为非小细胞肺癌患者共9例,并按肺癌中医证型诊断标准分为气阴两虚型3例、脾虚痰湿型3例、气滞血瘀型3例,以同期健康体检者3例作为对照组,应用高通量测序法检测各组血清中miRNA的表达谱,筛选出差异表达的miRNA,实时荧光定量PCR验证结果,并进行靶基因预测及生物信息学分析。结果:在健康对照组及气阴两虚型、脾虚痰湿型、气滞血瘀型患者中分别鉴定得到791、707、773、846个已知miRNA成熟体。通过miRNA差异分析,发现hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-103b、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-532-5p等4个miRNA仅在气阴两虚型患者血清中呈显著表达;hsa-miR-142-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-18a-3p等15个miRNA仅在气滞血虚型患者血清中显著表达;hsa-let-7d-5p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-17-5p等18个miRNA...     

不同发展速度慢阻肺患者miRNA分子标志物的筛选与验证＊

目的 本项研究采用高通量测序技术，筛选发展“快”“慢”慢阻肺［慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD），简称慢阻肺］患者差异表达miRNA，验证其可能的生物学标志物及潜在治疗靶点。方法 收集新疆医科大学第四临床附属医院呼吸科2018年1月至2019年12月诊断明确慢阻肺稳定期患者240例，选取发展“快”组5例，发展“慢”组5例，正常组4例，健康对照组5例，健康人对照组5例。抽取受试者外周血，提取总DNA，进行miRNA高通量测序，运用生物信息学分析筛选不同发展速度慢阻肺患者各组间存在的差异性显著性miRNA、并进行GO和KEGG通路分析。候选的miRNA采用实时荧光定量PCR法在本地扩大样本的慢阻肺患者60例中进行验证。结果 与健康对照相比，COPD发展“快”患者中发现35个差异表达的miRNAs，COPD发展“慢”患者中发现16个差异表达的miRNAs，COPD发展正常患者中发现7个差异表达的miRNAs。根据差异miRNA生物信息学分析结合参考文献选择miR-4433a-5p、miR-1246、miR-1290进行qRT-PCR验证，结果显示miR-4433a-5p在COPD不同发展速度患者中显著升高，miR-1246、miR-1290在COPD不同发展速度患者中显著降低。结论 miR-4433a-5p、miR-1246、miR-1290可作为COPD疾病预测的标志物和治疗的潜在靶点。     

化痰散结方含药血清作用胃癌细胞系MGC803后差异表达miRNAs筛选及生物信息学分析

目的:筛选化痰散结方含药血清处理胃癌细胞系MGC803后差异表达的微小RNA(miRNAs),并进行生物信息学分析。方法:应用"下一代"测序技术(即高通量测序技术)对MGC803细胞和化痰散结方含药血清处理后的MGC803细胞进行miRNAs差异表达谱分析;结合文献报道确定4个与肿瘤相关的miRNAs,对其进行靶基因预测及信号转导通路的分析。结果:经化痰散结方含药血清处理后,miR-424～3p和miR-494～3p的表达水平明显上调,miR-33b-3p和miR-27a-5p的表达水平明显下调;生物信息学方法分析结果显示miR-424～3p、miR-494～3p、miR-27a-5p和miR-33b-3p及其靶基因参与细胞迁移、细胞周期和凋亡等通路。结论:化痰散结方含药血清可能通过调控miR-27a-5p、miR-33b-3p、miR-424～3p、和miR-494～3p的表达抑制胃癌的发生发展。     

消癌解毒方诱导人肝癌SMMC-7721细胞miRNA表达变化

目的:探讨消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及微小核糖核酸(microRNA,miR)-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p,miR-182-5p表达谱的影响。方法:将12只雄性大耳白兔随机分为4组,分别为消癌解毒方高、中、低剂量(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)组和空白组,各组分别给予消癌解毒方及生理盐水灌胃4 d。4 d后于颈动脉中取血清并配制培养基。用消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清及空白血清的培养基处理人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖活性、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法验证人肝癌细胞SMMC-7721中miR-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p和miR-182-5p的表达水平。结果:经过12,24,48 h后,消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖均存在抑制作用。随着消癌解毒方含药血清浓度的增加,其对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制率也相应增加。其中高剂量组含药血清的抑制效果最好,其干预12,48 h的吸光度A较同期空白组明显降低(P0.05)。高剂量组干预24 h A比同期空白组显著降低(P0.01),该组抑制率为42.86%。Real-time PCR证实消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清的培养基能诱导miR-25-3p,miR-182-5p表达下调,诱导miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p表达上调。且高剂量组的调控作用较空白组更显著(P0.01)。结论:消癌解毒方可能通过诱导miRNA表达谱的改变而参与抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,但其具体机制仍有待进一步研究。     

消癌解毒方对H22瘤荷小鼠 miRNAs表达谱的影响

目的通过对H22荷瘤小鼠肿瘤组织微小核糖核酸(miRNAs)表达谱的检测,探讨消癌解毒方抗肝癌的作用机制。方法将50只H22荷瘤小鼠随机分为模型组,消癌解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组和顺铂组,每组10只。应用病理组织学技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织光镜下的差异表现。应用miRNA芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织差异表达miRNAs。应用统计学方法分析,找出与消癌解毒方作用机制相关的差异miRNAs。结果病理组织学检查结果显示,随着消癌解毒方剂量的增加,病理性核分裂像减少,癌细胞减小,抗癌效果增强。根据miRNA芯片的分析结果,消癌解毒方对H22瘤荷小鼠肿瘤组织内一些特异miRNAs如miR-1298-5p、miR-874-3p、miR-721、miR-298-5 p、miR-551 b-5 p、miR-346-5 p、miR-105表达显著上调;miR-24-3 p、miR-3963、miR-127-3 p、miR-434-5 p、miR-1187、miR-468-3 p、miR-221-5 p、miR-6695-5 p表达显著下调。结论消癌解毒方可能通过调控多种miRNAs的表达来发挥其抗肿瘤的作用。     

马兜铃酸I致大鼠肾损伤后血清miRNA差异表达的研究

目的筛选马兜铃酸I(AAI)致大鼠肾损伤后血清中差异表达的微小RNA(micro RNA,miRNAs),为阐明miRNAs调控马兜铃酸肾病的机制研究提供靶标并奠定研究基础。方法 SD雄性大鼠随机分为对照组及AAI(2.25 mg/kg)组,连续ip给药14 d造成肾损伤模型后,对大鼠肾脏进行HE染色观察肾损伤程度。利用miRNAs芯片技术寻找AAI组及对照组大鼠血清中差异表达的miRNAs,预测靶基因,采用实时定量PCR(qRT-PCR)验证芯片结果的可靠性,并对部分结果进行信号通路分析。结果 HE染色显示AAI组大鼠肾脏出现不同程度的病变;miRNAs芯片结果显示有5个miRNAs(miR-10a-3p、miR-207、miR-3594-3p、miR-874-3p、miR-9a-3p)表达明显上调,无明显下调的miRNAs,并预测Rhebl1、Usp10等16种基因为差异表达的miRNAs靶基因;qRT-PCR验证结果与芯片结果基本一致;信号通路分析结果显示MAPK信号通路等相关性较大。结论芯片分析得到的差异表达的miRNAs可能与AAI致肾毒性机制相关,为进一步深入研究特定miRNAs的调控机制提供新的靶点,并为后期生物信息学层次的研究提供有效依据。     

Chir99021联合PD0325901对小鼠胚胎干细胞中miRNAs差异表达的影响

目的通过研究Chir99021联合PD0325901对小鼠胚胎干细胞中miRNAs差异表达的影响,为揭示胚胎干细胞的自我更新和分化的机制提供更多线索。方法采用miRNA基因芯片技术检测Chir99021联合PD0325901处理组和PD0325901处理组miRNAs的表达谱差异。选取3倍以上及通过查文献与胚胎干细胞自我更新相关的1.5倍以上3倍以下的miRNAs,采用实时荧光定量PCR法验证,利用miRDB、Miranda两个数据库交叉预测差异表达的靶基因,并应用KEGG Pathway进行靶基因功能富集分析。结果与PD0325901单独处理相比,Chir99021联合PD0325901处理组有47种miRNAs上调1.5倍以上,75种miRNAs下调1.5倍以上;用实时荧光定量PCR验证差异表达的miRNAs,结果显示13个miRNAs与芯片结果相符。靶基因预测分析显示,miR-466a-5p、miR-466d-5p处于重要位置,Plcb1、Prkcb处于关键基因位置。结论 Chir99021可引起小鼠胚胎干细胞中的miRNAs差异表达,差异表达的miRNAs可能通过调控Plcb1、Prkcb基因而影响胚胎干细胞的自我更新。     

清络通痹方对佐剂性关节炎大鼠破骨细胞分化相关miRNA表达的影响

目的观察清络通痹方(Qingluo Tongbi Compound,QTC)对佐剂性关节炎(adjuvant induced arthritis,AIA)大鼠骨破坏相关miRNA表达的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法建立AIA大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞模型,应用miRNA芯片的方法初步筛选破骨细胞分化后期miRNA的异常表达谱,并采用实时定量PCR(RT-PCR)对芯片结果进行验证。制备QTC含药血清和空白血清,将破骨细胞随机分为空白组、空白血清组及QTC组,采用RT-PCR检测QTC对差异表达miRNA的影响,并应用生物信息学软件对关键性miRNA进行分析。结果与单核细胞比较,破骨样细胞分化过程中存在明显差异表达的miRNAs共211个,其中表达上调88个,表达下调123个。RT-PCR验证结果与芯片检测结果表达趋势一致。RT-PCR结果显示,QTC干预后miR-140-5p表达明显上调,生物信息学分析结果显示miR-140-5p靶基因显著富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、Ras信号通路、c AMP信号通路和Rap1信号通路等信号通路上。结论破骨样细胞分化后期存在多种miRNAs失调,QTC可能通过影响miR-140-5p的表达参与调控破骨细胞的分化。     

基于miRNA组学探讨慈菇消脂方调控TGF-β1诱导LX2细胞活化的作用机制北大核心CSCD

目的:运用生物信息学方法筛选慈菇消脂方干预人肝星状LX2细胞中差异表达微小RNA(micro RNA,miRNA),并进一步探讨差异miRNA对活化LX2细胞刺猬(Hedgehog, Hh)信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制。方法:CCK-8法检测不同浓度含药血清,不同时间处理对细胞活性影响,筛选最佳作用时间和作用浓度。6%慈菇消脂方含药血清干预LX2细胞72 h,以空白血清组作为正常对照,进行总RNA提取、RNA质检、文库构建,使用测序平台为illumina HiSeqTM2500进行高通量测序,以P<0.05的标准筛选差异miRNA,利用miRanda和RNAhybrid两个软件进行miRNA靶基因预测,得到miRNA和靶基因间的对应关系。对差异miRNA靶基因分别进行Gene Ontology和KEGG富集分析,筛选Hh信号通路差异表达miRNA。转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立LX2细胞活化模型。试验随机分为正常对照组、模型对照组、6%慈菇消脂方含药血清组、环靶明脂组、微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)过表达组及其阴性对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Q-PCR和Western-blot技术检测细胞中miR-199a-5p、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型-胶原(Col-I)及Hh信号通路相关蛋白表达,以此探究miR-199a-5p对活化LX2细胞Hh信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制。结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞活力显著升高(P<0.01),miR-199a-5p表达上调(P<0.01),Sonic刺猬信号通路(Sonic Hedgehog, Shh)、脑胶质瘤相关癌基因1(Glioma related oncogene homology-1,Gli-1)、Gli-2、Col-I、α-SMA蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,6%慈菇消脂方含药血清组细胞活力显著降低(P<0.01),miR-199a-5p表达显著下调(P<0.01),Gli2、α-SMA蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:慈菇消脂方含药血清可以抑制TGF-β1诱导的LX2细胞活化,其机制可能通过下调miR-199a-5p进而抑制Hh信号通路蛋白表达发挥作用。     

基于外泌体miRNA测序探讨肝癌在脾虚状态下转移增强机制

目的?探索脾虚状态下外泌体促肝癌转移的机制。方法?使用随机数字表法将C57BL/6小鼠随机分为4组：正常对照组、脾虚组、肝癌组、脾虚肝癌组，每组10只，正常对照组腹腔注射生理盐水，脾虚组腹腔注射利血平，肝癌组采用肝癌原位移植术，脾虚肝癌组采用腹腔注射利血平加肝癌原位移植术。利血平腹腔注射共持续21天，确定脾虚模型建立后再行肝癌原位移植术，术后14天取材。基于模型血浆提取小鼠外泌体并使用电镜、颗粒分析及纳米流式鉴定。以外泌体为变量使用划痕实验、Transwell迁移与侵袭实验、尾静脉肺转移裸鼠模型验证脾虚状态下外泌体促肝癌转移的表型。随后对肝癌组和脾虚肝癌组外泌体进行miRNA测序鉴定差异miRNAs，并分析miRNAs靶向的mRNAs的通路富集结果。结果?与肝癌组比较，脾虚肝癌组小鼠的脾虚积分更高（P<0.0001）及肿瘤体积更大。电镜、颗粒分析及纳米流式结果成功鉴定外泌体。划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验结果表明脾虚肝癌组外泌体在体外促进了肝癌细胞的转移能力（P<0.0001）。尾静脉肺转移裸鼠模型的活体成像结果表明脾虚肝癌组外泌体在体内促进了肝癌细胞的转移能力。外泌体miRNA测序结果表明15个miRNAs在脾虚肝癌组差异表达，其中9个上调（miR-183-3p，miR-1247-5p，miR-543-3p，miR-495-3p，miR-466i-5p，miR-540-5p，miR-125b-5p，miR-214-3p，miR-499-5p），6个下调（miR-6516-5p，miR-450a-3p，let-7g-3p，miR-103-5p，miR-5129-3p，miR-301b-3p）。差异表达miRNAs靶向的mRNAs富集的通路与转移相关（Wnt signaling pathway）。结论?脾虚内环境来源的状态下外泌体通过miRNA-mRNA轴促进肝癌转移。     

安神定志方对阿尔茨海默病大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察安神定志方对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其相关作用机制.方法 通过GEO数据库筛选AD海马组织差异表达miRNA.50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、miR-103a-3p mimic组、安神定志方组和miR-103a-3p mimic+安神定...     

袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的差异表达miRNA的实验研究

目的:成骨细胞和骨细胞凋亡学说是激素性股骨头坏死的机制之一,袁氏生脉成骨片已被证实在临床治疗激素性股骨头坏死有一定疗效,但两者具体作用机制有待深入,实验研究袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的差异表达miRNA,预测其靶基因以推测作用机制。方法:取乳鼠(大鼠)的成骨细胞进行培养、传代,将第三代成骨细胞分为空白组,激素组,中药组;分别提取总RNA并进行质检;采用RNA标记与芯片杂交,采集数据及标准化,找出三组间的差异表达miRNA并对其表达谱进行分析。利用miranda、microcosm、mirdb 3个靶点预测软件对最明显的miR-672-5p进行靶基因预测。结果:和空白组相比,激素组中倍数>2.0倍的miRNA共有6个(4个miRNA表达上调,2个miRNA表达下调);和空白组相比,中药组中倍数>2.0倍miRNA共有63个(19个miRNA表达上调,44个miRNA表达下调);和激素组相比,中药组中倍数>2.0倍的miRNA共有56个(11个miRNA表达上调,45个miRNA表达下调)。在激素组与空白组对照中上调,在中药组与激素组对照中相对应下降的倍数>2.0倍的miRNA共4个(miR-672-5p、miR-3559-3p、miR-98-3p、miR-92a-1-5p),并预测出Angptl4、Ccdc51、RGD1306991、Ssbp3作为miR-672-5p的靶基因。结论:袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的miRNA表达发生了明显变化,以miR-672-5p最为显著。这表明了它有可能参与了成骨细胞的凋亡,为袁氏生脉成骨片治疗激素性股骨头坏死提供理论依据。     

基于miRNA测序技术探讨黄芪-丹参药对干预自发性高血压大鼠肾损害的机制研究

目的基于微小RNA (microRNA,miRNA)高通量测序技术,探讨黄芪-丹参药对通过调控miRNA改善高血压肾损害的作用机制。方法以9只WKY大鼠作为对照组,将自发性高血压大鼠随机分为模型组和黄芪-丹参药对(3.4 g/kg)组,每组9只;黄芪-丹参药对组给予黄芪-丹参药对进行干预,观察各组大鼠血压及肾组织病理变化,并对各组大鼠肾组织进行miRNA测序。结果经黄芪-丹参药对干预4周后,与模型组比较,大鼠血压显著降低(P0.01),大鼠肾小球分叶不明显,系膜区增生减轻。与对照组相比,模型组共筛选出115个差异表达miRNA,其中68个差异表达miRNA上调、47个差异表达miRNA下调;与模型组相比,黄芪-丹参药对组筛选得到91个差异表达miRNA,其中67个差异表达miRNA上调、24个差异表达miRNA下调。差异表达miRNA的qRT-PCR验证结果显示,各组大鼠肾组织miRNA-142-5p、miRNA-3585-5p、miRNA-219a-5p、miRNA-122-5p和miRNA-125b-1-3p表达与miRNA测序结果趋势一致。差异表达miRNA的靶基因预测及功能富集结果显示,基因本体(gene ontology,GO)功能主要富集于阴离子跨膜转运、突触前、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性等方面;京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路主要富集于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、自噬、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)信号通路等途径。结论miR-219a-5p、miR-3585-5p和miR-142-5p可能是黄芪-丹参药对延缓高血压肾损害进程的直接靶点。     

癌痛消颗粒对移植性肝癌模型大鼠肝癌及癌旁组织miRNAs的影响

目的观察癌痛消颗粒对移植性肝癌模型大鼠肝癌及癌旁组织微小核糖核酸（miRNAs）表达的调节作用,探讨癌痛消颗粒抗肝癌作用的机制。方法将60只移植性肝癌模型大鼠随机分为5组,即癌痛消颗粒高、中、低剂量组及5-氟尿嘧啶（5-Fu）对照组、蒸馏水对照组,另设10只大鼠为空白对照组,不进行造模及给药。于造模后第8 d对癌痛消颗粒高、中、低剂量及蒸馏水对照组灌胃给药治疗,连续用药14 d后停药;5-Fu对照组腹腔注射给药治疗,共连续注射5次,各组均停药24 h后处死各组大鼠,取出瘤块,用实时定量PCR（PT-PCR）技术观察肝癌及癌旁组织特定miRNAs中miR-199a-3p、miR-199a-5p、miR-18表达水平。结果癌痛消颗粒高、中、低剂量组及5-Fu对照组、蒸馏水对照组肝癌及癌旁组织miR-199a-3p、miR-199a-5p、miR-18表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;癌痛消颗粒高、中、低剂量组及5-Fu对照组miR-199a-3p、miR-199a-5p、miR-18表达水平与蒸馏水组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,且癌痛消颗粒高、中剂量组与5-Fu对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,癌痛消颗粒低剂量组与5-Fu对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,癌痛消颗粒中剂量组与高剂量组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论癌痛消颗粒对移植性肝癌模型大鼠的肝癌及癌旁组织miRNAs的表达具有调节作用,其抗癌机制可能与降低miR-18的表达,升高miR-199a-3p、miR-199a-5p的表达有关,且癌痛消颗粒的中剂量组的临床效果最好。     

艾灸足三里穴对自然衰老大鼠睾丸miRNA表达谱的影响

摘要目的：观察艾灸足三里穴对自然衰老大鼠睾丸组织miRNA 表达谱的影响,从 miRNA的角度探讨艾灸延缓衰老的效应机制。 方法：以自然衰老大鼠（20月龄）为衰老模型,随机分为老年对照组、艾灸足三里穴组;另设青年对照组（9月龄）。采用HE染色观察艾灸足三里穴干预自然衰老大鼠的效应,并采用高通量测序的方法检测各组大鼠睾丸组织miRNA表达谱,运用生物信息软件对靶基因进行预测分析。 结果：病理结果提示,艾灸能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织的形态结构。与青年组对比,老年对照组差异表达的miRNA有67个,其中上调3个,下调64个;与艾灸足三里组比较,老年对照组差异表达的miRNA有39个,其中上调4个,下调35个。表达量改变的 miR-1-3p, miR-19a-3p 和 miR-202-5p等28种miRNA,均可被艾灸足三里穴干预后逆转,其预测靶基因与涉及衰老和睾丸功能相关的多条调控通路密切相关。 结论：艾灸足三里穴对自然衰老大鼠睾丸组织衰老相关的结构变化具有改善作用,这与其影响睾丸组织miRNA表达谱相关,主要调节了睾丸组织异常表达的miRNAs,推测这可能是艾灸延缓睾丸衰老的部分作用机制。     

慢性乙型病毒性肝炎肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs的表达研究

目的研究慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs(miRNAs)的表达差异,探索不同证候的特征性miRNAs,为慢乙肝辨证分型提供生物学标志物和客观化依据。方法收集慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者(各53例)及健康者(24例)的尿液标本,采用miRNAs表达谱芯片技术检测miRNAs表达谱,分析差异表达的miRNAs;采用实时定量RT-PCR(RT-qPCR)技术检测慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中部分差异表达的miRNAs相对表达量;进行miRNAs潜在靶基因的预测、GO和pathway分析。结果①miRNAs表达谱芯片检测结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者有21条miRNAs呈高表达,1条miRNA呈低表达(差异倍数1.5,P0.05)。②RT-qPCR结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者尿液中miR-483-3p和miR-4700-3p呈显著高表达(P0.05),miR-4745-5p呈显著低表达(P0.05);与健康者比较,慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中miR-483-3p呈低表达(P0.05)、miR-4745-5p呈高表达(P0.05),慢乙肝肝郁脾虚证患者尿液中miR-4700-3p呈低表达(P0.05)。③miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p的联合ROC曲线AUC为0.810 6,对于鉴别肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者具有一定的诊断价值。④生物信息学方法显示,证候差异表达miRNAs所调控的潜在靶基因,GO大都与生物学调控、代谢过程、多细胞有机体的发展、应激反应和细胞增殖等相关,pathway大都与翻译后蛋白质修饰、TGF-β信号通路、TGF-β家庭成员的信号、TGF-β受体复合物的信号传导等通路有关。结论慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中存在差异表达的miRNAs,miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p或许为慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证的潜在标志性分子,这些miRNAs可能分别通过调控其相应的靶基因而影响证候的发生发展。     

白花蛇舌草对大肠癌耐药细胞microRNAs表达的影响

目的:探讨白花蛇舌草(Hedyotic Diffusa Wilid,HDW)对大肠癌5-FU耐药细胞miRNAs表达的调控作用,进一步揭示其逆转大肠癌多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)作用机制。方法:通过体外培养HCT-8/5-FU细胞,经HDW处理,采用MTT检测细胞活力、倒置显微镜观察细胞形态、microRNA(miRNA)表达谱芯片分析、QPCR验证差异miRNA表达、GO及Pathway分析预测差异miRNA调控的信号通路。结果:HDW可显著抑制大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞的活力,降低细胞密度;HDW调控57个miRNA差异表达,其中上调23个,下调34个;QPCR验证HDW上调miR-92b-5p、miR-1247-3p、miR-4800-5p的表达,下调miR-4454、miR-4443、miR-483-5p的表达;信号通路预测显示HDW可调控PI3K/Akt、TGF-β/Smad、MAPK、P53、Wnt、JAK-STAT等多条与细胞耐药、迁移、侵袭、增殖、凋亡有关的信号通路。结论:HDW对大肠癌5-FU耐药细胞HCT-8/5-FU具有显著的抑制作用,通过调控miRNAs表达是其逆转大肠癌耐药的作用机制之一。     

结核丸联合常规西药治疗阴虚火旺型耐药结核病临床研究

目的：观察结核丸联合常规西药治疗耐阴虚火旺型耐药结核病的临床疗效及对微小核糖核酸-30a- 5p（miR-30a-5p）、微小核糖核酸-431（miR-431） 表达的影响。方法：采用随机数字表法将98例阴虚火旺型 耐药结核病患者分为治疗组、对照组各49例。对照组予以常规西药治疗,治疗组予以结核丸联合常规西药治 疗,2组均治疗6个月。比较2组治疗前后中医证候积分、T细胞亚群、炎症因子[白细胞介素-4（IL-4）、C-反 应蛋白（CRP）、干扰素-γ（INF-γ） ]、miR-30a-5p、miR-431水平,评估2组临床疗效及不良反应发生情况。 结果：治疗后,治疗组总有效率97.96%,对照组总有效率85.71%,2组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。 治疗后,2组miR-30a-5p、CD3+、CD4+、INF-γ水平及CD4+/CD8+较治疗前升高（P＜0.05）,中医证候积分及 CD8+、miR-431、IL-4、CRP水平降低（P＜0.05）;治疗组治疗后miR-30a-5p、CD3+、CD4+、INF-γ水平及 CD4+/CD8+高于对照组（P＜0.05）,中医证候积分及CD8+、miR-431、IL-4、CRP水平低于对照组（P＜0.05）。 2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：结核丸联合常规西药治疗阴虚火旺型耐药结 核病疗效显著,能调节患者miR-30a-5p、miR-431水平,提高免疫功能,减轻炎症反应,安全性较高。     

葱白提取物对大鼠心梗后室性心律失常疗效评价及miRs表达的影响

目的:探讨葱白提取物对心肌梗死大鼠室性心律失常的疗效及对miRNA表达的影响。方法:将60只大鼠随机分为4组,每组15只,分为假手术组、空白模型组、葱白提取物组和胺碘酮片组。后3组结扎前降支建立心梗模型,随机选取10对葱白提取物组和非葱白提取物治疗,治疗4周后评价疗效,随后处死大鼠,分离心肌细胞,用miRNA芯片筛选出上调最明显的miR-21及下调最明显的miR-15b-5p样本作为后续验证对象,QRT-PCR进一步验证上述可逆性差异性表达的miRNAs。结果:与空白模型比较,葱白提取物组和胺碘酮片组均可延长室性心律失常发生时间,减少持续时间和发生率(P 0. 01),miRNAs芯片筛选出葱白提取物处理组大鼠心肌细胞中可逆性恢复的67个具有显著表达差异的miRNAs(FC 1. 5,P 0. 05)。在qRT-PCR对15组样本的验证中,与未使用葱白提取物的对照组相比,葱白提取物组大鼠心肌细胞中miR-15b-5p表达均显著减少(p 0. 05),miR-21表达均显著增加(p 0. 05)。结论:葱白提取物可通过影响大鼠模型心梗后室性心律失常的发生类型、发生及持续时间、发生率和ST段抬高程度进而改善心梗后室性心律失常的发生发展,作用机制主要与调节miR-15b-5p及miR-21的表达有关。     

山豆根致大鼠肝损伤外周血microRNA早期变化特征研究

目的 探讨山豆根致肝损伤外周血微小RNA（microRNA,miRNA）的早期变化特征,寻找肝损伤早期外周血miRNA标志物。方法 60只Wistar大鼠随机分为山豆根组和对照组,每组30只,分别给予山豆根水煎液12 g/kg（2 mL/100 g）和等容量蒸馏水灌胃。于给药3、7、14、28天和停药后28天分批处理动物,取血清,测定常规血液生化指标ALT、AST、TBIL、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）水平,计算球蛋白（GLO）水平;取肝组织进行HE染色,观察病理形态学变化。同时分别取两组大鼠给药7、14、28天全血进行miRNA芯片检测,筛选差异表达miRNA,并进行RT-PCR验证。结果 山豆根组给药7～28天ALT明显升高（P<0.05）,组织病理学检查显示肝组织于给药28天出现肝细胞变性肿大。外周血miRNA芯片检测中,给药7、14、28天上调差异表达miRNA分别有11个、22个、13个,下调差异表达miRNA分别有1个、13个、2个。对给药7、14、28天共有差异表达miRNA通过靶基因预测和pathway分析发现,参与调控信号转导、细胞间相互作用、细胞骨架、免疫相关的差异表达miRNA可能参与了肝损伤的进程。时效高峰在7天的miR-291a-5p的RT-PCR验证显示,miR-291a-5p在外周血和肝组织的表达基本一致。结论 miR-291a-5p可在早期提示肝脏的损伤,可作为山豆根致肝损伤早期标志物之一。