银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的观察银杏内酯B(GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为5组:对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、GB(50、100和200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。经药物干预16 h后,采用MTT法检测细胞存活率;测定培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞中AKT mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达,计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析,比色法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9活性。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高(P0.01),培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低(P0.05或P0.01),细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);GB干预组细胞凋亡状况明显好转,其中GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞凋亡率显著降低(P0.01),AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01),Bax mRNA表达显著下调(P0.01),Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P0.01),细胞中NF-k B蛋白表达量和Caspase-3、Caspase-9活性显著降低(P0.05或P0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞凋亡具有抑制作用;其作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤,下调NF-κB蛋白表达,上调抗凋亡基因AKT和bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值,降低Caspase-3、Caspase-9活性有关。     

抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法采用CCK-8法筛选抗纤益心方最佳给药浓度。大鼠H9c2心肌细胞常规培养,饥饿8 h后细胞进行分组,正常组未做处理,模型组加100μmol/L的NE 100μl,抗纤益心方组加入筛选最佳浓度抗纤益心方溶液2μl+100μmol/L的NE 100μl、卡托普利组加入2×10~(-5)mol/L卡托普利5μl+100μmol/L的NE 100μl,各组设3个复孔,作用24 h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果最终筛选以0. 25 mg/ml的抗纤益心方为干预浓度进行实验。与正常组比较,模型组细胞凋亡率升高,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P 0. 01)。与模型组比较,抗纤益心方组和卡托普利组细胞凋亡率降低,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P 0. 05或P 0. 01)。结论抗纤益心方可抑制NE诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

大黄醇提物对氯化血红素诱导HT22细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究大黄醇提物对氯化血红素诱导损伤后HT22细胞自噬与凋亡的影响。方法 将HT22细胞分为正常组、模型组和大黄醇提物高、中、低剂量组(25、12.5、6.25μg/mL),给药干预24 h后，以40μmol/L氯化血红素诱导3 h建立细胞脑出血损伤模型。造模结束后，CCK-8法检测细胞存活率，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测细胞凋亡及自噬相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1及P62表达。结果 与正常组比较，模型组细胞存活率降低(P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达升高(P<0.01),P62蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较，大黄醇提物各剂量组细胞存活率升高(P<0.05,P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达降低...     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

白藜芦醇致敏TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡及其相关机制的研究

目的研究白藜芦醇对TRAIL诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制。方法培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照组、TRAIL干预组、Res+TRAIL干预组,进行DNA末端原位标记(TUNEL)染色法作凋亡分析;Western Blot检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞Survivn表达的影响。结果对照组SMMC-7721细胞的凋亡指数为(1.78±0.49)%,TRAIL干预组凋亡指数为(9.86±0.53)%,Res+TRAIL干预组中25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度Ros凋亡指数分别为(11.30±0.80)%,(20.89±0.69)%和(27.78±1.88)%。除Res+TRAIL干预组(25μmol/L)与TRAIL干预组比较无显著性差异(P0.05),其余各组之间比较差异均有统计学意义(P均0.05)。Western Blot测定结果显示:25μmol/L Ros处理组Survivin/β-actin的值与对照组相比无统计学差异(P0.05);50μmol/L和100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较对照组显著降低(P0.01);100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较50μmol/L显著降低(P0.01)。结论 TRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;Res对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,并且这种作用呈剂量依赖关系;其分子机制可能与下调凋亡抑制因子Survivin的表达有关。     

白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的抑制作用与PI3K-Akt信号通路的关系

目的:探讨白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及与PI3K-Akt信号通路的关系。方法:50只成年雄性SD大鼠,随机分为5组,即对照组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、白藜芦醇预处理组(Res组)、白藜芦醇预处理+渥曼青霉素组(Res+Wom组)、缺血再灌注+渥曼青霉素组(I/R+Wom组)。结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血45 min,再灌注120 min,测定再灌注心肌组织中NOS,NO的含量,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带生物素的dUTP缺口末端标记(TUNEL)的方法测定细胞凋亡,免疫组化测定心肌组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达,利用Western blot测定Akt(又称PKB,即蛋白激酶B)及p-Akt(即磷酸化蛋白激酶B)含量。结果:与I/R组及Res+Wom组比较,Res组NOS及NO表达增加,显著减轻心肌细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2降低,Akt的磷酸化水平增高,上述各项指标差异具有统计学意义(P<0.05),而上述变化能够被PI3K-Akt信号通路的特异性阻断剂渥曼青霉素所阻断,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡,此过程有PI3K-Akt信号通路的参与。     

黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素诱导H9c2细胞肥大损伤的机制研究

目的:探讨黄芪甲苷减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导H9c2心肌细胞肥大损伤的保护作用及潜在机制。方法:以100μmol/L ISO作用H9c2细胞建立细胞肥大损伤模型。将细胞分为正常对照组、模型组及黄芪甲苷6.25、12.5、25μmol/L组,黄芪甲苷预给药2 h,ISO作用24 h。CCK-8法检测细胞活力,荧光染色测定细胞表面积,Hoechst 33342和TUNEL染色测定细胞凋亡率。比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平,WST-8法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平。q RT-PCR检测Bcl-2、Bax、P62、LC3 m RNA水平。Western Blot检测Sirt1、P62、Caspase-3、Beclin、P53蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平。结果:黄芪甲苷能显著减轻ISO诱导的H9c2细胞肥大损伤,减少心肌细胞表面积及LDH的释放,降低细胞凋亡率及细胞内ROS水平,升高SOD水平,上调自噬相关m RNA及蛋白的表达,下调凋亡相关m RNA及蛋白的表达。结论:黄芪甲苷能有效抑制ISO诱导的H9c2细胞肥大及凋亡,其机制可...     

去甲氧基姜黄素对毒胡萝卜素诱导乳鼠心肌细胞内质网应激的影响

目的:探讨去甲氧基姜黄素(DMC)对毒胡萝卜素内酯(TG)诱导的乳鼠心肌细胞内质网应激(ERS)的作用和机制,及其对相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)的影响。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,随机分为4组:①对照组细胞不做任何药物处理;②模型组加入1μmol/L TG处理24 h,建立ERS模型;③DMC低浓度组同时加入1μmol/L TG和10μmol/L DMC处理24 h;④DMC高浓度组同时加入1μmol/L TG和30μmol/L DMC处理24 h。采用CCK8法检测心肌细胞活性,流氏细胞法检测心肌细胞凋亡,检测细胞匀浆中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,Western Blot法检测GRP78和CHOP蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组细胞活性显著降低,细胞凋亡率明显增加,LDH及MDA含量升高,而SOD活力则降低,GRP78和CHOP蛋白表达显著升高,P<0.05;与模型组比较,不同浓度DMC干预后,细胞活性升高,细胞凋亡率明显减少,LDH及MDA含量显著降低,S...     

和营安心方对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察和营安心方对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法以皮下大量注射异丙肾上腺素（ISO）的方法制备慢性心衰大鼠模型,随机分为模型对照组,卡托普利组,参麦注射液组,和营安心大、中、小剂量组。另设正常对照组,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组化方法检测心肌细胞Bax,Bcl-2蛋白表达,计算Bcl-2／Bax比值。结果模型对照组TUNEL法心肌细胞凋亡严重,棕褐色细胞核明显增多,免疫组化图像分析Bax表达明显升高,Bcl-2,Bcl-2／Bax比值明显下降。与模型对照组比较,和营安心方组心肌细胞凋亡数量明显减少,Bax蛋白表达明显下降,Bcl-2,Bcl-2／Bax比值明显升高。结论和营安心方有减抑慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的作用。     

牡荆素对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨牡荆素(vitexin)对大鼠缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组:对照(CON)组,缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,牡荆素3个剂量组(VT,100、50、25 μmol/L)及葛根素阳性对照组(120μmol/L).应用Langendorff灌注技术,给予心脏30 min缺血/60 min再灌注,通过TUNEL检测和电镜观察细胞超微结构研究细胞凋亡以及免疫组化技术检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 与CON组相比,I/R组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量、凋亡率明显增加;与I/R组相比,VT(100、50、25 μmol/L)组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量明显减少(P＜0.01);I/R组心肌Bax蛋白表达明显高于VT组心肌(P＜0.01),VT组心肌Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显高于I/R组心肌(P＜0.05).结论 牡荆素可通过增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达而减少I/R诱导的大鼠心肌细胞凋亡.     

真武汤含药血清对异丙肾上腺素致心肌细胞凋亡Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察真武汤含药血清对异丙肾上腺素致大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨真武汤对心肌细胞损伤的保护作用机制。方法:采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量。筛选真武汤含药血清的最佳浓度。实验分为空白组、模型组[异丙肾上腺素(10-6mol/L)]、西药组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)]、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)。硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)的含量来衡量心肌细胞的损伤程度。免疫荧光检测线粒体膜电位。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:1、异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;2、异丙肾上腺素10μmol/L作用6 h后,细胞存活率降低较明显;3、TBA法检测MDA含量:与异丙肾上腺素作用相比,真武汤使心肌细胞内MDA含量减少,使心肌细胞受损伤的程度降低;4、免疫荧光检测线粒体膜电位:模型组与空白组比较线粒体膜电位明显变化,而真武汤与西药组较模型组线粒体荧光表达有所下降;5、TUNEL分析心肌细胞凋亡率:异丙肾上腺素组心肌细胞凋亡率明显升高,与空白组相比有显著性差异(P0.05);卡托普利组及真武汤10%含药血清组心肌细胞凋亡率与异丙肾上腺素组相比明显降低,有显著性差异(P0.05);6、Western Blotting检测结果:异丙肾上腺素组心肌细胞Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增加,与空白对照组比较有显著性差异(P0.01);真武汤10%含药血清组和西药组与模型组相比较,Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能有效降低异丙肾上腺素引起的心肌细胞损伤,抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与其能够保护心肌细胞内线粒体,调节Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

大黄素对氯吡格雷损伤人胃黏膜上皮细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨大黄素对氯吡格雷损伤人胃黏膜上皮细胞GES-1的保护作用及可能机制。方法:用氯吡格雷0.36 mmol/L处理GES-1细胞后,加入大黄素(15、30、60μmol/L)和JNK抑制剂SP600125 10μmol/L共培养。流式细胞术测细胞凋亡、MTT法测细胞增殖、比色法测乳酸脱氢酶(LDH)活性、Western Blot测细胞Bax、Bcl-2、p-JNK及t-JNK蛋白表达。结果:与对照组比较,氯吡格雷可促进GES-1细胞凋亡,抑制GES-1细胞增殖,增加GES-1细胞LDH活性,增加GES-1细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与氯吡格雷组比较,中、高剂量大黄素可减少GES-1细胞凋亡,促进GES-1细胞增殖,降低GES-1细胞LDH活性,降低GES-1细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05或P0.01);与大黄素高剂量组比较,SP600125可进一步减少GES-1细胞凋亡,促进GES-1细胞增殖,降低GES-1细胞LDH活性,降低GES-1细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01)。结论:大黄素可通过促增殖、抗凋亡减轻氯吡格雷诱导GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制JNK通路有关。     

β-细辛醚对阿霉素诱导乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的:探讨β-细辛醚对阿霉素(ADR)所致心肌细胞损伤的保护作用及机制.方法:分离培养出生1～3d大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、ADR(2.0 mg·L-1)模型组、β-细辛醚(10,20,40 mg·L-1)剂量组.72 h后,观察心肌细胞形态及搏动频率,MTT比色法检测细胞存活率,试剂盒检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,免疫组织化学法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bel-2相关蛋白(Bax)表达.结果:与正常对照组比较,ADR模型组心肌细胞皱缩变形,不规则,细胞间隙变大,搏动节律不齐,频率明显减慢;心肌细胞存活率明显减少;LDH漏出量增加;SOD活力降低;MDA含量增高;Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增高(P＜0.01或P＜0.05).与ADR模型组比较,β-细辛醚各剂量组心肌细胞形态较规则,细胞搏动频率规则、增高,呈现向心性同步化搏动;心肌细胞存活率明显增高;LDH漏出量降低;SOD活力增高;MDA含量降低;Bcl-2蛋白表达增高、Bax蛋白表达降低(P＜0.01或P＜0.05).结论:β-细辛醚对阿霉素诱导心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化及抑制细胞凋亡有关.     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用

目的:研究黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用,并探讨相关的作用机制。方法:利用酶解法和差速贴壁方法从出生1~3 d的正常SD大鼠的乳鼠心脏中分离得到原代心肌细胞,种于24孔板,体外培养48 h后,设置空白组、模型组、美托洛尔组及黄芪甲苷低、中、高剂量组。预先给予各组对心肌细胞有害的儿茶酚胺类物质异丙肾上腺素(ISO),造成体外原代心肌细胞损伤模型,空白组心肌细胞不加ISO;30 min后予各治疗组相应浓度的美托洛尔(2.336μg·L~(-1))及黄芪甲苷低、中、高剂量(3,10,30μmol·L~(-1))。BCA法检测总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测原代心肌细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax)及Bcl-2相关k蛋白(Bak)的表达,流式细胞学法检测各组细胞的凋亡率,Hochest/PI双染法镜下观察各组细胞细胞核的形态,从而检测细胞的凋亡情况。结果:与空白组比较,各给药组(10~40μmol·L~(-1))原代心肌细胞的活力上调(P0.05);HOCHEST/PI双染结果显示,与模型组比较,美托洛尔组及黄芪甲苷中、高剂量亮蓝色凋亡细胞明显减少;细胞流式结果显示,与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P0.01),黄芪甲苷中剂量组凋亡率下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组凋亡率下调(P0.01);Bcl-2灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bcl-2的表达上调(P0.01),黄芪甲苷低剂量组Bcl-2表达上调(P0.05),黄芪甲苷中、高剂量组Bcl-2表达上调(P0.01);Bak灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bak的表达下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组Bak表达下调(P0.05);Bax灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bax的表达下调(P0.01),黄芪甲苷高剂量组Bax表达下调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤有抗凋亡作用。     

三七皂苷R1抑制JNK通路减轻H_2O_2诱导心肌细胞损伤的作用

目的观察三七皂苷R1(R1)对过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞损伤的保护作用及与JNK通路的关系。方法分离原代培养的乳鼠心肌细胞,加入H2O2构建心肌损伤模型,以不同质量浓度R1(25,50,100μmol·L-1)及JNK通路抑制剂SP600125作用心肌细胞,MTT法测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡;试剂盒测丙二醛(MDA)含量及过氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot测心肌细胞中p-JNK、Bax、Bcl-2蛋白相对表达。结果与对照组相比,H2O2能显著降低心肌细胞活力,增加心肌细胞凋亡率,增加心肌细胞内MDA含量,降低SOD活性,上调心肌细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并减少Bcl-2蛋白表达(P0.05);与模型组比,R1及SP600125均能显著提高心肌细胞活力,降低心肌细胞凋亡率,减少心肌细胞内MDA含量,提高SOD活性,降低心肌细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论R1可显著减轻H2O2诱导的心肌细胞损伤,其机制与抑制JNK通路的激活有关。     

黄芪保心汤对慢性心力衰竭模型大鼠心室重构及内质网应激凋亡的抑制作用

目的:研究黄芪保心汤对慢性心力衰竭模型大鼠心室重构及内质网应激凋亡的抑制作用。方法:选取健康雄性SD级大鼠60只进行研究,将其按照随机抽签法等分成干预组、对照组以及模型组,每组20只。干预组与模型组大鼠建立慢性心力衰竭模型,对照组大鼠予以假手术处理。造模成功后,干预组予以黄芪保心汤干预,模型组、对照组大鼠予以等量生理盐水注射干预。比较3组大鼠干预4周后的心功能,血清NT-proBNP、ST2水平,心肌细胞凋亡率以及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果:模型组大鼠左室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、每搏输出量(SV)水平显著低于对照组,而左室收缩末期直径(LVESD)、左室舒张末内径(LVEDD)水平显著高于对照组;干预组大鼠LVEF、FS、SV水平显著高于模型组,且LVESD、LVEDD水平显著低于模型组(均P<0.05)。模型组大鼠NT-proBNP、ST2水平均显著高于对照组,而干预组大鼠N端脑钠肽前体(NT-proBNP）、基质裂解素2(ST2）水平均显著低于模型组(均P<0.05)。模型组大鼠的心肌细胞凋亡率显著高于对照组,而干预组大鼠的心肌细胞凋亡率显著低于模型组(均P<0.05)。模型组大鼠心肌Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组,而Bax以及Caspase-3蛋白表达水平显著高于对照组;干预组大鼠心肌Bcl-2蛋白表达水平显著高于模型组,且Bax以及Caspase-3蛋白表达水平显著低于模型组(均P<0.05)。结论:黄芪保心汤可有效抑制慢性心力衰竭模型大鼠心室重构及内质网应激凋亡,其主要作用机制可能和影响心肌Bcl-2、Bax以及Caspase-3蛋白表达有关。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法将对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组、H_2O_2干预组、GB(50、100和200μmol/L)干预组。检测细胞存活率、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量、细胞中氧自由基(ROS)含量和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,检测NF-k B蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高;培养液中AST、CPK、LDH含量和细胞中ROS、MDA含量显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,NF-k B蛋白表达显著下调;其中GB(200μmol/L)干预组GSH-Px活性显著降低。结论 GB能够有效提高细胞存活率,改善抗氧化酶活性、降低ROS含量、降低氧化应激损伤,下调NF-k B蛋白表达、降低细胞凋亡率,提示GB对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激具有抑制作用。     

鹿茸蛋白对缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨鹿茸蛋白对缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法将SD大鼠心肌细胞适应性培养后分为对照组,模型组,鹿茸蛋白低剂量组(0.25 mg/mL)、中剂量组(0.5 mg/mL)、高剂量组(1 mg/mL)和鹿茸蛋白高剂量+LY294002[PI3K抑制剂(10μmol/L)]组并置于相应培养基培养36 h,模型组和用药组进行缺氧处理。采用AnnexinⅤ-fluorescein Isothiocyanate (FITC)/Propidum Iodide(PI)检测心肌细胞的凋亡情况;应用JC-1荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位改变情况;Western Blot检测Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组心肌细胞凋亡加重,正常细胞减少,晚期凋亡细胞增加,心肌细胞线粒体膜电位降低,心肌细胞Bax和cleaved-Caspase3蛋白的表达增加,p-Akt和Bcl-2蛋白表达下降(P0.05,P0.01)。与模型组比较,用药组晚期凋亡细胞数量下降(P0.01),各用药组之间比较,差异无统计学意义(P0.05);用药组心肌细胞线粒体膜电位升高(P0.01);鹿茸蛋白高剂量组细胞Bax和cleaved-Caspase3表达下降,p-Akt和Bcl-2的表达增加(P0.01),鹿茸蛋白高剂量+LY294002组各蛋白表达无明显变化(P0.05)。结论鹿茸蛋白可能通过调控PI3K/Akt信号通路下游凋亡相关蛋白减轻缺血缺氧对心肌细胞造成的损伤,维持细胞线粒体膜电位稳定性,减少细胞凋亡。     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:探究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用氯化钴(CoCl_2)建立缺氧复氧损伤H9c2细胞模型,实验分正常对照组、模型组及荭草花提取物不同浓度组。应用MTS检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)释放量及细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot测定cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:利用800μmol/L CoCl_2缺氧22 h,复氧2 h可建立缺氧复氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,荭草花提取物能显著升高心肌细胞存活率,降低LDH、CK释放量及细胞内MDA含量,提高细胞内SOD、CAT活性,并呈浓度依赖性抑制CoCl_2诱导的缺氧复氧损伤。荭草花提取物能下调促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Bax的表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论:荭草花提取物对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。