怀牛膝多倍体育种的研究

本文报道了利用人工处理诱导产生怀牛膝多倍体的育种方法。用秋水仙碱不同浓度及不同时间和温度来处理怀牛膝的萌动种子,使之产生四倍体变异株,经连续七代的定向培育,证实其各种遗传性状及特征均已达到稳定。     

磷素对怀牛膝耐铜毒性的影响研究

目的:通过施磷(P)来调控怀牛膝对铜(Cu)的吸收和累积,防止怀牛膝过量吸收重金属Cu.方法:采用2因素完全设计,用自制PVC管栽培.结果与结论:Cu处理间、P处理间以及Cu,P交互间怀牛膝生物量差异都达到显著水平,土壤中P,Cu均为100 mg·kg~(-1)时生物量最大;低Cu可以增加怀牛膝产量,Cu超过200 mg·kg~(-1)后,怀牛膝产量、质量均下降,但对药材中活性成分齐墩果酸和脱皮甾酮的含量无影响.P的施入可以减轻高Cu对植株的毒害,怀牛膝产量增加,重金属Cu含量降低,但是当土壤Cu超过200 mg·kg~(-1)后,怀牛膝药材中Cu高于20.0.mg·kg~(-1)的限度,因此要生产出合格的怀牛膝药材,种植基地土壤中Cu一定要低于200 mg·kg~(-1).     

怀牛膝地上部分化学成分的分离鉴定

目的:研究怀牛膝地上部分的化学成分。方法:采用Sephadex LH-20柱、ODS柱、减压硅胶柱层析及制备高效液相等色谱技术,对怀牛膝地上部分化学成分进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果:从怀牛膝地上部分分离并鉴定了8个化合物,分别为:天师酸(1)、5,5'-二甲氧基-7-氧代落叶松脂醇(2)、zebirioside D(3)、大豆皂苷Ⅰ(4)、坡模酸-28-O-β-D-葡萄糖酯苷(5)、3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→3)-β-D-glucuronopyranosyl]-3β-hydroxyolean-12-en-28-oic acid(6)、太白盯木皂苷V(7)、3β-O-(6'-O-methyl-β-D-glucuronopyranosyl)oleana-11,13(18)-dien-28-oic acid(8)。结论:所有化合物均为首次从苋科植物中分离得到。     

怀牛膝预防动脉粥样硬化的实验研究

本实验以高脂诱发饲料造成鹌鹑动脉粥样硬化模型,经预防给药试验,初步揭示怀牛膝具有抗动脉粥样硬化作用,这一作用与其降血脂、降低过氧化脂质有关。     

怀牛膝的三萜皂苷成分研究

 目的对怀牛膝(Achyranthese bidentataBl.)根中三萜皂苷类成分进行研究,阐明其药效物质基础。方法利用硅胶柱、ODS柱、制备液相等进行分离,利用光谱技术和化学常数鉴定化合物的结构。结果分离并鉴定了7个化合物:即齐墩果酸(Ⅰ),竹节参皂苷-1(Ⅱ),齐墩果酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅲ),齐墩果酸-3-O-β-D-(6′-丁酯)-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅳ),齐墩果酸-3-O-β-D-(6′-甲酯)-吡喃葡萄糖醛酸苷(Ⅴ),3-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-齐墩果酸-28-O-(β-D-吡喃葡萄糖)(Ⅵ),chikusetsusaponin Ⅳ a ethylester(Ⅶ)。结论化合物Ⅳ,Ⅴ,Ⅶ为首次从该植物中分离得到。     

怀牛膝对记忆力和耐力的影响

以怀牛膝Achyranthes bidentata水煎液给小鼠连续灌服7天。可明显改善戊巴比妥钠所致的记忆障碍,使跳台法首次跳下的潜伏期明显延长,5分钟内错误次数明显减少,使Y型臂法第三天正确反应率明显提高,且可明显延长小鼠负荷游泳时间。     

怀牛膝对维甲酸所致大鼠骨质疏松防治作用的实验研究

目的 :探讨怀牛膝对维甲酸所致的大鼠骨质疏松的防治作用。方法 :怀牛膝水煎液分别以 7.1g/kg和 14.2 g/ kg灌胃给维甲酸所致骨质疏松大鼠 ,测其自发活动数、血 Ca、血 P、血中 AL P、骨 Ca、骨 P、骨密度以及骨中 HP等指标 ,并与模型组、对照组比较。结果 :大鼠的自发活动数、骨密度增加 ,血 Ca、血 P、骨 Ca、骨 P以及骨中 HP含量增加 ,血中 AL P活性降低。结论 :怀牛膝水煎液能显著增加维甲酸所致骨质疏松大鼠的活动能力 ,阻止维甲酸所造成的大鼠骨矿质的丢失 ,增加其骨中有机质的含量 ,提高骨密度。     

怀牛膝对维甲酸所致大鼠骨质疏松防治作用的实验研究

目的：探讨怀牛膝对维甲酸所致的大鼠骨质疏松的防治作用。方法：怀牛膝水煎液分别以7．1g/kg和14．2g/kg灌胃给维甲酸所致骨质疏松大鼠,测其自发活动数、血Ca、血P、血中ALP、骨Ca、骨P、骨密度以及骨中HP等指标,并与模型组、对照组比较。结果：大鼠的自发活动数、骨密度增加,血Ca、血P、骨Ca、骨P以及骨中HP含量增加,血中ALP活性降低。结论：怀牛膝水煎液能显著增加维甲酸所致骨质疏松大鼠的活动能力,阻止维甲酸所造成的大鼠骨矿质的丢失,增加其骨中有机质的含量,提高骨密度。     

中药怀牛膝的液相色谱指纹图谱研究

目的：建立怀牛膝药材液相色谱指纹图谱检测方法,为其质量控制提供方法。方法：以蜕皮甾酮为参照物,采用RP-HPLC法,色谱柱为Kromasil-C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长为254nm。结果：该方法可使怀牛膝药材中各成分较好分离,并根据检测结果确定了14个共有指纹峰,建立了怀牛膝HPLC指纹图谱共有模式。结论：建立的指纹图谱方法简便可靠,可以作为怀牛膝药材质控的重要方法。     

怀牛膝对重型颅脑损伤大鼠脑组织Nestin表达的影响

目的：观察怀牛膝对重型颅脑损伤大鼠脑组织巢蛋白（Nestin）表达的影响。方法：将大鼠分为怀牛膝高剂量组、怀牛膝中剂量组、怀牛膝低剂量组、模型组、假手术组,按自制改良的Feeney法制备重型颅脑损伤模型,治疗7d后处死各组大鼠取脑,用HE染色观察损伤灶脑组织病理变化,免疫组化法检测大鼠损伤灶脑组织Nestin的表达。结果：怀牛膝高剂量组Nestin表达明显高于模型组（P〈0.05）;怀牛膝中剂量组及低剂量组与模型组比较无明显差别;假手术组仅偶尔在海马区见极少量Nestin阳性细胞表达,部分切片无阳性表达。结论：高剂量怀牛膝能上调重型颅脑损伤大鼠脑组织Nestin的表达,对重型颅脑损伤大鼠神经干细胞的再生有促进作用。     

土壤增施生物质炭对牛膝生长和有效成分含量的影响

目的为了探讨土壤增施不同量生物质炭对牛膝植株生长和根有效成分含量的影响。方法通过盆栽的方法,在土壤中添加0(对照)、1%、2%、4%的生物质炭,比较不同处理牛膝植株性状和β-蜕皮甾酮含量变化。结果施入生物质炭能提高牛膝株高、茎粗、根长和根粗,减少叶片数和主茎分支数,根中β-蜕皮甾酮含量增加;添加4%生物质炭处理牛膝根干重和鲜重分别增加22.28%和21.82%;添加2%和4%生物质炭处理牛膝根中β-蜕皮甾酮含量比对照增加增加15.32%、28.47%。结论土壤中添加生物炭能促进牛膝植株生长,增加干重和提高牛膝β-蜕皮甾酮含量。     

牛膝醇提物对Aβ42聚集的抑制作用

目的 :观察牛膝醇提物 (Nx E)对Aβ42 聚集的抑制作用。方法 :Aβ42 单独或和Nx E在 37℃ ,5 %CO2 培养箱中孵育后 ,采用硫磺素T(Th T)荧光分析以及透射电镜观察Aβ42 的聚集程度。结果 :1μg·μl 1Aβ42 孵育 7d后荧光强度明显升高 ,电镜观察发现Aβ42 以淀粉样纤维结构为主 ,呈针状聚集 ;低、中、高三个剂量 (7 5、15、30 μg·μl 1)的Nx E与Aβ42 共同孵育 7d后 ,中、高剂量Nx E与Aβ42 的共同孵育产物荧光强度比Aβ42 单独孵育明显减弱 ;形态学观察纤维样结构减少 ,无定形结构增加 ,存在大量散在的颗粒。结论 :1μg·μl 1Aβ42 孵育 7d已“老化” ;15和 30 μg·μl 1的Nx E能在一定程度上抑制Aβ42 聚集。     

牛膝中三萜皂苷抑制破骨细胞分化作用的研究

目的：通过牛膝中三萜皂苷类成分对破骨细胞分化的影响,探讨牛膝防治骨质疏松症的作用机理。方法：建立破骨细胞分化体外实验模型,在甲状旁腺素（PTH）的诱导下,骨髓细胞分化形成TRAP阳性破骨样细胞。在细胞培养过程中,分别加入2、20、200μM的各组三萜皂苷样品进行干预,考察每组样品对破骨细胞形成的影响。结果：考察的7个三萜皂苷类成分均能不同程度地抑制破骨细胞分化,其中竹节参苷IVa和木鳖子皂苷Ib抑制作用最强,且其抑制作用具有可逆性。结论：牛膝中三萜皂苷类成分可有效抑制破骨细胞形成,提示其可能作为骨吸收抑制剂用于防治骨质疏松症。     

牛膝蜕皮甾酮的加速溶剂提取法研究

目的采用加速溶剂提取法提取牛膝中的蜕皮甾酮,探讨其在中药质量控制中应用的可行性。方法以蜕皮甾酮为指标成分,采用RP-HPLC为检测方法,单因素考察法对影响加速溶剂提取牛膝中的蜕皮甾酮的因素进行考察。结果优选出了牛膝中蜕皮甾酮加速溶剂提取的最佳条件以无水甲醇为溶剂,药材的粒径为0.3~0.45mm,提取温度为100℃,提取压力10.34MPa,提取时间6min,提取1次。结论加速溶剂提取技术能够快速高效地提取牛膝中的蜕皮甾酮。     

怀牛膝对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制研究

目的:研究怀牛膝对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制。方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、怀牛膝高剂量组、怀牛膝中剂量组和怀牛膝低剂量组5组。灌胃治疗12周后,观察肾功能、尿蛋白、肾脏病理变化;以RT-PCR检测p53和mdm2基因mRNA表达;以琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:怀牛膝能显著改善肾脏功能,明显降低肾组织细胞凋亡,且可下调p53基因表达、上调mdm2基因表达。结论:怀牛膝可能通过抑制细胞凋亡而发挥保护糖尿病大鼠肾脏功能的作用。     

牛膝水提取物化学成分的研究

 目的:对牛膝Achyranthes bidentata根的水浸渍提取物进行化学成分的分离,并鉴定其化学结构。方法:水浸渍液的正丁醇萃取部分采用硅胶柱层色谱进行分离和纯化,用IR、MS、¹HNMR、¹³CNMR、¹H-¹HCOSY和DEPT等光谱技术和理化常数,以及标准品对照鉴定化合物的结构。结果:鉴定了5个化合物:即β-谷甾醇 (Ⅰ)、琥珀酸 (Ⅱ)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(Ⅲ)、尿囊素 (Ⅳ)和磷酸镁 (Ⅴ)。结论:后3个化合物均为首次从该属植物中分离得到。     

三妙丸中牛膝引药作用的机理研究

目的通过药代动力学组织分布研究法,研究牛膝在正常大鼠体内对三妙丸中主要有效成分小檗碱组织分布的影响．以探讨其引药的作用。方法大鼠均分成两组,分别灌胃给予含或不合牛膝的三妙丸水提物,给药后2h,4h,6h和7d处死动物．取血浆和心脏、后肢关节组织的匀浆,用高效液相色谱（HPLC）法测定组织中小檗碱的浓度。结果含牛膝三妙丸组动物给药后关节药物浓度在2h时与去牛膝三妙丸组相近,4h明显高于去牛膝组,6h与去牛膝组相近,多次给药后明显高于去牛膝组。含牛膝组的关节／心脏药物浓度比始终明显大于去牛膝组。结论牛膝有促进三妙丸中有效成分小檗碱向关节组织分布的作用。     

紫外分光光度法测定牛膝总甾酮含量

目的 :建立牛膝总甾酮含量测定的新方法。方法 :采用大孔吸附树脂提取分离牛膝总甾酮 ,以 5 0 mg· m L- 1 香草醛冰醋酸溶液和高氯酸为显色剂 ,在 5 5 0 nm波长处测定样品吸收度。结果 :总甾酮在 10 0 .4～ 30 1.2 μg范围内 ,线性关系良好 ,其回归方程为 :A=32 1.1C× 10 - 5- 0 .0 85 ,r=0 .9983。结论 :分光光度法适合牛膝总甾酮含量的测定。     

怀牛膝HPLC指纹图谱研究

目的:建立怀牛膝药材的HPLC指纹图谱。方法:采用HPLC法测定10个不同产地的怀牛膝药材,制定指纹图谱。色谱柱为C18,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为250nm,进样量为20μL,柱温为30℃。结果:得到分离度、重现性均较好的怀牛膝药材HPLC/UV指纹图谱,得到15个共有峰。结论:该方法简便、可靠、重现性好,可用于怀牛膝的质量控制。