嗅鞘细胞与聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物材料的细胞相容性研究

目的 探讨嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)与聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[poly(DL-lactide-co-gly-colide),PLGA]材料的细胞相容性.方法 将新鲜分离的OECs细胞悬液接种于PLGA膜上,然后用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞生长及细胞与材料的附着情况;MTT、流式细胞术等方法 测定OECs的细胞增殖和细胞周期变化.结果 PLGA膜上培养OECs的形态特征、增殖能力、细胞周期及倍体水平等与正常培养的OECs相比,均无显著性差异(P>0.05).结论 PLGA生物材料与OECs相容性好,适于构建组织工程化人工神经.     

PLGA新型纳米支架的制备及其生物相容性

目的探讨和比较应用不同参数静电纺丝技术制备复合型聚乳酸-羟基乙酸[poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA]纳米纤维缓释膜片的可行性,检测其表面特性以及生物相容性。方法使用不同参数制备纳米纤维膜,扫描电镜观察膜片表面形态;人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPLDCs)培养及鉴定后接种于空白膜上,扫描电镜观察细胞与膜的附着情况,以MTT[3-(4,5-dimethylthiaozol-2-yl)-2,5-dip henyltetrazolium bromide]实验检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖变化情况的影响。结果随着PLGA流量增加,纳米纤维直径增加;细胞与PLGA膜复合后粘附良好且增殖状态无明显变化;不同浓度材料浸提液对牙周膜细胞增殖的影响无明显差异。结论通过不同参数静电纺丝制备的新型纳米纤维膜具有良好的生物相容性,可进一步作为多种药物及细胞因子载体构建缓释型支架,从而用于引导性牙周组织再生(guided tissue regeneration,GTR)或者牙周组织工程。     

搭载紫杉醇脂质体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物静电纺丝膜对神经干细胞增殖分化的影响

目的：探讨搭载不同浓度紫杉醇脂质体的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）静电纺丝膜对神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响，评价载有紫杉醇脂质体的PLGA静电纺丝膜在脊髓损伤组织工程修复中应用的可行性。方法：将紫杉醇脂质体和PLGA以不同比例混合，利用静电纺丝技术分别构建1、5和10 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜。从胎鼠大脑组织中分离纯化NSCs。扫描电镜（SEM）检测各组紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜纤维直径，免疫荧光染色鉴定分离纯化所得的NSCs。将NSCs分别培养在含有不同浓度（0、1、5和10 μg·L^-1）紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜的培养基中（作为纯PLGA静电纺丝膜组和1、5及10 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组），MTT法检测各组NSCs增殖活性，RT-PCR法检测各组NSCs中Tuj-1和GFAP mRNA表达水平。结果：紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜呈白色薄膜状。SEM检测，各组紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜纤维直径比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫荧光染色，从胎鼠脑组织中分离出的细胞呈球状，所有细胞均有Nestin蛋白阳性表达。MTT法检测，5 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组NSCs增殖活性高于其他3组（P<0.05）。RT-PCR检测，与纯PLGA静电纺丝膜组比较，5 μg·L^-1紫杉醇脂质体PLGA静电纺丝膜组NSCs中Tuj-1 mRNA表达水平升高（P<0.05），GFAP mRNA表达水平降低（P<0.05）。结论：中等浓度紫杉醇能够促进NSCs增殖，诱导NSCs向神经元分化。载有中等浓度紫杉醇脂质体的PLGA静电纺丝膜在脊髓损伤修复中有一定的应用价值。     

PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜在大鼠体内降解的实验研究*

目的：对一种新型聚乳酸-羟基乙酸(polylactic acid-glycolic acid, PLGA)/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的细胞毒性和体内降解进行初步探讨,为应用于引导骨组织再生(guide bone regeneration, GBR)提供实验依据。方法：以PLGA和医用级鱼皮Ⅰ型胶原为原材料,通过共轭静电纺丝技术制备出高取向性的纳米纤维膜,然后分别检测细胞毒性和大鼠体内的降解过程,初步评价组织学形态与体内降解率。结果：PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的细胞毒性为1级,符合植入性医用材料的标准。成纤维细胞黏附生长良好,且不能穿过纤维膜生长到膜的对侧。结论：PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜可用作GBR的屏障膜。     

大鼠骨髓间充质干细胞在静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维上的培养及成神经诱导

目的通过将骨髓间充质干细胞（BMSCs）培养在静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维上,研究BMSCs的生长及成神经分化情况。方法用家蚕丝素、柞蚕丝素分别与聚乳酸共混制成静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维,将第5代大鼠BMSCs培养其上,于24h后通过活细胞工作站观察细胞的黏附情况,并进行表型鉴定及存活检测。接种后待细胞长至60%左右,用bFGF/BHA诱导细胞成神经分化,并设多聚赖氨酸组进行对照。在诱导5h和维持48h时,观察细胞的形态学改变,通过免疫荧光法鉴定神经细胞特异性标志物Nestin,β-Ⅲ-Tubulin和NCAM的表达并进行定量统计分析。结果BMSCs在静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维上的黏附情况良好,细胞生长于纳米纤维上。存活检测中几乎未发现死细胞,多数细胞在材料上可存活。神经分化的形态学改变与多聚赖氨酸组一致,并且培养在纳米纤维上的细胞分化时出现的突起可缠绕在纺丝纤维上。神经特异标志的表达情况与多聚赖氨酸对照组的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论静电纺丝素/聚乳酸纳米纤维具有良好的生物相容性,可支持BMSCs的黏附及成神经分化,且对细胞生存无毒性。     

自制编织型三维支架对体外神经膜细胞生长的影响及体内降解观察

目的:自制聚乙交酯-丙交酯(poly lactide-co-glycolide acid,PLGA)神经组织工程三维支架,观察该支架对体外神经膜细胞生长的影响及其体内降解情况及炎症反应,为后续研究奠定基础.方法:通过熔融、纺丝、拉伸、编织等步骤制作编织型三维PLGA支架,扫描电镜观察内部微管道的排列规律,测量微管道孔径大小.将原代培养的神经膜细胞接种到编织型三维支架上,采用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上生长、黏附、增殖和凋亡情况,并与细胞培养皿和胶原海绵培养细胞进行对照.将携带神经膜细胞的三维支架植入大鼠脊柱两侧肌肉中,H-E染色观察支架在体内的降解情况及炎症反应.结果:支架外径为3 mm,微管道直径为100 μm,均匀平行排列.三维支架与细胞培养皿中的神经膜细胞细胞黏附率、增殖率无统计学差异,与胶原海绵培养细胞差异有统计学意义(P<0.05);三维支架与胶原海绵上的细胞凋亡率无统计学差异,二者均低于细胞培养皿培养细胞,差异有统计学意义(P<0.05).三维支架植入体内12周后完全降解,周围无明显炎性细胞浸润.结论:自制编织型三维支架对体外神经膜细胞生长无不良影响,体内能有效降解,具有良好的生物相容性.     

纳米羟基磷灰石膜复合材料与小鼠成纤维细胞的相容性

目的探讨纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料(nano-Hydroxyapatite/ polyurethane,nHA/PU) 与小鼠成纤维细胞（L929）的生物相容性[1]。方法 将小鼠成纤维细胞与纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料体外复合培养,并设单独细胞培养的阴性对照和细胞与传统材料复合培养的对照组,倒置相差显微镜、扫描电镜行形态学观察,计数接种后的黏附情况,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞的生长周期,CCK-8法[2]检测材料对细胞增殖影响。结果 小鼠成纤维细胞在纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料上良好的黏附、生长、增殖,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞,其细胞周期与空白对照组和传统对照对比差异均无显著统计学（P>0.05）,CCK-8检测显示材料对细胞增殖的影响小于传统材料。结论 纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料具有良好的细胞相容性,可望作为组织工程人工肛门括约肌的外层套囊材料。     

猕猴组织工程化周围神经的体外构建

目的:研究以猕猴骨髓基质干细胞作为种子细胞和以PLGA作为支架材料,体外构建猕猴组织工程化周围神经的方法.方法:采用密度梯度离心的方法分离培养猕猴骨髓基质干细胞,利用相差显微镜观察细胞生长情况,描绘其生长曲线;将4/0vicryl编织线在10倍手术显微镜下打散成PLGA细丝纤维,扫描电镜下观测其表面形态;将猕猴骨髓基质干细胞种植到经生物学修饰的PLGA纤维上共培养,倒置显微镜下观察细胞在支架材料上的生长情况.结果:采用密度梯度离心的方法可得到大量增殖能力强的猕猴骨髓基质干细胞;接种后的骨髓基质干细胞很快粘附于PLGA纤维上,生长、分裂、增殖良好,在PLGA纤维表面形成串珠样排列,部分细胞还形成连接在PLGA纤维间的链状或片状细胞桥.结论:猕猴骨髓基质干细胞与PLGA适合体外构建组织工程化周围神经.     

静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架与兔脂肪源干细胞的体外生物相容性研究

目的利用兔脂肪源干细胞评价静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架的生物相容性。方法脂肪源干细胞取自新西兰白兔皮下脂肪组织,经分离、培养后接种到待检支架上,使用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上的生长形态;MTT法比较支架上培养和常规培养条件下的脂肪源干细胞生长曲线与倍增时间。结果脂肪源干细胞在纤维支架上生长良好,生长曲线与常规培养时基本一致,两组间细胞倍增时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂肪源干细胞能够在静电纺丝聚乳酸/聚己内酯共混纤维支架材料上正常生长增殖,该支架材料生物相容性好。     

大鼠肛提肌卫星细胞的分离纯化及鉴定

目的：　探讨大鼠肛提肌卫星细胞分离和纯化方法,观察肛提肌卫星细胞的体外增殖和成肌特性。方法：　采用改进的胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶来消化分离大鼠的肛提肌卫星细胞,结合差速贴壁法进行纯化,从而获得高纯度的大鼠肛提肌卫星细胞。运用显微镜观察细胞的形态和生长状况;CCK-8检测体外培养的肛提肌卫星细胞生长情况并绘制生长曲线;免疫荧光法对不同时期的卫星细胞进行鉴定。结果：　显微镜下观察发现,分离出的大鼠肛提肌卫星细胞生长较好。CCK-8检测结果显示,体外培养的前1、2 d细胞生长缓慢,3 d以后细胞呈倍数扩增,第10天细胞生长速度下降,部分细胞出现分化。免疫荧光和DAPI染色显示不同时期的肌卫星细胞,其特征性基因表达有差异。结论：　本方法成功从大鼠肛提肌组织中分离出了具有增殖、分化能力的肛提肌卫星细胞,为应用肛提肌卫星细胞探讨肌肉的损伤、修复机制奠定了前期基础。     

3D打印明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞的黏附增殖作用

目的 探讨3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞(HDPCs)的细胞毒性,及不同接种方法对细胞黏附生长的差异.方法 组织块酶消化法分离培养HDPCs,利用Bioplotter三维生物打印机进行明胶海藻酸钠凝胶支架的3D打印,选取第3代HDPCs,Cell Counting Kit-8试剂检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖的影响,扫描电镜观察、台盼蓝染色计数比较直接滴加低浓度细胞悬液与高浓度细胞浓缩液接种法,对细胞在材料表面黏附与增殖作用的差异.结果 不同浓度的材料浸提液均对HDPCs细胞毒性为0,具有促进细胞增殖的作用.HDPCs在3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架上生长良好,先滴加高浓度的细胞浓缩液可以更有效的促进细胞对材料的黏附,5d后材料表面的细胞计数结果较滴加低浓度细胞悬液显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架具有良好的生物相容性,具有促进HDPCs增殖的作用,可作为牙再生的支架材料,选择高浓度细胞浓缩液接种细胞更有利于细胞黏附.     

黄芩素PLGA纳米粒的体外评价及细胞相容性研究

[目的]制备黄芩素聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA)纳米粒,并对其理化性质、体外释药以及体外角膜细胞相容性进行研究。[方法]使用乳化溶剂挥发法制备黄芩素PLGA纳米粒,评价其性质和体外缓释效果,主要包括:纳米粒粒径,纳米粒包封率,药物载药量和体外缓释曲线等。采用细胞增殖实验评价黄芩素PLGA纳米粒的细胞毒性。[结果]黄芩素PLGA纳米粒粒径(92.5±2.35)nm、Zeta电位(-21.1±2.5)mV、包封率(92.5±2.35)%、载药量(23.12±1.45)%。体外缓释实验提示:突释阶段黄芩素释放率在1 d内达(8.37±0.31)%,缓释阶段纳米粒可稳定释放,在10 d时释放达(51.30±0.50)%,细胞增殖实验提示黄芩素PLGA纳米粒对细胞体外生长无不良影响,细胞相容性好。[结论]采用乳化溶剂挥发法制备的黄芩素PLGA纳米粒具有良好的缓释效应和良好的细胞相容性。     

牙胚细胞与PLGA支架体内复合培养的实验研究

目的 摸索胎鼠牙胚细胞体外培养所需的条件及细胞-支架复合物在裸鼠体内培养的条件.方法 取17日龄的胎鼠第一磨牙牙胚组织消化成细胞悬液,然后种植于PLGA支架上,再将细胞支架复合物埋植于裸鼠皮下,术后40d后取出细胞支架复合物,观察细胞与支架的吸附及生长,繁殖情况.结果 细胞呈单层生长;细胞为多角形,紧密镶嵌成铺路石状;牙胚细胞染成蓝色,支架组织染成红色,牙胚细胞较散在分布,细胞与支架紧密贴附,适度伸展,并有基质分泌.结论 牙胚细胞支架复合物在裸鼠体内能够成活,细胞与支架紧密贴附,生长正常并有基质分泌,表明PLGA是牙组织工程良好的支架材料.     

体外评估硫酸肝素-胶原蛋白生物支架与嗅鞘细胞生物相容性的研究

背景：中风和神经系统的外伤和卒中可导致神经功能缺损,同时伴随轴突受损,形成胶质瘢痕、空腔和裂隙。嗅鞘细胞作为自体移植最佳的候选细胞,可以分泌神经营养因子促进轴突的生长。并且生物支架具有多孔的三维立体结构,能够运载细胞填充和桥连这些空隙。因此移植支架联合种子细胞是一种修复神经组织重要的策略。 方法：硫酸肝素-胶原蛋白生物支架经过一系列的程序而制作成功。将硫酸肝素-胶原蛋白生物支架与嗅鞘细胞在体外共培养,在第1、3、5和7天时用MTT法检测细胞活性。数据分析采用重复测量设计的方差分析,当P < 0.05时被认为具有显著性差异。之后将嗅鞘细胞用CFSE标记,通过流式细胞仪检测标记率为99.8%。用CFSE标记后的嗅鞘细胞以适宜的浓度种植于支架上。细胞在支架上的粘附和生长可以通过荧光显微镜和扫描电镜直接追踪和观察。 结果：硫酸肝素-胶原蛋白生物支架具有稳定的三维立体结构,对于嗅鞘细胞无毒性（F= 0.14,P= 0.9330）。除此之外,细胞及其轴突也能够在该支架中很好的黏附和生长。 结论：本实验表明硫酸肝素-胶原蛋白生物支架与嗅鞘细胞在体外具有很好的生物相容性。因此,硫酸肝素-胶原蛋白生物支架可能可以作为一种载体,种植嗅鞘细胞后应用于神经组织工程。     

骨髓基质细胞与壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料的生物相容性

目的：研究壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料对离体培养的骨髓基质细胞黏附及增殖的影响,探讨二者的生物相容性,为骨组织工程中生物材料的选择提供实验依据。 方法：采用冻干法制备壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料,培养兔骨髓基质细胞,传代扩增后接种到材料表面,体外继续培养,用倒置光学显微镜、扫描电镜观察细胞的黏附和生长情况,用MTT方法检测种植后2、4、6及8 d细胞的增殖情况。 结果：种植2 d后细胞呈梭形纤维细胞样,平均每100倍视野下,有生物材料的实验组与无材料的对照组胞数分别为(360±20)个和(76±18)个,二者比较差异有显著性（P＜0.01）。MTT法检测结果显示,两组细胞均保持持续增殖。且实验组增殖最快,接种后2、4 、6及8 d光吸收值与对照组比较,差异均有显著性（P＜0.01）。扫描电镜下可见材料呈多孔网状结构,兔骨髓基质细胞紧密贴附在材料表面,细胞可沿材料的孔隙活跃生长。 结论：壳聚糖-聚磷酸三钙复合材料能促进骨髓基质细胞的增殖;兔骨髓基质细胞与复合材料具有良好的生物相容性,可作为骨髓基质细胞的载体应用于组织工程。     

丝素/明胶组织工程支架的生物相容性初探

目的 初步研究丝素/明胶（silk fibroin/gelatin,SFG）支架的生物相容性。方法 利用冷冻干燥法制备SF/G支架,将1×10⁵/ml的第3代人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）接种于SF/G支架上,设置对照组（人牙周膜干细胞悬液）,通过MTT试验测试两组人牙周膜干细胞第1、3、5、7天的吸光度值,利用细胞扫描电镜观察第5天和第7天两组细胞的生长增殖状况。结果 MTT显示接种于SF/G支架上的hPDLSCs的吸光度值在第1、3、5、7天分别为0.053、0.113、0.197、0.399,对照组分别为0.069、0.105、0.176、0.283。细胞扫描电镜显示第5、7天的hPDLSCs在SF/G支架上相互融合,分泌大量细胞外基质,细胞触须几乎铺满整个支架表面,并且有朝向支架空隙内部生长的趋势。结论 冷冻干燥法制备的SF/G支架能够促使细胞在其上增殖生长,具有一定的生物相容性,在牙周组织工程领域具有一定的应用潜力。     

人脂肪干细胞与聚L-谷氨酸/海藻酸钠可注射水凝胶的生物相容性研究

天然高分子聚合物聚L-谷氨酸(PLGA)与氧化海藻酸钠(OAg)共价交联合成PLGA/OAg水凝胶,将人脂肪来源干细胞(hADSCs)接种于水凝胶内,倒置显微镜、扫描电镜观察细胞在支架中的存活、增殖、黏附情况,DNA定量法检测细胞的增殖。体外证实该水凝胶材料生物相容性良好,具有性能可控性和微创性等优势,对于进一步开发脂肪组织工程材料具有指导性意义。     

氧等离子处理PLLA/BG引导骨再生膜生物相容性

目的制备一种新型的聚乳酸-生物玻璃（Poly-L-Lactic Acid/Bioglass, PLLA/BG）亲水性纳米纤维膜,探讨其作为引导骨
再生屏障膜的生物相容性。方法采用氧等离子处理PLLA/BG纳米纤维引导骨再生膜,改善其亲水性能,将人成骨样细胞
（MG63）接种于膜表面,通过Hoechst荧光染色观察其在膜表面的生长,计算细胞粘附率及增殖率,检测MG63细胞碱性磷酸酶
活性,最后通过扫描电镜观察细胞在膜上生长形态及钙结节形成,分析该膜生物相容性及促成骨性能。结果氧等离子处理的
PLLA/BG 膜在1、3、6 h 的细胞粘附率分别为（30.570±0.96）%、（47.27±0.78）%、（66.78±0.69）%,细胞黏附率高于两组膜（P<
0.01）;3 组膜的细胞增殖率均随时间延长提高,在不同时间点氧等离子处理的PLLA/BG膜的细胞增殖率高于另外两组（P<
0.01）;Hoechst荧光染色中可观察到氧等离子处理的PLLA/BG膜表面早期有更多细胞黏附;碱性磷酸酶活性测定实验结果显
示加入BG的复合膜可在早期促进成骨细胞分泌基质,差异具有统计学意义（P<0.01）;扫描电镜下可观察到MG-63细胞呈梭
形,黏附于膜表面,与复合膜相互交联,形成钙结节。结论经氧等离子处理的PLLA/BG复合膜在早期可促进细胞黏附、增殖及
促进成骨细胞分泌基质,具有良好的生物相容性和促成骨性能。