血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用

【目的】本研究主要是从丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)激活及失活角度研究该信号途径在血管紧张素Ⅱ (an giotensinⅡ ,AngⅡ )介导的心肌细胞肥大反应中作用。【方法】实验分别以 :①心肌细胞蛋白合成速率作为心肌肥大反应指标 ;②磷酸化MAPK蛋白 (p44MAPK、p42MAPK)表达反映MAPK活性状态。【结果】①AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 48h ,可使3H 亮氨酸掺入明显增加 ,该作用可被CV11974明显抑制 (抑制 85 % ) ,而PD0 980 5 9可部分抑制该反应 (抑制 32 5 % ) ;②AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 5min ,磷酸化MAPK蛋白表达即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h基本恢复正常 ,血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体 (AT1)拮抗剂CV11974(0 .1mmol/L)或MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5 0 μmol/L)可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达 (30min时分别下降 89%及 81% )。【结论】AngⅡ主要通过AT1受体激活MAPK及介导心肌肥大反应 ,抑制MAPK的激活可减轻AngⅡ介导的心肌肥大反应。MAPK通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要机制。     

肾性高血压大鼠肥大心肌血管紧张素Ⅱ水平、碱性成纤维细胞生长因子和丝裂素活化蛋白激酶的表达

目的观察肾性高血压大鼠肥大心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的表达。方法20只健康雄性SD大鼠随机分为2组,每组10只,实验组制备二肾一夹高血压大鼠模型,假手术组大鼠未进行二肾一夹,观察2组大鼠术后8周血压、心肌肥大指数、心肌AngⅡ含量、心肌组织bFGF与MAPK的表达。结果与假手术组比较,实验组大鼠术后8周血压、心肌肥大指数、心肌AngⅡ水平明显增高(P<0.01,P<0.05),心肌bFGF与MAPK表达显著增强(P<0.05)。结论bFGF、MAPK参与肾性高血压大鼠心肌肥大的发生机制。     

卡托普利对大鼠心肌组织丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的　探讨卡托普利对肾性高血压大鼠心肌组织丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)表达的影响。方法　复制二肾一夹高血压动物模型作为实验组 ,术后 4周开始给予卡托普利者作为治疗组 ,以未进行二肾一夹者为对照组。术后 8周测定动脉血压、心肌肥大指数及心肌组织MAPK的表达。结果　与对照组相比 ,实验组动脉血压及心肌肥大指数显著升高 ,MAPK表达显著增强 (P <0 .0 1) ;卡托普利显著降低心肌MAPK的表达。结论　心肌MAPK表达增强可能是血管紧张素II介导的心肌肥大信号转导通路中的重要环节。     

肾性高血压大鼠肥大心肌bFGF与丝裂素活化蛋白激酶的表达及氯沙坦对其影响

目的:观察肾性高血压大鼠肥大心肌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响以及氯沙坦逆转心肌肥大的作用。方法:制备二肾一夹高血压大鼠模型为实验组,采用氯沙坦作为治疗组,以未进行二肾一夹大鼠作为假手术组,观察3组大鼠术后8周心肌肥大指数、心肌血管紧张素含量、心肌组织bFGF与MAPK的表达。结果:与假手术组相比,实验组大鼠术后8周心肌肥大指数、心肌Ang水平明显增高(分别P<0.01,P<0.05);治疗组大鼠心肌肥大指数则无明显差异,心肌Ang仍保持在高水平。与假手术组相比,实验组心肌bFGF与MAPK表达显著增强(分别P<0.05),而氯沙坦可以显著抑制bFGF与MAPK表达。结论:bFGF、MAPK参与肾性高血压心肌肥大的发生机制,氯沙坦除了阻断Ang诱导的肥大信号转导外,还可能通过抑制bFGF诱导的细胞信号转导途径逆转心肌肥大。     

MAPK及MKP—1在肾性高血压大鼠心肌肥大过程中的变化

目的 研究肾性高血压大鼠心肌肥大发生发展过程中心肌组织丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性,蛋白表达及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶（ＭＫＰ－１）蛋白表达的变化以及血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ Ⅱ）１型受体（ＡＴ１）拮抗剂ＴＣＶ１１６作用。方法 （１）制作两肾一夹肾性高血压大鼠模型;（２）以左心室质量与体质量比值作为心肌肥大的指标;（３）以胶内ＭＢＰ原位磷酸化法测定ＭＡＰＫ活性,以免疫印迹法检测ＭＫＰ－１蛋白表达     

肾性高血压大鼠肥大心肌丝裂素活化蛋白激酶的表达

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)在肾性高血压致心肌肥大中的作用。方法　制作肾性高血压大鼠动物模型为实验组 ,观察术后第 4周、8周动脉血压、心肌肥大指数及心肌组织MAPK表达的改变 ,并与对照组进行比较。结果　实验组大鼠术后第 4周、8周动脉血压持续升高、心肌肥大逐渐加重 ,第 4周、8周心肌MAPK表达分别显著高于对照组 (P<0 .0 5和P <0 .0 1)。结论　MAPK表达增强可能是肾性高血压时各种细胞外刺激因素介导心肌肥大发生的重要途径     

Pyk2在Goldblatt鼠左心室肥大心肌中的变化

目的以两肾一夹肾性高血压大鼠为模型,研究肥大心肌中富脯氨酸蛋白酪氨酸激酶（Pyk2）介导的细胞信号转导的变化及其意义。方法制备两肾一夹肾性高血压大鼠模型,分别于术后第1、4、8和12周测定尾动脉血压和心肌肥大指数,免疫组织化学法检测肥大心肌组织中Pyk2及其磷酸化表达。结果大鼠肾动脉狭窄术后4周心肌肥大已发生,8周至12周心肌肥大进一步加重;术后4、8、12周大鼠心肌组织Pyk2活性逐渐增加,心肌Pyk2活性与心肌肥大程度呈显著正相关。结论随肾动脉狭窄时间的延长,Pyk2活性逐渐增加是导致心肌肥大加剧的重要原因;Pyk2非受体酪氨酸激酶介导的信号通路可能是心肌肥大的重要的信号通路。     

脂质体修饰p42丝裂原活化蛋白激酶反义寡核苷酸对心肌肥厚大鼠p42丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的观察p42丝裂原活化蛋白激酶（p42一MAPK）反义寡核苷酸对肾性高血压导终3肌肥厚大鼠p42一MAPK表达的影响。方法纳入健康清洁级SD大鼠30Z，建立肾性高血压大鼠模型，分为假手术纽、模型纽、反义链纽、错义链纽及脂质体对照组。用脂质体将p42一MAPK反叉寡核苷酸转染入相应组别大鼠，测定收缩压、左心室质量指数、心肌细胞直径和面积。免疫印迹法测定p42一MAPK表达。免疫沉淀法测定p42一MAPK活性。结果p42一MAPK反义寡核苷酸能显著降低模型组p42一MAPK表达及活性，下调肥厚重塑相关指标。结论p42一MAPK反义寡核苷酸可能是基因治疗心肌肥厚重塑的新靶点。     

卡托普利对肾性高血压大鼠肥大心肌内皮素的影响

目的 :观察卡托普利对肾性高血压大鼠肥大心肌内皮素 (ET)的影响 ,探讨心肌肥大的发生机制。方法 :制作肾性高血压动物模型 ,以左心室与体重之比为心肌肥大指数、放免法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与ET的变化。结果 :肾动脉狭窄术后 8周 ,心肌肥大指数显著升高 ,心肌AngⅡ与ET均显著升高 ,卡托普利使心肌肥大指数 ,心肌AngⅡ与ET水平显著下降。结论 :AngⅡ可能通过诱导ET分泌增加参与肾性高血压所致心肌肥大的发生     

P38丝裂原活化蛋白激酶短发夹RNA对H9C-2心肌细胞基因表达的影响

目的 探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的短发夹环RNA(shRNA)质粒对H9C-2心肌细胞增殖变化的影响并探讨其发生机制.方法 构建3种P38MAPK shRNA质粒并测序鉴定,将其转染入H9C-2心肌细胞中,应用RT-PCR和Western blotting检测心脏细胞P38MAPK mRNA和蛋白的表达.结果 P38MAPK shRNA质粒分布在心肌细胞的胞浆及细胞核中,与心肌细胞组比较,AngⅡ组和shRNA阴性组的P38MAPK mRNA和蛋白水平显著升高(P ＜0.01,P＜0.01);与AngⅡ组比较,shRNA1、shRNA2和shRNA3组的P38MAPK mRNA和蛋白水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.05,P＜0.01).结论 P38MAPK shRNA质粒成功转染心肌细胞,P38MAPK shRNA3质粒能最有效地抑制心肌细胞P38MAPK的表达.     

慢性寒冷应激诱导大鼠肝脏损伤及其机制

目的：研究寒冷应激对大鼠肝脏损伤的诱导作用及其分子机制.方法：将雄性SD大鼠置于（-15±1）℃自动控温低温实验舱内每日进行冷暴露6h,按照寒冷应激暴露时间的不同分为1,3,5,7,10,14d组.取各组大鼠肝脏组织石蜡切片,采用HE染色观察不同寒冷暴露时间下对大鼠肝脏的损伤程度.采用Western Blot方法检测大鼠肝脏组织c-Jun氨基末端激酶（JNK）和细胞外信号调节激酶（ERK）信号分子的表达及磷酸化水平.结果：寒冷应激对大鼠肝脏可产生明显的损伤作用,冷应激7d时肝脏损伤有暂时性恢复,但随后再次加重.寒冷应激后肝组织JNK1/2（p-JNK1/2）磷酸化水平显著增高,而且这种增高与肝组织细胞损伤程度存在显著的相关性,但ERK1/2的表达及磷酸化水平没有明显的改变.结论：寒冷应激可以引起大鼠肝脏的损伤,肝脏组织JNK1/2的磷酸化水平的增高可能是其重要分子机制之一.     

促分裂原活化激酶2在胃癌中的表达及与胃癌生物学行为关系的研究

目的：探讨磷酸化促分裂原活化激酶2（MAPK2）在胃癌中的表达及与胃癌生物学行为之间的关系。方法：应用Western印迹分析方法对34例胃癌及癌旁正常组织进行检测。结果：磷酸MAPK2在胃癌组织中有表达，阳性率22.8%（8／35），其表达水平明显低于癌周正常组织；磷酸化MAPK2表达水平的变化与胃癌浸润深度有关。结论：MAPK信号通路可能参与胃癌的发生发展过程。     

核糖体S6蛋白激酶在大鼠肝纤维化组织中的表达

目的:探讨有丝分裂原活化的蛋白激酶级联信号通路的关键效应分子--核糖体S6蛋白激酶(ribosomal S6 kinase,RSK)与肝纤维化发生的关系.方法:采用皮下注射二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)的方法制备大鼠肝纤维化模型,根据注射时间的不同,获取组织标本,行H-E和VG染色.明确纤维化分期后,进一步利用Northern 印迹及免疫组化方法,观察RSK在肝纤维化进程中的表达变化情况.结果:RSK在正常大鼠肝脏中,仅在中央静脉周围的肝血窦有少量表达,而随着纤维化的进展,其表达量进行性增加;在纤维化肝脏,RSK主要分布于汇管区间质中,肝细胞未见染色.结论:RSK在肝纤维化进程中持续上调,可能在肝纤维化的发生中起重要作用.     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用

目的研究丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在金黄色葡萄球菌α-毒素所致人外周血单核细胞凋亡中的作用。方法以Annexin V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,以Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及c-Jun N末端激酶(JNK)等蛋白的表达。结果随着α-毒素作用时间的延长,磷酸化-p38 MAPK和JNK1/2等蛋白的表达逐渐增高,而磷酸化-ERK1/2蛋白的表达不变。用SB203580和SP600125阻断p38 MAPK和JNK1/2后,单核细胞凋亡率明显降低,分别为(17.7±1.8)%和(15.3±1.6)%,与感染60 min时(35.7±3.6)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MAPK信号通路的成员p38 MAPK和JNK1/2在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用。     

Protection of carbon monoxide intraperitoneal administration from rat intestine injury induced by lipopolysaccharide

Background Treatment with inhaled carbon monoxide （CO） has been shown to ameliorate intestinal injury in experimental animals induced by lipopolysaccharide （LPS） or ischemia-reperfusion. We hypothesized that CO intraperitoneal administration （i.p.） might provide similar protection to inhaled gas. This study aimed to investigate the effects of continuous 2 L/min of 250 ppm CO i.p. on rat intestine injury induced by LPS and to try to develop a more practical means of delivering the gas. Methods A total of 72 male Sprague-Dawley rats were randomly assigned to 4 groups： control group, CO i.p. group, LPS group and LPS＋CO i.p. group. One hour after intravenously received 5 mg/kg LPS, the rats in LPS group and LPS＋CO i.p. group were exposed to room air and 2 L/min of 250 ppm CO i.p., respectively, and the rats of control group and CO i.p. group intravenously received an equal volume of 0.9% NaCI and 1 hour later, were exposed to room air and 2 L/min of 250 ppm CO i.p., respectively. One, 3 and 6 hour of each group after treated with room air or CO i.p., the animals （n=-6 for each time point） were sacrificed and intestinal tissues were collected for determinating the levels of platelet activator factor （PAF） and intercellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） with enzyme-lined immunosorbent assays. The maleic dialdehyde （MDA） content and the myeloperoxidase （MPO） activity were determined with a chemical method. The phosphorylated p38 mitogen activated protein kinase （MAPK） expression was assayed with Western blotting and the cell apoptotic rate with flow cytometery. The arterial oxygenation was measured by blood gas analysis, and the pathology determined by light microscope. Results After treatment with 2 L/min of 250 ppm CO i.p., the increase of PAF, ICAM-1, MDA, MPO, and cell apoptotic rate induced by LPS was markedly reduced （P 〈0.05 or 0.01）, and accompanied by ameliorating intestine injury. Western blotting showed that these effects of CO i.p. were mediated by p38 MAPK pathway. There were no significant differences in all observed parameters between control group and CO i.p. group. Conclusion The injury to the intestine via anti-oxidant, anti-inflammation and anti-apoptosis, which may involve the p38 MAPK pathway, was induced by 2 L/min of 250 ppm CO i.p. exerting potent protection against LPS.     

p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达

目的：探讨p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达．方法：应用免疫组织化学SABC法检测1～7周龄小鼠睾丸p38MAPK的表达和定位．结果：在2周龄小鼠睾丸生精小管上皮中即可观察到p38MAPK免疫阳性反应，免疫反应阳性细胞为精原细胞；3，4和5周龄小鼠睾丸仅有个别生精小管上皮可见p38 MAPK免疫阳性反应；6，7周龄小鼠睾丸中p38 MAPK表达较丰富，免疫反应阳性细胞为精原细胞和初级精母细胞，免疫阳性反应物均主要位于细胞核内．在7周龄小鼠睾丸中还可见到部分间质细胞呈p38 MAPK阳性，免疫阳性反应物主要位于细胞质内．结论：p38 MAPK可能对生精细胞的增殖分化以及雄激素的分泌具有调控作用。     

MAPKs阻断剂对乳鼠心肌细胞能量代谢的影响

目的 :在原代培养的心肌细胞上观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPKs)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,旨在探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据 .方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用 .结果 :AngⅡ在 12h内使formazan产物的值逐渐上升 ,12h达到高峰 (A值 :0 .36 4 3± 0 .0 2 4 1) ,此后开始下降 ,至2 4h已低于正常水平 (A值 :0 .2 785± 0 .0 912 ) ,它们的值之间均有显著性统计学差异 (P <0 .0 5或 0 .0 1) ,PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响 .结论 :PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响     

丝裂原活化蛋白激酶p38在急性胰腺炎患者外周血单个核细胞中的变化和意义

目的探讨急性胰腺炎患者外周血单个核细胞(PBMC)内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)信号水平的变化及其与疾病严重程度的关系。方法收集轻型胰腺炎(MAP组)29例、重症胰腺炎(SAP组)23例和对照组21例,实时荧光聚合酶链反应检测患者PBMC p38 MAPK基因表达水平,Western blot检测PBMC p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK(P-p38 MAPK)蛋白的水平。结果 SAP组p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平高于对照组和MAP组(P<0.05);MAP组p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SAP组P-p38 MAPK总蛋白水平高于对照组和MAP组(P<0.01,P<0.05),MAP组P-p38 MAPK总蛋白水平高于对照组(P<0.05)。结论急性胰腺炎患者PBMC内p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平变化较小;p38 MAPK磷酸化水平显著升高,而且与病情程度密切相关。     

HDAC1、MAPK水平与慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者糖皮质激素抵抗的关系

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）水平与慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者糖皮质激素（GC）抵抗的关系。方法:选取2018年10月—2020年10月收治的CRSwNP患者60例,根据患者是否存在GC抵抗分为GC抵抗组（n=22）和GC敏感组（n=38）。测定两组GC治疗前、后HDAC1 mRNA及细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c-Jun N末端蛋白激酶（JNK）、p38MAPK mRNA水平。利用受试者工作特征（ROC）曲线分析HDAC1、p38MAPK、ERK、JNK对CRSwNP患者GC抵抗发生的预测价值。将有差异的单因素纳入Logistic模型,行量化赋值,明确CRSwNP患者GC抵抗发生的危险因素。结果:治疗后,GC抵抗组HDAC1 mRNA表达量显著低于GC敏感组,p38MAPK mRNA、ERK mRNA、JNK mRNA表达量显著高于GC敏感组（t=18.425、19.213、18.721、19.694,均P＜0.05）。经ROC曲线分析,HDAC1 mRNA、p38MAPK mRNA、ERK mRNA、JNK mRNA预测CRSwNP患者GC抵抗发生的曲线下面积分别为0.715（95%CI:0.570～0.860）、0.917（95%CI:0.849～0.985）、0.863（95%CI:0.754～0.971）、0.885（95%CI:0.795～0.973）,均P＜0.05。经多因素Logistic回归分析证实,HDAC1 mRNA＜0.660（OR=1.386,95%CI:1.216～1.580）、p38MAPK mRNA≥0.428（OR=1.647,95%CI:1.342～2.021）、ERK mRNA≥0.571（OR=1.627,95%CI:1.234～2.145）、JNK mRNA≥0.510 （OR=1.897,95%CI:1.342～2.682）是CRSwNP患者GC抵抗发生的危险因素。结论:HDAC1、MAPK水平与CRSwNP患者GC抵抗密切相关。     

肾炎宁对IgA肾病大鼠TGF-β_1/p38 MAPK的影响

目的探讨肾炎宁对IgA肾病大鼠肾组织TGF-β_1/p38MAPK信号通路的作用。方法将SD大鼠随机分为4组,对照组、模型组、西药组(贝那普利+氯沙坦)、中药组(肾炎宁),应用脂多糖+牛血清白蛋白+四氯化碳方法复制IgA肾病模型,按各组相应药物剂量灌胃。于第15周末行IgA免疫荧光检测,并用RT-PCR法检测肾组织转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)mRNA表达水平。结果中药组、西药组与模型组比较IgA免疫荧光强度、TGF-β_1、p38MAPK mRNA表达水平显著下降(P<0.05)。结论肾炎宁可能通过抑制肾组织TGF-β_1/p38MAPK信号通路,发挥对IgA肾病的治疗作用。