天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的：改良常用的植物DNA提取的CTAB，SDS法，以有效去除天麻多糖类杂质。方法：用CTAB法提取天麻鲜品不同部位（块茎、花序轴和胚芽）DNA；用生理盐水浸泡天麻干品之后，在应用CTAB，SDS法提取天麻干品的DNA；通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应（PCR）扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果：提取了44份天麻样本DNA，用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA，成功地用于PCR扩增，并通过DNA测序进一步鉴定；应用改良的CTAB，SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增，但DNA测序未成功。结论：用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析，而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想；改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA。提取的DNA可用于基因扩增。     

不同预处理方法对天麻块茎总DNA提取效果的影响

目的:以天麻块茎为材料,研究不同的预处理方法对DNA提取的纯度和浓度的影响.方法:将新鲜天麻块茎切成薄片,分别置于生理盐水,灭菌双蒸水及不同浓度的乙醇溶液中,于4℃存放5～7d,再分别用CTAB法和SDS法提取其总DNA.结果:样品采用浓度为30%～50%的乙醇溶液浸泡后再提取,获得的DNA浓度和纯度都较为理想,而经生理盐水和灭菌双蒸水预处理后提取的样品DNA虽纯度不理想,但浓度较高.结论:采用30%～50%的的乙醇溶液可作为天麻块茎总DNA提取前的预处理液,生理盐水和灭菌双蒸水适用于样品的长期保存.     

天麻基因组DNA提取方法的选择和优化

目的:探讨天麻DNA提取法。方法:选最优法并正交试验。结果:SDS-CTAB法提取DNA完整、纯度高、重复性好。结论:优化SDS-CTAB法提取DNA适用于天麻AFLP体系。     

天麻DNA转化马铃薯遗传稳定性研究

目的观察天麻DNA转化马铃薯的遗传稳定性.方法①紫外分光光度法扫描观察转基因马铃薯图谱变化,扫描波长为200～300nm.②SDS-PAGE电泳观察转基因马铃薯蛋白质表达情况.结果转基因马铃薯5～7子代的扫描图谱和电泳图谱与马铃薯的图谱均有明显差异.结论转基因马铃薯子代含有天麻的某些成分,并且遗传性状比较稳定.     

植物药材总DNA提取

目的 为获得高质量的DNA，研究木质部较发达的根，根茎类以及茎木类药材的DNA提取方法。方法 总DNA的提取过程包括用Tris缓冲液洗净，CTAB抽提和纯化。结果 对升高，Chong木，木香，乌药，芍药和木通等进行了DNA提取，能较好的去除色素，多糖等干扰PCR物质。结论 本法使用常用试剂，成本低，易于推广，为药材DNA分子鉴别的应用奠定了基础。     

适用于天麻AFLP分析用的DNA提取及纯化方法

扩增片段多态性(amplified fragment length polymorphisms,AFLP)是上世纪90年代发展起来的一种检测DNA多态性的新方法,其基本原理是选择性扩增基因组DNA的酶切片段,由于不同材料的DNA酶切片段存在差异,因而便产生了扩增产物的多态性.     

天麻DNA的快速提取方法

目的建立天麻基因组DNA快速提取方法.方法CTAB 酚/氯仿法加以改良提取DNA.结果本方法提取的DNA纯度高(A260/A280》1.8),耗时短(2～3h),分子大小约为50kb,适用于随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.结论本方法提取DNA纯度高,耗时短,成本低,提取的DNA适宜RAPD分析.     

陈皮总DNA提取方法的研究

目的寻找一种以市售中药材陈皮为材料,可获得高质量的陈皮总DNA的方法。方法采用CTAB法提取总DNA,在研磨过程加入PVP,经琼脂糖凝胶电泳检测。结果用非可溶性PVP(Polyvinylpyrrolidone)研磨,CTAB法能较好的去除色素、多糖等干扰物质。结论该方法可以用于多糖、色素含量高的中药材的总DNA的提取。     

利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的研究

目的研究野生天麻总DNA对马铃薯的转化,分析马铃薯转化植株中野生天麻的药用成分天麻素。方法采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,通过紫外扫描法、PCR扩增筛选转化植株,对转化植株进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)蛋白分析,通过TLC法检测天麻素。结果(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220 nm有明显吸收峰。(2)5株经PCR扩增出野生天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因。(3)转基因马铃薯与正常马铃薯的蛋白表达有明显差异,并且在转基因马铃薯中有一条与GAFP相同的条带。而正常马铃薯中无此条带。(4)通过薄层色谱法检测出3株转基因马铃薯表达野生天麻的有效药用成分天麻素。结论采用浸苗法进行外源总DNA导入是可行的。     

天麻有效成分提取工艺研究

目的:考察不同条件下天麻素的提取情况。方法:采用正交试验法,以提取液中天麻素的含量为指标优选提取工艺条件。结果:提取的最佳条件为选用6倍药材量的600 ml/L乙醇提取3次,每次1.5 h。     

天麻乙醇提取物辅助降血脂保健功能评价

目的 进行天麻提取物辅助降血脂的功能评价。方法 大鼠随机分为正常组、模型组、辛伐他汀组（4 mg/kg）、天麻乙醇提取物高（1 g/kg）、低（0.2 g/kg）剂量组,正常组普通饮食,其余各组通过高脂饮食复制大鼠高脂血症模型,连续给药120 d。给药结束,测定大鼠的血脂（TG、TC、HDL-C、LDL-C）、肝功能（AST、ALT）并观察肝组织病理损伤情况。结果 与正常组比较,模型组TC、LDL-C明显升高（P<0.05）;与模型组比较,天麻提取物高剂量组能降低模型大鼠TC、LDL-C水平（P<0.05）,降低血清及肝组织中AST及肝组织ALT水平（P<0.05）。天麻提取物低剂量组仅能降低大鼠血清中LDL-C及肝组织AST、ALT水平（P<0.05）,天麻提取物给药后能减轻肝组织损伤。结论 天麻提取物能降低血脂水平,减轻肝脏病变程度,说明天麻提取物具有辅助降血脂功能。     

微乳增敏分光光度法测定天麻制剂中的微量锌

本文研究了以十六烷基三甲基溴化铵（CTMAB）－正戊醇－正庚烷－水组成的阳离子型O／W微乳液为介质,以4－（2－吡啶偶氮）间苯二酚（PAR）为显色剂,用分光光度法直接测定天麻制剂中的微量锌含量,方法灵敏、准确、简便。其增敏效果与相应的胶束体系比较更加明显。     

川芎-天麻不同比例配伍药效成分含量变化的研究

目的建立HPLC法测定川芎-天麻药对70%(体积分数,下同)乙醇提取液中药理活性成分阿魏酸、天麻素和天麻苷元的质量浓度,研究药对中不同比例配伍对目标组分的影响。方法采用Waters e2695高效液相色谱仪、GL Science Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温25℃,流速1 m L·min-1。阿魏酸检测的流动相为甲醇-0.05%(体积分数)H3PO4水溶液(体积比40∶60),波长为320nm;天麻素、天麻苷元检测的流动相为乙腈-0.05%(体积分数)H3PO4水溶液(体积比3∶97),波长为220nm。结果用本法测定得到不同比例配伍的川芎-天麻药对70%乙醇提取液中各指标成分质量浓度随药材比例改变而改变。结论本试验建立的HPLC法可有效测定不同比例配伍的川芎-天麻药对的70%乙醇提取液中阿魏酸、天麻素和天麻苷元的质量浓度,可为川芎-天麻药对体内外的成分研究和临床运用提供参考。     

昭通野生和栽培天麻中微量元素及氨基酸化学成分研究

根据中医传统“地道药材”的理论观点，以微量元素现代研究理论为指导，对云南昭通野生和栽培天麻的２９种无机元素和氨基酸含量进行对比分析研究，探讨昭通天麻内在质量的相关性。     

微乳增敏分光光度法测定天麻制剂中的微量锌

本文研究了以十六烷基三甲基溴化铵（CTMAB）－正戊醇－正庚烷－水组成的阳离子型O／W微乳液为介质，以4－（2－吡啶偶氮）间苯二酚（PAR）为显色剂，用分光光度法直接测定天麻制剂中的微量锌含量，方法灵敏、准确、简便。其增敏效果与相应的胶束体系比较更加明显。     

天麻对大鼠缺血再灌注时肾脏的保护作用研究

目的探讨天麻在大鼠肾缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制。方法建立大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型，测定天麻对肾缺血再灌注后血清BUN浓度、肾组织SOD活力、MDA及NO含量的变化及肾脏的病理组织学改变。结果与对照组相比，使用天麻后，在灌注24h后血清BUN浓度明显下降（P值〈0.01），再灌注1、6、12和24h后肾组织SOD活力明显升高（P值分别〈0．01，0．05，0．01），MDA含量明显降低（P值分别〈0．05，0．01，0．05）；未应用天麻保护的对照组肾组织出现明显的损伤性改变。结论天麻在大鼠肾缺血再灌注损伤模型中有保护作用，其机制可能与天麻的抗自由基损伤和减轻脂质过氧化的作用有关。     

一种适于AFLP分析的天麻花葶DNA提取方法

目的：获得能用于中药天麻扩增片段长度多态性（AFLP）分析及其它分子生物学研究的高质量DNA。方法：以天麻花葶为材料，采用改良SDS法提取天麻DNA，经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测。结果：改良的SDS法能获得高质量的DNA，OD260／OD280为1．75～1．9，蛋白质、多糖、RNA等去除较彻底，适于AFLP分析。结论：改良的SDS法所提取天麻DNA适于AFLP分析。     

《中药鉴定学》创新性实验方法探讨研究——贵州省道地药材天麻、杜仲、吴茱萸的真伪鉴定与质量评价

目的:探索生药学创新性的实验方法及培养学生的创新思维、动手能力和团队协作精神的作用。方法:在教师的指导下,成立3个学生课题小组,分别选取贵州道地药材药材天麻、杜仲、吴茱萸,通过文献查阅与综述、药材市场调查与样品收集、药材鉴定、质量评价、实验记录与报告书写等完成相应的研究工作。结果:学生掌握了如何进行文献查阅与综述,如何开展药材市场调查,怎样收集到合格的药材,如何制定实验方案,物资准备包括哪些内容,选用什么样的性状、显微、理化鉴定方法对药材进行鉴定,如何评价中药的质量,如何正确书写实验记录与报告。结论:通过具体的实验项目使学生了解进行中药品种鉴定与质量评价的基本思路、方法与程序;通过与本学科课堂理论学习结合,增加学生学习兴趣,提高学生参与科学实验的积极性,培养学生的创新思维;通过实验过程的全程参与,特别是样品收集、物资准备和实验操作的锻炼,学生的动手能力普遍提高;通过课题小组的分工与协作,锻炼学生独立从事及完成一项任务的能力,改善学生之间、学生与社会之间沟通及协作能力。     

黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化

目的探索黄连药材DNA的提取并对其RAPD反应体系进行优化。方法采用目前较为流行的苯酚法、CTAB法、高盐低pH值法,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确定黄连药材基因组DNA提取的最佳方法。结果CTAB法为黄连药材基因组DNA提取的最佳方法,建立了适合黄连药材的RAPD反应体系:25μL体系中内含1×PCRbuffer、2mmol/LMg2 、100~150μmol/LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶。结论CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材的RAPD分析。