天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的：改良常用的植物DNA提取的CTAB，SDS法，以有效去除天麻多糖类杂质。方法：用CTAB法提取天麻鲜品不同部位（块茎、花序轴和胚芽）DNA；用生理盐水浸泡天麻干品之后，在应用CTAB，SDS法提取天麻干品的DNA；通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应（PCR）扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果：提取了44份天麻样本DNA，用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA，成功地用于PCR扩增，并通过DNA测序进一步鉴定；应用改良的CTAB，SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增，但DNA测序未成功。结论：用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析，而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想；改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA。提取的DNA可用于基因扩增。     

药用植物珠子参新鲜块根DNA提取方法研究

目的为获取珠子参高质量、高产量的总DNA,满足SSR-PCR标记实验。方法采用经典CTAB法、改良CTAB法、高盐低PH法和SDS法对珠子参总DNA提取方法进行比较研究,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。结果 4种方法中产量最高的为经典CTAB法,产率为149.533ng/g,纯度最高的为改良CTAB法,OD260/OD280为1.796。结论 4种方法提取的DNA质量均满足SSR-PCR标记实验,扩增效果改良CTAB法和SDS法效果最佳。     

不同预处理方法对天麻块茎总DNA提取效果的影响

目的:以天麻块茎为材料,研究不同的预处理方法对DNA提取的纯度和浓度的影响.方法:将新鲜天麻块茎切成薄片,分别置于生理盐水,灭菌双蒸水及不同浓度的乙醇溶液中,于4℃存放5～7d,再分别用CTAB法和SDS法提取其总DNA.结果:样品采用浓度为30%～50%的乙醇溶液浸泡后再提取,获得的DNA浓度和纯度都较为理想,而经生理盐水和灭菌双蒸水预处理后提取的样品DNA虽纯度不理想,但浓度较高.结论:采用30%～50%的的乙醇溶液可作为天麻块茎总DNA提取前的预处理液,生理盐水和灭菌双蒸水适用于样品的长期保存.     

玄参总DNA提取方法的比较研究

目的探讨药材玄参总DNA的最佳提取方法。方法分别采用SDS法和CTAB法提取药材玄参总DNA,并对其进行核酸含量测定和电泳检测。结果采用SDS法提取的总DNA其OD260/OD280=1.83,而采用CTAB法提取的总DNA其OD260/OD280=1.64;DNA电泳检测显示采用SDS法提取的总DNA条带清晰,而采用CTAB法提取的总DNA出现严重的拖尾现象。结论用SDS法提取药材玄参总DNA优于CTAB法。     

陈皮总DNA提取方法的研究

目的寻找一种以市售中药材陈皮为材料,可获得高质量的陈皮总DNA的方法。方法采用CTAB法提取总DNA,在研磨过程加入PVP,经琼脂糖凝胶电泳检测。结果用非可溶性PVP(Polyvinylpyrrolidone)研磨,CTAB法能较好的去除色素、多糖等干扰物质。结论该方法可以用于多糖、色素含量高的中药材的总DNA的提取。     

DNA提取方法对桑树内生菌多样性研究的影响

【目的】基于聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）对桑树根、茎、叶组织内生菌多样性的分析,结合浓度、纯度、 PCR扩增性等指标,比较4种DNA提取方法之优劣。【方法】采用常见的DNA提取方法十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、缓冲液振荡（SPBS）法、液氮研磨（LNG）法和试剂盒（KIT）法提取桑树各组织DNA,从PCR-DGGE多样性等多方面对4种方法进行比较。【结果】对于桑树根和茎, DNA提取浓度最高的方法是LNG法,最低的是SPBS法;桑树叶情况则完全相反。桑树各组织, KIT法获得的DNA纯度均最高。桑树各组织通过16S rDNA PCR-DGGE比较内生细菌多样性,适宜的DNA提取方法是LNG法或CTAB法,不宜采用KIT法提取DNA。内生真菌ITS PCR-DGGE分析结果完全不同,最佳提取方法是KIT法,最不适宜的DNA提取方法因组织不同而异。【结论】对于桑树内生菌研究,最佳的DNA提取方法因组织不同而异,还与研究的内生菌种类有关系。     

金银花药材脱氧核糖核酸(DNA)提取方法的研究

目的:研究金银花药材总脱氧核糖核酸(DNA)的提取方法。方法:对经典的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法进行了改良,采用改良的CTAB法提取金银花药材的总DNA,通过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和浓度。结果:用改良的CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280比值在1.76-1.85之间,干药材提取率为89.8-325.4μg/g。结论:用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学的要求。     

大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取方法的比较

目的 比较两种肠内容物前处理和两种提取方法对清洁级SD大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取效率.方法 分别选用PBS多次离心漂洗、液氮破细胞两种前处理方法和酚/氯仿抽提、试剂盒过柱法两种提取方法进行组合分析,对4份肠内容物和16份含金黄色葡萄球菌肠内容物进行随机提取.结果 大鼠肠内容物细菌基因组DNA含量和纯度测定结果显示,与PBS反复离心相比,液氮研磨前处理能显著提高大鼠肠内容物基因组DNA.荧光定量PCR表明,液氮研磨前处理较PBS反复离心能更好地收集细菌基因组DNA,其Ct值最低.结论 研究结果表明,采用液氮研磨试剂盒法在大鼠肠内容物DNA提取中是较为优良的方法,该方法为建立实验动物中微生物的定量PCR检测方法打下了基础.     

天麻DNA的快速提取方法

目的建立天麻基因组DNA快速提取方法.方法CTAB 酚/氯仿法加以改良提取DNA.结果本方法提取的DNA纯度高(A260/A280》1.8),耗时短(2～3h),分子大小约为50kb,适用于随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.结论本方法提取DNA纯度高,耗时短,成本低,提取的DNA适宜RAPD分析.     

鱼腥草叶片总RNA提取方法的比较与分析

【目的】建立提取鱼腥草叶片高质量RNA的有效方法。【方法】采用RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue法、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)Ⅰ法和SDSⅡ法提取鱼腥草叶片总RNA。在匀浆上清液抽提时分别选用6种试剂组合,通过现象观察,检测紫外吸光度值和琼脂糖凝胶电泳图,考察RNA的纯度、产率和完整性,比较各方法提取效果的差异。【结果】RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue法、CTAB法和SDSⅡ法使用苯酚/氯仿/异戊醇或NaCl加苯酚/氯仿/异戊醇抽提后,所得RNA纯度和完整性均好,最大得率为172.6μg/g。【结论】确定了鱼腥草总RNA提取的有效方法,为鱼腥草转录组研究打下基础。     

川党参的基因组DNA提取与ISSR引物筛选

目的 筛选最适党参基因组DNA的提取方法及ISSR (inter-simple sequence repeat)引物,为研究党参种植资源遗传多样性及DNA鉴定奠定基础.方法 以党参嫩叶作为材料,采用常规SDS法、改良CTAB法和试剂盒法3种提取方法基因组DNA,用优化的ISSR-PCR反应对100条引物进行筛选.结果 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA,改良CTAB法效果最佳.从公布的100条ISSR引物中筛选出10条引物,能扩增条带清晰、稳定性好、多态性高的DNA条带.结论 以党参嫩叶为材料提取基因组DNA进行ISSR分子标志研究遗传多样性时应采用改良CTAB法,筛选出合适的引物在ISSR分子标志中很重要.     

高质量的丹参叶片DNA的提取方法研究

目的从富含多酚和多糖的泰山白花丹参干叶片中分离出适用于AFLP分析的高质量基因组DNA。方法比较4种DNA提取方法，获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。此法包括：CTAB-free buffer清洗，4倍CFAB抽提和固体PVP和Vc防止氧化。结果使用该方法从泰山白花丹参干叶片中分离的DNA OD260／OD280为1．86，由此法所得的DNA可直接用于AFLP分析。结论该技术可有效地从富含多酚和多糖的药周植物组织中分离出高质量DNA。     

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA（RAPD）的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠（SDS）法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。     

天麻对心血管及代谢性疾病的作用机制研究进展

中药天麻传统用于神经系统疾病的治疗,然而该药对心血管及代谢性疾病亦具有一定的药理作用。为了拓展天麻的临床价值,从抗心肌缺血再灌注损伤、降血压、保护血管、抗血小板聚集、抗血栓等方面综述天麻及其复方、主要活性成分对心血管疾病的作用和机制,同时综述了天麻对糖尿病、高脂血症等代谢性疾病的作用及相关机制。     

几种中药快速定性鉴别的研究

天麻、山药、何首乌、人参均乃常用中药材，临床伪品较多，针对上述中药特定的化学成分，分别采用微量升华法、化学定性分析法、荧光分析法、显微化学分析法和泡沫指数的测定等方法来鉴别药材的真伪。     

天麻醒脑胶囊的质量控制

目的建立天麻醒脑胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对该制剂中天麻、远志、熟地黄、地龙、石菖蒲进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对君药天麻中天麻素进行含量测定。结果薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰,专属性强;天麻素在0.107～1.070μg(r=0.999 2)范围内与峰面积呈良好的线性关系,加样回收率为97.8%,RSD=2.8%(n=5)。结论所建立的方法准确、重现性好,可为天麻醒脑胶囊质量控制提供实验依据。