miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的上皮间质化现象及机制

目的:建立乳腺癌阿霉素耐药细胞株,命名为MCF-7/ADM,探讨耐药细胞的上皮间质化(EMT)现象及机制,为耐药乳腺癌的治疗奠定基础.方法:中等浓度间歇法建立乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM.采用MTT和Transwell实验分别检测耐药对细胞增殖、迁移与转移能力的影响;荧光定量PCR检测MCF-7/ADM细胞EMT相关分子标志物E-钙黏蛋白及间质细胞分子标记N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白等的表达.ELISA检测TGF-β的表达,Western blot检测TGF-β及Smad2/3在蛋白水平的表达.结果:乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM的耐药指数为32.2,对5-氟脲嘧啶、顺铂、环磷酰胺产生交叉耐药性.与MCF-7细胞相比,MCF-7/ADM细胞迁移和转移能力明显增强,E-cadherin表达降低而N-cadher-in表达显著增高,细胞上清中TGF-β1表达增加,细胞内TGF-β及磷酸化Smad2/3在蛋白水平表达升高.结论:乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM发生EMT现象,可能与经典TGF-β通路激活有关.     

乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系

目的研究乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系,探讨p38MAPK信号转导途径在其中的作用。方法 以p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADM,采用流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响;MTT检测MCF-7／ADM细胞对阿霉素的半数药物抑制浓度（IC50）;Western blot检测SB203580处理MCF-7／ADM和MCF-7两株细胞后p38MAPK蛋白表达水平;RT—PCR检测细胞内MDR-1 mRNA水平。结果SB203580（10μmol／L）干预24h后MCF-7／ADM细胞的凋亡率为（26．73±4．90）％,与未干预组和对照组凋亡率相比差异有显著统计学意义（F=143．80,P〈0．001）;MCF-7／ADM细胞对阿霉素的敏感性明显提高（F=148927．10,P〈0．001）,相对逆转率达68．45％;与对照组和未干预组相比,干预组的MDR1 mRNA（F=9139．24,P〈0．001）及p38MAPK（F=685．42,P〈0．001）蛋白表达水平明显降低。结论p38MAPK信号转导途径与乳腺癌耐药密切相关,其可能机制为p38MAPK保护人乳腺癌耐药细胞（MCF-7／ADM）逃避凋亡,阻断该通路可增强乳腺癌耐药细胞发生凋亡。     

逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的影响

目的探讨逆转胶囊在乳腺癌多药耐药中的应用。方法应用流式细胞技术。测定逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的影响。结果阿霉素单用对P—gp表达无明显影响,其余各处理组与对照组（正常鼠血清组）比较P-gp的荧光表达率均有所下降;逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞P—gp表达;阿霉素与10％含药鼠血清合用,对人乳腺癌耐药MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的抑制效果良好,P—gp荧光表达率的下降幅度大,与异博定＋阿霉素＋10％正常鼠血清组无明显差异。结论逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞P—gp表达;并有耐药逆转作用。     

GCS在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及与P-gP的关系

目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）在人乳腺癌细胞多药耐药中的作用及其与P-糖蛋白（P-gP）的关系。方法采用MTT法检测多柔比星（阿霉素）对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／Adr和敏感株MCF-7的抑制率和IC50。以GCS抑制剂D，L-threo-1-phenyl-2-decanoyl—amino-3-morpholino-1-propanol（PDMP）预处理MCF-7／Adr后检测抑制率和IC50。运用流式细胞术（FCM）检测人MCF-7及MCF-7／Adr中GCS、P-gp的表达，以PDMP预处理细胞后检测GCS、P-gP的表达。FCM法检测细胞中ADM的荧光强度。结果MCF-7／Adr对MCF-7的耐药倍数为22．7倍，PDMP作用后阿霉素对MCF-7／Adr的抑制率升高，IC50下降（P〈0．05）。MCF-7／Adr中GCS和P-gp的表达均高于MCF-7，PDMP使MCF-7／Adr中GCS表达下降（P〈0．05），对P—gp表达无明显影响（P〉0．05）。FCM检测显示PDMP可使阿霉素在MCF-7内潴留增多。结论GCS在MCF-7／Adr多药耐药中起重要作用，PDMP能影响P-gP功能，GCS与P-gP有-定关系。     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

目的研究甲基莲心碱逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性;PI 染色流式细胞计数测定细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞 P-gp 的表达;HPLC 检测细胞内药物浓度。结果 Nef(1、5、10μmol·L~(-1))对人乳腺癌细胞(MCF-7/S)和耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7/ADM)无显著毒性作用。阿霉素(ADM)对敏感株 MCF-7/S 的 IC_(50)为0.13μg·mL~(-1)而对 MDR 细胞株 MCF-7/ADM 的 IC_(50)为11.63μg·mL~(-1),MCF-7/ADM 细胞较MCF-7/S 细胞对 ADM 耐药88倍,1、5、10μmol·L~(-1) Nef 能使 ADM 对 MCF-7/ADM 细胞的 IC_(50)从11.63μg·mL~(-1)依次下降至4.59、2.44、0.27μg·mL~(-1)。MCF-7/ADM 细胞对 ADM 具有凋亡抗性,Nef(1、5、10μmol·L~(-1))能克服 MCF-7/ADM 细胞对 ADM 的凋亡抗性。MCF-7/ADM 细胞较 MCF-7/S 细胞高表达 P-gp,Nef(10μmol·L~(-1))处理24h 后,MCF-7/ADM 细胞 P-gp 表达明显下降。ADM 作用3h 后,MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度比 MCF-7/S 细胞少2.8倍,Nef(10μmol·L~(-1))可使 MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度增加3.2倍,但并不增加 MCF-7/S 细胞内 ADM 的浓度。结论 Nef 具有逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞 MDR 的作用,其作用机理与促进 MDR 细胞内 ADM 积累和下调 MDR 细胞 P-pg 表达有关。     

Shh和Gli-1在人乳腺癌MCF-7耐药细胞株中的表达及意义

目的 研究Shh和Gli-1在人乳腺癌耐药株中的表达情况,探讨Hedgehog信号通路与乳腺癌耐药的关系。方法 高浓度间歇诱导法建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX,MTT法检测紫杉醇（PTX）对MCF-7与MCF-7／PTX细胞的半数抑制浓度（IC50）。实时定量PCR（QPCR）检测MCF-7、MCF-7／PTX细胞中Shh、Gli-1 mRNA的表达。Western blotting检测MCF-7、MCF-7／PTX细胞中Shh、Gli-1蛋白的表达。结果 PTX 对 MCF-7细胞的IC50为（0.10±0.02）mg／L,对 MCF-7／PTX细胞的 IC50为（5.30±0.01）mg／L;耐药指数为53.0。Shh mRNA在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为0.78±0.12和1.45±0.56（P＜0.01）;Gli-1 mRNA在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为1.86±0.02和3.56±0.26（P＜0.01）。Shh 蛋白在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为0.58±0.06和1.03±0.22（P＜0.01）;Gli-1 蛋白在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为1.17±0.12和2.78±0.09（P＜0.01）。结论 人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX高表达Shh、Gli-1,化疗药物可能通过上调Hedgehog信号通路相关蛋白及基因介导乳腺癌耐药,针对该信号通路的靶向治疗将是克服乳腺癌耐药的一个新的选择。     

miR-155对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药蛋白表达的调控作用研究

目的 探讨microRNA-155（miR-155）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及乳腺癌耐药相关蛋白表达的调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7细胞和人乳腺正常上皮细胞中miR-155的表达水平。将MCF-7细胞分为4组：对照组、空转染组、抑制（转染miR-155 inhibitor）组和过表达（转染miR-155 mimics）组,采用qRT-PCR检测转染24、48、72及96 h后各组的转染效果,噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,采用流式细胞仪PI／Annexin V双染色法检测各组转染24、48 h后的凋亡率,Western blotting法检测各组转染48 h后乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、P-糖蛋白（P-gp）及多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达水平。结果 乳腺癌MCF-7细胞中的miR 155水平高于人乳腺正常上皮细胞（P＜0.05）,且转染miR-155 inhibitor或mimics可呈时间依赖的方式降低或升高MCF-7细胞的miR-155水平（P＜0.05）。与对照组相比,抑制组转染后的细胞增殖率及BCRP、P-gp和MRP1的表达水平均降低,凋亡率升高（P＜0.05）;而过表达组的细胞增殖率及BCRP、P gp和MRP1的表达水平均升高,凋亡率降低（P＜0.05）。结论 MCF-7细胞中miR-155呈高表达,下调miR-155表达可抑制其增殖及耐药相关蛋白的表达,同时诱导凋亡。     

聚束微波加热逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素耐药性的实验研究

目的 耐药性是化疗失败的主要原因之一,克服耐药性的方法之一是使用逆转剂.目前尚无一理想的、可应用于临床的阿霉素(ADM)耐药逆转剂.本研究探讨聚束微波加热对ADM耐药性的逆转作用及其机制.方法 体外利用人乳腺癌细胞株MCF-7的ADM耐药模型MCF-7/ADM,采用MTT法检测聚束微波加热对MCF-7/ADM细胞耐药性的逆转作用.用Real-Time PCR测定细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(Multidrug resistance related protein,MAP)的表达水平.高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM浓度.结果 MCF-7/ADM细胞对ADM的耐药指数为45.5.经聚束微波加热后,ADM对MCF-7/ADM的半数抑制浓度(IC50)由(60.56±2.38)ug/ml下降至(22.86±2.76)ug/ml,逆转倍数为2.64倍.Real-Time PCR检测结果显示,MCF-7/ADM细胞的MAP与P-gp mRNA表达水平均明显高于MCF-7细胞,经聚束微波加热后,MCF-7/ADM细胞胞内的MAP与P-gp mRNA表达水平均明显下降.HPLC法测定细胞内ADM含量的结果显示,经聚束微波加热处理后,MCF-7/ADM细胞内ADM的含量明显增加.结论 聚束微波加热能逆转MCF-7/ADM对ADM的耐药性,聚束微波加热逆转ADM耐药性的机制可能是减少MCF-7/ADM细胞内MRP与P-gp mRNA的表达水平,从而增加了MCF-7/ADM细胞内ADM的蓄积.     

CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞分选鉴定及其多药耐药性研究

目的:观察MACS免疫磁珠法分选CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞活性,并检测其与多药耐药的关系。方法:运用MACS免疫磁珠法从多药耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中分选CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞,流式细胞术测定分选前后CD44+CD24-/low细胞比例,微球体培养法检测分选细胞自我更新能力,流式检测CD44+CD24-/low细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达水平,Real-time PCR检测多药耐药相关基因MDR1表达水平。结果:MACS免疫磁珠法分选后,CD44+CD24-/low细胞比例为93.85%,其成球能力明显强于non-CD44+CD24-/low细胞亚群。MCF-7/ADR细胞株和CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞P-gp表达强度分别为101 177.10±2 171.86和114 906.70±2 560.19,P<0.05。CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞MDR1基因表达水平为MCF-7/ADR细胞株的(1.07±0.02)倍,P<0.05。结论:经MACS免疫磁珠法分选所得CD44+CD24-/low细胞亚群有更强的自我更新能力,高表达P-gp蛋白和MDR1基因可能是引起乳腺癌多药耐药的重要原因。     

甲基莲心碱对乳腺癌MCF-7/Adr 细胞MDR逆转的研究

 目的 探讨甲基莲心碱（Neferine，Nef）对耐药人乳腺癌细胞增殖，细胞内ADM积聚浓度及mdr-1／P-gp表达的影响。方法 采用MTT法测定细胞毒作用，高效液相色谱法测定细胞内ADM积聚浓度，RT—PCR技术及蛋白质印迹技术检测mdr-1／P-gp表达。结果 10μg／ml Nef＋ADM组细胞的抑制率及细胞内ADM积聚浓度比ADM组高（P〈0.01）；20μg／ml Nef＋ADM组细胞抑制率及细胞内ADM积聚浓度较5μg／ml异博定＋ADM组及10μg／ml Nef＋ADM组均高（P〈0．01）。10μg／ml Nef＋ADM组MCF-7／Adr细胞mdr-1 mRNA及P-gp表达比ADM组明显下降（P〈0．01）。20μg／ml Nef＋ADM组细胞mdr-1mRNA及P-gp表达较10μg／ml Nef＋ADM组明显下调（P〈0．01）。结论 Nef能抑制耐药人乳腺癌细胞增殖。Nef能增加MCF-7／Adr细胞内ADM积聚浓度。Nef通过降低耐药人乳腺癌细胞mdr-1 mRNA及P-gp的表达逆转MDR。     

水飞蓟素联合阿霉素对耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用

[目的]探讨水飞蓟素联合阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药性的影响.[方法]采用MTT法测定单用阿霉素及其联合水飞蓟素对MCF-7/S、MCF-7/ADM细胞增殖抑制率(IR),计算耐药倍数和逆转倍数.[结果]阿霉素作用MCF-7/S的IC50值(2.89±0.35 μg/ml)明显小于MCF-7/ADM(56.85±2.12μg/ml),耐药倍数为27.6倍;阿霉素联合水飞蓟素作用MCF-7/ADM的IC50值(9.07±0.56μg/ml)明显小于单独使用阿霉素(59.52±2.38μg/ml),逆转耐药倍数为6.6倍.[结论]人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素具有明确耐药性,水飞蓟素能够明显逆转MCF-7/ADM对阿霉素的耐药性.     

MDR1基因下调逆转人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM的耐药性

目的：探讨RNA干扰（RNAi）人MDR1基因对人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM耐药性的影响。方法：应用针对人MDR1基因的RNAi质粒pENTRTM/U6-MDR1转染人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM和亲本细胞株K562,48 h后实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达,流式细胞术检测P-gp蛋白表达和P-gp功能,MTT法检测细胞对ADM的耐药性。结果：与未转染细胞相比,K562/ADM耐药细胞pENTRTM/U6-MDR1组的MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达和功能均显著下降（ P <0.05）,对阿霉素的耐药性显著降低（ P <0.05）。结论：MDR1基因下调可逆转人白血病阿霉素耐药细胞株对阿霉素的耐药性。     

ATP1B1协同阿霉素抑制乳腺癌细胞MCF-7生长及逆转耐药的作用

背景与目的：Na^＋-K^＋ATP酶（Na^＋-K^＋泵）是细胞能量转换的重要系统,可能与肿瘤转移有关,其B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化细胞中表达低。本实验研究ATP1B1协同阿霉素（ADM）在人乳腺癌细胞株MCF-7和其耐药株MCF-7／ADM中的作用以及其逆转耐药效应的影响。方法：将重组质粒PEGFP—ATP1B1转染到MCF-7和MCF-7／ADM细胞,MTT法检测质粒及其B1亚基因沉默后ADM抑瘤效应,荧光显微镜和流式细胞术分析细胞内药物荧光强度,定磷法检测ATP酶活性,RT—PCR和real-timePCR检测MDR1 mRNA的表达,Western blot法检测P—gP蛋白的表达。结果：转染PEGFP-ATP1B1的MCF-7和MCF-7／ADM细胞对ADM的敏感性相对阴性对照ADM—C3组（pEGFP—C3空载体转染）和空白对照ADM—RPMI-1640组均明显增加,且ADM各浓度梯度ADM—ATP1B1组与ADM—RPMI-1640组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;而B1亚基沉默后阴性对照组ADM-shNC,相对实验组ADM—shATP1B1和空白对照ADM—RPMI-1640组细胞对ADM的敏感性明显偏高。荧光显微镜下观察ADM-ATP1B1组MCF-7和MCF-7／ADM细胞ADM红色荧光均高于对照组。流式细胞术显示,ADM—ATP1B1组MCF-7细胞中ADM平均荧光强度较对照组高（P〈0．05）,ADM—ATPlBl组MCF-7／ADM细胞中ADM平均荧光强度高于对照组（P〈0．05）。MCF-7和MCF-7／ADM细胞的ADM-ATP1B1组ATP酶活性均高于ADM—RPMI-1640组（P〈0．05）．而ADM-C3组与ADM-RPMI-1640组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR和real-time PCR检测结果显示,MCF-7／ADM细胞ADM—ATP1B1组MDR1 mRNA相对表达水平与两对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。Western blot显示P-gp蛋白的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：ATP1B1对ADM抑制乳腺癌细胞生长具有协同作用,并可逆转耐药细胞MCF-7／ADM对ADM的耐药效应,其机理与MDR1基因无明显的相关性,?     

米非司酮逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐多柔比星机制的探讨

目的 探讨米非司酮对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转耐药作用.方法 以亲本乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞MCF-7/ADR为研究对象,分别应用MIF进行干预后,流式细胞仪检测MIF作用前后瘤细胞P-gp的表达、细胞内阿霉素蓄积量的变化以及细胞周期的分布.结果 (1)10 μmol/L MIF作用72小时后,MCF-7/ADR细胞P-gp表达率[(23.21±1.80)％]明显高于MCF-7细胞[(19.37±2.37)％,P＜0.05].(2)5 μmol/L ADR处理后,MCF-7/ADR细胞内ADR蓄积量为(47.13±4.11)％,低于MCF-7细胞[(60.24±2.61)％,P＜0.05].(3) 10 μmol/L MIF联合5 μmol/L ADR处理细胞,MCF-7/ADR和MCF-7细胞内ADR的蓄积量分别为(82.72±2.42)％及(88.63±2.75)％ (P ＞0.05);但均较单用ADR时升高(均P＜0.01).(4) MIF作用前,MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例[(77.21±3.10)％]高于MCF-7细胞G0/G1期比例[(59.05±2.16)％,P＜0.05];MCF-7/ADR细胞S期比例明显低于MCF-7细胞(P＜0.05).经10 μmol/L MIF作用后,MCF-7细胞G0/G1期比例(75.28±2.53)％较MIF作用前明显升高(P＜0.05);S期比例则较MIF作用前显著降低(P＜0.05);MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例和S期比例分别为(80.13±2.72)％及(13.52±1.03)％,与MIF作用前比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);两种瘤细胞的G2/M期比例与MIF作用无关(P＞0.05).结论 (1)MIF可以逆转MCF-7/ADR的耐药性,其作用机制与降低细胞P-gp含量、增加细胞内ADR蓄积量有关.(2) 10 μmol/L浓度的MIF对MCF-7/ADR细胞周期分布影响不大.     

体外培养人肝癌细胞对阿霉素耐药机理及电镜形态研究

目的应用人肝癌细胞株SMMC-7721,研究多药耐药（MDR）的产生机理。方法通过不断提高培养液中阿霉素（ADM）的浓度,长期筛选培养,得到人肝癌多药耐药株SMMC-7721／ADM。用MTT法检测常用6种化疗药物对肝癌细胞敏感株SMMC-7721／S和耐药株SMMC-7721／ADM的毒性;用流式细胞技术检测肝癌细胞MDRI基因产物—P—精蛋白（P-gp）的表达以及细胞内柔红霉素（DNR）浓度。结果SMMC-7721／ADM细胞对阿霉素的敏感性下降了59.33倍,同时对表阿霉素（EPi）、柔红霉素（DNR）、丝裂霉素（MMC）也具有显著的交叉抗药性,对顾铂（CDDP）、氯甲喋吟（MTX）无抗药性。耐药株P-gp较敏感株有非常明显升高,耐药细胞内柔红霉素相对该区明显少于其敏感细胞。结论SMMC-7721／ADM对结构和作用不同的亲脂类化疗药物都表现出交叉抗药性。P-gp过度表达引起的细胞内药物浓度减少是SMMC—7721／ADM细胞抗药性的主要原因。     

U0126对MCF-7细胞株化疗敏感性及XIAP蛋白表达的影响

目的：探讨MEK抑制剂U0126对乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡诱导和化疗增敏作用及其与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的相关性。方法：利用体外培养乳腺癌细胞株MCF-7，采用MTF比色法观察U0126、紫杉醇（PTX）、阿霉素（ADM）对MCF-7生长的影响；应用流式细胞术观察用药前后细胞周期变化和凋亡率；以Westernblot法检测用药前后XIAP蛋白表达变化。结果：与单药相比，U0126与PTX、ADM联合可显著抑制MCF-7的增殖，增加细胞的凋亡率；联合用药组XIAP蛋白的表达比单药组明显降低。结论：MEK抑制剂U0126与PTX、ADM序贯性联合应用可以协同性增加对MCF-7化疗的敏感性，其机制可能与下调XIAP的表达有关。     

PCNA的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系

目的：研究增殖细胞核抗原（PCNA）的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系。方法：以乳腺癌细胞株MCF-7／S（化疗敏感细胞株）为研究对象,应用MTT比色法检测阿霉素（ADR）对体外培养的MCF-7／S细胞增殖抑制作用,末端标记（TUNEL）法检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,免疫细胞化学法检测ADR作用前后PCNA的表达。结果：ADR抑制MCF-7／S细胞增殖,旱剂量依赖性,IC50为0．128mg／L;ADR作用组MCF-7／S细胞的凋亡率（Apoptoticrate,AR）为0．261,与对照组细胞的凋亡率0．0449相比明显增高（P〈0．01）;PCNA阳性表达率为0．3371,与对照组PCNA阳性表达率0．5152相比明显降低（P〈0．01）。结论：乳腺癌肿瘤细胞的凋亡率（AR）和PCNA的阳性表达呈负相关;ADR能诱导MCF-7／S细胞凋亡,并能抑制其增殖。     

川芎嗪逆转肿瘤多药耐药性及其机制的研究

目的:探讨川芎嗪(tetrameth-ylpyrazine,TMP)逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对多柔比星(adriamycin,ADM)的耐药及其P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)表达的影响。方法:MTT法测定细胞的药敏性,荧光分光光度法检测细胞内多柔比星浓度的变化,流式细胞术检测耐药细胞凋亡率的变化,流式细胞术观测细胞P-gp的表达。结果:非细胞毒性剂量(320mg/L)川芎嗪能显著降低MCF-7/ADM的IC50(P=0·0031),逆转倍数为2·13倍;且能明显增加耐药细胞ADM的浓度(P=0·0042)和凋亡率(P=0·0026);320mg/L川芎嗪使耐药细胞的P-gp表达率由(90·6±0·41)%降低至(69·1±1·65)%。结论:川芎嗪具有部分逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对多柔比星的耐药性,其逆转机制可能与抑制该细胞P-gp的表达有关。     

Ad-p53逆转乳腺癌细胞株多药耐药性及其对P-gp、TOPOⅡ和GST-π表达的影响

背景与目的肿瘤细胞对抗癌药物产生耐受性是化疗失败的主要原因,突变型p53基因与肿瘤多药耐药密切相关.本研究旨在探讨腺病毒介导的p53基因(Ad-p53)对人乳腺癌多柔比星(阿霉素)耐药细胞株MCF-7/Adr多药耐药的逆转作用及其对耐药相关蛋白P-gp、TOPOⅡ和GST-π表达的影响.方法以人乳腺癌MCF-7细胞及其多柔比星耐药株MCF-7/Adr为实验对象,cck-8法观察Ad-p53对多药耐药的逆转作用,Western blot检测P-gp、TOPOⅡ和GST-π蛋白表达的变化.结果50 MOI Ad-p53能使多柔比星对MCF-7/Adr细胞IC50由(4.54±0.91) μg/ml降到(0.26±0.11) μg/ml,逆转耐药倍数为18.1倍(P〈0.001);P-gp、GST-π蛋白表达量下降,TOPOⅡ未见明显变化.结论Ad-p53能够逆转MCF-7/Adr多药耐药,下调P-gp和GST-π表达.