产黄青霉高产菌株的选育

目的:对现生产用产黄青霉菌诱变育种以获得稳定高产菌株。方法:用化学诱变剂对菌种进行诱变育种,筛选得到的菌株通过摇瓶试验考察其产抗能力与传代稳定性。结果:选育得到的259#菌株摇瓶效价比出发菌株提高,传代三代后仍稳定。结论:通过诱变育种得到259#菌株是高产优质菌株。     

产黄青霉青霉素生物合成途径的亚细胞分区

产黄青霉(P.chrysogenum)的青霉素生物合成途径分三步(图1),至20世纪九十年代各步酶的编码基因皆已克隆,所构成的基因簇,亦克隆至不产青霉素的异种,并获表达.青霉素生物合成途径的亚细胞分区研究,则建立于这种基础上,还借助于高产的工业菌株.     

产黄青霉发酵过程中还原糖的浓度测定

青霉素产生菌产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)876丝状菌发酵培养基中主要碳源为葡萄糖,由于碳源对发酵过程菌体生长及青霉素合成都有较大影响,因此测知发酵过程还原糖浓度变化趋势对青霉素发酵过程控制具有重要意义。 一、还原糖测定方法 1.菲林法:方法见文献[1]。 2.DNS法:原理为3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热生成棕红色的氨基化合物。还原糖的量与棕红色物质颜色深浅成一定比例关系,简称DNS法。     

产黄青霉细胞分化与青霉素生物合成的相关性

目的：通过菌丝细胞在发酵阶段中的分化规律，去了解青霉素生物合成能力的相关性。方法，应用相差显微镜观察产黄青霉在插瓶发酵培养时菌丝形态分化的不同发育阶段。结果：它们分别完成了三个生活循环，每个生活循环中不同分化阶段的菌丝结构东同，功能也不同，结论：根据不同发酵阶段的菌丝细胞分化，可了解和掌握发酵规律。     

一种快速提取丝状真菌产黄青霉DNA的方法

介绍一种快速有效的提取丝状真菌产黄青霉染色体DNA的方法。该方法以100mmol／L Tris、100mmol／L NaCl、50mmol／L．EDTA-Na2和2％SDS（pH9.0）为提取液，经石英砂研磨破壁．获得了较高质量的染色体DNA，该法较酶解法和氯化苄法廉价、快速、安全，且不影响其后续的分子生物学操作。     

产黄青霉在沉没培养中菌丝球的形成和破碎与青霉素生产的关系

在沉没生长期间,许多丝状真菌可以以游离菌丝或菌丝球的形式生长,它取决于许多因素,如培养基的pH、输入功率、接种孢子浓度、表面活性剂的存在等.菌丝球形成背后的确切机制还不清楚,可能随菌种的不同而异,甚至可能随菌株的不同而异.然而,成球微生物传统上认为有两种类型:(1)凝聚型和(2)非凝聚型.对于凝聚型来说,培养早期孢子先凝聚,萌发后逐渐发育成菌丝球.而对非凝聚型,由单个孢子就可发育成球,如最近King等对链霉菌菌种所考察的那样,产黄青霉(P.chrysogenum)一般认为是非凝聚型,但也观察到由菌丝单元发育成为菌丝球.最近Thomas和同事指出,在产黄青霉沉没培养期间由菌丝单元结团形成了松散的菌丝团块.因此,产黄青霉的菌丝球很可能是一些菌丝单元结团形成松散团块的结果,由于团块中菌丝生长而逐渐成为有致密核的球.菌丝单元结团取决于菌丝单元的特性,如总菌丝长度、分枝形式和细胞壁表面结构,以及环境条件,如培养基成份和作用在团块上的剪切力.因此,在菌丝球形成的研究中需要包括对孢子发育或游离分散菌丝过程的分析.     

产黄青霉原生质体制备和再生影响因子分析

产黄青霉原生质体制备过程中,菌丝体最佳酶解条件与原生质体释放最适条件不同,菌丝体培养基含有0．05％L－天冬酰胺时,选取培养48h的菌丝体,在裂解酶(Lysing enzyme)浓度15mg/ml,0.7mol/L KCl作为渗透压稳定剂的条件下酶解,可获得大量原生质体;同时,再生培养基中含有25mmol/L Ca^2 离子、上层琼脂浓度1．1％,可获得较佳原生质体再生率。     

产黄青霉细胞分化与青霉素的生物合成

在青霉素发酵中,应用相差显微镜观察产黄青霉(P.chrysoaznum)在摇瓶种子和发酵培养时菌丝形态分化的不同发育阶段。它们分别完成了一个和三个生活循环,每个生活循环又都包括孢子或菌丝的萌发,菌丝的分枝,分节和孢子形成这样三个阶段。每个生活循环中不同分化阶段的菌丝结构不同,功能也不同。所以通过菌丝细胞在各发育阶段中的分化规律,去了解菌丝细胞生长和pH的变化,以及它们与青霉素生物合成能力的相关性,对青霉素生产具有一定的指导意义。     

高产产黄青霉补料分批培养生物合成青霉素V的分析

1 引言 当今,青霉素生物合成途径差不多已完全阐明。如图1所示,它由三步酶促反应组成,第一步是3个氨基酸——L-α-氨基己二酸、L-半胱氨酸和L-缬氨酸缩合形成三肽——L-α-氨基己二酰-L-半胱氨酰-D-缬氨酸(ACV)。半胱氨酸和缬氨酸已知是生物细胞的中间代谢物,而α-氨基已二酸是真菌生物合成赖氨酸的中间产物。三肽的形成由单一的多功能酶——ACV合成酶(ACVS)催化完成。这一ACVS还没有从产黄青霉中获得纯品,但其他β-内酰胺产生菌的和ACV具有高度同源性的一种基因已发现与生物合成途径中另外两个酶的基因一起形成基因簇。顶头孢酶的ACVS是一个430kD的特大酶,它能完成ACV合成涉及的所有反应:两个肽键的形成和缬氨酸的叉向异构化。 生物合成的第二步是ACV氧化闭环生成异青霉素N,它由异青霉素N合成酶     

一种新的鱼蛋白胨在产黄青霉生产青霉素中的应用

目的　研究宁波海浦生物科技公司生产的鱼蛋白胨作为一种新型氮源对产黄青霉 C- 396生产青霉素的各环节的影响。方法　在固体培养、发酵培养、生产米孢子制备时分别加入适量鱼蛋白胨 ,在相同条件下与原工艺配方对照比较 ,进行考察研究。结果　采用该鱼蛋白胨用于产黄青霉 C- 396有利于提高生产种子的内在质量和发酵效价。结论　海浦公司的鱼蛋白胨是一种较为理想的新型氮源     

产黄青霉形态的显微图像分析研究

利用显微图像分析法对产黄青霉的菌丝形态进行了定量研究，并统计分析了青霉素发酵过程中菌线形态的变化规律，具体对菌丝总长度、菌丝生长期的菌丝生长单位、菌丝变异率和菌丝自溶率进行了定量分析。     

CO差光谱法分析重组大肠埃希菌及产黄青霉中VHb的活性表达

为快速、准确检测重组菌中透明颤菌血红蛋白(VHb)的活性表达．本文改进了CO差光谱法。诱导表达VHb的重组大肠埃希菌经超声破壁、高速离心和过量的Na2S2O4充分还原后，再在试样中通人CO与VHb进行络合反应，最后进行VHb的CO差光谱分析。VHb与CO络合物在419nm呈明显的吸收峰，因而可快速准确的检测VHb的活性表达。该方法亦适用于丝状真菌产黄青霉中VHb活性表达的检测。     

十六烷对青霉素发酵中产黄青霉细胞形态的影响

青霉素(Pen)发酵是一种需氧过程,故氧的供给是发酵获得成功的关键因素之一.由于氧在水溶液中的不良溶解度,所以在通气发酵过程中供氧往往成为一种限制因素.     

机械力对产黄青霉形态和青霉素生产的影响

丝状真菌和链霉菌是用于抗生素生产的最常见微生物.由于它们在工业生产沉没培养中的复杂形态,因此对发酵控制需要特别注意.丝状菌在沉没培养中表现为两个极端形态:球状和丝状.两种形态之间没有明显界限.丝状一般指游离分散菌丝.这些菌丝常常缠连成丛,使发酵液呈高粘度和非牛顿型,在发酵中造成不良的传热和传质.球状生长由离散致密菌丝团形成,通常使发酵液呈牛顿型特征.但当球增大时,使营养成分向球中心扩散受到限制,从而造成较低产率.已知沉没培养中呈丝状生长的微生物在许多工业发酵中起着重要作用,而一些代谢物的商业化生产常常需要产生菌以特殊的形态生长.例如,青霉素生产要求产黄青霉呈丝状生长,而柠檬酸生产则需要呈球状生长的黑曲霉(Aspergillus niger).     

在无前体发酵培养基中筛选青霉素产生菌产黄青霉

近年来筛选抗生素产生菌采用细胞和基因工程研究已引起了很大的关注.其中问题的关键就在于如何挑选受试菌株.这些菌株要符合一系列要求,其中之一的要求是该菌株在生物合成的一定阶段中能超合成抗生素代谢中间产物.     

产黄青霉简单高效遗传转化法——电激转化法

目的 研究产黄青霉(P.chrysogenum)电激转化方法,建立产黄青霉快速、高效的遗传转化方法.方法 应用美国Bio-Rad电转仪,将外源DNA转化入产黄青霉菌丝中,研究了菌丝培养时间、电场强度、DNA类型等对遗传转化的影响.结果菌丝培养24h,处于旺盛生长阶段,电场强度为6000V/cm,电阻200Ω,电容20μF,环状质粒DNA较线状能获得转化效率稍高,1μg DNA获得的克隆数可达500个.结论 应用电激转化方法对产黄青霉进行遗传转化属首次报道,特别是可直接将目的片段与T-DNA相融合,转化入产黄青霉中,该方法操作简单,快速高效.     

透明颤菌血红蛋白基因在产黄青霉中的克隆与表达

将透明颤菌血红蛋白基因（vg6）克隆至质粒载体pMK4中，构建成表达载体pMK4-LV，并将表达载体pMK4-LV转化青霉素生产菌株——产黄青霉的原生质体，获得转化子。经发酵实验表明，vg6的表达可以使产黄青霉的生物量提高9．76％，青霉素的产量提高9．68％。     

搅拌对产黄青霉的菌丝形态和产生青霉素的影响

本文报道在两种规模的发酵罐(公称10L,容积14L,装量8L,Di=0.35D_t,发酵编号以 B 为字头;另一种是公称100L,容积150L,装量80L,发酵编号以 C 为字头)中搅拌对青霉素 V 生产的影响。实验时的最低通气率和搅拌转速都保持在溶解氧30%空气饱和度以上,以防止混和及质量传递受到     

产黄青霉Penicillium chrysogenum S-3-25的次级代谢产物及其活性研究

目的 阐明南极深海来源真菌产黄青霉Penicillium chrysogenum S-3-25的次级代谢产物及其活性.方法 利用各种色谱技术分离纯化次级代谢产物,根据理化和波谱数据(核磁共振、质谱和单晶衍射技术)鉴定化合物结构,采用3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetr...     

产黄青霉vgb转化菌PTH-1嗜盐新特性研究

利用CaCl2/PEG介导的原生质体转化法获得一株有产抗能力的产黄青霉vgb转化菌PTH－1。该转化菌具有嗜盐性，必须在含有高浓度KCl的培养基中才能生长。在该盐条件下转化菌PTH－1对博莱霉素抗性稳定，具有摄氧率高、易自溶、细胞壁胞弱等特性。在高盐发酵试验中，PTH－1产抗比对照株提高14％。