氧化损伤诱导的人晶状体上皮细胞系基因表达谱的差异和表型改变

目的：探讨人晶状体上皮细胞( hulan lens epithelial cells, HLEC)氧化刺激后基因表达谱的差异以及相应的表型改变。
　　方法：培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3并给予H2 O2刺激。24 h后,提取细胞总RNA进行基因表达谱芯片检测,并采用生物信息学数据库DAVID对氧化刺激组相比对照组显著上调的基因进行Gene Ontology ( GO )功能富集分析。 RT-qPCR对上调的基因进行验证。通过MTT和流式细胞仪检测细胞凋亡水平。
　　结果：表达谱芯片结果显示,氧化刺激造成HLEC中367个基因上调,GO分析表明这些基因富集于310个功能类别中,主要包括p53信号通路、细胞凋亡通路、细胞程序性死亡通路等。 RT-qPCR结果证实,6个主要参与促凋亡或抗凋亡调节的基因,包括 BCL2 A1、TP53 I3、FAS、ZMAT3、DDB2和BCL2 L1,在氧化刺激后表达水平明显上升。 MTT实验和流式细胞仪检测结果显示,H2 O2刺激后HLEC凋亡逐渐上升,是细胞氧化损伤的主要表现。
　　结论：氧化刺激可同时诱导HLEC中促凋亡基因和抗凋亡基因表达水平上调,但最终仍然导致了细胞凋亡。     

光感受器661细胞系早期低氧损伤转录组测序的生物信息学分析

目的:观察661W细胞低氧条件下基因表达水平和信号通路的早期改变,寻找潜在功能性靶基因。方法:将培养的小鼠661W细胞分为低氧处理组、常氧对照组。低氧处理组细胞置于37 ℃、体积分数分别为1%、5% CO 2的三气培养箱中培养;常氧对照组细胞置于37 ℃、体积分数为5% CO 2培养箱中培养。培...     

地塞米松诱导的人小梁网基因表达谱变化及生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法分析地塞米松诱导的人小梁网基因表达谱变化,揭示激素性青光眼(GIG)发病过程中可能涉及的机制。方法:从公共基因芯片数据库(GEO)获取基因表达数据集GSE37474,GEO2R筛选地塞米松组和正常小梁网之间的差异表达基因。使用DAVID数据库对差异基因进行GO功能注释和KEGG通路富集分析,使用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络(PPI),利用CytoHubba插件筛选关键枢纽基因,最后对关键枢纽基因的mRNA表达进行RT-PCR验证。结果:与正常小梁网组织相比,地塞米松处理的小梁网组织有252个基因存在差异表达,其中141个为上调基因,111个为下调基因。GO功能注释显示差异基因主要定位于细胞外基质,参与炎症的正调控和细胞外基质重塑等生物学过程。KEGG通路富集分析显示差异基因主要参与血管平滑肌收缩、花生四烯酸代谢、醚脂质代谢和胆碱代谢。从PPI网络中筛选出7个关键枢纽基因,包括3个上调基因EDN1、FOS、LPL和4个下调基因CCL2、IGF1、PTGS2、CCL5,RT-PCR验证结果和基因表达谱芯片一致。结论:地塞米松可引起小梁网基因表达谱发生显著变化,差异基因富集到的通路及筛选到的一些关键枢纽基因在细胞外基质重塑和房水流出调控中起着重要作用,这将有助于更全面地认识GIG的分子机制。     

准分子激光原位角膜磨镶术中负压吸引兔眼视网膜基因谱的表达变化

目的 应用基因芯片技术研究负压吸引后兔视网膜的基因表达谱,探讨负压吸引引起RGCs凋亡可能的分子学机制.方法 12只健康新西兰大耳白兔随机分为实验对照组和负压吸引3min组.负压吸引3min组分别于术后即刻(0 d)、7d和10 d处死,取视网膜组织提取总RNA,利用Agilent公司兔单标芯片检测视网膜组织的基因表达谱,并分析差异表达基因.结果 负压吸引3min术后即刻差异表达基因共704条.上调基因485条,下调基因219条,其中凋亡相关基因共筛选出6条,上调5条,下调1条,上调表达较高的基因是CRYAA、CRYAB和TLR3,下调表达较高的基因是KRT18.负压吸引3min术后7d差异表达基因共482条.上调基因178条,下调基因304条,其中凋亡相关基因共筛选出4条,上调1条,下调3条,上调表达较高的基因是CRYAB,下调表达较高的基因是IL1 -BETA和IL1 R1.负压吸引3min术后10 d差异表达基因共402条.上调基因213条,下调基因189条,其中凋亡相关基因共筛选出6条,上调4条,下调2条,上调表达较高的基因是CRYAB、CRYBA3和CRYBB2,下调表达较高的基因是IL1 -BETA和IL1R1.在差异表达基因中除凋亡相关基因外还有能量代谢、物质转运、信号传导、发育、解毒抗氧化、免疫反应、细胞运动、细胞组织生物发生、分化和细胞黏附等相关基因.结论 负压吸引可使视网膜一些基因表达水平发生变化,其中基因差异倍数较高的基因多数对RG Cs凋亡起保护作用.     

泪腺良性淋巴上皮病变与眼眶海绵状血管瘤患者病变标本中差异表达基因的检测

背景 泪腺良性淋巴上皮病变是临床较少见的眼眶病,主要表现为双侧泪腺的对称性、无痛性肿大,其病因和发病机制至今尚未阐明. 目的 筛选泪腺良性淋巴上皮病变组织与眼眶海绵状血管瘤患者病变组织中的差异表达基因,从分子水平探讨泪腺良性淋巴上皮病变的发病机制.方法 收集2010年9月至2013年4月在首都医科大学附属北京同仁医院经病理学检查证实的泪腺良性淋巴上皮病变患者9例的病变标本,并收集同期眼眶海绵状血管瘤患者9例的组织标本作为对照.利用全基因组表达谱芯片技术和limma算法检测2个组患者组织标本中的差异表达基因,并采用实时荧光定量PCR法验证差异基因的表达,采用Fisher法和基因本体(GO)功能富集分析法对差异表达基因进行功能分析和信号通路分析,找到主要差异表达基因的功能群和信号通路. 结果 泪腺良性淋巴上皮病变患者与眼眶海绵状血管瘤患者中共筛选出5 260个差异基因,Fisher差异表达基因的功能显著性分析和信号通路分析显示,109个GO条目中的差异表达基因显著上调,101个GO条目中的差异表达基因显著下调,其中32个功能基因相关的信号通路显著上调,25个信号通路显著下调.GO分析显示,差异表达基因中补体受体介导的信号通路表达丰度最高,其次为T细胞信号通路和B细胞信号通路上调以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路和转化生长因子-β(TGF-β)信号通路下调.实时荧光定量PCR结果显示,泪腺良性淋巴上皮病变组患者标本中TIPRL、TLR7和TLR10基因的相对表达量明显高于眼眶海绵状血管病组,差异均有统计学意义(Z=-2.03、-2.32、-2.32,均P＜0.05),与基因芯片检测结果一致.结论 人泪腺良性淋巴上皮病变组织与眼眶海绵状血管瘤病变组织中基因表达谱明显不同,这些差异表达基因除参与T细胞和B细胞信号通路的上调以及MAPK信号通路和TGF-β信号通路的下调外,还涉及补体系统的变化.泪腺良性淋巴上皮病变的发生和发展是多种基因和通路共同作用的结果.     

低氧诱导视网膜色素上皮细胞损伤的生物学机制转录组测序分析

目的:利用转录组测序(RNA-seq)和生物信息学技术对低氧与常氧条件下人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞的差异表达基因(DEGs)及信号通路的变化进行分析,探讨低氧诱导ARPE-19细胞损伤的生物学机制。方法:将ARPE-19细胞分为低氧处理组和常氧对照组,分别采用体积分数1%和21% O 2处理细...     

变应性鼻炎患者外周血基因芯片检测及差异表达基因研究

目的利用基因芯片研究变应性鼻炎（AR）基因表达谱的改变,从基因水平深入探讨AR的发病机制。方法应用GeneChip Human Gene1．0STArray检测4例常年性AR与4例非AR患者外周血单个核细胞的基因表达谱,分析差异表达基因及其功能、信号通路,并选择有显著差异表达的部分基因进行实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）验证。结果基因芯片筛选出差异表达基因2347条,其功能主要与免疫应答、炎症反应、免疫调控、基因转录、细胞代谢、抗体生成、细胞增殖、信号转导、多种酶活性、膜受体结合活性、细胞结构蛋白活性等有关;对差异基因进行功能与信号通路分析,证实细胞因子-细胞因子受体、JAK-STAT通路、SOCS系统,在AR发生、发展过程中的相互作用和复杂变化。qRT-PCR测定差异表达基因IL-4R、SOCS、IL-33和TNFRSF的表达水平,与芯片试验结果一致。结论AR存在多基因表达调控的异常;对其功能及信号通路进行分析,有助于从基因网络揭示AR的病理生理机制;IL-33在AR发生、发展过程中发挥重要作用,对其深入研究有可能为AR的临床治疗提供新的方向与靶点。     

番茄红素对紫外线诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素对紫外线诱导的人晶状体上皮细胞(hulan lens epithelial cells,HLEC)氧化损伤的保护作用及可能机制。
　　方法：HLEC传代培养,分为阴性对照组、氧化损伤组、番茄红素低剂量组和番茄红素高剂量组, MTT比色法检测细胞存活率,电子显微镜观察细胞形态学改变,DCFH-DA荧光探针检测胞内ROS变化,分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶( superoxide dislutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase, GSH )活性及丙二醛( lalondialdehyde,MDA)的含量。
　　结果：番茄红素能明显抑制紫外线诱导的细胞活性的下降,减少紫外线所致HLEC内ROS的生成,引起HLEC内SOD和GSH-Px水平的升高及MDA水平的下降。
　　结论：番茄红素通过提高细胞内SOD和GSH-Px含量,降低细胞内MDA含量,发挥其较强的抗氧化作用,从而为其用于白内障防治提供可靠的实验依据。     

microRNA-132在人脐静脉内皮细胞中调控作用的研究

目的：探讨 miR-132在人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelia cells,HUVEC)中的调控作用。
　　方法：体外低氧培养人脐静脉内皮细胞6h后继续常氧培养3、6、12、24h,利用Real-time PCR检测miR-132和PGC-1α mRNA表达变化,Western-blot检测PGC-1α蛋白表达变化,及观察各组与正常培养的细胞之间的表达差异。通过对人脐静脉内皮细胞转染 miR-132模拟物与拮抗剂后,再分别置于常氧和低氧环境中培养,利用 Real-time PCR检测不同氧条件下miR-132和PGC-1α mRNA的表达变化,Western-blot检测PGC-1α蛋白表达变化。
　　结果：miR-132和PGC-1α在细胞低氧培养后继续常氧培养3 h时蛋白与mRNA表达量最高,与正常培养的细胞表达差异最为明显( P<0.01)。细胞转染后可观察到miR-132和PGC-1α在低氧组表达量要高于常氧组,而两组中转染miR-132模拟物后的表达量要高于转染拮抗剂组( P<0.01)。
　　结论：miR-132在低氧时的人脐静脉内皮细胞中表达明显上调,对PGC-1α存在调控作用。     

短发夹状RNA干扰bcl-2后诱导人晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 应用RNA干扰技术抑制人品状体上皮细胞(HLEC)bcl-2基因表达,观察诱导其细胞凋亡情况,为防治晶状体后囊膜混浊提供新的策略.方法 实验研究.设计2条以bcl-2基因为靶标的短发夹RNA(shRNA),克隆入质粒PGCsi表达载体,分别命名为P1、P2,经脂质体转染入永生性HLEC系SRA01/04,48 h后检测转染效率和bd-2的基因及蛋白表达情况,并检测HLEC的细胞凋亡情况.多组间及组间计数资料的比较,采用随机区组设计的方差分析.结果 重组质粒经自动基因测序仪测序,证实构建成功.转染后48 h,流式细胞仪测得P1、P2转染率为44.1%、47.2%.免疫印迹法测得P1、P2组的bcl-2蛋白表达较对照组降低,实时荧光定量聚合酶链反应法测得P1、P2组的bcl-2 mRNA相对表达量为0.435、0.476,较对照组降低(F=1672.4,P<0.05),流式细胞仪双染法测得P1、P2组HLEC的细胞凋亡率分别为42.3%、45.4%,较对照组增加(F=1756.2,P<0.05),并且活化型caspase-3蛋白的表达增加.结论 P1、P2可抑制HLEC的bcl-2基因表达,并诱导HLEC凋亡.(中华眼科杂志,2009,45:636-640)     

角膜曲率的分析

目的：探讨我国人角膜曲率半径的正常值及不同性别、不同年龄的角膜曲率半径差异。方法：对10998只眼的角膜曲率进行检测，并按男、女10岁一组进行统计分析。结果：（1）K1为7.65mm,K2为7.71mm，平均K值为7.67mm。较眼科学正常值K:7.77mm短0.1mm。（2）K的平均值男性较女性的长0.1155mm。且女性各年龄段角膜曲率半径均男性的有不同程度的减短。（3）男女均随年龄的增长，角膜曲率半径大致呈递减趋势，即：角膜曲率半径与年龄成反比关系。（４）男女K1,K2之比，均随年龄增长而增长，即K1逐渐增长而增长，即　K1值逐渐增长，K2逐渐减短。结论：本文测定的角膜曲率较眼科文献中的提供的正常值短0.1mm，并且存在着年龄、性别上的差异。     

艾滋病眼部并发症的资料分析

目的:通过调查分析,了解艾滋病眼部并发症的临床表现、治疗及预后。方法:收集赞比亚卡布韦总医院眼科2008-08/2009-08就诊患者。结果:艾滋病眼部并发症症状重,病程长,致盲率高。结论:充分认识、掌握艾滋病眼部并发症的临床表现,提高艾滋病的检出率,早发现、早治疗,提高艾滋病患者的生活质量。同时应强调预防是降低艾滋病发生率的关键。     

泪囊鼻腔吻合术后复发的原因分析和再次手术探讨

目的分析泪囊鼻腔吻合术术后复发的原因并探讨再次手术的可行性。方法对11例泪囊鼻腔吻合术术后复发的患者予以再手术治疗,随访半年至一年。结果复发原因：泪囊未完全切开2例,骨孔过小或位置错误4例,吻合腔或骨孔内肉芽组织增生堵塞5例;10例术后流泪消失,泪道冲洗通畅,占90.91%,1例流泪减轻,泪道冲洗基本畅通,占9.09%。结论泪囊鼻腔吻合术术后复发患者可以通过再次手术重建泪道,是治疗泪囊鼻腔吻合术术后复发的有效方法之一。     

多排螺旋CT三维重建对视神经管骨折的诊断价值

目的探讨多排螺旋CT对视神经管骨折的诊断价值。方法对58例眼部外伤的病人行螺旋CT扫描，并进行三维重建。结果58例病人中，均伴不同程度的眼眶骨折，合并视经管骨折8例，其中视神经管内壁骨折4例，内壁为蝶窦壁3例，筛窦壁1例，外壁骨折3例，上壁骨折1例，通过三维重建可清晰地显示骨折线，骨重建显示准确，多平面重建定位好，3D重建显示骨折直观、立体。结论多排螺旋CT三维重建对视神经管骨折显示清晰，定位准确，对临床论断及治疗提供充分的依据。     

亟待新型早产儿视网膜病变动物模型的问世

早产儿视网膜病变（ROP）病因和发病机制尚不完全清楚,制约了其有效防治和相关研究的深入开展。尽管氧诱导视网膜病变动物模型为探索ROP复杂的病因和发病机制发挥了重要作用,但特异性较差,与人类ROP临床本质存在一定差异。因此,有必要对现有动物模型进行改良或建立新动物模型。通过更新观念、在多学科交叉中寻求突破,融合更多ROP危险因素,并结合新兴的转基因技术以及完善模型评价系统,建立科学的实验研究平台,为更好地开展ROP防治研究奠定基础。     

早产儿视网膜病变筛查和阈值期治疗的研究

目的研究早产儿视网膜病变(ROP)的发生率,评估ROP阈值期治疗效果。方法使用双目间接检眼镜对108例早产儿进行ROP筛查,将筛查结果进行统计学分析,达到阈值病变的患儿及时进行视网膜激光光凝或经巩膜、视网膜冷凝术。结果筛查108例早产儿,发现ROP23例,发生率为21.3%。在所有ROP患儿中,ROP1期13例,占56.5%;ROP2期3例,占13.0%;ROP3期7例,占30.4%。其中ROP3期患儿均伴有附加病变,达到阈值病变标准。ROP患儿出生体重为(1.43±0.25)kg(t=4.059,P<0.001);孕周为(31.0±2.3)周(t=2.637,P=0.013);吸氧时间为1~49d,平均17d(n=23,Z=-3.630,P<0.001);需要机械辅助呼吸患儿18例(χ2=12.009,P=0.001);上述指标与非ROP患儿比较,差异均有统计学意义;而与是否多胎的差异无统计学意义(χ2=1.013,P=0.314)。Logistic回归分析:出生体重低(β=-2.542,OR=0.079,P=0.032)和使用机械辅助呼吸(β=1.341,OR=3.823,P=0.025)的患儿是发生ROP的相关高危因素。7例阈值期病变患儿中,6例进行激光光凝或冷凝治疗。术后随访2个月至2年,手术眼的结构和视功能未见异常。1例阈值期病变患儿未予治疗,于1个月后出现视网膜脱离。结论出生体重轻、孕周少、吸氧时间长、需要机械辅助呼吸的早产儿发生ROP的风险较高。对阈值期病变患儿应及时进行激光光凝或冷凝治疗。     

早产儿视网膜病变阈值病变的相关因素分析

目的 对早产儿视网膜病变(ROP)不同转归一自然退行与阈值病变各相关因素进行分析,以探讨与ROP阈值病变有关的因素.方法 回顾性分析2008年5月至2009年7月在吉林大学第一医院新生儿科收治的83例确诊ROP的早产儿相关临床数据,并进行统计学分析.结果 在83例不同程度ROP患儿中(166只眼),自然退行51例(102只眼,占ROP患儿61.45％),阈值病变32例(64只眼,占ROP患儿38.55％).使用t检验和logistic回归分析,结果表明ROP阈值病变组的胎龄较ROP自然退行组小,产次较ROP自然退行组次数多,差异均有统计学意义(P＜0.05);排除其他因素干扰后,男性、机械呼吸及发生败血症与ROP阈值病变有关,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小胎龄、多产次,男性、使用机械呼吸、发生败血症与ROP不能自然退行有关.     

中国早产儿视网膜病变登记网的建设

早产儿视网膜病变（ROP）近年来在我国逐渐受到关注,成为研究热点.但由于民众欠缺相关知识及专业技术人员的匮乏,致使我国ROP的防治处于初级阶段,亟待ROP知识的普及以及专业防治的开展.＂中国早产儿视网膜病变登记网＂（http：//www.chinarop.com）的建设,旨在加强ROP的科普宣传和医务工作者的专业培训,建立国内的ROP病历注册登记制度及ROP数据库,为国内的ROP研究提供帮助.     

玻璃体内注射康柏西普治疗早产儿视网膜病变的血管化过程

目的：评价玻璃体内注射康柏西普在治疗I型(阈值期和阈值前期)和A-ROP(急进性ROP)的早产儿视网膜病变(ROP)的一系列病例中引起的视网膜血管化过程。方法：回顾性研究2017-07/2020-03在厦门市儿童医院眼科通过玻璃体腔注射康柏西普(IVC)治疗的ROP患者34例67眼。再活化是指急性期特征的复发，发生在疾病的任何阶段，无论是否存在其他疾病。结果：患儿34例的平均胎龄为28.82±2.32wk。平均出生体质量为1155.18±398.22g。19例37眼的病变区域为Ⅰ区。10例20眼的病变位于Ⅱ区，5例10眼的病变位于Ⅱ区后部。一次IVC治疗的ROP患儿疾病控制总有效率为73.1%(49/67)，且Ⅱ区血管化均完成。患者在Ⅲ区的血管化完成率出现差异。在接受过一次治疗且未再复发的患者中，Ⅰ型ROP血管化时间平均为9.11±2.49wk，A-ROP为13.40±4.04wk。A-ROP的血管化完成时间明显比Ⅰ型ROP的时间长，且结果有统计学差异。结论：IVC治疗后的病变为Ⅱ区的患儿均具有较高的血管完成率。     

早产儿视网膜病变的筛查分析

目的 了解早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)发病情况.方法 回顾性分析2009年6月至2010年10月间在东莞市人民医院ROP发病率及其特点.结果 接受筛查的早产儿共126例,发生ROP病变的21例,均为双眼发病,发病率16.67%,未到阈值前病变的19例,发病率15.08...