多聚酶链反应技术在医学微生物学中的应用

多聚酶链反应（polymerase,PCR）技术是由Mullis等于1985年首先创建,基本原理是先将目的DNA变性为单链并作为模板,加入两个人工合成的与已变性的单链DNA模板互补的引物,在耐热的DNA聚合酶（Tag酶）催化下,使4种三磷酸脱氧核苷依模板3’端引物向5’端延伸,合成新的DNA,然后经反复变性、延伸、退火等循环20～30周期,极微量DNA即可放大10⁶倍。因此,检测标本中只箱少量DNA经放大后即能检测目的基因序列。     

聚合酶链反应检测人胃螺杆菌

人胃螺杆菌（Ｈｈ）是慢性胃炎的又一病原菌，体外尚不能培养。作者用对应于细菌１６ＳｒＲＮＡ的螺杆菌属特异引物和细菌通用引物配对，建立了一套ＰＣＲ直接检测人胃粘膜活检标本中Ｈｈ的方法。１２例形态学检查证实为Ｈｈ感染者，１１例ＰＣＲ结果阳性，而大肠杆菌、空肠弯曲菌、双歧杆菌等８种常见肠道菌均阴性；普通ＰＣＲ灵敏度达０．１ｎｇＤＮＡ水平，巢式ＰＣＲ则可检测出０．０１ｎｇＤＮＡ。     

聚合酶链反应（PCR）技术：一种可用于肉制品检验的新方法

前言 聚合酶链反应或称多聚酶链反应(PolymeraseChain Reaction,PCR),是一种根据生物体内DNA复制的某些特点而设计的在体外对特定DNA序列进行快速扩增新技术。该方法在体外数h内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增10~7～10~9倍,大大提高了DNA的得率。特别是随着热稳     

多聚酶链反应探讨人乳头瘤病毒和疱疹病毒-2与宫颈疾病的关系

用多聚酶链反应(PCR)检测正常妇女、慢性宫颈炎患者、宫颈癌患者中HPV6、11、16、18和HSV-2感染情况。结果显示:慢性宫颈炎患者中HPV总阳性率(58.6％),HPV6、11、16、18各型阳性率(30.0％、29.3％、29.3％、35.0％)明显高于正常妇女;宫颈瘤患者中HPV总阳性率62.5％,其中HPV16阳性率高达52.5％,明显高于HPV6、11、18;慢性宫颈炎患者中HSV-2感染率为34.7％,显著高于正常妇女(12.9％),但低于HPV总阳性率(58.6％)。这两类患者中HPV各型的混合感染及HPV与HSV-2的混合感染普遍存在。     

混合尿液质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染

目的建立高效的围生期沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,CT）流行病学调查批处理方法——混合尿液（pooling urine）质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法（gap-ligase chain reaction-en-zyme linked immunoabsorbent assay,gap-LCR-ELISA）。方法比较质粒gap-LCR-ELISA对不同体积孕妇尿液混合库（4×,6×,8×,10×）及单份样本（1×）检出CT感染的灵敏度和特异度。结果质粒gap-LCR-ELISA检测4,6,8,10人份混合尿样中的CT感染均可达到100%的特异度,灵敏度分别为95%,85%,70%和65%,各组实验成本下降的比例均超过40%。结论4人份孕妇混合尿液质粒gap-LCR-ELISA的检测效能,等同于对单份标本的独立检测,为该法最适宜的标本混合策略,在大规模流行病学调查中具有应用价值。     

多聚酶链反应法检测168例结核杆菌的分析

肺结核诊断一般根据临床表现、X线检查、痰涂片镜检及结核菌培养等传统方法。但为了快速敏感、特异及早期诊断 ,我们自 1999年 2月～ 2 0 0 3年 1月用多聚酶链反应 (PCR)技术检测168例肺结核患者 ,现报告如下。1　材料与方法168例痰标本来源于我院传染科住院病人 ,留取晨痰 ,根据临床表现 ,X检查及细菌学检验 (涂片、PCR) ,血抗结核抗体诊断为肺结核。 (PCR诊断试剂由华远生物技术研究所提供 )。其中男 91例 ,女 77例 ,年龄 16～ 79岁 ,平均 3 5 4岁。晨痰标本直接涂片抗酸染色镜检。并用ELISA方法检测病人血清中特异性的结核抗体。…     

连接酶链反应检测沙眼衣原体和淋病奈瑟菌的可重复性问题研究

〔目的〕应用连接酶链反应技术(LCR)检测男性尿标本中的淋病奈瑟菌和沙眼衣原体,发现并阻止污染和可重复性问题的发生。〔方法〕采集受检者晨起或较长时间(2h以上)不排尿后的首段尿(FVU)标本1130份,利用LCR对此尿液标本进行淋病奈瑟菌和沙眼衣原体检测,针对S/CO在0.8以上的标本72h内进行复检,如果重复实验的S/CO≥1.0则认为阳性,S/CO<1.0,则为阴性。〔结果〕在1130例标本中,淋病奈瑟菌的S/CO在0.8以上的标本有13份,重复实验10份为阳性,其中3份S/CO在0.8～2.0的标本,复检为阴性。沙眼衣原体阳性60份,重复实验45份为阳性,18份S/CO在0.8～2.0的标本,15份复检为阴性。〔结论〕采用LCR检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体时,如S/CO在0.8～2.0应进行重新检测,可阻止污染和可重复性问题的发生。     

人因工程学在医疗设备安装与检验中的应用

人因工程学(HFE)综合运用生理学、心理学、社会学、卫生学、人体测量学和生物医学工程等知识和技术,研究生产系统中人、机与环境三大要素间的相互关系,通过对此关系的恰当设计和改进提高生产效率和经济效益,使工作系统达到满意效果。医疗设备安装是医学工程部门的基本职责之一,运用HFE理论研究分析医疗设备安装与检验过程中,临床医学工程师、医疗设备和安装环境的各项要素及应用,更加科学合理的组织实施医疗设备安装与检验工作。     

质量控制在临床免疫检验中的重要性和有效措施

目的分析质量控制在临床免疫检验中的重要性。方法选取我院2012年1月—2014年1月200例需行免疫检验的患者作为观察对象。按患者入院顺序将其编号,单号为对照组（n=100）,双号为观察组（n=100）。对照组行常规免疫检验,观察组行全程质控免疫检验;对比两组免疫指标变异指数。结果与对照组相比,观察组AFP、CEA、Ca199及Ca125指标平均变异指数更低（P〈0.01）。结论全程质控免疫检测可提高免疫检测结果准确性及可靠性,为临床诊疗提供科学、可靠依据。     

人3型腺病毒快速实验室检测方法的建立

[目的]为不明原因的呼吸道感染疾病的诊断提供一个新的筛选检测方法。[方法]建立一套针对人Ad3型腺病毒的PCR检测方法并应用该方法对人Ad3型腺病毒进行灵敏度、特异性的试验。[结果]通过对提取的Ad3型腺病毒DNA定量测定,该建立的方法可检测到pg级的人Ad3型腺病毒DNA,PCR扩增产物为一条特异的502 bp条带。[结论]建立的快速检测人Ad3型腺病毒的方法大大改善了用细胞培养的不便,不仅缩短了检测时间,而且提高了检测的灵敏度。     

检测孕妇阴道液人绒毛膜促性腺激素诊断胎膜早破的临床研究

胎膜早破为产科常见的并发症，及时诊断和处理可避免或减少对母儿的危害。多年来，临床上一般根据阴道流液、阴道积液、阴道液pH值测试，以及阴道液涂片检查做出诊断。近年来有报道，通过检测阴道液中的生化标记物，有助于胎膜早破的诊断。我们就孕妇阴道液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）水平与胎膜早破的关系进行了前瞻性的研究，现总结如下：     

用4对引物聚合酶链反应检验鼠疫菌的研究

目的 以传统的“四步检验”法为“金标准”，用4对引物聚合酶链反应（PCR）检测鼠疫动物材料，从而探索一种鼠疫快速诊断的方法。方法 毒力测定和4对引物PCR按常规方法进行。结果 在150份动物材料中，传统的“四步检验”作为金标准共检出阳性62份，而PCR法共检出阳性52份，经χ^2检验，差异无统计学意义（χ^2=1．42，P〉0．05）。PCR实验在4h内全部完成。结论 4对引物PCR法具有快速、敏感等优点，可以用于鼠疫的快速诊断和流行病学调查。     

聚合酶链反应结合地高辛标记探针杂交检测宫颈组织癌人乳头瘤病毒

应用聚合酶链反应结合地高辛标记探针杂交方法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）。应用１对通用型引物检测３６例新鲜活检宫颈癌组织中ＨＰＶ，凝胶电泳分析与聚合酶链反应结合印迹杂交（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ）及聚合酶链反应结合斑点杂交的检测阳性率分别为６６７％、６９４％、６９４％，结果基本一致。应用３对通用型引物检测宫颈癌组织中ＨＰＶ，ＨＰＶ的检测阳性率分别为７２２％（２６／３６）、７５０％（２７／３６）、６３２％（１２／１９），总的检测阳性率为９１７％（３３／３６）；在β球蛋白基因阳性的２７例宫颈癌组织中，总的检测阳性率为９００％（２４／２７）。说明聚合酶链反应结合地高辛探针检测ＨＰＶ方法可应用于宫颈癌的分子流行病学研究。     

人重组内皮抑素基因的克隆与融合表达

目的构建人内皮抑素(endostatin)融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法用反转录多聚酶链反应(RT—PCR)得到人内皮抑素全基因,连接PGEM—T载体,测序确认,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达。结果经SDS—PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,大小与预期相符合。结论人内皮抑素基因在原核细胞表达载体pTRX中获得成功表达,为应用内皮抑素进行肿瘤的抗血管生成治疗奠定了基础。     

乙型肝炎病毒的液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用探讨

目的 利用液相杂交技术,将核酸杂交技术进行简化,建立乙型肝炎病毒(HBV)的液相杂交的聚合酶链反应酶联免疫检测(PCR-ELISA)方法.方法 以HBV为目的靶DNA,引物P15'端标记Bio-PCR扩增37个循环.PCR扩增产物与5’端标记地高辛的探针呈液相混合,85cC 2.5 min,60C1 min进行杂交,杂交后产物均经过链霉素亲和素酶标板进行固定,经过酶标仪记录抗地高辛标记抗体,结合、显色.结果 液相杂交酶联免疫检测条件的优化:地高辛的探针浓度为2.4 pmol/次,液相杂交时间为2.5min,固相杂交时间为100 min,检测结果差异无统计学意义(P＞0.05);本试剂对87份“HBsAg+、HbeAg+、抗HBc+”标本的阳性检出率为91.95％; 72例“HBsAg+、抗-Hbe+、抗HBc+”标本的阳性检出率为68.06％,其他免疫检测指标组合标本为16份.结论 HBV的液相杂交技术应用于聚合酶链反应酶联免疫检测(PCR-ELISA),该杂交技术的实验操作简便,快速,适合于临床实验室的检测.     

生殖道亚临床型人乳头状瘤病毒感染及分娩方式的决择

目的探讨孕妇生殖道亚临床型人乳头状瘤病毒(HPV)感染、母儿间传播途径及分娩方式的决择。方法应用多聚酶链反应(PCR)结合限制性内切酶分型技术(GP-PCR)研究152例孕妇生殖道亚临床型HPV感染状况及母儿间传播途径。结果孕妇宫颈分泌物中HPVDNA检出率为3621%,外周血HPVDNA检出率为5278%,均以HPV16和18型为主;母儿间经产道的传播率为4091%,血行性经胎盘的传播率为5789%。结论母儿间HPV感染传播途径除经产道、羊水传播外,尚有血行性经胎盘传播可能。因此,孕妇生殖道亚临床型HPV感染并不是剖宫产的绝对指征。     

直接酶联免疫吸附法和聚合酶链反应联合检测沙门菌的应用

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,2种方法的检测符合率达 99%以上。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的 15 4 6份人粪便样品进行检测 ,同时以国家标准方法为参照 ,直接ELISA法的敏感性和特异性达 10 0 %和 97 14 % ,PCR法的敏感性和特异性均为 10 0 %。结论　优化的沙门菌检测程序是对大量样品采用直接ELISA筛检 ,除去大量阴性样品 ,阳性样品用PCR法作进一步鉴定 ;血清型的确定用国家标准方法。     

人血液和尿液样本HIV-1抗体的ELISA 检测比较

目的 比较人的血液和尿液样本中HIV-1抗体的一致性。方法 在广东省两所劳动教养所收集346名HIV高危的血液和尿液样本，分别用血液和尿液ELISA初筛试剂检测HIV-1抗体。结果 346份血液和尿液样本各18份阳性，其中有17人的血液和尿液平行样本均为HIV—1抗体阳性，血液和尿液样本HIV-1抗体检测的一致性为99．4％。结论 在采集血液样本不便的情况下，可利用尿液ELISA初筛诊断试剂进行HIV感染的筛查和监测。