实验性碱烧伤角膜新生血管的观察研究

目的 利用碱烧伤诱导实验性角膜新生血管(CRNV)的发生,探讨定量分析CRNV和观察CRNV通透性的方法.方法 取36只C57BL/6小鼠,随机分为:实验组(n=30):采用浸润l mol/L NaOH的滤纸片接触角膜5 s,诱导碱烧伤CRNV;对照组(n=6):不进行任何处理.于碱烧伤后第4、7、10、14天测量CRNV面积;第3、7、10、16、28天取眼球做切片的HE染色行组织学检查;第10天使用CD31抗体标记CRNV并计数,行荧光血管造影观察CRNV的通透性;每日观察角膜溃疡和前房积血等情况. 结果 实验性碱烧伤CRNV存在生长和消退的过程.无菌性角膜溃疡和前房积血较为常见,发生率分别为6.7%和10.0%.眼球切片的HE染色可观察到不同时间角膜组织的病理变化.碱烧伤后第10天,CD31抗体免疫组化标记并记数CRNV,荧光血管造影可观察到显著的CRNV渗漏.结论 CD31抗体免疫组化标记、记数CRNV及联合CRNV面积测量,是CRNV定量分析较为客观的方法;荧光造影是观察和记录CRNV通透性可行的方法.     

氟伐他汀对大鼠角膜碱烧伤后新生血管形成的影响

目的:探讨氟伐他汀对大鼠角膜碱烧伤后新生血管形成的作用及其机制。方法:30只SD大鼠随机分为3组:生理盐水组、氟伐他汀组和地塞米松组,每组10只,均用1mol/L的NaOH烧伤大鼠右眼,生理盐水组、氟伐他汀组和地塞米松组分别以生理盐水、10-5 mol/L氟伐他汀和1g/L地塞米松点眼。碱烧伤后1-14d用裂隙灯观察角膜的混浊度和新生血管的生长情况,HE染色观察角膜组织病理学改变,免疫组化观察VEGF和CD31的表达情况。结果:碱烧伤后第3,7,14天,氟伐他汀组和地塞米松组的角膜混浊度评分和新生血管生长评分都显著低于生理盐水组,差异有统计学意义,P<0.05。组织病理学检查结果提示,与生理盐水组相比,氟伐他汀组和地塞米松组的角膜组织结构明显整齐,新生血管的形成明显减少,伴少量炎性细胞浸润。免疫组化结果显示氟伐他汀组和地塞米松组的VEGF和CD31的表达显著减少。结论:氟伐他汀能减轻大鼠角膜碱烧伤,其机制可能是下调VEGF和CD31的表达。     

角膜缝线与碱烧伤诱导兔角膜新生血管的实验观察

目的利用角膜缝线、碱烧伤两种常用方法来诱导兔角膜新生血管（CNV）产生。观察CNV产生早期的过程中,其生长情况及血管内皮生长因子（VEGF）在兔角膜中的表达情况。方法将新西兰白兔75只随机分为3组,A组-正常对照组5只;B组-角膜缝线组35只;C组-碱烧伤组35只。每日裂隙灯显微镜观察角膜炎性反应情况与混浊程度,检测第3天、7天、14天角膜新生血管长度和数量并摄影记录;B、C两组分别于实验后第1、2、3、5、7、10、14天观察、取材。免疫组织化学（IHC）检测VEGF在兔角膜中的表达情况。结果伤后3 d,新生血管开始侵入角膜;7 d,新生血管生长活跃;10 d,新生血管达到生长高峰;14 d后B组与C组新生血管均出现回退迹象。角膜缝线组CNV面积明显小于碱烧伤组（P〈0.01）,10 d后VEGF在碱烧伤组的表达明显高于缝线组（P〈0.01）。结论碱烧伤组相对于缝线组可以诱导产生更多的新生血管（CNV面积）,且CNV退化的时间晚,这些可能与VEGF的表达有关;但角膜缝线更容易控制CNV产生的范围。     

诺帝滴眼液对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用

目的 观察自制诺帝滴眼液（Nordy eye drop）对Long．Evans大鼠角膜碱烧伤后新生血管（CRNV）有无抑制作用及其对正常角膜有无毒副作用。方法 采用0．025％、0．1％两个不同浓度诺帝滴眼液滴眼21d,通过裂隙灯、光镜、电镜观察检测诺帝滴眼液的毒副作用。建立角膜碱烧伤后角膜新生血管模型,0．025％、0．1％两个不同浓度诺帝滴眼液4次／d滴眼治疗,0．1％地塞米松磷酸钠滴眼液作为阳性对照、空白溶液作为阴性对照,观察诺帝治疗效果。结果 诺帝滴眼液滴眼21d后观察正常大鼠,无畏光、结膜充血等刺激症状,组织学检查显示结构正常,未见炎性细胞浸润。大鼠角膜碱烧伤后1d时仅见角膜缘血管网扩张,3d时新生血管长入,7～14d达高峰,14d时治疗组和地塞米松组新生血管开始退化;比较各组CRNV面积与角膜面积的比值,治疗组和阳性对照组均小于阴性对照组并有非常显著性差异（P〈0．01）。治疗组与阳性对照组间、0．025％与0．1％治疗组间均无显著性差异（P〉0．05）。结论 0．025％、0．1％的诺帝滴眼液局部滴眼无明显毒副作用,并且对CRNV有显著抑制作用。     

Avastin对碱烧伤角膜内新生淋巴管和血管形成的影响

目的观察小鼠碱烧伤后角膜新生淋巴管和血管的形成情况,探讨Avastin对小鼠角膜新生淋巴管和血管形成的影响及其机制。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型,随机分为治疗组和对照组,治疗组小鼠25 mg/mL Avastin 5μL结膜下隔日注射,同时左氧氟沙星滴眼液滴眼3次/d,连续治疗两周;对照组连续两周内每日左氧氟沙星滴眼液滴眼3次,分别于碱烧伤后3 d、7 d和12 d取材。应用LYVE-1标记淋巴管,观察小鼠角膜内新生淋巴管的形成情况;体视显微镜观察角膜新生血管形成情况。免疫组化法检测血管生成因子VEGF-C在角膜碱烧伤后不同时间段角膜组织内的表达。结果碱烧伤后7d的对照组角膜基质中可见新生淋巴管。在治疗组中,碱烧伤后12d可见角膜基质内存在新生的淋巴管。Avastin治疗组不同时间段角膜新生血管的形成均少于角膜碱烧伤对照组。在正常小鼠角膜组织内,VEGF-C表达于角膜上皮层和内皮层。在治疗组碱烧伤角膜内,各时间段VEGF-C的表达均低于对照组。结论 Avastin具有抑制小鼠角膜碱烧伤后角膜新生淋巴管和新生血管形成的作用,其机制可能是通过抑制角膜组织内VEGF-C的表达从而抑制角膜新生淋巴管和新生血管的形成。     

AS2O3对角膜新生血管的影响

目的探讨碱烧伤后不同时期角膜新生血管的表达,研究三氧化二砷(AS2O3)对角膜新生血管形成的影响。方法日本大耳白兔48只,碱烧伤法建立兔角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)动物模型,随机分成1、2、3、4四组。实验组(1、2、3组)分别给予0.1 ml、0.3 ml、0.5 ml的AS2O3结膜下注射;对照组(4组)给予生理盐水0.3 ml结膜下注射,检测烧伤后第7、14、28天角膜组织中新生血管面积,HE染色法检测烧伤后第7、14、28天角膜组织中新生血管的表达。结果兔角膜碱烧伤后,1组,2组,3组,4组碱烧伤后角膜新生血管面积,第7天时分别为(44.12±20.90),(29.32±17.32),(16.03±8.07),(53.86±20.60);第14天时分别为(67.19±35.20),(51.82±31.60),(24.25±11.26),(128.31±40.10);第28天时分别为(49.22±9.90),(32.42±9.97),(11.81±9.04),(78.15±35.13)。以HE染色法检测1组,2组,3组,4组烧伤后角膜组织中新生血管的表达,第7天时分别为(1.8±0.74),(1.1±0.77),(0.5±0.41),(4.8±0.67);第14天时分别为(3.3±0.74),(2.9±0.73),(1.5±0.8),(6.6±0.68);第28天时分别为(1.4±0.90),(0.9±0.41),(0.2±0.64),(2.8±0.72)。结论 AS2O3可抑制碱烧伤后角膜新生血管的形成,其抑制作用与浓度呈正比。     

HIF、iNOS及VEGF在兔角膜碱烧伤后CNV生成中的作用研究

目的研究缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor,HIF）和诱导性一氧化碳合成酶（in-ducible nitric oxide synthase,iNOS）以及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在角膜碱烧伤后角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）形成过程中的作用及机制。方法 1）建立兔角膜新生血管动物模型。2）将兔随机分为对照组和3个实验组,对照组兔结膜下注射生理盐水;3个实验组兔则分别注射不同剂量的三氧化二砷。3）观察兔角膜新生血管的生长情况,并记录角膜新生血管的生长面积。4）于兔角膜碱烧伤后3个时间点,用免疫组化方法检测兔角膜缺氧诱导因子和诱导性一氧化碳合成酶的表达以及血管内皮生长因子,并观察兔角膜HE染色情况。结果1）角膜大体情况观察：实验组角膜比对照组角膜更为光滑透明,并随三氧化二砷剂量的增加而大体情况渐好。2）角膜新生血管面积：在各时间点上,各实验组面积均小于对照组,差异均有显著性意义（P〈0.05）。3）免疫组化方法检测角膜HIF-1α和iNOS,VEGF蛋白的表达：在第7天有较高表达,14 d达到高峰,28 d时明显降低,且对照组明显高于实验组,各实验组的表达随三氧化二砷剂量的增加而减少。结论三氧化二砷对兔角膜新生血管的形成具有抑制作用。三氧化二砷通过抑制HIF-1α和i NOS,VEGF表达而抑制兔角膜新生血管的形成。     

环氧化酶-2和VEGF在角膜新生血管中的表达和相关性研究

目的观察环氧化酶-2（COX～2）和血管内皮生长因子（VEGF）在碱烧伤诱导的兔角膜新生血管（CNV）中的表达，分析其相关性，探讨CNN形成的有关机制。方法采用碱烧伤建立兔CNV模型，伤后每日裂隙灯显微镜观察CNV生长情况并计算其面积，并于第3、7、10、14天各时段，免疫组化S—P法检测COX-2和VEGF蛋自在角膜组织中的表达，分析其相关性。结果CNV生长面积在伤后第3、7、10、14天逐渐增大，COX-2和VEGF的表达逐渐增加，主要分布于炎症细胞胞质及新生血管内皮细胞，相关性分析显示二者呈显著正相关（r=0．995，P〈0．05）。结论COX-2和VEGF参与炎症相关CNV形成，其机制可能与COX-2上调VEGF表达有关。     

前节缺血致实验性兔虹膜新生血管模型

目的应用前节缺血的方法制备家兔实验性虹膜新生血管模型,观测其眼压波动、眼前节特别是虹膜组织病理学改变。方法对35只家兔的右眼行上、下直肌离断加涡静脉阻塞手术,用数字表法随机取30只家兔为第1组,从术前2d及术后每天测量眼压、裂隙灯观察至术后25d处死。眼球摘除后行HE和CD34免疫组化染色,光镜下观察。余5只家兔为第2组,从术前2d及术后每天行裂隙灯观察,至术后第9天处死,摘除眼球做组织学观察。左眼均作为对照仅测定眼压、裂隙灯观察及眼球摘除后光镜下观察。结果术后眼压呈先上升后下降趋势,最终稳定于低眼压水平。裂隙灯下虹膜新生血管于术后4～6d开始出现,术后9d时最明显,此后逐渐消退。HE和CD34染色显示2组家兔的实验眼均可见纤维血管增生膜堵塞房角,虹膜表面可见新生血管,术后25d组织学可见睫状体明显萎缩,术后9d睫状体以出血坏死为主,2组视网膜均未见明显异常。结论利用上、下直肌离断加涡静脉阻塞致前节缺血方法制作的实验性虹膜新生血管模型操作简单、廉价实用、虹膜新生血管出现率较高。     

CD105和血管内皮生长因子在大鼠角膜新生血管中的表达

目的 研究CD105在大鼠角膜新生血管(CNV)中的表达,并研究其和血管内皮生长因子(VEGF)的相关性.方法 用含有100 ng/μL 鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 1 μL的缓释药丸放入36只SD大鼠角膜囊袋内,建立大鼠角膜新生血管模型;按照不同时间点,对角膜新生血管的情况进行形态学分析,用免疫组织化学和计算机图像分析系统检测新生血管形成不同时间点CD105和VEGF在角膜中的表达.结果 在模型制作后第4天开始长出新生血管,第7～10天达高峰,3周以后开始明显减少.免疫组化结果显示CD105和VEGF的表达情况与新生血管的生长呈平行关系.结论 CD105与角膜新生血管形成有相关性,在新生血管生长中扮演着重要角色.     

兔角膜碱烧伤后LYVE-1的表达及意义

目的：研究探讨新西兰大白兔角膜碱烧伤后LYVE-1（淋巴管内皮透明质酸盐受体1）的表达及意义,进一步证实角膜新生淋巴管的存在,揭示其与角膜碱烧伤损伤修复的关系。方法：饲养24只健康新西兰大白兔,左眼制作角膜碱烧伤模型作为实验组,右眼不做手术作为对照组。术后1天、3天、7天、14天分别处死6只兔,免疫组化测定两眼LYVE-1的表达情况。结果：实验组于术后第3天出现表达,第7天、第14天表达增加;实验组术后3天、7天和14天LYVE-1表达均高于对照组。结论：角膜新生淋巴管在角膜碱烧伤中扮演重要角色。     

几丁糖促进兔角膜碱烧伤愈合的作用

目的 观察2％医用几丁糖在兔角膜碱烧伤早期对角膜上皮愈合，抗过氧化损伤和炎症反应的影响。方法 用15只新西兰大白兔制作角膜碱烧伤模型，设立几丁糖组(右眼)和磷酸盐缓冲液对照组(左眼)。裂隙灯观察角膜烧伤后角膜炎症反应及上皮修复过程。于烧伤后第7，14，28天各随机处死5只兔，取角膜和房水检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，并观察角膜组织病理学变化。结果 医用几丁糖组较对照组同期角膜上皮修复快，SOD活性高，MDA生成量少。角膜炎症反应轻。结论 几丁糖在角膜碱烧伤急性期治疗中具有较强的促进上皮修复，抗过氧化损伤及抑制炎症的作用。     

贝伐单抗抑制兔角膜碱烧伤新生血管的实验研究

目的通过点眼和结膜下注射贝伐单抗两种不同的给药途径,抑制兔角膜碱烧伤后的新生血管,探讨该药的这两种给药方式的疗效。方法普通白色家兔50只,取2只为正常对照组,其余48只右眼碱烧伤后随机分为三组,每组16只：A组为碱烧伤对照组,B组为点眼组,用贝伐单抗（5mg/ml）点眼,3次/d,C组为结膜下注射组,用贝伐单抗（2.5mg/0.1ml）结膜下注射。在不同的时间点（第1、4、7、14d）测量角膜新生血管的生长情况及免疫组化检测角膜血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白的表达。结果 B、C组的CNV相对于A组得到明显抑制,CNV的长度和面积及VEGF蛋白的表达差异有统计学意义,而B组和C组之间没有明显差异。结论两种用药方法对于抑制角膜新生血管没有明显差异。     

大鼠角膜碱烧伤后黏附分子变化的研究

目的 探讨大鼠角膜碱烧伤后不同时期ICAM-1、VCAM-1和CD44在角膜的表达和分布，了解与角膜碱烧伤病理损害的关系，完善角膜碱烧伤免疫机制的研究。方法 Wistar大鼠80只，制备角膜中度碱烧伤动物模型。分别于角膜碱烧伤后8h、1天、3天、1周、2周、4周、7周处死大鼠，分别采用链酶亲和素-过氧化物酶法（SABC法）和RT-PCR方法检测大鼠角膜局部ICAM-1，VCAM-1和CD44的表达。结果 碱烧伤3天组角膜上皮细胞ICAM-1和VCAM-1呈强阳性，角膜上皮细胞和角膜缘的毛细血管内皮细胞CD44呈中度阳性。2周组角膜上皮细胞ICAM-1表达减弱，基质细胞仍呈强阳性，角膜上皮细胞、基质细胞和基质内新生血管内皮细胞VCAM-1和CD44呈中度表达。碱烧伤3天组ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达量增加，差异显著，CD44 mRNA表达量无显著变化。碱烧伤2周组ICAM-1 mRNA量均较3天时明显减少，两者有显著差异（P〈0．01），VCAM-1 mRNA表达量增加，比3天时增多，同正常对照组相比差异极显著（P〈0．001），CD44 mRNA表达量增加，同正常对照组相比差异显著（P〈0．01）。结论 ICAM-1、VCAM-1和CD44在角膜碱烧伤的不同阶段其表达不同。急性期ICAM-1和VCAM-1的抗原表达和mRNA合成增加，说明角膜碱烧伤的炎性反应重，预后差。随病程延长，CD44 mRNA表达量逐渐增加，证明CD44及其配体在角膜碱烧伤的愈合过程中发挥重要作用。     

兔眼碱烧伤后VEGF的表达与角膜新生血管的关系探讨

目的:研究兔眼碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达与角膜新生血管(CNV)的关系。方法:56只兔随机分成实验组A、实验组B、实验组C及对照组。实验组用N aOH碱烧伤法诱导CNV模型,按碱烧伤后24h、3d、1周、2周、3周、4周,2月、6月处死兔取出角膜,进行CNV的形态学检查及免疫组化法评价VEGF的表达。结果:实验组兔碱烧伤后1d开始出现CNV,2周达高峰;碱烧伤后1d出现VEGF表达,持续升高至碱烧伤后1周,随后表达水平开始下降。对照组中未出现CNV及VEGF不表达。结论:碱烧伤后兔眼VEGF的表达与CNV的形成有密切相关性,并发挥了作用。     

兔角膜碱烧伤后角膜组织中NO、MDA含量及SOD活性的变化

目的：探讨一氧化氮与脂质过氧化反应在角膜碱烧伤中的作用。方法：在兔右眼角膜用２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液烧伤６０秒钟后，分别于第１、４、８、１６、３２及６４天测量其ＮＯ和丙二醛（ＭＤＡ）的含量及ＳＯＤ活性，左眼为正常对照。结果：烧伤后的第１、４、８、１６及３２天，其ＮＯ和ＭＤＡ含量显著高于对照组，至第６４天接近对照组水平。烧伤后第１～１６天，ＳＯＤ活性较对照组显著降低，第３２天已基本恢复至对照组水平。结论：角膜碱烧伤后角膜组织中ＮＯ水平升高和脂质过氧化反应增强可能是其损伤机制之一。     

基质金属蛋白酶-9在兔角膜新生血管模型的表达

目的：研究兔正常角膜及损伤后角膜中MMP-9的表达,探讨其与角膜新生血管的关系。方法：将45只健康新西兰大白兔随机取5只,为正常对照组,余40只作角膜缝线,建立角膜新生血管动物模型,用免疫组化和图像分析研究MMP-9的平均积分光密度（MMP-9IOD）微血管计数。结果：在术后不同时间点,MMP-9IOD,微血管计数间有高度相关性（r=0．7260）。结论：MMP-9表达与角膜新生血管的形成与退化平行。     

骨形态发生蛋白-7在大鼠角膜碱烧伤修复过程中的表达

目的探讨骨形态发生蛋白-7（BMP-7）在大鼠角膜碱烧伤修复过程中的表达。方法用免疫组织化学方法检测BMP-7在正常对照组及角膜碱烧伤后1、3、5、7和14 d角膜中的定位与蛋白水平的表达,用计算机图像分析系统进行分析。结果BMP-7的表达在大鼠角膜碱烧伤后第1天降低,第3、5天逐渐升高,第7天基本接近正常水平,14 d时表达最强。结论BMP-7可能参与了角膜碱烧伤后炎性反应过程。     

兔角膜碱烧伤后角膜组织中G-6-PD和胶原酶活性变化

目的：探讨角膜组织中６ － 磷酸葡萄糖脱氢酶（Ｇ－ ６ － ＰＤ） 和胶原酶活性变化与角膜碱烧伤的关系。方法：用２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液造成右眼角膜碱烧伤模型,以左眼为正常对照。分别于烧伤后不同时期测定两组角膜中的Ｇ－ ６ － ＰＤ 的活性和氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ） 及羟脯氨酸的含量。结果：与对照组相比,在烧伤后的１ － １６ 天,实验组的Ｇ－ ６ － ＰＤ活性和羟脯氨酸含量下降,而ＧＳＳＧ 含量升高,尤其是第８ 天的差异非常显著（Ｐ＜ ０ ．０１） ,至第３２ 天时上述指标基本接近对照组水平。Ｇ－ ６ － ＰＤ 活性与羟脯氨酸含量呈正相关,而与ＧＳＳＧ 含量呈负相关。结论：Ｇ－ ６ － ＰＤ活性降低导致ＧＳＳＧ 含量升高继而胶原酶活性增强,可能是角膜碱烧伤的机制之一。     

MHC-Ⅱ类抗原在角膜碱烧伤后眼组织的动态改变

目的：探讨角膜碱烧后角膜溃烂溶解穿孔以及眼内炎症的免疫学机制。方法：在大鼠角膜上制作碱烧伤模型。在烧伤后的不同阶段。制备角膜、虹膜、脉络膜以及视网膜铺片,采用卵白素-生物素过氧化物酶免疫组化方法（ABC法）,检测眼组织MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞。结果：烧伤初期,角膜及虹膜即有MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞的轻度增多。在角膜溶解穿孔阶段。MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞,结果：烧伤初期,角膜及虹Ⅱ类抗原阳性细胞的轻度增多;在角膜溶解穿孔阶段。MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞大量出现,密集分布于角膜缘及溃疡溶解处,以及虹膜、脉络膜组织中,且在形态学也发生了一些变化。当烧伤后角膜溶解期以及稳定期,均可见Ⅱ类抗原阳性细胞。结论：免疫反应可能参与了严重角膜碱烧伤角膜溶解及眼内炎症的病理过程,其发生机理可能与自身免疫反应有关。