人类脐带血MSC和骨髓MSC分泌细胞因子的对比研究

目的比较人类脐带血间充质干细胞和骨髓间充质干细胞支持造血干细胞分泌生长因子的能力。方法应用EUSA方法,测定两种细胞分泌的干细胞生长因子（Stem cell factor,SCF）,血小板生成素（Thrombopoietin,TPO）和白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）的浓度,并且进行对比。结果人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可分泌TPO、SCF和IL-6等支持造血生长因子。但是相同生长条件下,两种细胞分泌的因子浓度不同。人脐血基质细胞分泌SCF的量（575．7±40．2pg／ml）高于骨髓基质细胞（482．2±17．7pg／ml）,而人脐血基质细胞分泌IL-6（469．7±27．2pg／m1）的量（低于同期培养的骨髓基质细胞（935．19±35．4pg／ml）,人脐血基质细胞TPO分泌的量（195．5±7．3pg/ml）与骨髓基质细胞（172．2±9．3pg/ml）相近。结论人脐血基质细胞与骨髓基质细胞都具有分泌支持造血生长因子的能力,但是分泌量之间有差异。     

人胎盘滋养层细胞表达白细胞介素-3

目的:确定脐血中高含量白细胞介素3(IL-3)的主要来源,进一步了解脐血造血微环境.方法:应用抗IL-3多克隆抗体对7例人工流产的绒毛标本和10例健康产妇足月分娩的胎盘组织及脐带标本进行免疫组织化学染色.结果:足月胎盘的滋养层细胞呈现阳性表达,绒毛标本的滋养层细胞未见阳性表达,在其他细胞和脐血管内皮细胞上未见阳性表达.结论:胎盘滋养层细胞是脐血和胎盘表面的IL-3的主要来源.滋养层细胞分泌这种细胞因子的功能是随着胚胎的发育而逐渐完善的.     

白细胞介素-2对脐血CIK细胞体外增殖活性的影响

目的研究白细胞介素2对脐血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖的影响。方法将白细胞介素2与经CD3单抗、γ干扰素活化的脐血细胞因子诱导的杀伤细胞体外共培养,以台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞增殖水平,Giemsa染色观察细胞集落。结果体外培养3、7、10d后脐血单个核细胞分别扩增至3倍、9倍、25倍,培养10d后细胞密度增大,集落形成。结论白细胞介素2能诱导脐血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖,是脐血造血干细胞扩增的重要细胞因子。     

Th17细胞在肝脏疾病的研究进展

Th17是新近发现的一种辅助性T细胞亚型,Th17细胞分泌的细胞因子除白细胞介素(IL)-17外,还包括IL-17F、IL-21、IL-22、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNFα)等。Th17细胞及其分泌的细胞因子在自身免疫性疾病、感染性疾病和变态反应性疾病中     

白细胞介素7在病毒感染性疾病中的研究进展

人们通过对细胞增殖、分化调节机制的不断深入研究,发现了一系列细胞因子均可促进淋巴细胞生长和分化,其中包括白细胞介素(interleukin,IL)-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、干扰素(IFN)-γ、TNF-α和转化生长因子(TGF)-β等。1987年Hunt等[1]在研究骨髓基质细胞对前B细胞生长的支持作用时发现一种不同于其他细胞因子的前B细胞生长     

手足口病患儿血清细胞因子的检测及其临床意义

目的 探讨手足口病患儿血清细胞因子[白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素13 (interleukin-13,IL-13)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis fact...     

脐血IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α与母体、胎儿炎症反应及早产预后的相关性

目的：研究脐血白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与母体、胎儿炎症反应及早产预后的相关性。方法选取2015年1月至2016年1月在我院妇产科就诊的早产孕妇及早产儿各93例作为研究对象。比较母体炎症反应不同时期的脐血细胞因子水平,胎儿炎症反应不同分型的脐血细胞因子水平,不同早产预后的脐血细胞因子水平,利用Spearman相关性分析法分析脐血细胞因子与母体或胎儿炎症反应及早产预后的相关性。结果母体炎症反应≥2期者的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应与1期者,IL-10水平明显低于无炎症反应与1期者,而1期的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应者,IL-10明显低于无炎症反应者,差异均有统计学意义(P<0.05);胎儿2型炎症反应的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应与1型者,IL-10水平明显低于无炎症反应与1型者,而1型的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应者,IL-10水平明显低于无炎症反应者,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良的早产儿脐血IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平均明显高于预后良好者,而IL-10水平明显低于预后良好者,差异均有统计学意义(P<0.05);根据Spearman法评价相关性可知,IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α分别与母体或胎儿炎症反应及早产预后均呈正相关(P<0.05),而IL-10与母体或胎儿炎症反应以及早产预后呈负相关(P<0.05)。结论脐血IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平分别与母体或胎儿炎症反应及早产预后呈正相关,而IL-10与母体或胎儿炎症反应及早产预后呈负相关。     

多种细胞因子组合对脐血CD34+细胞的体外扩增

目的 探讨不同细胞因子组合在无血清、无基质条件下对脐血干／祖细胞的调控作用。方法 将SCF、Flk2／Flt3配体(FL)、TPO、IL-6及IL-6受体的可溶性形式(sIL-6R)进行不同组合扩增脐血CD34^ 细胞。结果 ①SCF FL ／-TPO组合能有效快速扩增脐血CD34^ 、CD34^ Thy-1^ 、CD34^ CD33^ 及长期培养启始细胞(LTC—IC)；②该组合同时加入IL-6及sIL-6R后，脐血干／祖细胞显著增殖；单独加入IL-6(不含sIL-6R)时，早期CD34^ 细胞和LTC—IC含量无明显增加，而且CFU-Mix、BFU—E的扩增不如CFU—GM明显；③通过细胞凋亡早期膜变化标记FITC—Annexin—V检测细胞凋亡率，加入Flt3L和／或IL-6 sIL-6R后Annexin-V阳性细胞由15．2％～19．1％降至2．8％～3．5％。结论 在SCF TPO Flt3L IL-6 sIL-6R组合的无基质、无血清悬浮体系中，脐血既能产生大量定向祖细胞，又能保持一定数量的早期造血细胞，这一体外培养体系具有重要的临床意义。     

条件培养液对脐血CD34^＋细胞扩增效应的实验研究

目的：探讨并分析不同条件培养液对脐血CD34^ 细胞的体外扩增效应及影响因素。方法：利用4种条件培养液（胎儿肌肉、胎盘组织、外周血、脐血单个核细胞）对脐血CD34^ 细胞进行2周的体外扩增，并和三细胞因子组合：干细胞因子（stem cell factor,SCF)，血小板生成素（thrombopoietin,TPO),flt-3配基（flt-3 ligand,FL)，对脐血CD34^ 细胞扩增结果进行了比较；利用ELISA方法检测4种条件培养液中细胞因子[白细胞介素－1（interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、FL、TPO]的浓度。结果：脐血单个核细胞条件培养液及细胞因子组合对脐血CD34^ 细胞均有明显的扩增效应，脐血组优于细胞因子组合；4种条件培养液中，脐血组细胞因子FL的含量明显高于其余条件培养液组。结论：脐血条件培养液可作为体外培养扩增脐血CD34^ 细胞有效而廉价的扩增剂；细胞因子FL可能是造成不同条件培养液对脐血CD34^ 细胞体外扩增结果差异的主要因素。     

白细胞介素 6在银屑病发病中作用的研究进展

银屑病是一种慢性炎症性增生性皮肤病,其发病原因复杂,多认为与免疫因素相关。在银屑病中,白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)诱导角质形成细胞的分化和增殖、参与T细胞的活化、促进角质形成细胞产生血管内皮生长因子、白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)等细胞因子,促进皮损形成,IL-6还与银屑病合并骨质疏松、高脂血症、心血管疾病的发生有关。     

人脐血基质细胞自发分泌多种造血生长因子的实验研究

目的探讨体外培养的人脐血基质细胞分泌血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、干细胞生长因子(stem cell factor,SCF)的能力.方法留取不同培养时相点的培养液上清,ELISA法检测上清中TPO、GM-CSF、SCF的浓度,并与骨髓基质细胞的培养上清液对照比较其特点.结果人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可分泌TPO、GM-CSF和SCF等造血生长因子,二者造血生长因子的分泌随着培养时间的延长而逐渐下降,其中人脐血基质细胞分泌TPO和SCF的高峰期出现在第7天,而GM-CSF的分泌则无高峰期的出现;通过与骨髓基质细胞分泌三种造血生长因子量进行对比发现,人脐血基质细胞SCF和GM-CSF的分泌量低于骨髓基质细胞,而TPO的分泌高于同期培养的骨髓基质细胞.结论人脐血基质细胞与骨髓基质细胞一样具有分泌造血生长因子,支持调控造血的作用.     

骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达造血生长因子的实验研究

目的在分子生物学水平上探讨体外培养的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达TPO、GM-CSF、SCF的mRNA的能力的差异.方法收集培养28d的骨髓基质细胞与人脐血基质细胞,采用RT-PCR方法在mRNA水平上分析其造血生长因子GM-CSF、SCF、TPO的表达,比较二者表达TPO、GM-CSF、SCF等造血生长因子的mRNA能力的差异.结果体外培养的人脐血基质细胞与骨髓基质细胞均能表达:(1)TPO的mRNA,人脐血基质细胞表达能力强于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为1.57;(2)SCF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.83;(3)GM-CSF的mRNA,人脐血基质细胞表达能力弱于同期培养的骨髓基质细胞,二者积分光密度量化比为0.68.结论人脐血基质细胞和骨髓基质细胞均可以表达造血生长因子TPO、GM-CSF、SCF的mRNA,具有支持调控造血的物质基础.     

人脐血基质细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的作用

目的研究人脐血基质细胞(hUCBSCs)对脐血CD34+细胞体外扩增的促进作用. 方法应用MACS磁珠分离系统分离脐血CD34+细胞,按照DEXTER法行脐血基质细胞培养,观察hUCBSCs的生长状态及细胞表面分子的表达情况.建立以hUCBSCs为滋养层的脐血CD34+细胞体外扩增体系,并对脐血CD34+细胞短期扩增后行集落形成单位(CFU)-GM、CFU-E和CFU-Mg半固体培养. 结果脐血基质细胞为混合细胞群,包括CD68(+)、Fn(+)、CD31(+)和CD34(-);以hUCBSCs为滋养层的体外扩增体系对脐血CD34+细胞具有明显的扩增作用,体外液体扩增后的脐血CD34+细胞集落形成能力明显高于对照组,其中细胞因子(SCF+IL-3+EPO+TPO+GM-CSF)联合hUCBSCs体系的扩增作用最强,hUCBSCs在促进CFU-Mg集落形成的作用中具有明显优势. 结论hUCBSCs具有体外支持造血作用,与细胞因子联合对促进脐血CD34+细胞扩增作用更加明显.hUCBSCs对促进巨核细胞扩增可能具有特殊的意义.     

不同刺激物对过敏性哮喘产妇脐血中嗜碱性粒细胞分泌IL-4的影响

目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴定细胞活性。在两组提纯后的嗜碱性粒细胞中分别加入ACM缓冲液(阴性对照)、肽聚糖(PGN)、粉尘螨浸液及甘露醇,采用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-4的质量浓度。结果细胞分选结果显示:嗜碱性粒细胞纯度为(95.64±3.15)%,回收率为(60.22±7.18)%;锥虫蓝染色显示细胞活性为(99.4±0.89)%。与阴性对照比较,经PGN、粉尘螨浸液和甘露醇刺激后的哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著升高(P<0.05或P<0.01);经PGN和甘露醇刺激后,哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著高于正常对照组(P<0.05和P<0.01)。结论 PGN、粉尘螨及甘露醇可刺激过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞IL-4的分泌增加,通过诱导辅助性T淋巴细胞亚群Th2细胞的分化,参与哮喘的发生和发展。     

Transwell培养体系中人AGM区基质细胞支持脐血CD34+细胞造血

[目的]探讨Transwell系统中人胚主动脉-性腺-中肾(AGM)区基质细胞对脐带血造血干/祖细胞的造血能力长期维持及扩增的作用.[方法]采用免疫磁珠方法分离人脐带血CD34 细胞,接种于底层铺有人AGM区基质细胞的Transwell培养板的Inserts中,非接触共培养7～35 d,每星期取样检测细胞总数,用半固体培养基分析CFU-C及HPP-CFU集落形成数,流式细胞术检测CD34 、CD34 CD38-细胞百分率.[结果]在Transwell中非接触共培养条件下,人AGM区基质细胞培养体系较胚胎躯干基质细胞和无饲养层培养体系对有核细胞总数、CFC和CD34 细胞均具有明显的扩增作用,共培养14 d的CD34 、CD34 CD38-造血干/祖细胞均获得峰值扩增(2.62±0.8和2.15±1.04,P<0.05),而MNC总数和CFC均在21 d获得最大扩增(32.5±4.3和4.2±0.6倍,P<0.05).克隆分析发现CFU-Mix、CFU-GM、BFU-E在共培养4～5星期后均仍然可见.原始祖细胞HPP-CFC在3星期也得到2.23倍的扩增,较空白及hFT对照组均有显著性差异(P<0.05),并在共培养35 d后仍可见HPP-CFU集落形成.[结论]人AGM区基质细胞hAGM-S3/hAGM-S4均具有造血支持作用,在非接触共培养条件下中可长期维持脐血中造血干/祖细胞的多系造血能力和高增殖潜能达21～35 d,对脐血CD34 /CD34 CD38-细胞数也有一定程度的扩增作用.     

人脐血CD34+细胞体外DEXTER基质细胞培养的动态观察

目的 动态观察人脐血CD34^ 细胞DEXTER基质细胞培养的情况。方法 应用MACS磁珠分离系统分离脐带血CD34^ 细胞，按照DEXTER法行脐血基质细胞培养，观察不同时间、不同细胞因子组合基质细胞的生长状态。结果 SCF及SCF BFGF组合可促进基质细胞集落的生成，脐血基质细胞在生长情况、组成成分、细胞形态等方面与骨髓基质细胞有不同的生物学特性。结论 脐血CD34^ 细胞在生长因子的辅助下能促进基质细胞集落的形成，有望成为新的基质细胞来源。     

IL-3基因cDNA的克隆、测序及其在脐血造血干细胞中的表达

目的:克隆人IL- 3基因cDNA ,构建真核表达质粒并转导脐带血造血干细胞(HSC) ,探讨IL -3在HSC中的表达情况,从而为脐血HSC扩增及移植奠定基础。方法:从人外周血单个核细胞中提取IL -3mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应(RT- PCR)扩增IL -3cDNA ,通过T/A克隆法,构建真核表达型载体pcDNA3/IL- 3。将pcDNA3/IL -3质粒转导脐血HSC ,并于1～7d检测IL- 3表达情况。结果:pcDNA3/IL -3重组质粒的插入基因与I-L 3基因序列相同;pcDNA3/IL- 3转导脐血HSC后,经检测能够有效表达。结论:成功克隆了hIL- 3基因cDNA并构建了重组质粒pcD -NA3/IL- 3,该质粒转导脐血HSC后,能在短期内有效表达。     

Bioactive proteins in healthy pregnancies and preeclampsia: relevance to hypertension and proteinuria

Background Bioactive proteins,such as cytokines and chemokines,have not been systematically evaluated in healthy and preeclamptic pregnancies.We aimed to investigate the difference of these proteins between healthy and preeclamptic pregnancies in order to help clarify their potential roles in the pathogenesis of hypertension and proteinuria in preeclampsia.Methods Samples of amniotic fluid and maternal/umbilical cord blood were collected from normal pregnancies and women with preeclampsia for examination of bioactive proteins.Fifty-three pregnant women were enrolled in this study.Of them,30 pregnant women were recruited as healthy controls,and 23 pregnant women were diagnosed with preeclampsia.An antibody array was used to screen for higher levels of cytokines and related proteins in amniotic fluid than in the blood samples,and these proteins were then selected for quantification by immunoassay.Results Interleukin-1 receptor 4,hepatocyte growth factor,and urokinase plasminogen activator receptor were significantly elevated in the blood of preeclampsia patients.In particular,interleukin-1 receptor 4 was 8-fold higher in preeclampsia patients than in the healthy pregnancies.Moreover,in cord blood samples hepatocyte growth factor and interleukin-8 were significantly higher in preeclampsia patients.Conclusions Because of the biologic activities,Interleukin-1 receptor 4,hepatocyte growth factor,urokinase plasminogen activator receptor and interleukin-8 in maternal and/or cord blood could play a role in the pathogenesis of hypertension and proteinuria in preeclampsia.     

多种细胞因子对人骨髓基质细胞生长的影响

目的:探讨多种细胞因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法:分离人骨髓单个核细胞,经培养获得骨髓基质细胞(BMSC),分别用不同的细胞因子组合作用于BMSC,MTT法测细胞增殖。采用Mini MACs系统阳性分离纯化脐血CD34+细胞,用BMSC结合不同的细胞因子组合培养14天后计数CFU-Mix集落数。结果r:hGM-CSF结合FL、SCFI﹑L-6对BMSC生长的增殖作用最明显;BMSC联合SCFI、L-3、FL、G-CSF、EPO对促进CD34+细胞体外集落形成的作用最明显。结论:细胞因子作用下的BMSC扩增有可能应用于造血损伤修复。