葡萄糖和谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长代谢的影响

在生物反应器的批培养过程中考察了葡萄糖及谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长及代谢的影响。当葡萄糖浓度降至1～4mmol／L，谷氨酰胺浓度降至0．4～2mmol／L时，细胞生长并未受到明显影响，但细胞代谢途径发生转换，乳酸及氨的生成显著减少。葡萄糖和谷氨酰胺浓度的比例对杂交瘤细胞的生长及代谢也有影响，葡萄糖相对较多时，其细胞得率小，乳酸得率大；而当谷氨酰胺相对较多时，其细胞得率小，氨得率大。实验结果表明谷氨酰胺与葡萄糖的能量代谢在某种程度上可进行相互补充。     

底物限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响

考察了葡萄糖或谷氨酰胺限制的批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。葡萄糖或谷氨酰胺限制时最大活细胞密度基本相同,为(1.0±0.1)×106cells/mL。葡萄糖限制时,乳酸生成减少,YLac/Glc降低,YCell/Glc增加,提示葡萄糖更多地参与三羧酸循环。谷氨酰胺限制时,氨和丙氨酸生成减少,YAmm/Gln增加,YAla/Gln减小,提示谷氨酰胺的能量利用率提高。谷氨酰胺缺失时异亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸等替代谷氨酰胺,维持细胞生长和单抗合成,产物是甘氨酸和天冬氨酸。单抗生成与细胞生长关联,并且细胞停止生长后单抗仍生成。细胞死亡阶段的qMAb约是生长阶段的一半。葡萄糖和谷氨酰胺共限制下细胞对单抗的生产能力比葡萄糖和谷氨酰胺单独限制时小。     

谷氨酰胺对杂交瘤细胞生长代谢的影响

研究了不同浓度的谷氨酰胺对分泌抗小细胞肺癌单克隆抗体的2F7杂交瘤细胞生长、葡萄糖消耗、乳酸及氨的生成等代谢过程的影响。在细胞培养箱中,用含不同浓度谷氨酰胺的培养液培养2F7杂交瘤细胞,培养条件为pH 7.2～7.4,温度37℃,5%CO_2、95%空气。实验表明,适宜于2F7杂交瘤细胞生长的谷氨酰胺浓度为2.5 mmol/L,谷氨酰胺浓度与细胞的葡萄糖消耗呈反比,与乳酸生成浓度呈反比,与氨的生成浓度呈正比。     

rCHO细胞无血清适应及悬浮培养

考察了血清对rCHO(C28)细胞生长与产物(HBsAg)表达的影响,发现φ血清<0.01时细胞出现明显的代谢转换;考察了微量元素、氢化可的松、混合脂类与短多肽混合物(TL混合物)对细胞的影响,建立了适于rCHO(C28株)生长的无血清培养基MT-SFM;在将细胞从有血清转到无血清状态时,阶段性降血清比直接降血清更有利于rCHO(C28)细胞的无血清适应;当细胞适应了MT-SFM无血清培养基后,批培养中细胞的最大平均比生长速率可达0.65d-1,产物HBsAg的滴度在32～64之间。     

葡萄糖限制的流加培养中杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成

考察了葡萄糖或谷氨酰胺限制的批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。葡萄糖或谷氨酰胺限制时最大活细胞密度基本相同,为(1.0±0.1)×106cells/mL。葡萄糖限制时,乳酸生成减少,YLac/Glc降低,YCell/Glc增加,提示葡萄糖更多地参与三羧酸循环。谷氨酰胺限制时,氨和丙氨酸生成减少,YAmm/Gln增加,YAla/Gln减小,提示谷氨酰胺的能量利用率提高。谷氨酰胺缺失时异亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸等替代谷氨酰胺,维持细胞生长和单抗合成,产物是甘氨酸和天冬氨酸。单抗生成与细胞生长关联,并且细胞停止生长后单抗仍生成。细胞死亡阶段的qMAb约是生长阶段的一半。葡萄糖和谷氨酰胺共限制下细胞对单抗的生产能力比葡萄糖和谷氨酰胺单独限制时小。     

谷氨酰胺对肠粘膜细胞凋亡影响的研究进展

谷氨酰胺(glutamine,Gln)是血液循环和组织内自由氨基酸池中含量最丰富的氨基酸,参与多种代谢必需物质的合成,并为肠粘膜和其他增生活跃的细胞(如免疫细胞)提供主要的能量[1].     

表皮生长因子、谷氨酰胺对小肠上皮细胞生长和分化的影响

探讨了EGF、谷氨酰胺，以及两者联合使用原代培养的小肠上皮细胞增殖和分化的影响。结果显示：单独使用EGF或谷氨酰胺均能促进肠上皮细胞的生长，使ALP活性升高，CK活性下降，EGF和谷氨酰胺合用后对肠上皮细胞产生协同的营养作用。联合用药的效果远比单独用药明显，讨论了CK、ALP变化的生物学意义，MTT显色法和EGF、谷氨酰胺促进肠上皮细胞生长的作用机理。认为上述研究结果将为临床联合使用细胞生长因子和肠营养素提供理论依据。     

膳食纤维和谷氨酰胺对大鼠氨基酸代谢的影响

肠外和某些肠内营养可引起肠功能改变 ,促使细菌移位 ,而补充谷氨酰胺或膳食纤维的肠内营养可扭转这一现象[1] 。作者以大鼠肠内营养加化疗为动物模型 ,前瞻性研究肠内营养液中补充膳食纤维和谷氨酰胺对创伤后血浆、肌肉和小肠游离氨基酸的变化。为临床应用提供理论依据。一、材料与方法1 动物实验 :取健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 5 0只 ,体重 180～2 0 0ｇ,适应环境 1周后进行胃造瘘术 ,步骤如下 :大鼠术前禁食 12ｈ ,称重后 ,用质量浓度为 10 %的戊巴比妥钠按 45ｍｇ/ｋｇ进行腹腔内麻醉 ,上腹正中切口长约 2ｃｍ进腹 ,于胃底前壁用 3 0丝线…     

生物反应器培养Vero细胞的生长代谢与限制因素研究

目的研究生物反应嚣大规模培养Vero细胞生产疫苗细胞生长代谢与限制因素。方法采用微载体培养系统进行细胞培养，同时进行细胞记数、消化和贴壁实验。结果细胞培养过程中测得饱和溶解氧浓度系数（Cm）为0．197mM，体积氧解析系数（Kla）为0，0158min^-1，同时随着葡萄糖消耗、乳酸生成，细胞停止生长并开始死亡。结论利用生物反应嚣培养细胞时细胞代谢与细胞密度、搅拌速率、温度通气流量、葡萄糖消耗、乳酸生成等有直接关系。     

柠檬酸对 CHO 细胞生长和代谢的影响

研究了重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO)批培养过程中柠檬酸对细胞生长和代谢的影响。结果表明:柠檬酸明显抑制了细胞的生长。与对照组相比,添加12 mm o l/L柠檬酸的处理组细胞的葡萄糖比消耗速率(QG lc)降低了37.5%,渗透压提高了10.0%,乳酸生成量与葡萄糖消耗量的比值增加了27.0%,氨生成量与谷氨酰胺消耗量的比值也增加了。在谷氨酰胺代谢过程中,更多的谷氨酰胺经谷草转氨酶途径生成α-酮戊二酸,参与能量代谢。柠檬酸促使细胞更多地被捕获在G 1期,阻碍细胞的DNA合成,抑制细胞增殖,并促进蛋白的表达。     

杂交瘤细胞流加培养过程中不同拟稳态下的代谢动力学分析

采用流加培养方式,实现了杂交瘤细胞在营养物富裕、葡萄糖限制和谷氨酰胺限制3种条件下的拟稳态培养。代谢动力学分析表明:葡萄糖限制时,葡萄糖比消耗速率(qGluc)降低到1.1×10-9mmol/(cell·d),相比营养物富裕时降低了40%以上;乳酸生成量降到最低。谷氨酰胺限制时,谷氨酰胺的最小比消耗速率(qGln)约为0.28×10-9mmol/(cell·d),相比营养物富裕时降低了56%以上;氨的比生成速率降低到0.23×10-9mmol/(cell·d),营养物富裕时为0.93×10-9mmol/(cell·d);丙氨酸的生成降到最低。3种拟稳态下单抗的比生成速率都在29×10-9~37×10-9mg/(cell·d)。本文的流加培养设计方法为快速认识细胞的代谢规律,设计相应的培养基和调控策略,实现细胞高密度和产物高浓度的培养过程提供了指导。     

乳酸对海水鱼类细胞系CHSE生长和代谢的影响

在鲑鱼胚胎细胞(CHSE)培养中，低乳酸浓度(1．1～6．14mmol／L，相应渗透压为644～673kPa)对细胞生长无明显影响，主要的代谢特征基本不变；在高乳酸浓度(13．1～41，58mmol／L，相应渗透压为701～944kPa)下培养，细胞生长受到抑制，代谢发生明显变化。乳酸对cHsE细胞生长的抑制作用主要由乳酸导致培养基pH下降和渗透压增加引起。在CHSE细胞批培养中，维持正常的pH，7mmol／L的乳酸浓度，不会明显抑制CHSE细胞的生长。     

温度对重组BHK细胞生长、代谢和vWF蛋白表达的影响

通过重组幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)在不同温度下的批培养和脉冲培养,研究了温度对重组BHK细胞生长、代谢以及血管性血友病因子(vWF)蛋白表达的影响。相对于37℃,升高和降低温度的培养都降低了细胞的生长速率和密度,降温的作用更明显,主要表现为延长了细胞生长的迟滞期。在不同温度的脉冲培养中,细胞的比生长速率变化不大,表明进入对数生长期后,细胞生长对一定范围的温度变化不敏感。培养温度对细胞群体中处于S期的细胞比例影响不大,但在33℃和39℃下培养,细胞群体中处于G0/G1期的细胞比例有明显升高,处于G2/M期的细胞比例下降。当培养温度降低到33℃时,细胞群体中发生凋亡的细胞数随着温度升高而增加。温度的降低能显著提高单个细胞的vWF蛋白表达能力,在33℃下培养,vWF平均比生产速率提高了45%。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响Ⅲ.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0～ 8.9mmol/L范围时 ,丙氨酸对细胞生长影响不大 ,对单抗的生成没有直接影响 ,但对细胞代谢有较大的影响。随着丙氨酸浓度的提高 ,葡萄糖的消耗增加 ;同时 ,乳酸的生成增加 ,而丙氨酸和氨的生成减少