15-羟基前列腺素脱氢酶基因转染对人胃癌细胞生长和迁移的影响

目的:探讨含有NAD+依赖性l5-羟基前列腺素脱氢酶(NAD+-dependent 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase, 15-PGDH)的真核表达质粒(pcDNA3/15-PGDH)转染对人胃癌细胞生长和迁移的影响. 方法:Real time PCR检测多种胃癌细胞株中15-PGDH的表达情况.双酶切方法鉴定15-PGDH真核表达质粒pcDNA3/15-PGDH后,应用Lipofectamine 2000将其转染入胃癌细胞SGC7901中.MTT法检测质粒转染对胃癌细胞增殖的影响,划痕实验观察质粒转染对胃癌细胞迁移的影响,软琼脂克隆形成实验观察质粒转染对胃癌细胞克隆形成的影响.结果:SGC7901细胞中15-PGDH表达显著偏低.pcDNA3/15-PGDH质粒转染入SGC7901细胞的效率较高,转染后24 h及48 h时pcDNA3/15-PGDH组的15-PGDH mRNA表达量分别是pcDNA3空质粒组的188倍和271倍.pcDNA3/15-PGDH质粒转染后SGC7901细胞增殖、迁移和克隆形成能力均显著低于空质粒组和未转染组(P<0.05). 结论:15-PGDH基因转染可显著抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,推测15-PGDH可能是抑制胃癌发生、发展的重要因素之一.     

CacyBP编码基因对胃癌细胞多药耐药性形成的影响

目的：探讨CacyBP在胃癌多药耐药机制中的作用。方法;构建CacyBP正义核酸真核表达载体pcDNA3.1/hCacyBP ,以脂质体将其导入胃癌药敏细胞SGC7901,以RT－PCR检测hGacyBP mRNA水平的变化。以MTT检测SGC7901及转染细胞对ADR的药物敏感性;以流式细胞仪（FCM）检测SGC7901及转染细胞内ADR的蓄积浓度及细胞周期。结果：转染pcDNA3.1CacyBP 的SGC7901,其hCacyBP mRNA表达水平显著高于空载体转染及未转染之SGC7901,且细胞生存率亦有所增高,未转染之SGC7901及分别转染空载体或pcDNA3.1/hCacyBP 之SGC7901细胞,平均ADR蓄积浓度分别为5．64,5．49和5．17。与未转染之SGC7901相比,转染pcDNA3.1/hCacyBP 和空载体的SGC7901细胞G1期减少G2期及S期增高,结论：CacyBP在胃癌MDR机制中可能有一定作用。     

反义survivin核酸增强胃癌细胞对多西他赛敏感性及其逆转耐药机制的探讨

目的探讨反义survivin核酸(anti-pcDNA3-svv)对胃癌细胞系SGC7901的凋亡诱导和化疗增敏作用,及其与多药耐药基因(mdr-1)的相关性。方法采用电转染法转染胃癌细胞系SGC7901,并筛选阳性克隆。以Western blot法检测survivin蛋白的表达,用透射电镜观察转染后对SGC7901的凋亡诱导作用,RT-PCR检测mdr-1 mRNA的表达,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。诱导SGC7901细胞耐药,检测耐药mdr-1和survivin的表达。结果转染anti-pcDNA3-svv的SGC7901细胞中,survivin蛋白表达较未转染组明显降低;透射电镜下,转染组细胞呈凋亡晚期变化;转染组的mdr-1 mRNA较未转染组明显降低,转染组与未转染组的MDR指数分别为0.196±0.013和3.126±O.019;转染组多西他赛的IC50值为(16.7±1.98)μg/L,而未转染组为(55.7±1.89)μg/L,差异有统计学意义。耐药SGC7901细胞的survivin mRNA表达随着mdr-1 mRNA表达增加而明显增强。结论反义survivin核酸可诱导SGC7901细胞凋亡,增强多西他赛化疗敏感性,其逆转耐药的机制与mdr-1低表达有关。     

蛇毒cystatin基因转染抗人胃腺癌细胞体外侵袭作用的研究

目的:探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对人胃腺癌细胞SGC7901侵袭转移的抑制作用.方法:采用人工拼接方法合成蛇毒cystatin cDNA,构建pcDNA3.1/sv-cystatin真核表达质粒,经脂质体转染将pcDNA3.1/sv-cystatin质粒和pcDNA3.1质粒分别导入胃腺癌细胞系SGC7901:利用RT-PCR和Western blot检测SGC7901细胞中sv-cystatin基因的表达;应用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析svcystatin表达对SGC7901细胞粘附、运动和侵袭能力的影响.结果:转染sv-cystatin基因后,SGC/sv-cystatin细胞克隆中可检测到sv-cystatin的明显表达,SGC/sv-cystatin细胞的运动能力和体外穿越重建基底膜的能力明显低于转染空载体细胞和未转染的SGC7901细胞,但其体外粘附能力未见明显变化.结论:sv-cystatin基因的表达可使胃癌SGC7901细胞体外运动能力及侵袭能力明显减弱,提示sv-cystatin具有抑制胃癌细胞侵袭转移的作用.     

茉莉酸甲酯对胃癌SGC7901细胞生长抑制机制探讨

目的:探讨茉莉酸甲酯(MJ)对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用及其机制。方法:四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞生长活性;Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡细胞核的形态学变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。结果:MTT法显示,MJ对胃癌SGC7901细胞生长有显著抑制作用,且呈剂量-时间依赖关系,0.5、1.0和2.0mmol/L MJ作用6h后,抑制率分别为(7.10±0.84)%、(18.22±1.82)%和(26.89±1.56)%,溶剂对照组为(0.43±0.26)%,顺铂(DDP)组为(10.44±1.17)%,总体比较差异有统计学意义(F=232,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均<0.01;采用MJ上述3种浓度作用12h后,抑制率分别为(12.44±1.20)%、(32.70±1.29)%和(52.94±2.29)%,溶剂对照组为(0.31±0.41)%,DDP组为(22.60±1.97)%,总体比较差异有统计学意义(F=1 013,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均<0.01;MJ三种浓度作用24h后,抑制率分别为(17.37±1.95)%、(41.79±4.40)%和(71.93±4.65)%,溶剂对照组为(0.34±0.21)%,DDP组为(27.72±2.45)%,总体比较差异有统计学意义(F=444,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均<0.01;其中以浓度为2.0mmol/L MJ作用24h后,对SGC7901细胞的抑制率效果最佳。荧光染色法观察MJ能够诱导人胃癌SGC7901细胞株的凋亡。流式细胞检测显示,MJ可促进胃癌SGC7901细胞的凋亡,凋亡率为(68.14±7.91)%;与溶剂对照组(6.98±1.45)%相比,差异有统计学意义,P=0.013。蛋白质印迹法检测显示,MJ可上调凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达;事先采用辣椒素受体拮抗剂(Cap)预处理,MJ的抗胃癌SGC7901细胞的效应可被消除,与MJ单独给药组相比,MJ对癌细胞的生长抑制率下降为(38.79±2.77)%,P=0.05;凋亡细胞明显减少;肿瘤细胞凋亡率降为(39.81±4.57)%,P=0.045;凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9表达也降低。结论:MJ有显著抑制胃癌SGC7901细胞增殖的作用;辣椒素受体(VR1)可能介导了MJ对SGC7901细胞增殖的抑制作用,使细胞内凋亡信号通路激活,促进了肿瘤细胞的凋亡。     

白杨黄素对人胃癌细胞SGC7901的放疗增敏作用及其相关机制研究

目的:探讨白杨黄素对人胃癌SGC7901细胞增殖的放射增敏作用及其相关机制.方法:应用克隆形成实验分别检测不同浓度白杨黄素及60Co γ射线联合应用对人胃癌细胞系SGC7901细胞生存率的影响;应用吖啶橙(AO)/溴化乙碇(EB)荧光染色和TUNEL法分别检测白杨黄素与60Co γ射线联合应用后对人胃癌细胞系SGC7901细胞凋亡的影响;应用Westen-blot检测与细胞凋亡调控相关的蛋白Caspase-3、Survivin和Bcl-2的表达情况.结果:白杨黄素能够明显增强60Co γ射线对人胃癌SGC7901细胞克隆集落形成的抑制作用;增强60Co γ射线导致的人胃癌SGC7901细胞的凋亡;白杨黄素能够上调60Co γ射线处理过后人胃癌SGC7901细胞内活性Caspase的表达,下调细胞内凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2的表达.结论:对于胃癌细胞系SGC7901,白杨黄素可以作为一种有效的放射增敏剂.     

miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响

背景与目的：既往研究表明微小RNA-486-5p(miR-486-5p)在多种肿瘤的进展中起重要作用,但其在胃癌中作用的研究较少,本研究旨在探讨miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法：使用实时定量PCR(quantification real-time PCR,qRT-PCR)检测胃癌细胞株SGC7901及胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-486-5p的表达,构建miR-486-5p过表达质粒,使用脂质体法瞬时转染胃癌细胞株SGC7901,qRT-PCR检测转染细胞后miR-486-5p的表达丰度,噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测细胞的增殖及凋亡情况,Transwell小室迁移实验检测细胞的迁移能力。结果：miR-486-5p在SGC7901细胞中表达明显下调,SGC7901细胞转染miR-486-5p过表达质粒后,miR-486-5p表达明显上调,细胞增殖、迁移能力降低,凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-486-5p可抑制胃癌细胞株SGC7901的增殖和迁移。     

MicroRNA let - 7f 对胃癌细胞株 SGC7901 / ADR 耐药性的影响

目的：通过检测胃癌细胞株SGC7901及其阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中microRNA let-7f的表达差异,探讨let-7f表达与胃癌细胞对ADR耐药的关系.方法：通过实时荧光定量PCR比较SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞中 let-7f表达水平的差异;MTT法检测SGC7901,SGC7901/ADR及转染let-7f mimic后SGC7901/ADR的药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况.结果：qRT-PCR结果显示,let-7f在SGC7901/ADR细胞中的表达较在SGC7901中的表达显著降低（ P＜0.05）.MTT法结果显示SGC7901与SGC7901/ADR两种细胞阿霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（0.95 ±0.08）g/L和（5.40 ±0.28）g/L.SGC7901/ADR细胞转染let-7f mimic后,let-7f表达显著上调,并且对阿霉素的IC50明显降低（ P＜0.05）.凋亡检测结果显示,转染let-7f mimic后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加（ P＜0.05）.Western Blot结果表明相较于转染let-7f negative control（NC）组,转染let-7f mimic组cleaved-Caspase-3表达显著降低（P＜0.05）,而两组中的Bcl-2表达水平无差异.结论：let-7f在胃癌阿霉素耐药细胞株SGC7901/ADR中的表达显著降低,逆转let-7f表达可增加其对阿霉素敏感性,并诱导其凋亡.     

MASPIN真核表达载体的构建及对胃癌细胞SGC7901的诱导凋亡作用

背景与目的:MASPIN基因与多种恶性肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、浸润、转移和凋亡中起着十分重要的作用.本研究通过构建MASPIN基因真核表达载体,分析MASPIN过表达对胃腺癌细胞株SGC7901凋亡的影响.方法:构建MASPIN/PCR2.1表达载体,转染胃癌细胞株SGC7901.RT-PCR和Western bolt检测MASPIN基因、Bax/Bcl-2基因表达变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特征性DNA梯形带;采用Annexin V-FIFC/PI检测凋亡率.结果:酶切证实成功构建真核表达质粒MASPIN/PCR2.1:转染重组质粒组MASPIN mRNA(33.6±1.2)和蛋白水平(23.4±1.6)的表达明显高于未处理组(13.7±2.0、12.0±1.3)和空质粒组(15.0±1.5、12.3±1.5,P<0.05);凝胶电泳观察到特征性DNA梯带;各组细胞均有凋亡率的增加且呈时间依赖性:转染重组质粒/TRAIL作用组最高,12、24、48 h分别达到8.0%、16.3%、25.8%,转染重组质粒组为3.0%、8.2%、14.4%,TRAIL作用组为4.1%、9.8%、15.9%(P<0.05);48 h转染重组质粒/TRAIL组Bax mRNA和蛋白表达(55.3±2.1、75.4±1.3)高于转染重组质粒组(34.3±1.2、40.7±1.8.P<0.05)和TRAIL作用组(43.2±1.8、36.2±1.3,P<0.05);48 h转染重组质粒/TRAIL组、转染重组质粒组、TRAIL作用组Bcl-2 mRNA表达为28.3±2.5、34.3±1.2、32.8±2.1(P<0.05).蛋白表达为17.4±1.5、45.1±2.1、42.8±1.5(P<0.05).结论:上调MASIPIN基因的表达能显著增加胃癌细胞对凋亡刺激的敏感性.其机制可能通过上调Bax,下调Bcl-2基因的表达诱导胃癌细胞凋亡.     

尼美舒利逆转人胃癌细胞耐药的实验研究

目的:研究环氧化酶 -2 (COX -2)选择性抑制剂尼美舒利(nimesulide,NIM)对丝裂霉素 (mitomycin,MMC)抑制体外培养人胃癌细胞株 SGC 7901 及其耐药亚系 SGC 7901/VCR的细胞增殖及诱导凋亡的影响,初步探讨 NIM逆转人胃癌细胞耐药的机制。方法: 1) MTT比色法及集落形成实验研究 NIM对 MMC抑制人胃癌细胞 SGC 7901,及其耐药亚系 SGC7901/VCR细胞增殖的影响; 2)流式细胞仪技术及吖啶橙(acridine orange, AO)荧光染色研究NIM对 MMC诱导人胃癌细胞 SGC 7901,及其耐药亚系 SGC 7901/VCR 细胞凋亡的影响。结果:1) 联合应用 NIM 与单用 MMC 比较,SGC 7901细胞株中,MMC对 SGC 7901 细胞的半数抑制浓度(IC50 )降低 0. 74μg/mL,集落形成率下降 46 4%。SGC 7901/VCR 细胞株中, IC50 从 > 2. 0 μg/mL 下降到 0 .65μg/mL,集落形成率下降 31%;2) SGC 7901 细胞株及其耐药亚系 SGC 7901/VCR细胞株中,NIM+ MMC 组的染色阳性细胞数分别为47 .00±1 .00、30 .33±4 .16,较其他组别均有显著升高,流式细胞仪分析细胞凋亡结果与其基本一致。结论: 1) COX 2 选择性抑制剂 NIM能增强MMC抑制人胃癌细胞株 SGC 7901,及SGC 7901/VCR的细胞增殖和诱导其凋亡的作用;2)NIM对体外培养的人胃癌细胞株的多药耐药有一定的逆转作用。     

小干扰RNA靶向MIF对胃癌细胞SGC 7901增殖和凋亡的影响#br#

目的探讨靶向巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的小干扰RNA（siRNA）对胃癌细胞SGC 7901增殖和凋亡的影响。 方法取对数生长期的SGC 7901细胞，采用脂质体法分别转染靶向人MIF的siRNA（siMIF组）或阴性对照序列（NC组），48 h后采用Western blotting检测MIF蛋白的表达情况，MTT法观察转染后24、48、72 h的细胞增殖情况，流式细胞仪检测转染后72 h的细胞凋亡率，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax的表达变化。 结果siMIF组转染48 h后的MIF相对表达量为0321±0104，低于NC组的1078±0212，差异有统计学意义（P＜005）。siMIF组转染48～72 h后的细胞增殖率低于NC组，差异有统计学意义（P＜005）。转染MIF siRNA 72 h后，siMIF组的细胞凋亡率为（235±36）％，高于NC组的（47±17）％，差异有统计学意义（P＜005）。siMIF组Bcl 2的相对表达量为0663±0209，低于NC组的1129±0178，而Bax相对表达量为0981±0225，高于NC组的0587±0254，以上差异均有统计学意义（P＜005）。 结论siRNA靶向沉默MIF能够降低SGC 7901细胞中MIF蛋白表达，抑制SGC 7901细胞的增殖并促进凋亡，在胃癌的靶向治疗中有一定前景。     

小干扰RNA靶向MIF对胃癌细胞SGC 7901增殖和凋亡的影响#br#

目的探讨靶向巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的小干扰RNA（siRNA）对胃癌细胞SGC 7901增殖和凋亡的影响。 方法取对数生长期的SGC 7901细胞,采用脂质体法分别转染靶向人MIF的siRNA（siMIF组）或阴性对照序列（NC组）,48 h后采用Western blotting检测MIF蛋白的表达情况,MTT法观察转染后24、48、72 h的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后72 h的细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax的表达变化。 结果siMIF组转染48 h后的MIF相对表达量为0321±0104,低于NC组的1078±0212,差异有统计学意义（P＜005）。siMIF组转染48～72 h后的细胞增殖率低于NC组,差异有统计学意义（P＜005）。转染MIF siRNA 72 h后,siMIF组的细胞凋亡率为（235±36）％,高于NC组的（47±17）％,差异有统计学意义（P＜005）。siMIF组Bcl 2的相对表达量为0663±0209,低于NC组的1129±0178,而Bax相对表达量为0981±0225,高于NC组的0587±0254,以上差异均有统计学意义（P＜005）。 结论siRNA靶向沉默MIF能够降低SGC 7901细胞中MIF蛋白表达,抑制SGC 7901细胞的增殖并促进凋亡,在胃癌的靶向治疗中有一定前景。     

Midkine shRNA对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究shRNA干扰midkine对胃肿瘤细胞SGC7901生物学特性的影响。方法：构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染SGC7901细胞,检测细胞的增殖和克隆形成能力以及细胞凋亡情况。结果：与对照组相比,转染重质粒后1—5天,SGC7901细胞增殖明显受到抑制（P〈0．01）,细胞形成克隆数明显降低（P〈0．01）,并且有明显的亚二倍体峰出现（P〈0．05）。结论：针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞SGC7901 midkine表达,细胞增殖及克隆形成能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

重组人 ZNF278 促进胃癌细胞系 SGC7901 增殖的研究

目的：构建pcDNA3．1-ZNF278重组人真核表达质粒,研究ZNF278对胃癌细胞增殖和周期的影响。方法：PCR扩增正常人胃黏膜组织中的ZNF278基因,并用EcoRI和HindIlI双酶切,与酶切后的pcDNA3．1-myc—his载体连接,转化DH50t大肠杆菌,克隆筛选,提取重组质粒,酶切鉴定并测序。重组人ZNF278真核表达质粒转染胃癌细胞系SGC7901,定量PCR和Westernblot技术检测ZNF278表达状况,利用MTr和细胞记数法检测细胞增殖,同时分析细胞周期变化。结果：测序证实pcDNA3．1-ZNF278真核表达质粒构建成功,并成功转染SGC7901细胞,检测确认ZNF278表达上调,转染重组pcDNA3．1-ZNF278质粒的SGC7901细胞较对照组生长加快,促进细胞周期进入s期。结论：pcDNA3．1-ZNF278重组质粒构建成功,并可促进胃癌细胞系SGC7901细胞增殖和细胞进入分裂期。     

雷帕霉素联合紫杉醇对SGC-7901增殖影响的研究

目的：研究雷帕霉素联合紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测经雷帕霉素、紫杉醇和雷帕霉素＋紫杉醇作用后人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-la（hypoxia-inducible{actor-1alpha,HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）蛋白表达,两因素析因设计方差分析法进行统计分析。结果：雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞增殖抑制率分别为（25．43±1．98）％、（27．28±3．34）％和（53．64±1．99）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可抑制细胞增殖,联合作用对细胞增殖抑制率影响极显著,F-57．471,P〈0．001;两药联合指数〉1．15,雷帕霉素和紫杉醇具有协同作用。雷帕霉素、紫杉醇及雷帕霉素联合紫杉醇处理SGC-7901细胞后细胞凋亡率分别为（16．25±1．86）％、（21．80±3．12）％和（38．60±3．78）％,雷帕霉素或紫杉醇单独作用均可诱导细胞凋亡,两药联用细胞凋亡率显著增加,P=O．0163;雷帕霉素和紫杉醇具有协同诱导SGC-7901细胞凋亡作用。紫杉醇处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达量分别为0．598±0．089和0．4204±0．091,VEGF蛋白表达下降,P=0．001;而HIF_1a蛋白表达无明显变化,P=0．434。雷帕霉素处理细胞后,HIF-1d及VEGF蛋白相对表达量分别为0．416±0．034和0．376土0．022,表达均显著下降,P值分别为0．016和0．001;而两药联合处理细胞后,HIF-1α及VEGF蛋白相对表达分别为0．209±0．027和0．156±0．015,均显著降低,F值分别为18．322和25．525,P值均为0．001。2种药物对SGC-7901细胞HIF-1aTYcVEGF蛋白表达抑制起到了显著的协同作用。结论：雷帕霉素联合紫杉醇可显著抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,2种药物具有协同抗肿瘤作用。     

抑制核转录因子活化逆转胃癌细胞株耐药性研究

目的　探讨核转录因子（ＮＦ-κＢ）的活化在胃癌细胞株耐药性机制中的作用。方法　用阿霉素（ＡＤＭ）诱导培养胃癌细胞耐药亚株ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ,ＭＴＴ法检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率的变化,免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株ＮＦ κＢ的活化情况。吡咯烷二硫代氨基甲酸脂（ＰＴＤＣ）抑制ＮＦ-κＢ活化,并检测ＡＤＭ对胃癌细胞株的细胞毒作用。结果　ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ的ＩＣ_５０为２.６３μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１的ＩＣ_５０为０.２９μｇ／ｍｌ,ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ相对耐药度较亲本细胞提高了８.９倍。４８ｈ内ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率随ＡＤＭ浓度增加而升高,随着作用时间延长而升高;１０μｇ／ｍｌＡＤＭ分别作用４８ｈ时ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞株发生的凋亡率为（４８.５３±１.０２）％和（１７.５３±１.０２）％。免疫细胞化学染色显示ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ胃癌细胞９ｈ后可检测到ＮＦ-κＢ核移位,最高达到６５％;ＡＤＭ作用ＳＧＣ７９０１胃癌细胞株１８ｈ后可检测到少量ＮＦ-κＢ核移位;所有的细胞株ＮＦ-κＢ核移位均于２４ｈ后减弱;ＰＴＤＣ抑制核转录因子活化后ＡＤＭ细胞毒效应增强（Ｐ＜０.０５）。结论　ＮＦ-κＢ活化所导致的胃癌细胞株凋亡率下降在胃癌细胞株耐药性机制中发挥一定作用,抑制ＮＦ-κＢ活化后可以逆转胃癌细胞株对ＡＤＭ耐药性。     

马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的  探讨马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞,分别用不同浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL）马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞,以生理盐水溶液为阴性对照组,5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照组,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 不同浓度马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长和药物浓度的提高而增加。作用48 h后,200 μg/mL、300 μg/mL马齿苋多糖组的细胞增殖抑制率分别为（53.02±2.46）%、（57.20±2.14）%,与5-FU组细胞增殖抑制率（56.36±3.26）%相当（P＞0.05）;各浓度组的细胞凋亡率依次为31.92%、38.39%、40.45%、48.49%、55.71%,与阴性对照组比较均升高（均P＜0.05）;与5-FU组比较,低浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL）组的细胞凋亡率降低（P＜0.05）,而高浓度（300 μg/mL）组的细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论 马齿苋多糖可抑制胃癌SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡。     

多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂协同抗胃癌细胞增殖的研究

目的 探讨多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂对胃癌细胞增殖的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测多烯磷脂酰胆碱、奥沙利铂及两药联合对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞周期分布及凋亡情况;Western blotting检测各组凋亡相关蛋白细胞色素c、Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3和细胞周期调控蛋白细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结果 奥沙利铂显著抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;多烯磷脂酰胆碱促进胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用呈剂量依赖性（P＜0.05）;两药联合表现为协同作用,与奥沙利铂单药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。奥沙利铂使胃癌细胞增殖停滞在G0／G1期,并具有诱导胃癌细胞凋亡的作用;多烯磷脂酰胆碱可增强奥沙利铂诱导细胞凋亡及细胞周期停滞的作用,但这两种增强作用均与多烯磷脂酰胆碱的浓度无关（P＞0.05）。Western blotting检测结果显示,多烯磷脂酰胆碱联合奥沙利铂上调细胞色素c的水平并激活其下游蛋白Bcl-2、Bax、caspase-9、caspase-3,下调细胞因子D1、细胞因子E的表达水平。结论 多烯磷脂酰胆碱与奥沙利铂可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡,将细胞阻滞于G0／G1期,两药联合可能会产生协同抗肿瘤的作用。     

Effect of tissue factor on invasion inhibition and apoptosis inducing effect of oxaliplatin in human gastric cancer cell

Objective: Tissue factor (TF) is expressed abnormally in certain types of tumor cells, closely related to invasionand metastasis. The aim of this study was to construct a human gastric cancer cell line SGC7901 stably-transfectedwith human TF, and observe effects on oxaliplatin-dependent inhibition of invasion and the apoptosis induction.Methods: The target gene TF was obtained from human placenta by nested PCR and introduced into the humangastric cell line SGC7901 through transfection mediated by lipofectamine. Stably-transfected cells were screenedusing G418. Examples successfully transfected with TF-pcDNA3 recombinant (experimental group), and emptyvector pcDNA3 (control group) were incubated with oxaliplatin. Transwell chambers were used to show changein invasive ability. Caspase-3 activity was detected using a colorimetric method and annexin-V/PI doublestainingwas applied to detect apoptosis. Results: We generated the human gastric cancer cell line SGC7901/TFsuccessfully, expressing TF stably and efficiently. Compared with the control group, invasion increased, whereascaspase-3 activity and apoptosis rate were decreased in the experimental group. Conclusion: TF can enhancethe invasive capacity of gastric cancer cells in vitro. Its increased expression may reduce invasion inhibition andapoptosis-inducing effects of oxaliplatin and therefore may warrant targeting for improved chemotherapy.     

降低S100A6基因表达对胃癌细胞生物学特性影响的研究

目的：初步探讨S100A6基因对于胃癌细胞生长、增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及成瘤、浸润转移能力等恶性表型的影响。方法：S100A6基因的RNAi载体通过脂质体介导法转染S100A6基因高表达SGC7901细胞,后经G418压力筛选法获得稳定转染的细胞系,经过RT—PCR法、免疫细胞化学法及Western—bloting法证实。对稳定表达株进行鉴定,而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验等方法分析稳定表达株相关生物学特性与恶性表型的变化,每种检测实验均设立RNAi载体稳定转染细胞组、IMGS00空载体稳定转染细胞组和空白SGC7901细胞组。结果：稳定的S100A6基因RNAi细胞系经过RT—PER法、免疫细胞化学法及Western—bloting法证实,mRNA抑制率可达75％左右,蛋白产物的抑制率达85％左右。与转染IMGS00空载体及空白SGC7901胃癌细胞相比转染S100A6RNAi载体的稳定表达细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组（P〈0．05）;后两组之间亦无显著差异,细胞周期检测显示S100A6RNA干扰组G0—G1期比例显著高于对照组,而G2-M及S期比例显著低于对照组（P〈0．05）,其它各期细胞比例均无显著差异。平板克隆形成实验结果显示S100A6RNA干扰组克隆形成率显著低于对照组（P〈0．05）;细胞迁徙实验结果提示S100A6RNA干扰组穿膜率显著低于对照组（P〈0．05）。结论：S100A6基因可能具有促进细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,增加处于分裂期细胞的比例可能具有促进细胞分裂作用,并可促进胃癌细胞侵袭转移。降低S100A6基因表达可能抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。