对氨基水杨酸异烟肼对耐INH及PAS结核菌株的耐药实验观察

目的　了解对氨基水杨酸异烟肼 (PSNZ)对耐异烟肼 (INH)及对氨基水杨酸钠 (PAS)的结核菌株耐药情况。方法 用改良罗氏培养基观察36株同时耐INH和PAS及149株对INH和PAS敏感的结核菌株对PSNZ药敏结果。结果 36株耐INH和PAS的结核菌株在1μg/ml浓度下有44.4%的菌株对PSNZ有效,149株对INH和PAS均敏感的结核菌株在1μg/ml浓度下有96%的结核菌株对PSNZ敏感。结论 PSNZ对耐INH和/或PAS的结核菌株仍显示一定程度的敏感,是一种独立的抗结核药物,可作为治疗耐多药结核病的有效药物之一。     

卷曲霉素联合对氨基水杨酸异烟肼对耐药结核病治疗疗效分析

目的评价卷曲霉素联合对氨基水杨酸异烟肼在耐多药肺结核（MDR-TB）治疗中的疗效。方法将139例MDR-TB患者随机分为治疗组70例和对照组69例。化疗方案治疗组以卷曲霉素联合对氨基水杨酸异烟肼、吡嗪酰胺、丙硫异烟胺、喹诺酮类药物;对照组以链霉素联合利福喷丁、吡嗪酰胺、丙硫异烟胺、喹诺酮类药,疗程均为21个月,观察两组治疗前后的痰菌阴转、空洞闭合、X光变化及不良反应等。结果完成化疗疗程132例,治疗组64例,痰阴转率87.1%。对照组68例,痰阴转率58%,治疗组明显高于对照组（P〈0.01）;治疗组病灶显效率48.6%,空洞闭合率83.8%,优于对照组显效率31.9%,空洞闭合率65.7%（P〈0.01）;治疗组药物不良反应率为57.1%,对照组为53.6%,两组比较差异无显著性（P〈0.05）。结论含卷曲霉素联合对氨基水杨酸异烟肼的化疗方案治疗MDR-TB,痰菌阴转和病变吸收好转较优,药物不良反应低,可以在临床推广应用。     

结核杆菌异烟肼耐药的分子机制

在抗结核治疗策略中,异烟肼是最重要的一线药物.在过去50年的抗结核治疗中,异烟肼发挥了非常重要的作用,而耐异烟肼结核菌的出现使这种效果减弱.本文从异烟肼的抗结核机制人手,对异烟肼耐药的分子机制作一综述.     

对氨基水杨酸异烟肼联合左氧氟沙星、丙硫异烟胺治疗复治结核临床疗效观察

目的观察复治肺结核患者采用2PaVPtAK（Sm）/16PaVPt方案治疗的疗效。方法 2006年1月～2009年12月住院的57例复治涂阳肺结核病人采用2PaVPtAK（Sm）/16PaVPt方案治疗,疗程中第0、2、6、12月、18月摄胸片、痰抗酸杆菌检查。结果 57例中52例完成疗程,结束时痰菌阴转率82.7%,肝功异常率9.62%。2例因副反应停药,3例因治疗失败改个体化方案。结论对复治肺结核患者采用2PaVPtAK（Sm）/16PaVPt方案治疗的效果满意,药物副反应小,该治疗方案值得临床推广。     

对氨基水杨酸异烟肼治疗复治菌阳肺结核疗效评价

目的观察对氨基水杨酸异烟肼方案对复治菌阳肺结核的疗效。方法162例复治涂阳肺结核患者随机分为治疗组与对照组各81例,化疗方案分别为2RIAZES/6RIAE,2HRZES/6HRE。结果8个月后治疗组涂阳阴转率95%,培阳阴转率96%,而对照组涂阳阴转率80%,培阳阴转率85%,痰菌阴转率显著高于对照组。结论对氨基水杨酸异烟肼治疗复治涂阳肺结核有明显疗效。     

结核分枝杆菌耐对氨基水杨酸相关基因研究进展

对氨基水杨酸(PAS)是20世纪40年代研发的有效抗结核药物之一,其对结核分枝杆菌具有良好的抑制作用,与其他抗结核药物联用有利于增强其他抗结核药物疗效并减少其他抗结核药物耐药性。目前,PAS仍是世界卫生组织(WHO)推荐的有效抗结核药物之一,主要用于治疗耐多药结核病(MDR-TB)。近年来,结核分枝杆菌对PAS耐药现象逐渐增多,但具体耐药机制尚未完全清楚。本文综述了结核分枝杆菌耐PAS相关基因,旨在为结核分枝杆菌对PAS的耐药机制研究提供参考。     

异烟肼与力克肺疾对结核菌耐药情况分析

目的了解结核分枝杆菌对抗结核药物异烟肼、力克肺疾的耐药情况。方法采用绝对浓度法对结核分枝杆菌作异烟肼、力克肺疾耐药性试验。结果3087株结核分枝杆菌的异烟肼、力克肺疾总耐药率为51.60%、13.12%。异烟肼与力克肺疾相比耐药率高,两者之间有显著差异(P0.01)。结论临床上可以选用力克肺疾替代异烟肼作为初治、复治、耐药结核病的治疗用药和结核病感染者预防用药。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药基因突变及其分子流行病学调查研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG基因突变特点以及Spoligotyping分型和结核病流行关系。方法对123株结核分枝杆菌临床分离株，其中有药敏结果的98株，（耐异烟肼菌株45株；异烟肼敏感株53株）的katG基因进行DNA片断扩增然后进行SSCP分析；同时对其中的121株菌株进行Spoligotyping分型。结果45株耐INH结核杆菌株中，27株（60％）第315位点突变，低耐药菌株（1mg／L）第315位点突变率显著高于高耐药菌株（10mg／L；53株敏感株中无KatG基因315位密码子突变。对121株临床株的Spoligotyping DNA指纹分析，1型，（北京型）103株占84％（103／121），其它基因型18株，分散在13种基因型中。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG基因突变之间的关系；北京型感染是北京地区结核病流行的重要原因。     

异烟肼耐药肺结核患者对丙硫异烟胺和对氨基水杨酸的耐药情况分析

目的 分析异烟肼(INH)耐药肺结核患者对丙硫异烟胺(Pto)和对氨基水杨酸(PAS)的耐药情况,并分析inhA基因突变与Pto耐药的相关性。方法 采用回顾性分析的方法,收集2018年1月1日至2020年12月31日就诊于西安市胸科医院且符合入组标准的849例INH耐药肺结核患者对Pto和PAS的耐药资料及INH耐药基因(PCR熔解曲线法)。采用Kappa一致性检验进行inhA基因突变与Pto耐药的相关性分析。结果 849例INH耐药肺结核患者中,Pto的耐药率为3.89%(33/849),PAS的耐药率为11.90%(101/849)。518例行PCR熔解曲线检测INH耐药基因的患者中,katG基因突变率为73.75%(382/518),inhA基因突变率为15.83%(82/518),Pto耐药率为3.86%(20/518);82例inhA基因突变者中,Pto耐药7例(8.54%),与Pto耐药者中发生inhA基因突变者(35.00%,7/20)的一致性较差(Kappa=0.080)。结论 INH耐药肺结核对Pto的耐药率较低,对PAS的耐药率较高;inhA基因突变与Pto耐药的发生一致性较差。     

体外诱导对氨基水杨酸高浓度耐药结核分枝杆菌及其突变位点研究

目的:通过对实验室诱导产生的对氨基水杨酸(para-aminosalicylic acid, PAS)耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)和临床分离株进行全基因组测序，探索PAS的潜在作用机制和耐药性。方法:通过体外药物浓度梯度诱导法，将MTB标准菌株H37Rv诱导成标准耐PAS菌株及高水平耐药菌株，收集并保存每一代诱导菌株。用液体微孔板法检测上述诱导菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)及交叉耐药情况，筛选耐药水平相似的临床分离株。通过对PAS耐药的实验室突变株和临床分离株进行全基因组测序，从基因水平上探索MTB对PAS的耐药机制。结果:本研究在体外建立了耐PAS的MTB耐药动态变化模型。全基因组测序结果显示，PAS耐药可能与3个位点突变直接相关，分别是plcC(Q462R)、folC(S150R)和1个thyA上游位点(3074495G→A)。MTB对高水平的PAS耐药的产生除了基因突变因素以外，尚存在其他的调控机制。对PAS敏感和耐药的MTB临床分离株测序发现某些folC、thy...     

31株结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因检测及序列分析

目的了解贵阳地区分离的结核分枝杆菌katG基因、inhA启动子和oxyR-aphc间隔区基因突变特征。方法对31株结核分枝杆菌临床分离株（异烟肼耐药株17株,异烟肼敏感株14株）的katG基因、inhA启动子和oxyRaphc间隔区进行DNA片段的PCR扩增,并进行测序分析。结果 17株异烟肼耐药菌株中有16株检出katG基因突变,其中70.5%（12/17）为315位密码子变异,且变异类型均为AGC→ACC,敏感株未发现315位点突变。11株敏感菌和4株耐药菌在463位密码子发生变异,变异类型均为CGG→TGG,变异率分别为78.6%（11/14）和23.5%（4/17）,差异无统计学意义。有12株耐药株的变异类型为katG基因双重位点突变,其中10株为katG315（AGC→ACC）和463（CGG→TGG）位变异,463（CGG→TGG）和299（GGC→AGC）变异及463（CGG→TGG）和419（GAC→CAC）位变异各1株。2株异烟肼耐药菌检出oxyR-aphC启动区G32A突变,其中1株为联合katG463和299位突变。结论贵阳株结核杆菌菌株异烟肼耐药基因突变具有多态性,主要的变异类型为katG315位点突变。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药性——一个不容忽视的问题

异烟肼是控制结核病的主要药物之一。2018年WHO报告的结核病初治病人中利福平敏感的异烟肼耐药率明显高于2017年的耐多药/利福平耐药率。我国结核病人的异烟肼总耐药率明显高于利福平总耐药率。异烟肼耐药容易导致治疗失败或复发。异烟肼耐药机制复杂,多个基因的突变均与异烟肼耐药有关,然而这些基因突变与表型的关系尚未完全清楚,直接影响了分子药敏快速诊断方法的建立。基因组学数据证明异烟肼耐药相关基因突变先于利福平耐药性相关基因突变发生。异烟肼耐药结核分枝杆菌容易诱发菌株获得额外耐药性,其机制可能与外排泵以及氧化应激机制有关。总之,结核分枝杆菌异烟肼耐药问题不容忽视,因此应该加强异烟肼作用机制、耐药机制、协同作用机制等方面的研究。     

结核分枝杆菌katG基因突变对异烟肼耐药性的影响

目的探讨结核分枝杆菌katG基因突变TGG328TTT(Trp328Phe)对异烟肼耐药性的影响。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv和临床突变株DNA为模板,采用PCR扩增野生型和双突变型(含Trp328Phe与Met420Thr)katG基因,采用重叠延伸PCR技术构建单突变型(Trp328Phe)katG基因。将各katG基因重组至质粒pET22b(+),再导入表达宿主菌BL21(DE3)pLySs中,IPTG诱导目的蛋白表达,亲和层析法对重组KatG蛋白进行分离纯化。通过各重组KatG蛋白与过氧化氢和邻联大茴香胺反应,检测受试菌过氧化氢酶和过氧化物酶的活性。结果成功获得纯化的KatG蛋白。相比野生型KatG(19.05U/mg和7.05×10-3 U/mg),单突变型KatG(10.50U/mg和2.23×10-3 U/mg)过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降44.9%和68.3%,双突变型KatG(11.88U/mg和3.31×10-3 U/mg)则分别下降37.6%和53.0%。结论 katG基因(Trp328Phe)突变引起KatG酶活性部分缺失,与异烟肼耐药有关,可作为耐药菌株基因检测的标志用于基因芯片的开发。双突变时KatG蛋白活性较高,提示katG-328TTT具有代偿性突变的作用。     

对氨基水杨酸（PAS）耐药与结核分枝杆菌thyA基因突变的研究

目的 检测结核分枝杆菌临床分离株对氨基水杨酸（PAS）耐药和胸苷酸合成酶基因（thyA）突变的关系，以探讨结核分枝杆菌PAS耐药的分子机制。方法95株结核分枝杆菌临床分离株中的51株PAS敏感株和44株PAS耐药株的PAS耐药相关基因thyA基因进行PCR扩增，扩增产物纯化后进行序列测定，与结核分枝杆菌标准株H37Rv的野生型岫，A基因序列进行对比，判断这些临床分离株的thyA基因有无突变。结果51株PAS敏感株thyA基因未检出突变。44株PAS耐药株中有16个临床分离株的thyA基因检测到突变，突变检出率为36．4％（16／44）。突变类型包括置换、颠换、插入、缺失，均为单碱基改变或单碱基缺失，其中2株为thyA基因2个位点联合突变。结论结核分枝杆菌tyA基因突变是其产生PAS耐药的重要原因之一。结核分枝杆菌胸苷酸合成酶是PAS作用的重要靶位。     

耐异烟肼和链霉素的结核分枝杆菌临床分离株与敏感株差异蛋白表达研究

目的 鉴定结核分枝杆菌对异烟肼和链霉素耐药相关的潜在蛋白。 方法 以药物敏感株（01105）和标准株H37Rv为对照,核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)结合Nano液相色谱-串联质谱分析仪（LC-MS-MS）技术和生物信息学,鉴定并相对定量结核分枝杆菌对异烟肼与链霉素耐药的临床分离株02166菌体蛋白。 结果02166菌株分别与01105菌株和H37Rv菌株比较差异表达蛋白为153个和130个,02166菌株与01105菌株和H37Rv比较差异表达蛋白均为86个(共同差异表达蛋白)。差异表达蛋白理论相对分子质量和等电点分布广泛,相对分子质量从7.63~326.22,等电点从3.74~12.48,其主要参与中间代谢、呼吸作用和脂类代谢。共同差异表达蛋白：9个核糖体蛋白（Rv0056、Rv0651、Rv0652、Rv0701、Rv0719、Rv1630、Rv2785c、Rv2909c和Rv3458c）在02166菌株中表达下调;5个蛋白（Rv0234c、Rv2466c、Rv2626c、Rv2986c和Rv3118）在02166菌株中呈显著差异表达,其中琥珀酸半醛脱氢酶（Rv0234c）和假定未知蛋白（Rv2466c）在02166菌株中表达上调倍数>1.2,DNA结合蛋白HU同系物hupB（Rv2986c）、假定未知蛋白(Rv2626c和Rv3118)在02166菌株中表达下调倍数<0.5。 结论iTRAQ发现了耐异烟肼和链霉素的结核分枝杆菌临床分离株差异表达蛋白,为进一步探讨结核分枝杆菌异烟肼或链霉素耐药机制奠定了基础。     

结核分枝杆菌耐异烟肼菌株与敏感菌株的比较蛋白质组学研究

目的研究结核分枝杆菌耐异烟肼菌株与敏感菌株间蛋白质表达的差异。方法应用双向电泳技术比较9株耐异烟肼菌株与7株敏感菌株的全菌蛋白表达图谱，采用基质辅助激光解吸及电离飞行时间质谱仪进行质谱分析，通过蛋白质数据库对耐药菌株和敏感菌株差异表达蛋白质相应的基因进行序列分析。结果耐异烟肼结核分枝杆菌中有20个蛋白质斑点表达量显著增加，质谱分析获得5个明确的肽质量指纹图谱，分别为Rv1446c、Rv3028c、Rv0491、Rv2971和Rv2145。结论差异表达蛋白的发现可能对新型抗结核药物靶点和耐异烟肼结核病诊断的分子标志物研究提供依据。     

结核分枝杆菌KatG-ACT271CCT(Thr271Pro)突变与异烟肼耐药关系的研究

目的 探讨结核分枝杆菌katG ACT271CCT(Thr271Pro)基因点突变对异烟肼耐药性的影响方法 应用基因克隆技术合成野生型katG、突变型katG(AGC315ACC)和katG(ACT271CCT)基因片段,分别重组至质粒pET22b(+),转入表达菌BL21(DE3)pLySs,IPTG诱导目的蛋白表达,亲和层析法对目的蛋白分离纯化。最终检测重组katG蛋白过氧化物酶及过氧化氢酶活性。此外,通过软件AutoDock4.0采用半柔性对接方式分别模拟野生型katG蛋白、Thr271Pro突变型katG蛋白与异烟肼相互作用结果 成功获得纯化katG重组蛋白。相比野生型katG蛋白(过氧化氢酶活性361.5 U/mg和过氧化物酶活性77.6 U/mg),Thr271Pro突变型katG蛋白过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降56%和63%(158.8 U/mg和28.7 U/mg),而Ser315Thr突变型katG蛋白过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降74%和75%(96.2 U/mg和19.7 U/mg)。分子对接结果提示,异烟肼与Thr271Pro突变型katG蛋白结合自由能较野生型升高,Thr271Pro突变蛋白与异烟肼结合的亲和性降低。271位氨基酸突变后, Thr271Pro突变型katG蛋白氧化反应活性空腔发生一定的变形结论 katG Thr271Pro基因突变引起katG蛋白酶活性部分缺失和氧化反应活性空腔发生变形,导致异烟肼耐药。     

福建省结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因突变特征初步分析

目的 了解福建省结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因的突变特征,为异烟肼耐药快速检测方法的建立提供一定的科学依据。方法 对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的75株耐多药和10株全敏感结核分枝杆菌分离株,进行katG、inhA、oxyR-ahpC基因片段PCR扩增并测序分析,用RD105缺失基因检测法进行北京家族基因型鉴定,使用卡方检验分析相关性。结果 10株全敏感株未检测到突变。75株耐多药结核分枝杆菌检测到72株katG、inhA、oxyR-ahpC发生单一或联合基因突变,突变率为96.0%(72/75)。其中,65株(86.7%,65/75)发生katG突变,涉及5个位点,最常见位点突变的密码子是315,突变率为82.7 %(62/75),最常见突变形式为Ser315Thr(77.3%,58/75);8株(10.7%,8/75)发生inhA突变,突变形式均为C(-15)T;5株(6.7%,5/75)发生oxyR-ahpC突变,突变形式为C(-39)T或C(-46)A。katG、inhA和oxyR-ahpC 在北京家族基因型菌株和非北京家族基因型菌株中的突变率分别为83.9 %(47/56)、12.5%(7/56)、7.1 %(4/56)和94.7 %(18/19)、5.3 %(1/19)、5.3 %(1/19),差异无统计学意义(P值分别为0.23、0.38、0.78)。结论 福建省结核分枝杆菌异烟肼耐药性相关基因突变绝大多数发生在katG、inhA和oxyR-ahpC基因位点,且以katG突变为主。初步分析显示北京家族基因型菌株流行与异烟肼耐药基因突变特征无关。     

1例服用对氨基水杨酸异烟肼引起过敏反应的抢救与护理

患者,男,78岁因反复咳嗽咳痰,10＋年,复发伴喘累,咯血1周入院。入院检查：T36.4℃,P 82次/min,R 21次/min,BP 110/70 mmHg,WBC 8.2×109/L,N 0.65,血气分析：pH7.4,PaO265 mmHg,PaCO231 mmHg,HCO3-19 mmol/L,BE-9 mmol/L、SPO292%。胸CT示左上肺毁损,左肺下叶可见片状影,密度不均,边界欠清,其内可见多个大小不等的空洞,余肺还见多个大小不等透亮影。