中低强度激光人工皱缩在扩张期囊胚玻璃化冷冻复苏中的应用研究

目的通过中低强度激光人工皱缩囊胚腔联合快速玻璃化冷冻在囊胚冻融周期中的应用,为囊胚冷冻复苏周期提供稳定的技术基础。方法选取2015年9月-2017年3月在该院常规体外受精培养至第3天移植和或冷冻后剩余的可利用胚胎在三气培养系统中进行囊胚培养,参照Gardner囊胚评分标准,将发育至第5天或第6天的4CB以上的囊胚分成试验组和对照组。试验组采用中低强度激光打孔,使囊胚腔皱缩后行玻璃化冷冻,对照组直接行玻璃化冷冻。分析177例解冻囊胚周期,比较解冻囊胚周期两种方法冷冻复苏的复苏率、临床妊娠率、种植率、多胎妊娠率及流产率等。结果试验组解冻囊胚复苏率高于对照组,流产率、多胎率低于对照组,但差异无统计学意义(P0.05);试验组临床妊娠率、胚胎着床率显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);单囊胚移植多胎率显著低于双囊胚移植(P0.05)。结论应用中低强度激光人工皱缩囊胚腔联合玻璃化冷冻技术,能够提高囊胚冻融周期的胚胎复苏率、妊娠率、着床率,降低流产率、多胎率。     

不同发育速度的囊胚在单囊胚冻融移植周期中临床应用价值探讨

目的探讨单囊胚冻融移植周期中不同发育速度囊胚的发育潜能,为进一步改进单囊胚冷冻复苏方案提高FET妊娠率提供依据。方法回顾性分析2012-2016年于华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖中心进行单囊胚复苏移植患者的资料,按照囊胚发育速度分为3组:D5组939例,D6组1 221例,D7组48例,比较3组之间妊娠结局和新生儿结局。结果D5组、D6组、D7组的临床妊娠率为60. 81%、50. 12%、29. 17%,活产率为50. 69%、39. 23%、18. 75%,3组间差异均有统计学意义(P0. 01)。3组间早期流产率、晚期流产率、异位妊娠率差异无统计学意义(P0. 05)。3组间孕周、分娩方式、单卵双胎比例、性别比、婴儿出生体质量差异均无统计学意义(P0. 05)。结论在冻融单囊胚移植周期中D5组临床结局优于D6、D7组,复苏周期可以优先考虑D5优质囊胚移植。但是D7延迟培养也能使部分D5、D6无囊胚形成的患者获益,从而获得健康活产的机会。     

卵裂期胚胎不同解冻时间点对其囊胚培养及妊娠结局的影响

目的:探讨卵裂期冻融胚胎不同解冻时间点对囊胚培养后移植妊娠结局的影响。方法:回顾性分析2013—2016年在江门市中心医院行冻融胚胎囊胚培养477例患者共520周期的资料。依据胚胎复苏时间不同分为D2组(D2 15:00—16:00胚胎复苏)、D3组(D3 8:00—9:00胚胎复苏),2组均于D5、D6 8:00-9:00观察囊胚形成。D5:D2、D3组培养时间分别为65 h、48 h;D6:D2、D3组培养时间分别为89 h、72 h。结果:2组的囊胚形成率(48.10%vs.46.59%)、优质囊胚率(39.70%vs.34.22%)、临床妊娠率(70.08%vs.69.48%)、生化妊娠率(7.48%vs.7.98%)、胚胎种植率(55.93%vs.58.06%),差异均无统计学意义(均P0.05)。优胚与非优胚在48 h、65 h囊胚形成率分别为30.37%vs.13.28%、62.64%vs.40.14%,差异有统计学意义(均P0.05)。优胚与非优胚在72 h、89 h囊胚形成率分别为32.32%vs.27.59%、2.17%vs.2.06%,差异无统计学意义(均P0.05)。不同培养时间移植周期的临床妊娠率、胚胎种植率:48 h组65 h组72 h组89 h组,而生化妊娠率:89 h组48 h组65 h组72 h组,但各组间比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:冻融胚胎囊胚培养可以根据工作需要选择在D2 15:00—16:00或D3 8:00—9:00进行胚胎解冻复苏;在D2 15:00—16:00解冻复苏,多数在D5即可形成囊胚进行移植;在D3 8:00—9:00解冻复苏,优胚在D5或D6均有形成囊胚可能,而非优胚需要培养较长的时间在D6形成囊胚。     

选择性单囊胚移植在辅助生殖技术中的应用研究

目的探讨选择性单囊胚移植是否能够在维持临床妊娠率不降低的同时,有效降低多胎妊娠率,为临床提供参考依据。方法将愿意行囊胚培养及选择性单囊胚移植的417例不孕患者作为观察组,本研究仅分析新鲜周期将单囊胚冷冻,解冻周期复苏移植的病例;将不愿意行选择性单囊胚移植,坚持行卵裂期胚胎移植的280例患者设为对照组,也仅分析解冻周期复苏移植的病例;另将冷冻胚胎解冻移植的患者设为自然对照组;分析各组的临床妊娠率、胚胎着床率及多胎妊娠率等。结果观察组临床妊娠率为50. 34%,胚胎种植率为50. 34%,多胎妊娠率为1. 35%。对照组临床妊娠率为45. 85%,胚胎种植率为30. 10%,多胎妊娠率为32. 76%。自然对照组临床妊娠率为43. 67%,胚胎种植率为27. 66%,多胎妊娠率为25. 90%。结论选择性单囊胚移植能够在维持临床妊娠率不降低的同时,有效降低多胎妊娠率。     

4859枚非优质胚胎和废弃胚胎囊胚培养的临床观察

目的:探讨不孕症患者辅助生殖治疗过程中废弃的胚胎和新鲜周期移植后不够冷冻标准胚胎培养的临床意义。方法:收集本院不孕症患者接受辅助生殖治疗后第3天(D3)废弃的胚胎和移植后不够冷冻标准的胚胎,序贯培养至囊胚,将可利用囊胚进行冷冻保存。分析年龄、不孕类型、受精方式、胚胎卵裂球数目、集合培养胚胎的个数、胚胎质量分级等与囊胚形成的关系。同时比较冻融周期移植正常的卵裂期胚胎和培养形成的可利用囊胚的妊娠和出生婴儿情况。结果:共收集4859枚废弃的胚胎和新鲜周期移植后不够冷冻标准的胚胎,培养至第6天(D6),形成囊胚2020枚(41.6%),优质囊胚661枚(32.7%)。D3胚胎卵裂球数目≥10个,囊胚和优质囊胚的形成率最高,7~9个次之,6个时囊胚和优质囊胚的形成率急剧下降。D3Ⅰ~Ⅱ级胚胎囊胚形成率和优质囊胚显著高于Ⅲ、Ⅳ级胚胎(P0.05)。集合培养有利于囊胚的形成,每个微滴培养1个胚胎时优质囊胚形成率最低。冻融胚胎移植周期中移植D3胚胎和囊胚的临床妊娠率、流产率、双胎率、活产率、出生体重均为无统计学差异,其D3胚胎着床率低于囊胚且有统计学差异。结论:部分非优质胚胎和废弃胚胎仍具有发育潜能,囊胚培养有助于筛选出高发育潜能胚胎并进行保存,冻融囊胚移植可提高患者卵子的利用率,节约患者的治疗成本。     

卵裂期胚胎不同解冻时间点对其囊胚培养及妊娠结局的影响

目的：探讨卵裂期冻融胚胎不同解冻时间点对囊胚培养后移植妊娠结局的影响。方法：回顾性分析2013-2016年在江门市中心医院行冻融胚胎囊胚培养477例患者共520周期的资料。依据胚胎复苏时间不同分为D2组（D2 15：00-16：00胚胎复苏）、D3组（D3 8：00-9：00胚胎复苏）,2组均于D5、D6 8：00-9：00观察囊胚形成。D5：D2、D3组培养时间分别为65 h、48 h;D6：D2、D3组培养时间分别为89 h、72 h。结果：2组的囊胚形成率（48.10% vs. 46.59%）、优质囊胚率（39.70% vs. 34.22%）、临床妊娠率（70.08% vs. 69.48%）、生化妊娠率（7.48% vs. 7.98%）、胚胎种植率（55.93% vs. 58.06%）,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。优胚与非优胚在48 h、65 h囊胚形成率分别为30.37% vs. 13.28%、62.64% vs. 40.14%,差异有统计学意义（均P＜0.05）。优胚与非优胚在72 h、89 h囊胚形成率分别为32.32% vs. 27.59%、2.17% vs. 2.06%,差异无统计学意义（均P＞0.05）。不同培养时间移植周期的临床妊娠率、胚胎种植率：48 h组＞65 h组＞72 h组＞89 h组,而生化妊娠率：89 h组＞48 h组＞65 h组＞72 h组,但各组间比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论：冻融胚胎囊胚培养可以根据工作需要选择在D2 15：00-16：00或D3 8：00-9：00进行胚胎解冻复苏;在D2 15：00-16：00解冻复苏,多数在D5即可形成囊胚进行移植;在D3 8：00-9：00解冻复苏,优胚在D5或D6均有形成囊胚可能,而非优胚需要培养较长的时间在D6形成囊胚。     

冻融周期中D 5、D 5加D 6、D 6期囊胚移植妊娠结局比较

目的比较分析冻融囊胚移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)周期移植第5 d(D 5)双囊胚、第5 d+第6 d(D 5+D 6)混合双囊胚、第6 d(D 6)双囊胚的临床妊娠结局。方法回顾性分析2014年1月至2018年6月在邢台不孕不育专科医院接受FET且移植2枚囊胚的1 578个周期的临床结局,根据移植囊胚的发育天数分为3组:D 5组为解冻第5 d双囊胚移植组(821个周期);D 5+D 6组为解冻第5 d加第6 d各1枚囊胚移植组(226个周期);D 6组为解冻第6 d双囊胚移植组(531个周期)。结果 3组患者平均年龄、不孕年限、内膜厚度、基础卵泡刺激素等基础数值比较,差异无统计学意义(P0.05);D 5+D 6组的临床种植率(57.74%)、妊娠率(76.55%)高于D 5组(51.88%、69.06%)和D 6组(37.00%、56.12%)(P0.05);D 5组高于D 6组(P0.05)。结论 FET周期中移植D 5+D 6囊胚比单纯移植D 5或D 6囊胚有更好的妊娠结局,D 5囊胚比D 6囊胚有更好的妊娠结局。     

冻融移植D5非优质囊胚和D6优质囊胚对妊娠结局的影响

目的探讨解冻移植周期中D5非优质囊胚和D6优质囊胚移植对临床妊娠结局的影响。方法回顾性分析广州医科大学附属第三医院生殖医学中心2015年1月-2018年10月共1 083例单囊胚解冻移植周期,根据囊胚质量分为D5非优质囊胚组367例、D6优质囊胚组716例。该研究纳入的周期均为移植单个囊胚,且年龄≤40岁,移植次数为1~2次,并排除反复流产或染色体异常者。比较两组患者的临床结局,包括临床妊娠率、种植率、流产率及围生结局等。结果 D5非优质囊胚组患者年龄显著低于D6优质囊胚组[(32.67±4.87)岁与(33.62±4.68)岁],不孕年限[(4.45±1.32)年与(4.88±1.03)年]、原发不孕比例(45.23%与50.42%)及不孕因素为男方因素的比例(14.44%与16.20%)显著低于D6优质囊胚组,h CG阳性率(49.05%与42.32%)、临床妊娠率(41.96%与35.34%)及活产率(31.06%与27.09%)均显著高于D6优质囊胚组,差异均有统计学意义(均P0.05)。回归分析排除其他干扰因素后,D6组临床妊娠率仍显著低于D5组,差异有统计学意义(P0.05)。结论解冻移植周期中D5非优质囊胚比D6优质囊胚具有更好的临床妊娠结局。     

冻融周期中不同子宫内膜转化时间移植囊胚的妊娠结局分析

目的 比较冻融周期中不同子宫内膜转化时间移植囊胚的临床结局,探讨冻融移植周期中囊胚移植策略。方法 回顾性分析2021年5月至2021年12月于邢台不孕不育专科医院生殖医学中心采用激素替代周期或降调节-激素替代周期准备子宫内膜进行囊胚冻融移植245个周期的妊娠结局。根据孕酮转化子宫内膜时间及移植不同发育天数囊胚的情况分为4组：D6-5组(100个周期,孕酮转化子宫内膜第6天移植第5天囊胚),D7-5组(48个周期,孕酮转化子宫内膜第7天移植第5天囊胚),D6-6组(71个周期,孕酮转化子宫内膜第6天移植第6天囊胚),D7-6组(26个周期,孕酮转化子宫内膜第7天移植第6天囊胚),比较各组的临床妊娠率、种植率、异位妊娠率、流产率、活产率。结果 4组患者的年龄、不孕年限、不孕类型、治疗方式、体质量指数、AMH、不孕因素、移植日内膜厚度、胚胎移植个数、胚胎评价比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与D6-5组相比,D7-5组的胚胎着床率、临床妊娠率、活产率均有升高趋势;与D6-6组相比,D7-6组的胚胎着床率、临床妊娠率、活产率均有下降趋势;第6天囊胚与第5天囊胚相比,无论在转化子宫...     

两种冷冻载体在囊胚玻璃化冷冻复苏中的对比分析

目的对比分析两种商品化的冷冻载体,冷冻麦管(JY Straws)和冷冻环(Crystal Cap)在囊胚玻璃化冷冻复苏中的效果。方法 2013年7月-2016年1月,在该中心进行的囊胚复苏移植周期1 153例。囊胚均采用玻璃化冷冻复苏移植,冷冻麦管组449例,其中D5单囊胚移植142例、D5双囊胚移植174例、D6单囊胚移植69例、D6双囊胚移植64例;冷冻环组704例,其中D5单囊胚移植123例、D5双囊胚移植330例、D6单囊胚移植90例、D6双囊胚移植161例。对比分析两种冷冻载体各分组的临床妊娠情况。结果 D5单囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率和种植率均高于冷冻环组,57.75%vs.46.34%,但差异无统计学意义(P0.05);D5双囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率、种植率均高于冷冻环组,74.71%vs.68.18%、58.62%vs.53.03%,但差异无统计学意义(P0.05);D6单囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率和种植率均高于冷冻环组,42.03%vs.32.22%,但差异无统计学意义(P0.05);D6双囊胚复苏移植中,冷冻麦管组的临床妊娠率、种植率均略低于冷冻环组,51.56%vs.52.17%、33.59%vs.36.65%,但差异无统计学意义(P0.05)。结论两种冷冻载体均可以获得不错的临床结局,冷冻麦管作为新采用的冷冻载体可以放心使用。     

间苯三酚在冻融胚胎移植中的应用

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)术前应用间苯三酚增加临床妊娠率效果。方法:前瞻性随机对照,将2015年3~7月在本生殖中心接受IVF-ET≤35岁282人随机分为2组,间苯三酚组IVF-ET前3min静脉推注间苯三酚80mg,对照组术前不使用间苯三酚。助孕指征包括女方、男方或男女双方复合因素,不明原因不孕等。剔除子宫内膜7mm或反复种植失败,比较两组的临床妊娠率、流产率和异位妊娠率。结果:两组年龄、BMI、不孕年限、移植胚胎数、移植优胚数、子宫内膜厚度等均无差异。按移植优胚数分层,移植1个优胚时间苯三酚组的种植率高于对照组(33.6%比14.5%,P0.01),临床妊娠率高于对照组(49.1%比26.9%,P0.05)。移植2个优胚时间苯三酚组和对照组的种植率、临床妊娠率(46.4%比38.7%,68.9%比59.4%)差异均无统计学意义,两组异位妊娠率和流产率均无差异(P0.05)。结论:移植1个胚胎情况下,IVF-ET前静脉推注间苯三酚有助于提高胚胎种植率和临床妊娠率。     

补佳乐在冻融胚胎移植中的临床研究

目的探讨补佳乐在冻融胚胎移植中的临床应用,寻找影响妊娠结局的可能因素。方法对南京妇幼保健院生殖医学中心2011年应用激素替代（补佳乐）方案进行冻融胚胎移植准备的316例患者资料进行回顾性分析,观察冻融胚胎移植结局的影响因素。结果补佳乐应用的各组年龄比较,大于13天组患者的年龄偏大（t=0．04,P〈0．05）;补佳乐应用时间显示,大于13天组、12—13天组、小于8天组患者的内膜厚度与平均内膜厚度相比均有差异（t值分别为0．45、0．37、0．58,均P〈0．05）;各组间妊娠率无明显差别（χ2=1．37,P〉0．05）;妊娠组与未妊娠组比较,在年龄、内膜厚度、补佳乐用药天数、补佳乐用量上均无明显差别（t值分别为0．89、0．21、0．38、0．25,均P〉0．05）。结论应用补佳乐方案的冻融胚胎移植周期中,患者的年龄越大,应用补佳乐天数越长;应用补佳乐的天数及总量与内膜厚度及妊娠率并无显著性关系。     

长方案全胚胎冷冻保存后首次冻融胚胎移植时机研究

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者采用长方案行超排卵后全胚冷冻,首次冻融胚胎移植时机。方法选择青海省人民医院生殖中心171例IVF-ET患者,均采用促性腺激素释放激素激动剂长方案行控制性超排卵,取卵后行全胚冷冻,根据胚胎冷冻日到冻融胚胎移植日的间隔时间分为两组,分别为间隔短(≤69 d)组80例,间隔长(>69 d)组91例,比较两组患者获卵率、受精率、卵裂率、获胚胎数、优胚率、ET优胚胎率、临床妊娠率。结果两组患者年龄、基础内分泌、不孕原因、不孕年限、BMI、子宫内膜准备方案、胚胎种类及获卵数均无明显差异。间隔短(≤69 d)组患者HCG日雌二醇(E2)水平低于间隔长(>69 d)组患者,差异有统计学意义。间隔短(≤69 d)组患者卵裂率、优胚数、临床妊娠率均高于间隔长(>69 d)组,差异有统计学意义。结论促性腺激素释放激素激动剂长方案患者,首次行经后即可复诊行冻融胚胎移植准备。     

不同用药方案在冻融胚胎移植中的作用

目的 比较三种不同用药方案对冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)结局的影响,指导如何选择恰当的子宫内膜准备方式.方法 对我中心采用自然周期、激素替代周期(hormone replacement therapy,HRT)、促排卵周期(HMG)三种子宫内膜准备方案进行FET的124个周期进行回顾性分析,比较不同方案在子宫内膜厚度、临床妊娠率、胚胎种植率、流产率、分娩率等方面是否存在差异.结果 三组病人的不孕年龄,不孕年限,不孕原因,移植胚胎个数间差异无统计学意义.三种方案在子宫内膜厚度,临床妊娠率,种植率,流产率,分娩率上差异均无统计学意义.结论 自然周期、激素替代周期、促排卵周期在冻融胚胎移植中作为子宫内膜的准备方法均获得良好的临床结局,在实际操作中应遵循个体化用药方案.     

宫腔镜检查在冷冻胚胎移植前的应用价值

目的探讨宫腔镜检查在冷冻胚胎移植中的临床价值。方法选取2015年1月至2016年10月四川省妇幼保健院生殖中心278例首次体外受精-胚胎移植(in-vitro fertilization,IVF-ET)失败后拟行冻胚解冻移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)的患者,按其是否行宫腔镜检查分为宫腔镜组168例和对照组110例,比较两组妊娠结局,分析宫腔镜组宫腔异常的发生率和异常类型。结果宫腔镜组患者FET后胚胎着床率(38.2%)、临床妊娠率(56.5%)均高于对照组(30.2%、43.6%)(P0.05)。宫腔镜组168例患者中原发不孕63例,继发不孕105例,共检出79例(47.0%)宫腔异常,其中原发不孕组27例(42.9%),继发不孕组52例(49.5%);原发不孕组子宫内膜息肉的发生率(19.0%,12例)高于继发不孕组(7.6%,8例);继发不孕组宫腔粘连的发生率(12.4%,13例)高于原发不孕组(6.3%,4例)(P均0.05)。结论宫腔镜检查改善胚胎着床环境、提高胚胎种植率和临床妊娠率,可作为FET前的常规检查。     

Production of transgenic porcine blastocysts by hand-made cloning

Recently, a zona-free technique for bovine somatic cell nuclear transfer (NT) with no requirement for micromanipulation (i.e. hand-made cloning (HMC)) has been described. The present study demonstrates the application of the HMC technique in the production of transgenic porcine blastocysts. In vitro-matured zona-free porcine oocytes were bisected manually using a microblade and halves containing no chromatin (i.e. the cytoplasts) were selected. Two cytoplasts were electrofused with one transgenic fibroblast expressing enhanced green fluorescent protein and reconstructed embryos were activated in calcium ionophore (A23187) followed by 6-dimethylaminopurine. Subsequently, embryos were cultured in NCSU-23 medium supplemented with 4 mg mL(-1) bovine serum albumin for 7 days. In five replicates, 93.0 +/- 7.0% (mean +/- s.e.m.) of attempted reconstructed embryos fused and survived activation (31/31, 15/23, 28/28, 37/37 and 28/28). On Day 7 after activation, the respective blastocyst rates (per successfully reconstructed embryos) were 6% (2/31), 7% (1/15), 7% (2/28), 3% (1/37) and 7% (2/28), resulting in an average of 6.0 +/- 0.8%. Enhanced green fluorescent protein was expressed in all cells of all eight developing blastocysts. Efforts are now directed towards the production of offspring from such transgenic NT blastocysts.     

Vasoactive intestinal peptide influences hatching of ovine blastocysts

Expanded blastocysts collected from superovulated Sarda ewes were divided at random into four groups for culture in a simple medium that does not support blastocyst hatching (CZB) or a complex medium that is permissive to hatching (TCM 199), with or without vasoactive intestinal peptide (VIP), a known embryo mitogenic peptide. Plasminogen activator (PA) secretion after 24 h of culture, and the number of cells, diameter of blastocysts and hatching rate after 48 h of culture were compared. The results showed an increase in hatching rate (78.6 v. 6.7%; P<0.01), diameter and number of cells (220.89 v. 210.44 microm, P<0.01 and 246 v. 232, P<0.01 respectively) and caseinolytic areas (1.33 v. 0.92 cm, P<0.01) of blastocysts cultured in TCM 199 compared with those cultured in CZB. Supplementation of the culture media with VIP increased these parameters in CZB (P<0.01) and partially in TCM 199. In particular, cell number, diameter and PA activity were significantly higher (P<0.01) after culture with VIP in both media. Immunoneutralization of exogenous VIP in culture with anti-VIP antibody caused a decrease in the hatching rate (P<0.01) of embryos cultured in medium with VIP, similar to the rate in unsupplemented CZB (P<0.01). These results suggest a receptor-mediated response. In immunohistochemical studies, VIP was shown to bind receptors in hatched blastocysts demonstrating the VIP-receptor interaction, and VIP receptors of approximately 150 kDa were revealed by electrophoretic studies. In conclusion, ovine preimplantation embryos exhibit VIP receptors, providing a basis for a receptor-mediated influence of VIP in the hatching of ovine blastocysts.     

影响冻融胚胎存活的相关因素分析

目的:探讨年龄、受精方式、胚胎冷冻方法及胚胎冻存时间对冻融胚胎存活的影响.方法:回顾分析冻融胚胎移植(FET) 1255个周期,根据年龄、受精方式、胚胎冷冻方法及胚胎冻存时间进行分组,比较各组的冻融胚胎存活率、完全存活率及临床妊娠率.结果:玻璃化冷冻组冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率分别为93.4％、95.9％、48.8％,程序化冷冻组冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率分别为81.2％、54.9％、30.1％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);年龄、受精方式、胚胎冻存时间对冻融胚胎存活率及完全胚胎存活率无明显影响(P＞0.05).结论:玻璃化冷冻胚胎技术比程序化冷冻胚胎技术能获得更高的冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率,3年内的冻融胚胎可不考虑冻存时间对胚胎存活的影响.     

Latent injury in frozen-thawed bacteriophage T4Bo.

Two interesting new phenomena have been observed in suspensions of T4Bo bacteriophage which were frozen to temperatures below the eutectic temperature of the salt (sodium chloride) in the suspending medium. Approximately 10% of the phage appeared to survive such a phase change as determined by plaque titre. However, exposure of these survivors to ultrasonic vibration or repeated freezing showed them to be hypersensitive and thus latently injured. The hypersensitivity was lost on incubating the phage at 37 degrees C. for 3 hr. Furthermore, following a eutectic phase change, the surviving phage could be inactivated by rapid cooling to -90 degrees C. followed by slow rewarming. Such inactivation cannot be accounted for by accepted theories of freezing injury.