趋化因子MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠脊髓中的表达

目的:研究单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α与实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的关系。方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_(35-55)多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,用免疫组织化学方法观察EAE小鼠发病后第0天(初期)、第7天(高峰期)及第30天(恢复期)脊髓中MCP-1、MIP-1α的表达的变化,并通过免疫组化染色标记星形胶质细胞及小胶质细胞,判断MCP-1、MIP-1α的细胞来源。结果: MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠发病初期脊髓中有少量表达,发病高峰期表达增高,而恢复期无表达,MCP-1主要由星形胶质细胞产生,MIP-1α主要由小胶质细胞产生;对照组小鼠脊髓中则没有MCP-1、MIP-1α表达。结论:趋化因子MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠CNS不同胶质细胞中表达,是EAE发病早期募集免疫反应细胞向CNS浸润的重要致炎性因子。     

二甲双胍通过调节Treg细胞反应治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的给予实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠应用二甲双胍(MET)干预性治疗。观察MET对EAE小鼠发病情况及体内Treg细胞反应的作用。方法将雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE模型组和MET治疗组,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG35-55免疫小鼠建立EAE模型。自身免疫后第1天开始,按100mg·kg~(-1)·d~(-1)给予MET治疗组腹腔注射。正常对照组及EAE模型组小鼠给予等量的生理盐水每日腹腔注射作为对照。应用Knoz评分观察小鼠的神经功能评分,流式细胞学检测方法检测小鼠脾细胞中Treg细胞比例,ELISA方法检测脾细胞培养上清及血清中IL-10、TGF-β含量。qPCR方法检测小鼠脾及脊髓中Treg细胞转录因子Foxp3 mRNA表达水平。结果与EAE模型组相比,MET治疗组发病程度减轻(P0.01);脾细胞中Treg细胞比例增高(P0.01),脾细胞培养上清及血清中IL-10、TGF-β含量增加(P0.01);脾组织中Foxp3mRNA表达水平升高(P0.01);脊髓组织中Foxp3mRNA表达水平升高(P0.01)。结论 MET通过提高外周免疫器官及中枢神经系统的Treg细胞数量,增加抑制炎症因子的表达而达到对EAE模型小鼠的保护作用。     

载脂蛋白E对EAE星形胶质细胞的影响

目的探索载脂蛋白E(apolipoprotein E,apo E)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型小鼠病灶星形胶质细胞的影响。方法采用MOG35-55诱导apo E基因敲除的C57BL/6小鼠(apo E-/-EAE组)及野生型C57BL/6小鼠(普通EAE组),建立EAE模型。取免疫后35 d的EAE小鼠的大脑及脊髓切片,行HE染色,免疫组织化学染色法观察各组小鼠水通道蛋白4(AQP4)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 apo E-/-EAE组和普通EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP的表达量均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);apo E-/-EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP表达量均高于普通EAE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EAE中存在星形胶质细胞水肿、增生,apo E缺乏可以加重这一病变。     

地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠IL-17表达的影响

目的研究地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑及脊髓组织中IL-17表达水平及脾组织中Th17细胞比例的影响。方法将33只C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组和地塞米松组。EAE组及地塞米松组小鼠以MOG35-55进行免疫造模。地塞米松组小鼠自免疫当天至处死,隔日给予地塞米松磷酸钠注射液0.07mg·kg~(-1)腹腔注射。对照组及EAE组给予等量生理盐水。观察小鼠的发病情况及神经功能评分。应用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色、实时定量PCR、流式细胞学方法分别检测小鼠中枢神经系统炎症细胞浸润、IL-17阳性细胞表达、IL-17m RNA水平及脾组织Th17细胞比例。结果地塞米松组与EAE组比较,小鼠发病率及神经功能评分明显降低(P0.05)。与对照组比较,EAE组小鼠脑及脊髓组织中炎性病灶数明显增多(P0.05),IL-17阳性细胞数明显增多(P0.05),脊髓组织中IL-17m RNA水平明显升高(P0.05),脾组织Th17细胞比例明显升高(P0.05);与EAE组相比较,地塞米松组小鼠脑、脊髓及脾组织中上述指标明显降低(P0.05)。结论地塞米松可以降低EAE小鼠发病率,减轻发病时神经功能损伤程度以及脑和脊髓内炎性细胞浸润程度,并使IL-17mRNA、蛋白表达水平及Th17细胞比例下降。其神经保护作用可能是通过抑制IL-17/IL-23轴等免疫调节机制而实现。     

马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠Th1/Th2细胞炎症因子平衡的影响

目的探讨马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠白细胞介素-4(IL-4)、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)表达的调节作用。方法将8~10周雌性C57BL/6小鼠54只随机分成对照组、模型组、治疗组。每组再随机均分为发病后10d及20d亚组,每亚组9只。采用皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽0.1mL诱导EAE模型。自发病当天起,治疗组小鼠给予马索罗酚10mg/(kg·d)治疗,模型组及对照组给予等量5%二甲基亚砜(DMSO)10mL/(kg·d)处理。比较3组小鼠临床症状评分。应用实时定量PCR检测小鼠脊髓和脾组织中IL-4、IL-12、IFN-γmRNA表达水平。应用ELISA检测脑组织中IL-4、IL-12、IFN-γ蛋白表达水平。结果与模型组比较,治疗组小鼠临床症状较减轻(P0.05)。与模型组相比,治疗组小鼠10d时脊髓和脾组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),IL-4mRNA水平增高(P0.05),脑组织IL-12、IFN-γ蛋白水平降低(P0.05),IL-4蛋白水平增高(P0.05);与模型组相比,治疗组20d时脊髓组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),脑组织IFN-γ含量降低(P0.05)。结论马索罗酚可能通过降低脑、脊髓及脾组织中IL-12、IFN-γ表达,增加IL-4表达,调节Th1/Th2细胞炎症因子平衡,进而改善EAE小鼠疾病严重程度。     

二甲双胍抑制Th17细胞反应对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠应用二甲双胍(MET)干预,观察MET对EAE小鼠发病情况、神经功能评分的影响及其对小鼠体内Th17细胞反应的作用。方法以MOG35-55免疫雌性C57BL/6小鼠建立EAE模型。随机分成对照组、EAE组和MET治疗组,比较不同组小鼠神经功能评分。在发病高峰期,比较小鼠脊髓中炎性细胞浸润程度,脾细胞中Th17细胞比例,脾细胞培养上清及血清中IL-17A含量以及小鼠脾及脊髓中IL-17A、RORγt mRNA转录水平。结果与EAE组相比,MET治疗组发病率减低(P0.05),疾病严重程度减轻(P0.01);脾细胞中Th17细胞比例降低(P0.01),脾细胞培养上清及血清中IL-17A含量减少(P0.01);脾及脊髓组织中IL-17A、RORγt mRNA转录水平均降低(P0.01)。结论 MET通过抑制外周免疫器官及中枢神经系统的Th17细胞反应而对EAE小鼠起到保护作用。     

口服法舒地尔治疗EAE对巨噬细胞、T细胞及TLR/NF-B通路的作用研究

目的探讨口服盐酸法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)小鼠巨噬细胞及TLR/NF-B通路的作用。方法采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55peptide,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,将EAE小鼠随机分为EAE模型组和Fasudil治疗组,免疫后第3天给予Fasudil治疗组小鼠Fasudil灌胃干预,直到免疫后第27天,EAE模型组同样处理给予等量生理盐水。光镜观察脊髓组织CD4+T细胞/CD68巨噬细胞表达的变化,Western blot法测定脊髓诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、Toll样受体2(TLR-2)、TLR-4和磷酸化核因子B(p-NF-B)蛋白的表达,ELISA法测定培养72h脾细胞分泌细胞因子的含量。结果与EAE模型组比较,Fasudil组CD4+T细胞数和CD68巨噬细胞数明显减少(P0.01),巨噬细胞M1表型iNOS表达减少(P0.05),M2表型Arg-1表达增加(P0.01),炎性通路蛋白p-NF-B、TLR-2和TLR-4表达减少(P0.05),外周细胞炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)和IL-17分泌减少(P0.05),而IL-10分泌增加(P0.05)。结论口服Fasudil可抑制CD4+T细胞/CD68巨噬细胞的激活,促进巨噬细胞表型M1向M2转化,抑制脊髓组织中p-NF-B、TLR-2和TLR-4的表达,抑制外周免疫细胞炎性因子分泌,而增加IL-10的分泌。     

粪菌移植对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠肠道功能及细胞因子的影响

目的探讨粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠发病、肠道功能和细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法选择30只清洁级SPF级雌性C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组、EAE模型组、FMT干预组,每组10只。采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽35-55(MOG35-55)抗原免疫法制备EAE模型。FMT干预组于造模第2天给予粪便滤液0.4 mL灌胃,1次/d,共14 d;正常对照组、EAE模型组以相同方式给予等量生理盐水灌胃。观察各组小鼠发病情况;于EAE模型组和FMT干预组发病高峰时、正常对照组28 d时取小鼠粪便定量检测肠道菌群数量,计算双歧杆菌与肠杆菌的比值(Bifidobacterium/Enterobacter value,B/E值);ELISA法检测各组小鼠血清、脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果与EAE模型组比较,FMT干预组小鼠发病潜伏期、达高峰期时间延迟,神经功能评分减低(均P0.05)。EAE模型组B/E值小于1,FMT干预组B/E值大于1,且FMT干预组B/E值较EAE模型组高(P0.05)。与正常对照组比较,EAE模型组血清和脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均增加(均P0.05),而FMT干预组IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平较EAE模型组减低(均P0.05)。结论 EAE小鼠存在肠道菌群紊乱,定植抗力差,细胞因子表达升高;FMT能改善EAE小鼠肠道菌群紊乱,提高肠道定植抗力,减轻炎症反应和神经功能障碍。     

干扰素β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓中趋化因子MCP-1表达的影响

目的研究干扰素（IFN）β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠中枢神经系统（CNS）中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响，从趋化因子角度探讨IFNβ治疗多发性硬化（MS）的机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35～55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫C57BL／6小鼠建立EAE模型，干预组（n=12）在免疫当天至免疫后第16天隔日一次皮下注射10000单位IFNβ-1b，对照组（n=12）则同时予1mL PBS皮下注射。比较两组EAE小鼠的临床表现，并用免疫组织化学及原位杂交技术比较两组EAE脊髓中MCP-1表达及MCP-1mRNA水平的差异。结果与对照组相比，IFNβ-1b干预组小鼠发病明显延迟，症状明显减轻，同时脊髓中MCP-1的表达及MCP-1mRNA的水平显著下调。结论IFNβ-1b可抑制EAE小鼠CNS中趋化因子MCP-1的表达，这可能是其治疗MS的机制之一。     

载脂蛋白E拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨载脂蛋白E(Apo E)拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为Apo E拟肽组、EAE组和正常组,每组10只小鼠。EAE模型通过以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55为抗原诱导。Apo E拟肽组在免疫后第2 d到30 d每隔2 d按5 mg/(kg·d)背部皮下注射Apo E拟肽。EAE组和正常组均以等体积生理盐水替代。免疫后第0~35 d每日对小鼠进行神经功能评分。免疫后第35d解剖小鼠,分离大脑和脊髓并行HE染色。采用免疫组化染色法检测各组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9和TIMP-1的表达。结果正常组小鼠均未发病。Apo E拟肽组、EAE组的小鼠全部发病,但各有1只小鼠发病后死亡。Apo E拟肽组与EAE组的发病潜伏期差异无统计学意义(P=0.72)。Apo E拟肽组的神经功能评分在峰值和慢性期(第35 d)均明显低于EAE组(均P0.05)。HE染色示,正常组未见炎症细胞浸润;EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓均有不同程度的炎性细胞浸润,以脑干和脊髓较为明显;Apo E拟肽组小鼠CNS炎性细胞浸润相对于EAE组明显减少。EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓的MMP-9表达均高于正常组(均P0.05)。Apo E拟肽组小鼠大脑和脊髓的MMP-9表达要明显低于EAE组(均P0.05),其中Apo E拟肽组小鼠中脑和脊髓的MMP-9表达与正常组相比无明显差异(均P0.05)。正常组小鼠脊髓TIMP-1的表达明显高于EAE组和Apo E拟肽组(均P0.05)。而Apo E拟肽组与EAE组小鼠大脑、脑干和脊髓TIMP-1表达的差异均无统计学意义(均P0.05)。结论 Apo E拟肽能通过抑制大脑和脊髓MMP-9的表达改善EAE小鼠的症状。     

他汀类药物对EAE小鼠RhoA表达的影响

目的探讨他汀类药物能否抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型RhoA蛋白表达及其对小鼠发病情况的影响。方法随机将雌性C57BL/6小鼠分为EAE组、他汀治疗组和佐剂组3组。EAE组和他汀治疗组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG_(35-55))免疫小鼠建立EAE模型,佐剂组以生理盐水替代MOG_(35-55)同样方法注射;他汀治疗组自免疫后第3天始按体质量10 nag/(kg·d)予阿托伐他汀灌胃。观察3组小鼠发病情况及病理变化并测定脑组织中RhoA蛋白表达。结果与佐剂组相比,EAE组小鼠脑组织中RhoA蛋白表达明显增多(P0.01)。他汀治疗组脑组织RhoA蛋白表达及临床神经功能评分均较EAE组下降(P0.01)。结论 EAE小鼠RhoA蛋白表达上调。他汀类药物可能通过抑制RhoA蛋白表达治疗EAE。     

载脂蛋白E拟肽对EAE小鼠的髓鞘和轴突损伤的影响

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统髓鞘脱失和轴突损伤的影响。方法以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)为抗原建立EAE模型。将40只雌性C57BL/6J小鼠随机分为4组,即正常组、EAE组、正常治疗组和EAE治疗组,两个治疗组皮下注射ApoE拟肽。免疫组化法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)和神经丝轻链(NF-L)的表达。结果 EAE治疗组中脑和脊髓的MBP和NF-L的表达均高于EAE组(P<0.05)。结论 ApoE拟肽可能对EAE的髓鞘和轴突的损伤有保护作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑内主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原和分化群3ε的变化

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑内主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原(MHC-Ⅱ)和分化群3ε(CD3ε)的变化。方法 25只C57BL/6小鼠随机分为EAE组(n=13)和正常对照组(n=12)。应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55抗原诱导小鼠EAE模型。观察记录小鼠行为学变化;采用常规及髓鞘染色方法观察脊髓损伤和炎症细胞浸润程度;荧光定量PCR检测脑MHC-Ⅱ和CD3εmRNA的表达。结果 EAE组小鼠发病后EAE症状评分逐渐增加;脊髓炎症细胞浸润明显;髓鞘脱失较多;脑组织MHC-Ⅱ和CD3εmRNA表达显著高于正常对照组(均P<0.01),并与EAE症状评分呈正相关。结论 EAE小鼠脑内MHC-Ⅱ及CD3εmRNA表达水平增高与其病情严重程度一致。     

胞浆型磷脂酶A2在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓中的表达

目的研究胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠发病不同时期的表达。方法8～10周龄的雌性C57BL／6小鼠30只随机分为2组，EAE组（n=20）以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）35-55多肽加福氏完全佐剂皮下注射诱发EAE，对照组（n=10）则用PBS液取代MOG35-55多肽。用免疫组织化学方法观察EAE小鼠发病后第0天（初期）、第7天（高峰期）及第30天（恢复期）脊髓中cPLA2的表达情况。结果cPLA2在EAE发病初期及高峰期脊髓内表达明显增多，初期在绝大多数血管内皮细胞中表达，高峰期时血管周围炎性细胞中表达相对增多，恢复期时表达下调；对照组小鼠脊髓中则没有cPLA2表达。结论cPLA2在EAE发病不同时期表达存在差异，可能与EAE发生及发展有密切联系。     

喹硫平对小鼠脑缺血后胶质增生及IL-1β表达作用的实验研究

目的研究喹硫平对小鼠脑缺血后胶质增生及IL-1β表达的作用。方法实验分为4组:喹硫平加缺血组、药物对照组、缺血组、药物保护组;采用免疫组化法及激光共聚焦显微镜方法检测喹硫平对小鼠脑缺血后胶质增生及IL-1β表达的作用。结果脑缺血再灌后2h小胶质细胞激活,脑缺血再灌后2d和4d小胶质细胞和星形胶质细胞激活;脑缺血再灌后8d、2w和4w喹硫平减少GFAP表达水平。缺血组与假手术组相比较GFAP-IL-1β共表达阳性细胞数量明显增加(P0.01);药物保护组与缺血组比较GFAP-IL-1β共表达细胞数量明显减少(P0.01)。结论喹硫平能够减轻小鼠脑缺血后胶质增生同时降低IL-1β表达水平。     

咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎影响的观察

目的：探讨不同剂量咖啡因慢性干预对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的影响及其分子免疫学机制。方法：C57BL／6小鼠随机分为CFA阴性对照组,EAE阳性对照组,咖啡因饮水干预组（1mg·k-1,10mg·kg-1,30mg·kg-1）。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）抗原诱导小鼠EAE模型,咖啡因干预至EAE造模后第20天与对照组小鼠同期处死为止。观察小鼠行为学变化、中枢炎症细胞浸润和损害程度、检测中枢细胞因子IL-17、IFN—γ、TGF—β的mRNA表达含量。结果：咖啡因干预组,特别是30mg·kg-1组的病情严重程度减轻,中枢炎症细胞浸润程度下降,促炎因子表达降低,抑炎因子表达上升。结论：慢性咖啡因干预,可通过降低促炎因子的表达,升高抑炎因子的表达,减轻小鼠EAE的炎症损伤。     

芬戈莫德对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达影响的研究

目的探讨芬戈莫德对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机分为完全弗氏佐剂(CFA)组、EAE组、芬戈莫德组。运用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55构建EAE小鼠模型,小鼠神经功能缺损评分达到1分或免疫第14天,芬戈莫德组腹腔注射芬戈莫德10 mg·kg-1,相应的CFA组、EAE组给予生理盐水。观察小鼠行为学变化,中枢炎症和脱髓鞘情况,脑组织中的MMP-9 mRNA及蛋白表达。结果芬戈莫德组小鼠临床症状减轻,体重下降减少,潜伏期延长,发病率降低,炎性病灶数减少,脱髓鞘程度减轻。芬戈莫德组MMP-9 m RNA和蛋白表达水平较EAE组降低。结论芬戈莫德能抑制EAE小鼠脑组织中MMP-9 mRNA及蛋白表达水平。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经损害与脑组织中丝裂原活化蛋白激酶表达的关系

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脑组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)表达变化及其与神经损害的关系。方法 C57BL/6小鼠随机分为:EAE组(n=12),采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)制备成抗原乳剂免疫小鼠;对照组(n=10),用生理盐水处理小鼠。每日观察两组小鼠的行为学变化,并进行神经功能障碍评分。于高峰期处死小鼠,冰冻处理脑与脊髓,行苏木精-伊红染色观察脊髓组织的炎症细胞浸润,LFB染色观察脊髓组织的髓鞘脱失,蛋白印迹法检测小鼠脑组织中MAPKs表达。分析EAE小鼠神经功能障碍改变与中枢神经组织MAPKs表达量的相关性。结果 EAE组与对照组比较:日均神经行为学评分增加(P0.01);脊髓炎症细胞浸润增多(P0.001),髓鞘脱失增多(P0.001)。P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达量均增多(P0.01、P0.05、P0.05)。神经功能障碍与P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达呈正相关。结论 EAE高峰期神经损伤程度与中枢神经组织中的P-ERK(42)、P-ERK(44)、P-JNK(54)表达增加相平行,提示MOG35-55诱导的EAE中枢神经损伤可能与MAPKs所激活的信号通路有关。     

法舒地尔通过诱导EAE小鼠Occludin表达抑制其炎性细胞浸润

目的观察法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型的治疗效果并探讨其作用机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫建立国际标准的小鼠EAE模型。将免疫后的42只雌性C57BL/6小鼠随机分为EAE组、Fasudil早期治疗组和Fasudil晚期治疗组。Fasudil早期治疗组即免疫后第3天按体质量40mg/(kg.d)腹腔注射Fasudil,1次/d,至免疫后30d;Fasudil晚期治疗组即免疫后首只小鼠出现症状即开始腹腔注射Fasudil,注射方法和剂量同Fasudil早期治疗组;与晚期治疗组给药同一时间,给予EAE组等量生理盐水作为对照。免疫后隔天观察各组小鼠临床评分和体质量变化。于免疫30d后处死动物,分离小鼠脊髓腰膨大和脑冠状位中部1/3处做冷冻切片,行HE染色和免疫荧光染色。同时提取小鼠脊髓蛋白检测Occludin蛋白的表达。结果 Fasudil可改善EAE的临床症状,抑制脑血管内皮细胞Rho激酶(ROCK)活性。与EAE组相比,Fasudil早期治疗组和晚期治疗组CD31阳性内皮细胞上p-MYPT1表达均减弱(P<0.01,P<0.05),起病时间均延长(P<0.01,P<0.05),脊髓Occludin蛋白表达均增加(P<0.05)。结论 Fasudil对EAE具有治疗的潜能,其机制可能为通过抑制血管内皮细胞ROCK活性,参与诱导内皮细胞紧密连接蛋白Occludin的表达,从而抑制炎性细胞的中枢浸润,最终阻止疾病的发生和发展。     

cPLA2抑制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用及对趋化因子的影响

目的 研究胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）的化学抑制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的影响及相关机制。方法 将34只雌性C57BL／6小鼠分为3组（两组干预组各12只及对照组10只），用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35—55多肽诱导建立EAE模型．两组干预组分别用200μL浓度为2mmol/L及4mmol/L的cPLA2特异性抑制剂-花生四烯酸三氟甲基酮（AACOCF3）在免疫当天至免疫后第16天隔日一次给小鼠腹腔内注射，对照组则不采取干预措施，比较各组EAE小鼠临床表现及高峰期病理改变，并用免疫组织化学染色比较各组脊髓中单核细胞趋化蛋白（MCP）-1和巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α表达的差异。结果 两干预组EAE小鼠的临床及病理改变均较对照组显著减轻，干预组小鼠脊髓中cPLA2、MCP-1、MIP—1α的表达较对照组显著减低，上述改变与AACOCF3呈剂量依赖性。结论 cPLA2化学抑制剂对EAE有治疗作用，cPLA2可能参与调节EAE小鼠中枢神经系统中MCP-1及MIP-1α的产生。