骨髓间充质干细胞干预治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)干预治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的效果及其机制,以及最佳的治疗时机。方法 36只健康雌性SD大鼠随机分为正常对照组、EAE模型组和免疫后当天、第5 d、第10 d、第15 d注入BMSCs干预治疗组(d0、d5、d10、d15 BMSCs组)。用MBP68-86作免疫原制作EAE大鼠模型,分别在免疫后相应时间点静脉注入Wistar大鼠的BMSCs或生理盐水。观察大鼠的发病状况、神经功能缺损评分(NDS)和脑、脊髓组织病理改变。用流式细胞仪检测周围血T细胞亚群,ELISA法检测血干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素(IL)-4和IL-10水平。结果正常对照组大鼠均正常。与EAE模型组比较,d0 BMSCs组和d5 BMSCs组大鼠的发病数减少,发病时间延迟,高峰期和平均NDS降低,外周血CD4+T细胞明显降低,Treg细胞明显升高,IFN-γ和TNF-α水平明显降低,IL-10水平明显升高(P0.05~0.01),脑、脊髓组织的病变明显减轻;d10 BMSCs组CD4+/CD8+比值明显降低(P0.05)。结论预先用BMSCs干预治疗EAE大鼠有显著的效果,其机制可能为BMSCs通过上调IL-10表达来调节T细胞的增殖活化及功能,抑制异常免疫反应。而在发病后给予BMSCs则无明显效果。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎的历史和现状

<正> 多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘性自身免疫性疾病,其确切的发病机制仍不清楚,研究MS的实验动物模型成为探索该病病因学的最佳途径和方法。MS的实验动物模型主要分为免疫介导模型和病毒诱导模型两种,其中以免疫介导模型多用,该模型主要是通过注射CNS髓鞘蛋白(或分子肽段)与抗原佐剂的乳化复合物诱导动物对抗原反     

实验性变态反应性脑脊髓炎IL-10与IL-18的研究

目的研究IL-10与IL-18在实验性变态反应性脑髓炎(EAE)免疫学发病机制中的变化与作用。方法应用豚鼠诱导Wistar大鼠EAE模型,以豚鼠髓鞘碱性蛋白(MBP)与弗氏完全佐剂(CFA)免疫Wistar大鼠,在第11、18、25d处死大鼠,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-10与IL-18水平。结果EAE组的IL-10水平在疾病缓解期升高,IL-18的水平随着疾病的进展逐渐升高,在缓解期有所下降,但均显著高于对照组。结论IL-10与IL-18在EAE的免疫学发病机制中具有重要的作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立和长期观察研究

目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型(EAE)并长期观察研究.方法 C57BL/6小鼠30只,随机分为EAE模型组、PBS对照组和正常对照组.应用神经功能评分进行临床评估,通过HE和髓鞘染色观察组织病理变化.结果 小鼠在诱导后的12±3d急性起病,16±2d内达到高峰,严重度评分为3.2±0.6分.半年观察期内复发1次,复发率为25%.光镜下可见EAE组以脊髓组织病变为主,表现为大量炎性细胞浸润和白质脱髓鞘.结论 采用MOG_(35-55)诱导C57BL/6小鼠建立的模型既往被认为是一种慢性迁延EAE模型,本研究通过长期观察发现其存在缓解复发现象.

Abstract：

Objective To establish a mice model of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and perform a long term study. Methods C57BL/6 mice were immunized with 300μg MOG_(35-55) in complete Freund' s adjuvant (CFA) to establish EAE model in EAE group (n = 10). Mice in adjuvant group( n = 10)were treated with CFA without MOG_(35-55) and control group( n = 10)were treated with normal saline. The pathologic changes of the central nervous system were studied by HE staining and myelin staining. Results The clinic symptoms of EAE were present in the 12±3th day post-immunization,and went to the peek in the 16±2 th day post-immunization. The severity score was 3.2±0.6. One relapse was observed in the term of 6 months, and the rate was 25%. Light microscopy showed there were abundant inflammatory cells infiltrated especially in spinal cord tissues in EAE mice,with evident demyelination in white matter. Conclusion The relapse of this EAE model was observed in the study, though it was believed to be a chronic persistent model without relapse.     

一氧化氮供体对实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用

目的探讨一氧化氮供体3-吗啉-斯德酮亚胺(3-morpholinosydnonimine,SIN-1)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠的作用。方法应用豚鼠髓鞘碱性蛋白68-86(myelin basic protein 68-86,MBP68-86)主动免疫制作EAE实验动物模型。将大鼠随机分为SIN-1组和对照组,SIN-1组大鼠于致敏后第0~7天给予SIN-1药物干预,动态观察两组大鼠的临床症状及体质量变化,致敏后第14天采用ELISA方法检测各组大鼠单个核细胞(mononuclear cells,MNC)培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,并观察大鼠脑组织病理变化。结果与对照组比较,SIN-1组大鼠发病时间延迟,恢复时间提前,体质量明显增加,临床症状明显减轻;疾病症状最高评分明显降低。SIN-1组大鼠MNC培养上清中IFN-γ水平为(90.29±9.07)pg/mL,较对照组的(121.57±10.44)pg/mL明显降低(P<0.05);IL-4水平为(18.14±3.98)pg/mL,较对照组的(8.14±1.95)pg/mL明显增加(P<0.05)。SIN-1组大鼠组织病理损伤较对照组明显减轻。结论一氧化氮供体SIN-1可抑制EAE大鼠病情发展,对EAE具有保护作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型早期轴索损伤

目的 研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型发病早期的轴索损伤.方法 采用髓鞘蛋白脂蛋白(PLP139-151)多肽作为抗原诱发EAE小鼠模型.小鼠经免疫后每天进行神经功能评分及称体质量,于发病后剥离脑及脊髓组织进行病理学研究.结果 7只(23.3%)小鼠于免疫后15～22 d内发病,平均免疫后发病时间为(19.00±2.58)d,平均神经功能评分为(2.14±0.69)分.免疫前小鼠平均体质量[(21.85±0.94)g]与发病后体质量[(23.24±1.55)g]比较差异无统计学意义.HE染色可见发病小鼠软脊膜下脊髓组织炎性细胞浸润明显,以小血管周围为主的血管袖套形成.病变累及脊髓多见,且较大脑病变重.LFB染色可见炎细胞浸润处髓鞘有不同程度脱失,同时Bodian银染可见轴索肿胀、横断.免疫组织化学染色可见髓鞘碱性蛋白着色的相同区域淀粉样前体蛋白浓染,而星形胶质细胞GFAP染色增生不明显.结论 PLP多肽诱发SJL/J小鼠的EAE模型临床症状较轻,病变主要累及脊髓,而在大脑未发现与MS类似的典型病灶.在EAE发病早期,髓鞘还未明显脱失时即可见轴索损伤,且早期轴索损伤与临床症状并不平行.     

雌激素在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的保护作用

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)与其他多种自身免疫性疾病一样存在着性别差异,表现为:与男性相比,女性发病率较高,且初发时间也较早。女性患者在妊娠期伴随着体内雌激素水平的波动,MS患者复发次数和严重程度也出现明显变化[1]。在MS动物模型即实验性自身免疫性脑脊髓炎(exp     

多发性硬化和实验性自身免疫性脑脊髓炎中的轴突损伤

本文综述了多发性硬化和实验性自身免疫性脑脊髓炎中轴突损伤的研究进展,包括疾病早期、起始阶段的轴突损伤及其机制,影像及组织学表现正常的白质内的轴突变性,多发性硬化灰质内的轴突损伤,长病程多发性硬化病变内的轴突缺失等方面,并提出可能的干预措施及存在的问题。     

干扰素β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓中趋化因子MCP-1表达的影响

目的研究干扰素（IFN）β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠中枢神经系统（CNS）中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响，从趋化因子角度探讨IFNβ治疗多发性硬化（MS）的机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35～55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫C57BL／6小鼠建立EAE模型，干预组（n=12）在免疫当天至免疫后第16天隔日一次皮下注射10000单位IFNβ-1b，对照组（n=12）则同时予1mL PBS皮下注射。比较两组EAE小鼠的临床表现，并用免疫组织化学及原位杂交技术比较两组EAE脊髓中MCP-1表达及MCP-1mRNA水平的差异。结果与对照组相比，IFNβ-1b干预组小鼠发病明显延迟，症状明显减轻，同时脊髓中MCP-1的表达及MCP-1mRNA的水平显著下调。结论IFNβ-1b可抑制EAE小鼠CNS中趋化因子MCP-1的表达，这可能是其治疗MS的机制之一。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型脑组织硫化氢的变化

目的 观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脑组织中硫化氢(H2S)动态变化,探讨H2S与多发性硬化(MS)的关系. 方法 按随机区组设计方法将SD大鼠分成对照组及模型组,每组78只.模型组制备EAE模型,对照组用生理盐水代替诱导乳剂,余措施相同.采用HE染色、尼氏染色观察2组大鼠脑组织病理变化;比较不同时间点(建模后5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 d和65 d)2组大鼠平均临床评分;采用比色法检测各时间点H2S和丙二醛(MDA)水平. 结果 (1)HE和尼氏染色显示模型组中可见明显的炎性细胞浸润现象及血管袖套形成,对照组未发现明显改变.(2)模型组于建模后第20天及第50天出现2次发病高峰,临床评分分别为(4.0±0.55)分和(3.5±0.25)分;对照组的评分为0分.(3)模型组大鼠各时间点脑组织中H2S表达量随着发病呈逐渐下降趋势,从第10天开始低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).相反,模型组大鼠各时间点脑组织中MDA呈逐渐增加趋势,从第10天开始高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组大鼠H2S和MDA水平无明显变化.(4)模型组大鼠脑组织中H2S水平的变化与临床评分、MDA水平呈负相关(r=0.960,P=0.000;r=-0.920,P=0.000);临床症状评分和MDA水平呈正相关(r=0.910,P=0.000). 结论 H2S在EAE模型中表达明显降低,在MS中的作用机制有待进一步研究.     

MCI-186治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的:探讨MCI-186干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效及机制。方法:PLP_(139-151)诱发EAE,分别在EAE发病前后予MCI-186治疗,观察病程;MRI观察病灶;免疫组化检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和硝基酪氨酸(NT)表达;TUNEL法检测细胞凋亡。结果:EAE发病前MCI-186干预可延迟发病,减轻炎症,抑制iNOS、NT的表达及细胞凋亡;EAE发病后MCI-186治疗减轻炎症,抑制病情进展。结论:MCI-186治疗EAE有效,通过保护血脑屏障、抑制炎症和自由基损伤起作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑神经干细胞的增殖

目的通过建立实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型,检测EAE神经干细胞的增殖。方法以豚鼠脑脊髓匀浆加完全弗氏佐剂作为抗原．给予Wistar大鼠四足垫皮内注射,建立EAE模型,对正常组、免疫后7d组、EAE发病后3,7,14,21d组,分别进行5一溴脱氧尿嘧啶（BrdU）免疫组织化学染色,以观察正常大鼠脑内Brdu、EAE免疫损伤后BrdU的变化规律。结果在正常组大鼠,Brdu阳性细胞主要分布在室管膜下区（SVz）及海马齿状回的颗粒层（SGZ）;Brdu阳性细胞教在免疫后呈现先上升后下降的变化趋势,于发病后3d达高峰,21d恢复正常。结论EAE可以诱导大鼠脑内神经干细胞的增殖。     

阿米洛利对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统中细胞因子表达的影响

目的：观察阿米洛利对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠脑组织中白介素17（IL-17）、白介素10（IL-10）和干扰素-γ（IFN-γ）的影响。方法：C57BL/6小鼠27只随机分成3组：EAE-生理盐水组、EAE-阿米洛利组和空白对照组。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白和完全弗氏佐剂混合抗原乳剂诱导小鼠EAE动物模型。EAE-阿米洛利组免疫当日开始给予阿米洛利10 mg.kg-1干预,连续14 d;EAE-生理盐水组给予相同剂量的生理盐水;空白对照组小鼠不做任何处理。每天评估EAE小鼠神经功能变化;采用苏木精-伊红染色观察病理学改变;ELISA法检测发病高峰期（免疫后第19天）脑组织中促炎因子IL-17和IFN-γ、抑炎因子IL-10改变。结果：与EAE-生理盐水组相比,EAE-阿米洛利组①日均神经功能评分降低（P〈0.05）,最大临床症状评分明显降低（P〈0.01）;而两组间发病率无明显差异。②苏木精-伊红染色：中枢神经系统炎症细胞浸润减少（P〈0.01）。③IL-17和IFN-γ表达降低（P〈0.01）,IL-10表达增加（P〈0.05）。结论：阿米洛利能够减缓小鼠EAE病情,其机制可能与下调中枢神经系统IL-17和IFN-γ的表达,上调IL-10的表达有关。     

雌激素抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的NF-κB和Rho激酶表达

目的 探讨雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠中枢神经系统NF-κB和Rho激酶表达的影响及相关作用机制.方法 60只雌性Wistar大鼠行卵巢摘除术后建立EAE模型,随机分为模型组、对照组、雌激素组和NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrro-lidine dithocarbamate,PDTC)组,每组15 只.自免疫日起,雌激素组给予17β-雌二醇20 μg/(kg·d),连续10 d;PDTC组注射PDTC 50 mg/(kg·d),连续10 d.免疫后16天统一处死取脑组织,HE染色观察炎性细胞浸润情况,免疫组化和Western blot 观察NF-κB p65和Rho激酶表达的变化.结果 与模型组比较,雌激素组发病率无统计学差异(P>0.05),但发病潜伏期延长(P<0.05),神经功能评分较低(P<0.05);HE染色示雌激素组和PDTC组脑组织炎性细胞浸润程度较模型组轻;免疫组化和Western blot 结果示,与模型组相比,雌激素组和PDTC 组NF-κB和Rho激酶表达均较低(P<0.01).结论 雌激素能抑制EAE大鼠NF-κB和Rho激酶的表达,其对Rho激酶的抑制作用可能部分通过下调NF-κB的水平实现的.     

地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠IL-17表达的影响

目的研究地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑及脊髓组织中IL-17表达水平及脾组织中Th17细胞比例的影响。方法将33只C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组和地塞米松组。EAE组及地塞米松组小鼠以MOG35-55进行免疫造模。地塞米松组小鼠自免疫当天至处死,隔日给予地塞米松磷酸钠注射液0.07mg·kg~(-1)腹腔注射。对照组及EAE组给予等量生理盐水。观察小鼠的发病情况及神经功能评分。应用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色、实时定量PCR、流式细胞学方法分别检测小鼠中枢神经系统炎症细胞浸润、IL-17阳性细胞表达、IL-17m RNA水平及脾组织Th17细胞比例。结果地塞米松组与EAE组比较,小鼠发病率及神经功能评分明显降低(P0.05)。与对照组比较,EAE组小鼠脑及脊髓组织中炎性病灶数明显增多(P0.05),IL-17阳性细胞数明显增多(P0.05),脊髓组织中IL-17m RNA水平明显升高(P0.05),脾组织Th17细胞比例明显升高(P0.05);与EAE组相比较,地塞米松组小鼠脑、脊髓及脾组织中上述指标明显降低(P0.05)。结论地塞米松可以降低EAE小鼠发病率,减轻发病时神经功能损伤程度以及脑和脊髓内炎性细胞浸润程度,并使IL-17mRNA、蛋白表达水平及Th17细胞比例下降。其神经保护作用可能是通过抑制IL-17/IL-23轴等免疫调节机制而实现。     

黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

目的探讨黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法将20只大鼠随机分为正常对照组及EAE组,EAE组采用粗制髓鞘碱性蛋白(MBP)抗原注入大鼠后足掌皮下(0. 2 ml/100 g)制作EAE模型,观察大鼠的发病情况及病理表现;并采用免疫组织化学法检测两组大鼠脑组织CD44的含量。结果正常对照组大鼠未发病,EAE组大鼠均有不同程度的发病。HE染色后,光镜下观察,正常对照组大鼠脑和脊髓无异常; EAE组大鼠可见脑及脊髓实质内小血管充血,小静脉周围有大量炎性细胞浸润,血管周围白质脱髓鞘改变。免疫组化显示,正常对照组大鼠脑和脊髓组织未发现CD44阳性细胞; EAE组大鼠中枢神经系统(CNS)白质及灰白质交界处可见大量CD44阳性细胞。结论 EAE模型中存在黏附分子CD44的高表达,其对EAE的发病可能起到促进作用。     

胞浆型磷脂酶A2在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓中的表达

目的研究胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠发病不同时期的表达。方法8～10周龄的雌性C57BL／6小鼠30只随机分为2组，EAE组（n=20）以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）35-55多肽加福氏完全佐剂皮下注射诱发EAE，对照组（n=10）则用PBS液取代MOG35-55多肽。用免疫组织化学方法观察EAE小鼠发病后第0天（初期）、第7天（高峰期）及第30天（恢复期）脊髓中cPLA2的表达情况。结果cPLA2在EAE发病初期及高峰期脊髓内表达明显增多，初期在绝大多数血管内皮细胞中表达，高峰期时血管周围炎性细胞中表达相对增多，恢复期时表达下调；对照组小鼠脊髓中则没有cPLA2表达。结论cPLA2在EAE发病不同时期表达存在差异，可能与EAE发生及发展有密切联系。     

黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

目的 探讨黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）发病中的作用。方法 将20只大鼠随机分为正常对照组及EAE组,EAE组采用粗制髓鞘碱性蛋白（MBP）抗原注入大鼠后足掌皮下（0.2 ml/100 g）制作EAE模型,观察大鼠的发病情况及病理表现;并采用免疫组织化学法检测两组大鼠脑组织CD44的含量。结果 正常对照组大鼠未发病,EAE组大鼠均有不同程度的发病。HE染色后,光镜下观察,正常对照组大鼠脑和脊髓无异常;EAE组大鼠可见脑及脊髓实质内小血管充血,小静脉周围有大量炎性细胞浸润,血管周围白质脱髓鞘改变。免疫组化显示,正常对照组大鼠脑和脊髓组织未发现CD44阳性细胞;EAE组大鼠中枢神经系统（CNS）白质及灰白质交界处可见大量CD44阳性细胞。结论 EAE模型中存在黏附分子CD44的高表达,其对EAE的发病可能起到促进作用。     

人脐血干细胞移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的研究人脐血干细胞(HUCBCs)移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的效果以及HUCBCs在EAE大鼠脑和脊髓的状况。方法从新生儿脐带血分离出单个核细胞,体外培养并予5-溴脱氧嘧啶尿苷(Brdu)标记48h。用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠制备EAE模型。在免疫后14d将3&#215;106HUCBCs经尾静脉注射移植入EAE大鼠(移植组)体内,观察大鼠移植后不同时间的神经功能缺损评分、脑和脊髓脱髓鞘病灶数的变化;用免疫组化技术观察移植后的HUCBCs在EAE大鼠脑和脊髓内存活、迁徙、分化的状况,并与对照组比较。结果移植组大鼠移植后21d、28d的神经功能缺损评分显著低于对照组(均P&lt;0.05);移植后7d、14d、21d、28d脑和脊髓中均可见Brdu染色阳性细胞,移植后21d、28d明显多于移植后7d、14d(均P&lt;0.05);植入的HUCBCs在大鼠脑和脊髓内能向损伤区域迁徙并能分化为星形胶质细胞、少突胶质细胞和神经元。移植后14d、21d、28d脑和脊髓内脱髓鞘病灶数明显少于对照组(均P&lt;0.05)。结论HUCBCs移植能显著改善EAE大鼠的神经功能,并能在其脑和脊髓内存活、迁徙和分化,减少脱髓鞘...     

Th17细胞与多发性硬化/实验性自身免疫性脑脊髓炎

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)及其理想动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是主要累及中枢神经系统的自身免疫性疾病.